Name: isolation and screening from soil biodiversity for fungi involved in the degradation of recalcitrant materials
Uploaded: 2022-05-16T14:00:00
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我々は、パヴィア大学のスクオーラ・ディ・アルタ・フォルマツィオーネ・ドットラーレ(SAFD)及びソルヴェイグ・トシ教授がこの研究の機会を提供してくれたことを認める。

1. 土壌から難治性物質を分解できる菌株の選定
<ol><li>抗生物質溶液の調製。<ol>
<li>ペニシリン(50 mg/L)、ストレプトマイシン(40 mg/L)、クロルテトラサイクリン(40 mg/L)、ネオマイシン(100 mg/L)、クロラムフェニコール(100 mg/L)を250 mLの脱イオン滅菌水に入れます。</li>
		<li>抗生物質溶液にクロラムフェニコールを加える前に、3mLの≥99%エタノールに溶解する。</li>
		<li>抗生物質溶液を?...

土壌の豊かな生物多様性は、多数の代謝能力を有する真菌の豊富な供給源であり、そのうちのいくつかはバイオレメディエーションの潜在的な候補となり得る。選択的培地試験(プロトコルのセクション1)は、天然の複合ポリマー上で増殖可能な真菌を唯一の炭素源として単離するための、実行が容易で効果的な方法です。真菌は、リグニノリグ溶解酵素ラクケースおよびペルオキシダーゼ<sup...

土壌は地球上の生命の基本的な構成要素であり、多くの生態系の基礎となっています。土壌中の鉱物、有機物、微生物は、密接な関係と相互作用が起こっている1つのシステムと考えることができます。これらの化合物の相互作用は、陸域のプロセス、環境の質、生態系の健全性に重要な影響を与えます1。土壌汚染は、世界中で深刻な環境問題を引き起こしています。農薬、石油製品、プラスチック、その他の化学物質などの反抗的および有毒物質の無差別、長期、および過剰な適用は、土壌生態学に深刻な影響を及ぼし、その結果、土壌微生物叢を変化させる可能性があります。土壌中の微生物群集は、異なる生理学的状態の広範囲の生物で構成されており、その大部分は細菌および真菌である。土壌中の汚染物質の多くは中長期的に安定性を有し、その持続性は微生物が不本意な物質を栄養素として利用することを可能にする適応メカニズムの開発につながる可能性がある2,3。したがって、これらの微生物は、バイオレメディエーション技術のために考慮することができる。
バイオレメディエーションは、廃棄物を毒性の低いまたは無毒な化合物に分解または変換するために微生物およびその酵素を使用することによって、汚染の影響を緩和しようとします。古細菌、細菌、藻類、および真菌の様々な種は、このバイオレメディエーション能力4を有する。それらの特定の生分解作用の結果として、真菌はバイオレメディエーションのために特に有望な生物である。彼らは彼らの菌糸ネットワークを使って異なる基質を攻撃することができ、他の微生物よりも効率的に土壌マトリックスに浸透することを可能にします。さらに、汚染物質を除去するのが難しいアクセスできない隙間に到達する可能性があり5、低水分レベル6でも生き残ることができます。さらに、真菌は、非特異的酵素の異なるカセットを合成し、通常、セルロース、リグニン、およびフミン酸などの天然の反抗物質を分解する。標的基質を欠いているものは、炭化水素、プラスチック、および農薬7、8、9、10などの広範囲の残留性汚染物質の分解に関与する可能性がある。そのため、バイオレメディエーション剤として既に多くの真菌種が報告されているが、難治性汚染物質のバイオレメディエーションの候補を選択するために未だ研究されていない種を探索することへの関心が高まっている。バイオレメディエーション特性を有することが既に知られている種は、子嚢菌11、12、13、担子菌14、15、およびケコロマイコタ属に属する。例えば、ペニシリウム属およびアスペルギルス属は、脂肪族炭化水素13、異なるプラスチックポリマー16、17、18、重金属19、および染料20の分解に関与することがよく知られている。同様に、Phanerochaete chrysosporiumやTrametes versicolorなどの担子菌類の真菌について行われた研究は、芳香族炭化水素13およびプラスチック21などの難治性物質の酸化への関与を明らかにしている。生分解プロセスに関与する真菌の別の例は、接合菌類Rhizopus spp.、Mucor spp.、およびCunninghamella spp.22,23である。特に、クニンガメラは芳香族炭化水素を酸化酵素することができ、広範囲の生体異物13からの生成物の無害化を研究するためのモデル生物と考えられている。
エステラーゼ、ラッカーゼ、ペルオキシダーゼ、およびプロテアーゼなどの難解な物質24、25の主要な分解プロセスに関与するいくつかの真菌酵素がある。ラッカーゼは、細胞内で産生され、その後分泌される銅含有オキシダーゼであり、様々なフェノール化合物および芳香族化合物の酸化を可能にする。これらは、オルトおよびパラジフェノール、アミノ基含有フェノール、リグニン、およびアリール基含有ジアミン26を分解することができる。ペルオキシダーゼは、リグニンおよび他の芳香族化合物を分解するためのメディエーターとして過酸化水素を使用する。ペルオキシダーゼには多くの種類がありますが、有害物質を分解する可能性が最も高いのはリグニンペルオキシダーゼとマンガンペルオキシダーゼ27です。
エステラーゼおよびプロテアーゼは、細胞外または外部細胞酵素のグループに属し、それらは起源の細胞外で作用するが、依然としてそれらに結合している。これらの酵素は、大きな反抗分子の加水分解をより小さな分子に触媒することができる。基質特異性が低いため、これらの酵素は、繊維染料、パルプおよび製紙産業から放出される廃液、皮革なめし、石油製品、プラスチック、および農薬などの様々な汚染物質のバイオレメディエーションにおいて重要な役割を果たすことができる28,29,30。
生体修復真菌株について選択するための多数のスクリーニング方法が既に公開されている。例えば、ストロー系寒天培地は、多環芳香族炭化水素(PAH)分解物31において高い電位を有する白色腐朽菌のスクリーニングに用いられてきた;腐った木材の小片を麦芽エキス寒天(MEA)の上に置き、木材腐朽菌32を単離した。しかしながら、既に提案されている方法のほとんどは、関心のあるそれらの活性のために非常に特異的な真菌を選択する。本研究は、より広範囲の作用を有する土壌菌類を選択するためのより広範なアプローチを提案する。この方法は、土壌サンプルの段階希釈物を抗生物質と混合したフミン酸またはリグノセルロースで修正した培地に初期メッキすることに依存し、これらの天然の反抗物質を分解する能力を有する真菌を選択する。フミン酸およびリグノセルロースは、実際には、非常に複雑な分子構造を有するので生分解に対して非常に耐性のある物質であり、これはそれらが試験された真菌の分解能力の優れた指標であることを可能にする33,34。その後、最初の試験で選択された真菌をスクリーニングして、ワセリン、使用済みエンジンオイル、プラスチックなどの特定の汚染物質を分解する可能性のある真菌を特定します。最後に、定性酵素試験は、反抗的な物質の生分解プロセスに関与する酵素を産生することができる真菌株を検出するために行われる。この目的のために、プロテアーゼおよびエステラーゼ試験が行われ、没食子酸およびグアイアコールがラッカーゼおよび他のリグニ分解酵素産生の指標として使用される35,36。これらの基質が使用されるのは、真菌がそれらを茶色に酸化する能力とリグニノライシス能力の保有との間に強い相関関係が見出されたからである37,38,39。
これらのプロトコールを通じて、土壌サンプルから直接、高い分解可能性および広範囲の作用スペクトルを有する真菌株を単離することが可能である。これらの真菌株の単離は、バイオレメディエーション目的の新しい候補を見つけるのに役立つ可能性がある。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96 microwell plate</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>650185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>84609.05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bushnell-Haas Broth</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>B5051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroamphenicol</td>
			<td>Eurobio</td>
			<td>GABCRL006Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlortetracycline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y0001451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoCl2&#183;6H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuCl2&#183;2H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C3279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20821.296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeCl3&#183;6H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>236489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>10462200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gallic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7384</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cover slips</td>
			<td>Biosigma</td>
			<td>VBS634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass vials 15 mL</td>
			<td>SciLabware</td>
			<td>P35467</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guaiacol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-density polyethylene (HDPE)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>434272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humic acids</td>
			<td>Aldrich Chemistry</td>
			<td>53680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lignocellulose</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>Sterilized bioethanol production waste</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-shaped cell spreader</td>
			<td>Laboindustria S.p.a</td>
			<td>21133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnetic stirrer</td>
			<td>A.C.E.F</td>
			<td>8235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malt Extract Broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>70146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&#183;7H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette 1000 &#956;L</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>FA10006M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette 200&#160; &#956;L</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>FA10005M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl2&#183;4H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M5005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2MoO4&#183;2H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N0401000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1504489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>peptone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>83059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene terephthalate (PET)</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>ES306031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Laboindustria S.p.a</td>
			<td>21050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petrolatum (Paraffin liquid)</td>
			<td>A.C.E.F</td>
			<td>009661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potato Dextrose Broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene (PS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>331651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyurethane (PUR)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>GF20677923</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinyl chloride (PVC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>81388</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile falcon tube</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>227 261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass vials 20 mL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SU860051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile point 1000&#160; &#956;L</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F172511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile point 200&#160; &#956;L</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F172311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile polyethylene bags</td>
			<td>WHIRL-PAK</td>
			<td>B01018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sterile syringe</td>
			<td>Rays</td>
			<td>5523CM25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S-6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 80</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Used engine oil</td>
			<td>/</td>
			<td>/</td>
			<td>complex mixture of hydrocarbons, engine additives, and metals, provided by an Italian private company</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vials 50 mL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>33108-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z0152</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and screening from soil biodiversity for fungi involved in the degradation of recalcitrant materials

環境汚染はますます大きな問題となっており、バイオレメディエーションプロセスに関与する真菌を特定することは不可欠な課題です。土壌は信じられないほど多様な微生物を宿主とし、これらのバイオレメディエーション菌類の良い供給源となり得ます。本研究は、異なるスクリーニング試験を用いて、バイオレメディエーションの可能性を秘めた土壌菌類の探索を目指している。唯一の炭素源として難治性物質を添加したミネラル培養培地を増殖試験として用いた。まず、土壌希釈物を、フミン酸またはリグノセルロースで修正したミネラル培地でペトリ皿に播種した。増殖中の真菌コロニーを単離し、炭化水素(ワセリンおよび使用済みモーターオイル)の複雑な混合物および異なるプラスチックポリマー(PET、PP、PS、PUR、PVC)の粉末などの異なる基質上で試験した。定性酵素試験は、エステラーゼ、ラッカーゼ、ペルオキシダーゼ、およびプロテアーゼの産生を調査するための成長試験と関連していた。これらの酵素は、不屈物質の主な分解プロセスに関与しており、検査された真菌株によるそれらの構成的分泌は、バイオレメディエーションのために利用される可能性がある。100以上の菌株を単離して試験し、良好なバイオレメディエーションの可能性を有するいくつかの分離株が見出された。結論として、記載されたスクリーニング試験は、土壌からバイオレメディエーションの可能性を有する真菌株を同定するための簡単で低コストの方法である。さらに、最小限の培養培地に他の不応物質を添加することにより、要件に応じて、異なる汚染物質のスクリーニング試験を調整することが可能である。

選択的培地法(プロトコルのセクション1)により、土壌の豊かな生物多様性をスクリーニングし、バイオレメディエーションの可能性の高い真菌を選択することができました。フミン酸およびリグノセルロース培地を用いて、100以上の真菌株が単離された。これらの真菌は、多くの汚染物質に似た化学構造を有する天然の残留物質の生分解に関与する酵素を産生した。しかしながら、選択的培?...

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Isolation and Screening from Soil Biodiversity for Fungi Involved in the Degradation of Recalcitrant Materials

ここでは、土壌生物多様性をスクリーニングして、不本意な物質の分解に関与する真菌株を探すためのプロトコルを提示する。まず、フミン酸またはリグノセルロース上で増殖することができる真菌株が単離される。その後、それらの活性は酵素アッセイと炭化水素やプラスチックなどの汚染物質の両方でテストされます。

難治性物質の分解に関与する菌類の土壌生物多様性からの単離とスクリーニング

Environmental pollution is an increasing problem, and identifying fungi involved in the bioremediation process is an essential task. Soil hosts an ...

このプロトコルは、バイオレメディエーション目的の候補として考慮される土壌サンプルから直接、高い分解可能性を有する真菌株を単離するので重要である。このプロトコルは、バイオレメディエーションの可能性を秘めた真菌を見つけるための低コストのスクリーニングです。さらに、解釈しやすい結果が得られます。この技術は微生物の取り扱いを伴うため、汚染を避けるために層流キャビネットまたはブンゼンバーナーを使用して無菌状態で作業することが非常に重要です。まず、目的の土壌をサンプリングし、2ミリメートルメッシュを使用して土壌をふるいにかけ、根や植物の破片を取り除きます。層流キャビネットの下で、ふるいにかけた土壌1グラムを滅菌15ミリリットルのチューブに加える。次いで、滅菌脱イオン水を10ミリリットル加え、10〜1倍の希釈液を作る。チューブを水平に30分間振る。懸濁液が落ち着く前に、滅菌ピペットで10ミリリットルのマイナス1希釈液を取り、それを9ミリリットルの脱イオン水ブランクに移して、10〜マイナス2希釈にします。サスペンションを徹底的に渦巻きます。同様に、10をマイナス3希釈管に、10をマイナス2希釈管とする。選択的媒体上のめっき土壌希釈液の場合、滅菌点を有するマイクロピペットを用いて、10〜マイナス3希釈液の100マイクロリットルを収集し、それを腐植寒天ペトリ皿に移す。希釈液を、滅菌済みの使い捨てL字型セルスプレッダーを使用してディッシュ表面に均等に分配します。そのような皿を4〜5個用意する。同様に、リグノセルロースディッシュを10からマイナス3本の希釈管に調製する。皿を10〜15分間風乾させてから、暗闇の中で摂氏25度で15日間インキュベートします。類似点が存在するすべての真菌コロニーを確認してください。必要に応じて、光学顕微鏡下で観察するスライドを用意する。層流キャビネットの下またはブンゼンバーナーで、滅菌接種針でコロニーから菌糸体のごく一部を穏やかに除去することによって、選択した各真菌株を単離する。単離されたコロニーを新しい麦芽エキス寒天、またはMEAディッシュに移す。20ミリリットルのブッシュネルハース(BH培地)を50ミリリットルのガラスバイアルに移す。7ミリリットルの脱イオン水を15ミリリットルのバイアルに移し、壊れたガラスカバースリップの破片を各バイアルに加える。バイアルを摂氏121度で20分間オートクレーブ処理して滅菌する。ワセリンの成長をテストするには、層流キャビネットの下の滅菌ピペットを使用して、各50ミリリットルのBHバイアルに1ミリリットルのワセリンを加えます。BHのみを含むバイアルをネガティブコントロールとして保管してください。滅菌針を使用して、選択した真菌株で培地表面の菌糸体をMEAプレートから取り出し、壊れたカバースリップで15ミリリットルのガラスバイアルに移す。バイアルをボルテックスミキサーで2分間攪拌し、壊れたカバースリップが真菌コロニーの立方体を切断し、懸濁液を作ることを可能にする。各ワセリンバイアルに200マイクロリットルの懸濁液を接種する。真菌株ごとに2つの複製を行う。陰性対照の場合、BH培地のみを含むバイアルに200マイクロリットルの真菌懸濁液を加える。また、バイアル瓶をワセリンで保ち、真菌接種を行わずに培地中の汚染を確認してください。バイアルを暗闇の中で摂氏25度でインキュベートし、接種物から15日および30日後に観察する。使用済みエンジンオイルの成長をテストするには、500マイクロリットルの使用済みエンジンオイルをBHAペトリ皿に移し、オイルを均等に分配します。次いで、MEAプレートから菌糸体を採取することによって真菌株をプレートに接種する。プラスチックでの成長をテストするには、200マイクロリットルの真菌懸濁液を96マイクロウェルプレートに移します。真菌株 - プラスチックの組み合わせの3つの複製を行う。真菌懸濁液で各ウェルに10ミリグラムの異なるプラスチック粉末を加える。陰性対照の場合、真菌懸濁液を含むウェルに200マイクロリットルのBH培地を加える。さらに、各プラスチック粉末について、200マイクロリットルのBH溶液と10ミリグラムの各プラスチック粉塵で井戸を満たし、汚染をチェックします。暗闇の中でプレートを摂氏25度でインキュベートし、15日後および30日後に観察する。定性的なラッカーゼ熱量測定試験のために、1リットルのジャガイモデキストロース寒天またはPDAを準備し、オートクレーブを20分間処理する。オートクレーブ処理後、培地が冷却されたが液体のままの場合は、層流フードの下に400マイクロリットルのグアイアコールを加え、ペトリ皿にプレートします。MEAプレートから菌糸体を採取することにより、PDAグアイアコールプレートに真菌株を接種する。陰性対照の場合、各真菌株を含むPDAプレートおよびPDAおよびグアイアコールを含む1つのプレートを調製する。暗闇の中でプレートを摂氏25度でインキュベートし、7日後にそれらを観察する。定性エステラーゼ試験のために、1リットルのTween 80培地を調製する。次いで、媒体内部の攪拌棒で加熱することなく、媒体をマグネチックスターラー上に置く。10分後、すべてが溶融したら、5ミリリットルの培地を20ミリリットルの滅菌バイアルおよびオートクレーブに移す。200マイクロリットルの真菌懸濁液をTween 80培地滅菌バイアルに加える。陰性対照の場合、5ミリリットルのオートクレーブ処理されたBH培地を20ミリリットルのバイアルに加える。次いで、200マイクロリットルの真菌懸濁液をバイアルに加える。バイアルを暗闇の中で摂氏25度で21日間インキュベートし、7日ごとに観察する。ワセリン、使用済みエンジンオイル、およびプラスチック粉末を唯一の炭素源として増殖できる真菌株の割合が評価され、成功の程度は異なっていた。ワセリンを利用する真菌の能力は、制御されたBHと含有ワセリンとの間のコロニー成長の違いとして評価された。試験した菌株のほぼ75%が唯一の炭素源としてワセリンを使用することができ、21%が最大の成長を示しました。BHAのみを含むプレートの成長とエンジンオイルの存在下での成長もモニターした。菌株のほぼ90%が使用済みエンジンオイルで成長し、39%が最大の成長を示しました。真菌コロニーの周囲に赤褐色がかったハローの形成は、ラッカーゼおよび他のリグニナッツ溶解酵素のより高い産生を示した。真菌の約60%がラッカーゼを生産することができた。さらに、株の17%は、グアイアコール培地中のコロニーの周りに強い暗いハローを産生した。エステラーゼ活性は、Tween 80培地中での白色沈殿物の形成によって評価した。株のほぼ60%がエステラーゼ活性を示し、13%がより高い沈殿物形成を示した。このプロトコールは、目的の反抗物質を最小限の培地に添加することによって、任意の汚染物質を分解することができる真菌をスクリーニングするように調整することができる。

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