Name: osmotic pump-based drug-delivery for in vivo remyelination research on the central nervous system
Uploaded: 2021-12-17T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Osmotic Pump-based Drug-delivery for In Vivo Remyelination Research on the Central Nervous System at JoVE.com

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (NSFC 32070964, 31871045) J.N.'ye ve Shenzhen Temel Araştırma Vakfı'ndan (JCYJ20210324121214039) YS'ye yapılan hibelerle desteklenmiştir.

Tüm hayvan prosedürleri, Üçüncü Askeri Tıp Üniversitesi'nin hayvan refahı ve etik komitesi tarafından onaylanan kurumsal kılavuzlar ve protokoller altında yürütülmüştür.
1. Lizositin-indüklenen demiyelinasyon fare modelinin kurulması
<ol><li>Steril PBS ile% 1 lizosetin (L-α-Lizofosfatidilkolin olarak da adlandırılır) çözeltisi hazırlayın.</li>
	<li>Makas, forseps, kavisli hemostat ve diğer cerrahi aletleri otoklav sterilizasyonu ile sterilize edi...

<ol>
	<li>Theeuwes, F., Yum, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+the+design+and+operation+of+generic+osmotic+pumps+for+the+delivery+of+semisolid+or+liquid+drug+formulations.">Principles of the design and operation of generic osmotic pumps for the delivery of semisolid or liquid drug formulations.</a> Annals of Biomedical Engineering. 4 (4), 343-353 (1976).</li><li>Herrlich, S., Spieth, S., Messner, S., Zengerle, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmotic+micropumps+for+drug+delivery.">Osmotic micropumps for drug delivery.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64 (14), 1617-1627 (2012).</li><li>Wei, E., Loh, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+dependence+of+opiate-like+peptides.">Physical dependence of opiate-like peptides.</a> Science. 193 (4259), 1262-1263 (1976).</li><li>Pettigrew, J. D., Kasamatsu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+perfusion+of+noradrenaline+maintains+visual+cortical+plasticity.">Local perfusion of noradrenaline maintains visual cortical plasticity.</a> Nature. 271 (5647), 761-763 (1978).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+oligodendrocyte+precursor+cell+impairs+astrocytic+development+in+early+life+stress.">Reduced oligodendrocyte precursor cell impairs astrocytic development in early life stress.</a> Advanced Science (Weinheim). 8 (16), 2101181 (2021).</li><li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+behave+as+a+functional+niche+for+the+maturation+of+newborn+neurons+through+the+secretion+of+PTN.">Neural stem cells behave as a functional niche for the maturation of newborn neurons through the secretion of PTN.</a> Neuron. 101 (1), 32-44 (2019).</li><li>Watanabe, S., Komine, O., Endo, F., Wakasugi, K., Yamanaka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebroventricular+administration+of+Cystatin+C+ameliorates+disease+in+SOD1-linked+amyotrophic+lateral+sclerosis+mice.">Intracerebroventricular administration of Cystatin C ameliorates disease in SOD1-linked amyotrophic lateral sclerosis mice.</a> Journal of Neurochemistry. 145 (1), 80-89 (2018).</li><li>DeVos, S. L., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+intraventricular+delivery+of+drugs+to+the+rodent+central+nervous+system.">Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. , e50326 (2013).</li><li>Tang, C., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+of+a+mini-osmotic+pump+plus+stereotactical+injection+of+retrovirus+to+study+newborn+neuron+development+in+adult+mouse+hippocampus.">Implantation of a mini-osmotic pump plus stereotactical injection of retrovirus to study newborn neuron development in adult mouse hippocampus.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100374 (2021).</li><li>Niu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodendroglial+ring+finger+protein+Rnf43+is+an+essential+injury-specific+regulator+of+oligodendrocyte+maturation.">Oligodendroglial ring finger protein Rnf43 is an essential injury-specific regulator of oligodendrocyte maturation.</a> Neuron. 109 (19), 3104-3118 (2021).</li><li>Breitschopf, H., Suchanek, G., Gould, R. M., Colman, D. R., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+with+digoxigenin-labeled+probes:+sensitive+and+reliable+detection+method+applied+to+myelinating+rat+brain.">In situ hybridization with digoxigenin-labeled probes: sensitive and reliable detection method applied to myelinating rat brain.</a> Acta Neuropathologica. 84 (6), 581-587 (1992).</li><li>Cree, B. A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clemastine+rescues+myelination+defects+and+promotes+functional+recovery+in+hypoxic+brain+injury.">Clemastine rescues myelination defects and promotes functional recovery in hypoxic brain injury.</a> Brain. 141 (1), 85-98 (2018).</li><li>Eckenhoff, B., Yum, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+osmotic+pump:+novel+research+tool+for+optimizing+drug+regimens.">The osmotic pump: novel research tool for optimizing drug regimens.</a> Biomaterials. 2 (2), 89-97 (1981).</li><li>Thoenen, H., Sendtner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophins:+from+enthusiastic+expectations+through+sobering+experiences+to+rational+therapeutic+approaches.">Neurotrophins: from enthusiastic expectations through sobering experiences to rational therapeutic approaches.</a> Nature Neuroscience. 5, 1046-1050 (2002).</li><li>Hagg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebral+infusion+of+neurotrophic+factors.">Intracerebral infusion of neurotrophic factors.</a> Methods in Molecular Biology. 399, 167-180 (2007).</li><li>Bittner, B., Thelly, T., Isel, H., Mountfield, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+co-solvents+and+the+composition+of+experimental+formulations+on+the+pump+rate+of+the+ALZET+osmotic+pump.">The impact of co-solvents and the composition of experimental formulations on the pump rate of the ALZET osmotic pump.</a> International Journal of Pharmaceutics. 205 (1-2), 195-198 (2000).</li><li>Arnot, M. I., Bateson, A. N., Martin, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethyl+sulfoxide/propylene+glycol+is+a+suitable+solvent+for+the+delivery+of+diazepam+from+osmotic+minipumps.">Dimethyl sulfoxide/propylene glycol is a suitable solvent for the delivery of diazepam from osmotic minipumps.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 36 (1), 29-31 (1996).</li><li>Gullapalli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+ALZET+osmotic+pump+compatible+solvent+compositions+to+solubilize+poorly+soluble+compounds+for+preclinical+studies.">Development of ALZET osmotic pump compatible solvent compositions to solubilize poorly soluble compounds for preclinical studies.</a> Drug Delivery. 19 (5), 239-246 (2012).</li><li>White, J. D., Schwartz, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+osmotic+minipumps+for+intracranial+delivery+of+amino+acids+and+peptides.">Using osmotic minipumps for intracranial delivery of amino acids and peptides.</a> Methods in Neurosciences. 21, 187-200 (1994).</li></ol>

Bu protokol, ozmotik pompayı, ilaçları doğrudan tedavi bölgesine ulaştırabilen ve uzun bir süre boyunca tutarlı ilaç dağıtımına izin veren, tüm deneysel süre boyunca merkezi sinir sisteminin mikro ortamında stabil bir ilaç konsantrasyonu yaratan, miyelin rejenerasyon araştırması için yeni bir ilaç dağıtım tekniği olarak tanımlamaktadır. Diğer ilaç dağıtım yöntemleriyle karşılaştırıldığında, ozmotik pompa demiyelinasyon lezyonunda ilaç konsantrasyonunu korumak için daha elveri?...

Ozmotik pompa, implante edilebilir küçük bir çözelti salgılayıcı cihazdır. Deri altından veya karın boşluğuna implante edildiğinde sistemik doğum için kullanılabilir. Ozmotik pompanın yüzeyi yarı geçirgen bir membrandır ve iç tarafı geçirgen bir tabakadır. Ozmotik pompa, ozmotik tabaka ile pompanın implante edildiği doku ortamı arasındaki ozmotik basınç farkını kullanarak çalışır. Ozmotik tabakanın yüksek ozmolalitesi, dokudaki suyun pompa yüzeyindeki yarı geçirgen membrandan ozmotik tabakaya akmasını sağlar. Ozmotik tabaka, pompanın içindeki esnek rezervuarı genişletir ve sıkıştırır, böylece çözeltiyi esnek rezervuardan uzun süre belirli bir oranda yer değiştirir1. Pompa, 100 μL, 200 μL ve 2 mL olmak üzere üç farklı rezervuar hacmine sahiptir ve teslimat oranları 0,11 μL/h ile 10 μL/h arasında değişmektedir. Seçilen pompa tipine bağlı olarak, cihaz 1 günden 6 haftaya kadar çalışabilir2. Bu protokolde, 14 gün boyunca çalışabilen 0,25 μL/h transfer hızına sahip 100 μL ozmotik pompa kullanılmıştır.
1970'lerde, ozmotik pompa nörobilimaraştırmalarında 3,4 olarak kullanılmıştır. Örneğin, Wei ve ark. uyuşturucu bağımlılığı3 çalışmasında opioid peptitleri ventriküle enjekte etmek için ozmotik pompa yaklaşımını benimsemişlerdir. Sürekli iyileştirmeden sonra, ozmotik pompa şimdi peptitler, büyüme faktörleri, bağımlılık yapan ilaçlar, hormonlar, steroidler, antikorlar vb. dahil olmak üzere binlerce ilacın kontrollü olarak verilmesinin incelenmesinde kullanılmıştır. Ek olarak, özel kateterler (Beyin İnfüzyon Kitleri) takılıyken, omurilik, beyin, dalak ve karaciğerdahil olmak üzere belirli doku veya organlara hedefli infüzyon için kullanılabilir 5,6,7.
Remiyelinasyon çalışmasında, birçok ilacın in vitro miyelin rejenerasyonunu teşvik ettiği gösterilmiştir, ancak bunların çoğu, muhtemelen uygun bir uygulama yönteminin bulunmaması nedeniyle, in vivo olarak önemli etkiler elde etmemiştir. İntraperitoneal enjeksiyon, subkutan enjeksiyon ve intragastrik uygulama gibi geleneksel uygulama yöntemlerinin ilaçların biyoyararlanımında sınırlamaları vardır. Ek olarak, bazı ilaçlar zayıf kan-beyin bariyeri geçirgenliğine sahiptir ve bu da beyin parankimine erişimlerini zayıflatır. Birlikte, bu sınırlamalar yeni ve verimli bir teslimat yöntemi gerektirir. Beyin infüzyon kitleri ile kombinasyon halinde, ozmotik pompalar kan-beyin bariyerini atlayabilir ve ilaçları doğrudan korpus kallozuma iletebilir, bu da özellikle kısa bir yarı ömre sahip bazı polipeptit ve protein ilaçları için ilaçların biyoyararlanımını etkili bir şekilde geliştirir. Bu nedenle, yeni bir ilaç dağıtım tekniği olarak ozmotik pompa, merkezi sinir sistemi miyelin rejenerasyonu araştırması alanında büyük değer taşımaktadır. Bu tekniğin uygulanması aşağıda ayrıntılı olarak tanıtılacaktır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anesthesia Air Pump</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R510-29</td>
			<td>E05818-006</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Infusion kit 3</td>
			<td>ALZET</td>
			<td>0008851</td>
			<td>1-3 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Macklin</td>
			<td>C830557-1g</td>
			<td>5 mg/kg every 24 h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin eye ointment</td>
			<td>Along technology</td>
			<td>YCKJ-RJ-024780</td>
			<td>Cover the surface of the eyeballs during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin ointment</td>
			<td>pythonbio</td>
			<td>RG180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Evacuation Apparatus</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R546W</td>
			<td>E05518-002</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-&#945;-Lysophosphatidylcholine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L0906</td>
			<td>Dissolve at 1% with sterile PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter Syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>65460-05</td>
			<td>Syringe Series:1700, 10 &#181;L, 33 gauge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-smotic pump model 1002</td>
			<td>ALZET</td>
			<td>0004317</td>
			<td>0.25 &#181;L per hour, 14 days</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (pH = 7.3)</td>
			<td>ORIGENE</td>
			<td>ZLI-9061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Shanghai Civi</td>
			<td>CAS NO: 57-33-0</td>
			<td>150-200 mg/kg intraperitoneal injection for euthanasia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Anesthesia Machine</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R520IE</td>
			<td>E05807-006 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic Equipment</td>
			<td>RWD</td>
			<td>E06382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STERI 250 sterilizer</td>
			<td>Keller</td>
			<td>31101</td>
			<td>Rapid sterilization of surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical sutures</td>
			<td>Shanghai jinhuan</td>
			<td>F504</td>
			<td>5-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe needle (1 mL)</td>
			<td>Shanghai KDL</td>
			<td>6930197811018</td>
			<td>26 gauge (0.45 mm x 16 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testing drug and solvent</td>
			<td>Experiment dependent</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoStar Homeothermic Monitoring System</td>
			<td>RWD</td>
			<td>69026</td>
			<td>Maintain body temperature during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond Tissue adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>Secure the brain infusion cannula , Adhere the skin incision</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

osmotic pump-based drug-delivery for in vivo remyelination research on the central nervous system

Demiyelinasyon sadece multipl sklerozda (MS) değil, Alzheimer hastalığı ve otizm gibi diğer merkezi sinir sistemi hastalıklarında da tanımlanmıştır. Kanıtlar, remiyelinasyonun hastalık semptomlarını etkili bir şekilde iyileştirebileceğini gösterdiğinden, miyelin rejenerasyon sürecini teşvik etmek için ilaç geliştirmeye artan bir odaklanma vardır. Bu nedenle, bu ilaçların in vivo etkinliğini ve özgüllüğünü test etmek için bölgesel olarak seçilebilir ve sonuç açısından güvenilir bir ilaç dağıtım tekniği gereklidir. Bu protokol, ozmotik pompa implantını, lizositinle indüklenen demiyelinasyon fare modelinde yeni bir ilaç dağıtım yaklaşımı olarak tanıtmaktadır. Ozmotik pompa, kan-beyin bariyerini (BBB) atlayabilen ve ilaçları fare beyninin belirli bölgelerine istikrarlı ve doğrudan verebilen küçük bir implante edilebilir cihazdır. Ayrıca, kısa bir yarı ömre sahip peptitler ve proteinler gibi ilaçların biyoyararlanımını etkili bir şekilde artırabilir. Bu nedenle, bu yöntem merkezi sinir sistemi miyelin rejenerasyonu araştırması alanında büyük bir değere sahiptir.

Ozmotik pompanın miyelin rejenerasyon araştırmasındaki etkisini doğrulamak için, P56 farelerde lizositin kaynaklı bir demiyelinasyon modeli oluşturuldu, ardından UM206 (1.5 mL% 0.9 salinde 1 mg), kısa bir yarı ömre sahip bir peptid ve zayıf BBB geçirgenliğine sahip bir peptid içeren ozmotik pompaların implantasyonu10 . Kontrol olarak %0.9 salin kullanıldı. Modelin kurulmasından on dört gün sonra, fareler kesitleme için beyinleri izole etmek için% 4 formaldehit ile transkard...

Watch this Scientific Journal Video about Osmotic Pump-based Drug-delivery for In Vivo Remyelination Research on the Central Nervous System at JoVE.com

Osmotic Pump-based Drug-delivery for In Vivo Remyelination Research on the Central Nervous System

Demiyelinasyon çoklu santral sinir sistemi hastalıklarında görülür. Remiyelinizan ilaç testi için güvenilir bir in vivo ilaç dağıtım tekniği gereklidir. Bu protokol, uzun süreli ilacın doğrudan beyin parankimine verilmesine izin veren ve remiyelinasyon araştırmalarında geniş bir uygulama ile ilaç biyoyararlanımını geliştiren ozmotik pompa bazlı bir yöntemi tanımlamaktadır.

Merkezi Sinir Sistemi Üzerine In Vivo Remiyelinasyon Araştırması için Ozmotik Pompa Bazlı İlaç Dağıtımı

Demyelination has been identified in not only multiple sclerosis (MS), but also other central nervous system diseases such as Alzheimer's disease and ...

Ozmotik pompa, miyelin rejenerasyonunun araştırılması için, özellikle kısa bir yarı ömre sahip ilaçlar, zayıf kan-beyin bariyeri geçirgenliği ve çeşitli periferik yan etkileri olan ilaçlar için büyük bir değere sahiptir. Ozmotik pompa, kan-beyin bariyerini atlayabilir ve ilaçları doğrudan korpus kallozuma iletebilir, bu da özellikle kısa bir yarı ömre sahip bazı ilaçlar için ilaçların biyoyararlanımını etkili bir şekilde geliştirir. Başlamak için, anestezi uygulanmış bir farenin kafasını stereotaksik aparata bir diş çubuğu ve kulak çubukları ile sabitleyin.Ameliyat bölgesi dışında hayvan vücudunu örtün. Bir neşter kullanarak, kafatasını ortaya çıkarmak için boynun tabanından gözlerin arasına kadar cildin bir santimetre uzunluğunda bir orta sagital kesisini yapın. % 30 hidrojen peroksit içeren bir pamuklu çubuk kullanarak, kafatası yapılarını görselleştirmek için kafatasının yüzeyini nazikçe silin.Lambda noktasını ve bregma noktasını aynı yüksekliğe yerleştirmek için diş çubuğunun ve kulak çubuklarının yüksekliğini ayarlayın. 10 mikrolitrelik ve 33 gauge şırınga iğnesinin ucunu yavaşça bregma noktasına yerleştirin ve X, Y ve Z koordinatlarını sıfırlayın. Şırıngayı enjeksiyon bölgesine taşıyın.Bir mikrolitre 26 gauge ve 0.45 milimetre şırınga iğnesi ile duraya nüfuz etmeden enjeksiyon bölgesinde kafatasından yavaşça küçük bir çapak deliği açın. Mikrolitre şırınga iğnesini belirli bir derinliğe ulaşana kadar delikten yavaşça beyin dokusuna yerleştirin. Dakikada 0.5 mikrolitre hızında 1.5 mikrolitre% 1lisolesithin enjekte edin.Şırıngayı çıkarmadan önce beş dakika bekleyin ve cildi 5-0 cerrahi dikişle dikin. Ameliyat olan fareyi tek başına bir kafese yerleştirin ve ameliyattan sonra fareyi günlük olarak izleyin. Kallozuma yakın 1,5 milimetrelik bir enjeksiyon derinliği elde etmek için doku yapıştırıcısı ile beyin infüzyon kanülünün iğnesine üç derinlik ayar aralayıcısı takın.Şırınga iğnesini bir pompa paketiyle bir mililitrelik bir şırıngaya takarak ozmotik pompayı doldurun ve ilacı aspire edin. Pompayı dik konumda tutun. Şırıngayı pompanın üstündeki açıklığa yerleştirin ve bir hava kabarcığı oluşturmadan ilacı yavaşça enjekte edin.Sıvı açıklıktan akarken şırıngayı yavaşça çekin. Makas veya pense kullanarak, beyaz flanşı akış regülatöründen çıkarın. Akış moderatörünü pompaya takın.Ozmotik pompada kabarcıklar olup olmadığını belirlemek için, ozmotik pompayı doldurmadan önce ve sonra ayrı ayrı tartın. Kateteri hayvanın büyüklüğüne göre istenen uzunluğa kesin. Kateteri beyin infüzyon kanülüne takın.Kateteri, hava vermeden şırıngayı kullanarak ilaçlarla doldurun. Kateteri, açıkta kalan akış moderatörünün yaklaşık dört milimetresini kapsayacak şekilde akış moderatörüne bağlayın. Doldurulmuş pompaları en az dört ila altı saat boyunca 37 santigrat derecede steril% 0,9 tuzlu veya PBS'ye batırın.Uygulamadan sonra bir gecede uzatmayı tercih edin. Fareleri stereotaksik aparatın üzerine tekrar sabitleyin. Daha önce dikilmiş cerrahi kesiyi açın ve kesiyi omuz bıçaklarına kadar genişletin.Cildi kürek kemiğindeki deri altı bağ dokusundan ayırın, bir boşluğu açmak için hemostatik pense veya cımbız kullanın ve ozmotik pompayı boşluğa yerleştirin. Bir pamuklu çubukla, demiyelinizasyon modelini oluştururken oluşturulan kafatasının yüzeyindeki pim deliğini nazikçe silin ve açığa çıkarın. Beyin infüzyon kanülünü iğne deliğinden dik olarak yerleştirin ve doku yapıştırıcısı ile kafatasına sabitleyin.Beyin infüzyon kanülünün üzerindeki çıkarılabilir tırnağı bir çift makasla çıkarın. Kesini dikin veya doku yapıştırıcısı ile takın. Ameliyattan sonra hayvanı tek başına bir kafese yerleştirin.Uygulama yapıldıktan sonra DAPI boyaması, beyin dokusundaki iğne deliğinin beyaz maddenin hemen üzerinde olduğunu ve ozmotik pompanın beyin infüzyon kanülünün başarılı bir şekilde uygulandığını ortaya koydu. In situ hibridizasyon deneyi, yeni farklılaşmış oligodendrositleri etiketlemek için olgun oligodendrosit işaretleyici MAG probu ile gerçekleştirildi. Sonuçlar, UM206 tedavisinin demiyelinizli bölgede kontrol grubundan daha fazla MAG pozitif hücre verdiğini göstermiştir.Demiyelinli bölgenin transmisyon elektron mikroskopisi, UM206 tedavi grubunda miyelinli akson sayısının kontrol grubuna kıyasla arttığını gösterdi ve bu da UM206'nın daha yüksek bir yeniden miyelinizasyon seviyesine neden olduğunu düşündürdü. Ozmotik pompayı hazırlarken, sisteme herhangi bir kabarcık sokmamaya dikkat edin.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Osmotic Pump-based Drug-delivery for In Vivo Remyelination Research on the Central Nervous System

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

Kemirgen Modeller Merkezi Sinir Sistemi Hastalıkları Tedavisinde Sistemik ve Yerel İlaç Taşıyıcı

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution ...

Nörobilim

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

Merkezi sinir sisteminin transducing Hücreleri için lentiviral Vektörler Üretimi

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Merkez Sinir Sistemi Tek Hücreler Etiketleme<em&gt; Drosophila melanogaster</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

Santral Sinir Sistemi Onarım İnceleyecek Bir Sakatlık Paradigma<em&gt; Drosophila</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Kemirgen Merkezi Sinir Sistemi İlaçların doğrudan Intraventriküler teslim

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Immunohistochemical Analysis in the Rat Central Nervous System and Peripheral Lymph Node Tissue Sections

Sıçan Santral Sinir Sistemi immunohistokimyasal Analizi ve Çevresel lenf nodu Doku Bölümler

Immunohistochemistry (IHC) provides highly specific, reliable and attractive protein visualization. Correct performance and interpretation of an IHC-based ...

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

Polyribosome Fraksiyonu tarafından Santral Sinir Sistemi Translatome in vivo sorguluyor

Multiple processes are involved in gene expression including transcription, translation and stability of mRNAs and proteins. Each of these steps are ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Kemirgen Santral Sinir Sistemi vivo optogenetic Stimülasyon içinde

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...