Name: measurement of oxygen consumption rate in acute striatal slices from adult mice
Uploaded: 2022-06-08T12:40:00
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Wangchen TseringとPamela Walter が、この原稿を批判的に読み、編集してくれたことに感謝します。この研究は、National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) (NS054773 to C.J. L. および NS098393 to H.Z.) と Thomas Jefferson University の Department of Neuroscience (Startup Funds to H.Z.) の支援を受けた。

動物作業を含むすべての手順は、国内および国際的なガイドラインに従って実施され、トーマスジェファーソン大学の動物ケアおよび使用委員会によって承認されました。生後3~14ヶ月の雄性FVB/NTacマウスを用いた。次の手順は非滅菌設定で実行しましたが、すべてをできるだけ清潔に保つように注意する必要があります。
注:ここで紹介した方法は、Zhiらによって報告さ?...

<ol>
	<li>Hauser, D. N., Hastings, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+and+oxidative+stress+in+Parkinson's+disease+and+monogenic+parkinsonism.">Mitochondrial dysfunction and oxidative stress in Parkinson's disease and monogenic parkinsonism.</a> Neurobiology of Disease. 51, 35-42 (2013).</li><li>Swerdlow, R. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+respiration+in+isolated+murine+brain+mitochondria:+implications+for+mechanistic+stroke+studies.">Measuring respiration in isolated murine brain mitochondria: implications for mechanistic stroke studies.</a> Neuromolecular Medicine. 21 (4), 493-504 (2019).</li><li>Picard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+structure+and+function+are+disrupted+by+standard+isolation+methods.">Mitochondrial structure and function are disrupted by standard isolation methods.</a> PLoS One. 6 (3), 18317 (2011).</li><li>Schuh, R. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+mitochondrial+analysis+in+acute+brain+sections+from+adult+rats+reveals+mitochondrial+dysfunction+in+a+rat+model+of+migraine.">Functional mitochondrial analysis in acute brain sections from adult rats reveals mitochondrial dysfunction in a rat model of migraine.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 307 (11), 1017-1030 (2014).</li><li>Qi, G., Mi, Y., Yin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+brain+metabolic+function+ex+vivo+with+acute+mouse+slice+punches.">Characterizing brain metabolic function ex vivo with acute mouse slice punches.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100559 (2021).</li><li>Underwood, E., Redell, J. B., Zhao, J., Moore, A. N., Dash, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+assessing+tissue+respiration+in+anatomically+defined+brain+regions.">A method for assessing tissue respiration in anatomically defined brain regions.</a> Scientific Reports. 10 (1), 13179 (2020).</li></ol>

私たちが開発した方法では、XFアナライザーを使用して、成体マウスの線条体スライスのOCRを4時間の期間にわたって測定することができました。この方法は、解剖学的に定義された脳構造から切り取られたパンチにおける細胞生体エネルギーを測定する新しい方法を提供する。分析される組織サンプルはかなり小さいので、疾患に関与する特定の脳領域の代謝パラメータを調査することがで?...

ミトコンドリア機能障害は、パーキンソン病(PD)、ハンチントン病、およびアルツハイマー病を含むいくつかの神経学的疾患に関与している1,2,3。PINK1ノックアウト(KO)マウスおよびラットなどのPDモデルは、ミトコンドリア機能障害4、5、6、7、8、9、10、11を示す。老化PINK1 KOマウスの線条体(STR)または全脳から単離されたミトコンドリアは、複合体I7、10、12、13において欠損を示す。酸素消費速度(OCR)を直接測定することは、OCRがミトコンドリア14の主要な機能であるATP産生と結合しているため、ミトコンドリア機能を評価する最も一般的な方法の1つです。したがって、疾患モデルまたは患者由来のサンプル/組織でOCRを測定することは、ミトコンドリア機能障害が疾患にどのようにつながるかを調査するのに役立ちます。
現在、ミトコンドリアOCRを測定するには、クラーク電極および他のO2電極、O2蛍光色素、および細胞外フラックス分析装置15、16、17、18、19を含むいくつかの方法がある。利点として、O2電極ベースの方法は、様々な基板を容易に添加することを可能にする。しかし、複数のサンプルを同時に測定するには不十分です。従来のO2電極ベースの方法と比較して、細胞培養物または精製ミトコンドリアにおけるOCRに一般的に使用されるツールである細胞外フラックスアナライザーは、改善されたスループット15,18,20を提供する。それにもかかわらず、これらの方法はすべて、通常、単離されたミトコンドリアまたは細胞培養物6、16、17、19、20、21におけるOCRを測定するために適用される。ミトコンドリアの単離は不注意による損傷を引き起こし、抽出されたミトコンドリアまたは細胞培養物は、無傷の脳スライス22よりも生理学的関連性が低い。微小電極がスライスに使用される場合でも、それらは培養細胞23よりも感度が低く、操作がより困難である。
これらの課題に対応するために、我々は、マウス24の急性線条体脳切片からの複数の代謝パラメータの分析を可能にするXF24細胞外フラックスアナライザーを使用する方法を開発しました24。この技術は、OCRを介したミトコンドリア呼吸の連続的な直接定量化を提供する。要するに、線条体脳スライスの小さな切片が膵島プレートのウェルに入れられ、分析器は酸素およびプロトン蛍光ベースのバイオセンサーを使用してOCRおよび細胞外酸性化速度を測定する17、21、25。
分析装置のユニークな特徴の1つは、最大4つの化合物または試薬を順次注入しながらOCRの継続的な測定を可能にする4つの注入ウェルです。これにより、基底ミトコンドリアOCR、ATP結合OCR、最大ミトコンドリアOCRなどのいくつかの細胞呼吸パラメータの測定が可能になります。ここに示したプロトコールの測定中に注入された化合物は、第1溶液ウェル(ポートA)における10mMピルビン酸、第2溶液ウェル(ポートB)における20μMオリゴマイシン、第3ウェル(ポートC)における10μMカルボニルシアン化4-(トリフルオロメトキシ)フェニルヒドラゾン(FCCP)、および第4ウェル(ポートD)における20μMアンチマイシンAの作業濃度であり、 Fried et al.25に基づく。これらの濃度は作業濃度であり、10x、11x、12x、および13xのストック溶液がそれぞれ溶液ポートA〜Dに注入されたことに留意しなければならない。各溶液を使用する目的は以下の通りであった:1)ピルビン酸は、それがなければ、FCCPの添加は、利用可能な基質の制限によって引き起こされるOCR応答を低下させるので、必要であった。2)オリゴマイシンはATP合成酵素を阻害し、ATP結合呼吸の測定を可能にする。3)FCCPはリン酸化から酸化を結合解除し、最大ミトコンドリア容量の測定を可能にする。4)アンチマイシンAは、電子輸送鎖中の複合体IIIを阻害し、したがって、ミトコンドリアに連結されていないOCRの測定を可能にする。
使用したオリゴマイシンの濃度は、以下の理由に基づいて決定した:1)ほとんどの細胞型(単離されたミトコンドリアまたは細胞培養物)に対するオリゴマイシンの推奨用量は1.5μMである。経験から、通常、勾配がある可能性があるため、解離した細胞用量の3x〜10xがスライス実験に使用され、スライス内の溶液の浸透には時間がかかる。したがって、濃度は5 μM〜25 μMの範囲であるべきである2)Fried et al.25に基づいて20 μM濃度が選択された。より高い濃度は、オリゴマイシンの非特異的毒性のために試みられなかった。3) Underwood et al.26による報告において、著者らはオリゴマイシンの滴定実験を行い、6.25、12.5、25、および50μg/mLの用量が同様の抑制をもたらすことを見出した。高濃度のオリゴマイシン(50 μg/mL)はそれ以上阻害しなかったが、より大きな分散を有していた。4)我々の観察では、決定因子はオリゴマイシンの浸透能力であると思われる。オリゴマイシンが組織に浸透することは困難であり、それがプラトーに達するのに少なくとも7〜8サイクルかかる理由であり、最大の応答である。プラトーに達する限り、阻害は最大であると仮定される。
線条体スライスのOCRを測定するために細胞外フラックス分析装置を適応させる重要な技術的課題は、組織低酸素症を予防することです。バッファーは測定の全期間(約4時間)の間酸素化されなかったため、低酸素症が中心的な問題でした。これは、酸素がサンプル全体に拡散できない、より厚い組織サンプルに特に当てはまります。この問題を克服するために、周囲酸素が脳スライスの中央に浸透できるように、スライスを150μmの厚さで切片化した。さらに、4mg/mLのウシ血清アルブミン(BSA)を予め酸素化した人工脳脊髄液(ACSF)緩衝液に添加し、以前に示唆されたように、最大OCRの決定を容易にした23。細胞が生きているかどうかを調べた。まず、ヘキスト33258(10 μM)およびヨウ化プロピジウム(10 μM)を使用して、これらの条件下で細胞が健康であるかどうかを調べました。次に、中程度の棘状ニューロンが機能的に健康であるかどうかをパッチクランプ記録を用いて調べた。我々はさらに、線条体スライス中のドーパミン(DA)末端が機能的に健全であるかどうかを、高速スキャンボルタンメトリーを用いてDA放出を測定することによって評価した。結果は、酸素化されていない線条体スライス(ACSF/BSA群)が酸素化対照群24と同じくらい健康であることを示した。
次に、スライスの厚さとパンチサイズのさまざまな組み合わせをテストして、フラックス呼吸アッセイに最適な線条体スライス条件を決定しました。厚さ(150 μmおよび200 μm)およびパンチサイズ(直径1.0 mm、1.5 mm、および2.0 mm)の背側線条体スライスを、分析装置を使用したOCR分析に使用した。厚さ150μm、パンチサイズ1.5mmの線条体スライスは、結合効率が最も高く、OCRは分析器24にとって最適な範囲内にあった。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Accumet AB150 pH benchtop meter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-636-AB150</td>
			<td>To measure pH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A from streptomyces sp.</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>A8674</td>
			<td>To inhibit complex III of the mitochondria</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>A6003</td>
			<td>To make modified artificial cerebrospinal fluid (BSA-ACSF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy) phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>C2920</td>
			<td>To uncouple mitochondrial respiration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>G8270</td>
			<td>To make artificial cerebrospinal fluid (ACSF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>D8418</td>
			<td>To dissovle compounds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>H3375</td>
			<td>To make artificial cerebrospinal fluid (ACSF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidified non-CO2 incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-683-230D</td>
			<td>To hydrate plates at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin from Streptomyces diastatochromogenes</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>O4876</td>
			<td>To inhibit mitochondrial ATP synthase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td></td>
			<td>sealing film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>3616</td>
			<td>To inhibit complex I of the mitochondria</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF Calibrant Solution 500 mL</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>103681-100</td>
			<td>Solution for seahorse calibration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF Extracellular Flux Analyzer</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td></td>
			<td>Equipment used to analyze oxygen consumption rate, old generation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe24 Extracellular Flux Analyzer</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td></td>
			<td>Equipment used to analyze oxygen consumption rate, new generation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF24 FluxPaks</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>101174-100</td>
			<td>Package of flux analyzer sensor cartridges, tissue culture plates, capture screens,&#160; calibrant solution and calibration plates; assay kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P2256</td>
			<td>To prevent any substrate-limiting constraints of substrate supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel biopsy punches</td>
			<td>Miltex</td>
			<td></td>
			<td>Device used to punch slices</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cell culture dish, 35 x 10 mm</td>
			<td>Eppendrof</td>
			<td>0030700102</td>
			<td>Used for slice punch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200</td>
			<td>To slice brain tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Thermo Scientific Precision</td>
			<td>282-115</td>
			<td>To heat buffer and solutions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of oxygen consumption rate in acute striatal slices from adult mice

ミトコンドリアは、細胞のATP産生、活性酸素種の調節、およびCa2+ 濃度制御において重要な役割を果たしている。ミトコンドリア機能障害は、パーキンソン病(PD)、ハンチントン病、アルツハイマー病を含む複数の神経変性疾患の病因に関与している。これらの疾患のモデルにおけるミトコンドリアの役割を研究するために、我々はミトコンドリア機能の代理として酸素消費速度(OCR)を介してミトコンドリア呼吸を測定することができる。OCRは、細胞培養物および単離されたミトコンドリアにおいて、すでに首尾よく測定されている。しかし、これらの技術は、急性脳スライスでOCRを測定するよりも生理学的に関連性が低い。この制限を克服するために、著者らは、成体マウスの急性線条体スライスのOCRを直接測定するために、タツノオトシゴXF分析装置を使用する新しい方法を開発した。この技術は、PDおよびハンチントン病に関与する脳領域である線条体に焦点を当てて最適化されています。分析器は、24ウェルプレートを使用して生細胞アッセイを行い、24サンプルの同時速度論的測定を可能にします。この方法は、サンプルとして線条体脳スライスの円形パンチ片を使用する。我々は、PDのマウスモデルの線条体スライスにおいてより低い基底OCRを同定することによって、この技術の有効性を実証する。この方法は、PDおよびハンチントン病の分野で働く研究者にとって幅広い関心事となるでしょう。

この研究の最初のステップは、スライスから線条体のセクションを切り取るために使用されるスライスの厚さとパンチサイズを最適化することでした(図3A)。厚さ150μmのスライスと1.5mmのパンチサイズは、カップリング効率によって決定される最良の結果をもたらしました(図3B-C)。図3Bに示すように、O...

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Measurement of Oxygen Consumption Rate in Acute Striatal Slices from Adult Mice

酸素消費率(OCR)は、ミトコンドリア機能の一般的なプロキシであり、さまざまな疾患モデルを研究するために使用することができます。我々は、シーホースXF分析装置を用いて、成体マウスの急性線条体切片のOCRを直接測定する新しい方法を開発した。

成体マウスの急性線条体スライスにおける酸素消費率の測定

Mitochondria play an important role in cellular ATP production, reactive oxygen species regulation, and Ca2+ concentration control. Mitochondrial ...

タツノオトシゴXF分析装置を用いて酸素消費率を直接測定する新しい方法を開発しました。しかし、成体マウス由来の急性スライドスライスにおけるミトコンドリア機能のための一般的なプロキシ。この方法は、解剖学的に定義された脳構造からの穿刺におけるエネルギー学によって細胞を測定する。急性スライスを使用すると、ミトコンドリア細胞または培養細胞を単離する方法では達成できない生理学的細胞環境をより厳密に模倣する。この方法は、パーキンソン病およびハンチントン病の分野で働く研究者にとって幅広い関心事となるであろう。まず、細胞外フラックスアッセイキットを開き、センサーカートリッジとユーティリティプレートの両方を取り外します。次に、センサーカートリッジを脇に置き、センサーに触れないでください。次に、ユーティリティプレートの各壁に600マイクロリットルの校正溶液を追加します。センサー・カートリッジをユーティリティー・プレートの上に置き、センサーをキャリブレーション・ソリューションに沈めて、ユーティリティー・プレートとセンサー・カートリッジ・プレートの三角形の切り込みが正しく揃っていることを確認します。その後、細胞外フラックスアッセイキットをシーリングフィルムで密封して、校正溶液の蒸発を防ぎ、二酸化炭素または酸素を補充していない摂氏37度のインキュベーターに一晩置きます。ハトメキャプチャマイクロプレートを開き、組織を座らせるためにハトメプレートを取り出す。次いで、50ミリリットルのチューブ中で、予め酸素化された修飾された人工脳脊髄液緩衝液の適切な体積を摂氏37度に温める。次に、BSAを1ミリリットルあたり4ミリグラムの最終濃度に加え、呼吸バッファーを調製した。プレートの揺れを避けながら、625マイクロリットルの呼吸バッファーをアイレットプレートの各ウェルに慎重に加え、各ウェルのバッファーに気泡が存在しないことを確認します。直ちに10ミリリットルの氷冷予備酸素化切断溶液で脳を解剖する。次いで、ビブラトーム断面冠状線条体スライスを用いて、氷冷予備酸素化切断液中で厚さ150マイクロメートルで製造業者の指示に従った。次に、スライスを50ミリリットルの酸素化人工脳脊髄液中に回収する。そして、室温で最大30分間溶液中に保管してください。回復後、スライスを5ミリメートルの呼吸バッファーを備えた35 x 10ミリメートルのペトリ皿に移します。ステンレス製の生検パンチを使用して、スライスをバッファーに保持しながらパンチを静かに押さえることによって、スライスされた脳の所望の領域に円形の組織片を作成する。その後、残りの組織を取り出し、パンチを持ち上げて、円形の組織片を緩衝液に取り除きます。次に、1ミリリットルのピペットチップの端をカットして直径1点5~2点ゼロミリメートルの穴を開け、それを使ってパンチしたスライスを保持し、キャプチャ画面の上部に移します。パンチされた脳組織の1枚を吸引し、キャプチャスクリーンのメッシュ側に組織を慎重に配置します。紙のティッシュを使用してキャプチャ画面を静かに乾燥させ、水分を除去すると、ティッシュが粘着性になり、メッシュの中心に付着します。次に、ピンセットでキャプチャ画面をスライス面下に持ち、インキュベートアイレットプレートのウェルの1つに置きます。次いで、アッセイを実行する前に、温度およびpH平衡を可能にするために、インキュベーター内で37°Cでハトメプレートを少なくとも30分間インキュベートする。BSAを含まない所望の化合物および修飾人工脳脊髄液を、それぞれポートA〜Dに対する作業濃度の最終ストック濃度まで希釈する。完全に挿入すると、ポートを介して化合物が漏れる可能性があるため、チップを注入ポートの壁に45度の角度で注入ポートの途中に配置して、希釈化合物の75マイクロリットルをセンサーカートリッジの適切な注入ポートに穏やかにプリロードします。その後、気泡を発生させずにポートからチップを慎重に引き出し、気泡を緩和しないようにカートリッジのどの部分もタップしないでください。次に、注入ポートを目視で検査して、すべての液体がポートにあり、カートリッジの上部に残留滴がないことを確認します。センサーカートリッジをユーティリティプレートに置いた後、ユーティリティプレートにつかまり、できるだけ動かないように慎重に取り扱いながら、摂氏37度まで加熱できるようにインキュベーターに30分間入れます。まず、ソフトウェアにアッセイテンプレートをロードし、次に緑色のスタートボタンを押します。次に、ユーティリティプレートのセンサーカートリッジを機器トレイにロードし、プレートが正しく収まり、平らであることを確認し、薬物で満たされたセンサーカートリッジを分析装置にロードして校正します。その後、画面の指示に従ってキャリブレーションします。センサーを平衡化します。平衡化ステップが完了したら、キャリブレーションプレートを取り外し、メッシュと組織スライスを含むハトメプレートと交換します。次いで、プレートの各ウェルにおける酸素消費速度を測定し、原稿に記載されているアッセイプロトコールを使用する。以下、酸素消費率測定データ及び結合効率データを解析する。対照群におけるスライスの異なる厚さおよびパンチサイズに対する酸素消費率は、測定全体にわたって安定した基礎呼吸を示し、スライスの体積に比例した。さらに、酸素消費速度は5時間にわたって比較的安定しており、ランダウンは10%未満であった。ミトコンドリア結合効率を比較し、厚さ150マイクロメートル、パンチサイズ1.5ミリメートルのスライスが最も高い結合効率を示した。酸素消費率は、Pink1ノックアウトの若年群および若齢群およびそれらの年齢が一致した野生型マウスについて測定された。基礎酸素消費率は、若齢マウスのノックアウト型群と野生型群の両方で同様であった。しかし、旧群のノックアウトマウスについては減少した。しかし、ノックアウトマウスのミトコンドリア機能障害は若年層で観察され、Pink1のノックアウトによる結合効率の低下によって示された。このプロトコルの重要なステップには、脳スライスの準備、キャプチャ画面の上部への転送、ウェルへのスライドの配置、測定中にキャプチャ画面に貼り付けたままにしておくことが含まれます。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

老化とアミロイド病理の間にシナプス変化の研究のためのラットおよびトランスジェニックマウスからの急性海馬スライスの準備

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

神経科学

Presynaptic Dopamine Dynamics in Striatal Brain Slices with Fast-scan Cyclic Voltammetry

高速スキャンサイクリックボルタンメトリーによる線条体の脳スライスにおけるシナプス前ドーパミンのダイナミクス

Extensive research has focused on the neurotransmitter dopamine because of its importance in the mechanism of action of drugs of abuse (e.g. cocaine and ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

成体マウスの前脳の急性スライスにおける神経芽細胞の移行のタイムラプスイメージング

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

カルシウムイメージングの急性脳室下帯スライスの調製

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

急性海馬スライスにおけるシナプス誘発アストログリアとニューロン活動の二重の電気生理学的記録

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Imaging Intracellular Ca2+ Signals in Striatal Astrocytes from Adult Mice Using Genetically-encoded Calcium Indicators

Imaging Intracellular Ca2+ Signals in Striatal Astrocytes from Adult Mice Using Genetically-encoded Calcium Indicators

イメージング細胞内Ca<sup&gt; 2+</sup遺伝的にエンコードされたカルシウム指標を用いて成体マウスからの線条体アスト​​ロサイト&gt;シグナル

Astrocytes display spontaneous intracellular Ca2+ concentration fluctuations ([Ca2+]i) and in several settings respond to neuronal excitation with ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

げっ歯類からの急性海馬スライスを用いて、シナプスタグ付け/キャプチャとクロス捕獲調査

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

Ex Vivoイメージング実験アダルト ゼブラフィッシュから準備新鮮な網膜スライス

The retina is a complex tissue that initiates and integrates the first steps of vision. Dysfunction of retinal cells is a hallmark of many blinding ...

Assessment of Long-term Depression Induction in Adult Cerebellar Slices

成人小脳スライスにおける長期うつ病誘導の評価

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...