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April 1st, 2022
DOI :
April 1st, 2022
•0:10
Introduction
1:03
Method Overview
1:52
Extended Anti-Inflammatory Treatment
2:53
Preoperative Preparation
4:01
Intraductal Injection
7:20
micro-CT Imaging
9:32
Image Analysis
11:02
Results
11:57
Conclusion
Transcript
स्तन कैंसर सबसे प्रचलित कैंसर है और अमेरिका में महिलाओं के लिए कैंसर से संबंधित मौत का दूसरा प्रमुख कारण है। वर्तमान रोकथाम दृष्टिकोण सीमित हैं और विभिन्न प्रकार के प्रतिकूल दुष्प्रभावों के साथ आते हैं। प्राथमिक रोकथाम के लिए नए हस्तक्षेपों की आवश्यकता है। हमने स्तन कैंसर की रोकथाम के लिए माउस स्तन एपिथेलिया के लिए इथेनॉल-आधारित एब्लेटिव समाधान के इंट्राडक्टल डिलीवरी के लिए एक विधि विकसित की है।
निप्पल खोलने में सीधे इंजेक्शन कम से कम संपार्श्विक ऊतक क्षति के साथ डक्टल पेड़ अस्तर उपकला कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए अनुमति देता है। यह विधि एक उच्च-रिज़ॉल्यूशन कंट्रास्ट एजेंट के रूप में टैंटलम ऑक्साइड नैनोकणों का उपयोग करके विवो इमेजिंग में एक साथ रहने की अनुमति देती है। इस विधि को अन्य एक्स-रे कंट्रास्ट एजेंटों और विभिन्न रासायनिक या थर्मल एब्लेटिव समाधानों के साथ विभिन्न निवारक उपचारों के साथ उपयोग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
छवि-निर्देशित स्तन कैंसर की रोकथाम की इस विधि के साथ शामिल पहला कदम प्रयोगशाला में तैयार सुक्रालोज़ जेल कप का उपयोग करके कार्प्रोफेन की मौखिक खुराक के माध्यम से विस्तारित विरोधी भड़काऊ उपचार को प्रेरित करना है। हम निपल्स के आसपास के क्षेत्र से फर को हटाने के लिए इंजेक्शन के लिए depilatory क्रीम का उपयोग करके जानवर को तैयार करते हैं। फिर इंट्राडक्टल इंजेक्शन एक स्टीरियोस्कोप की मदद से किया जाता है ताकि सुई सम्मिलन के लिए निप्पल के उद्घाटन का सबसे अच्छा पता लगाया जा सके और कल्पना की जा सके।
समाधान के वितरण के बाद, जानवरों को माइक्रो-सीटी या फ्लोरोस्कोपी द्वारा चित्रित किया जाता है ताकि यह निर्धारित किया जा सके कि इंजेक्शन कितने सफल थे। माइक्रो-सीटी स्कैन को सफल भरने और अन्य मीट्रिक के आगे के विश्लेषण के लिए इंजेक्ट किए गए स्तन डक्टल पेड़ के 3 डी पुनर्निर्माण बनाने के लिए संसाधित किया जा सकता है। सबसे पहले, आवश्यक एकाग्रता पर कार्प्रोफेन तैयार करें।
हम 0.5 मिलीलीटर इंजेक्ट करने और प्रति कप एक मिलीग्राम की अंतिम खुराक प्राप्त करने के लिए प्रति एमएल दो मिलीग्राम का एक कामकाजी समाधान बनाते हैं। आप मिश्रण में बाँझ खाद्य डाई जोड़ सकते हैं ताकि कप के सुक्रालोज़ में दवा के पूर्ण मिश्रण की बेहतर पुष्टि की जा सके। इसके बाद, कप को 15 मिनट के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में रखें।
कप को हटा दें और संदूषण की संभावना को कम करने के लिए उन्हें सूखा दें। कप ढक्कन की सतह को साफ करने और सूखने की अनुमति देने के लिए 70% इथेनॉल या इथेनॉल वाइप्स का उपयोग करें। ढक्कन के माध्यम से कार्प्रोफेन समाधान की आवश्यक मात्रा को इंजेक्ट करने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करें।
इस मामले में, हमें वांछित परिणाम के लिए 500 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करने की आवश्यकता है। सुई से छेद पर एक स्टिकर रखें और अतिरिक्त 15 सेकंड के लिए भंवर करने से पहले 15 सेकंड के लिए कप को हिलाएं। गहरे नीले रंग के clumps के लिए देख कर समरूप मिश्रण के लिए कप की जाँच करें।
कप को तब एक महीने तक प्रशीतित किया जा सकता है। इंट्राडक्टल प्रक्रिया से दो से तीन दिन पहले जानवर की तैयारी होनी चाहिए। Isoflurane का उपयोग कर जानवर anesthetizing द्वारा शुरू करो.
एक नाक शंकु जो isoflurane वितरित करने के लिए जारी रहता है करने के लिए जारी रखने के लिए anesthetized माउस स्थानांतरण. नाक शंकु पर रहते हुए माउस पर आंख स्नेहक लागू करें और फिर माउस को अपनी पीठ पर रखें। स्तन ग्रंथियों के क्षेत्र में depilatory क्रीम लागू करने के लिए एक कपास इत्तला एप्लिकेटर का उपयोग करें जिसे आप इंजेक्ट करने की योजना बना रहे हैं।
फर के तेजी से ढीले होने में मदद करने के लिए वांछित क्षेत्र में जानवर की त्वचा पर एप्लिकेटर को ऊपर और नीचे रगड़ें। त्वचा को जलाने से बचने के लिए जितना संभव हो उतना कम समय के लिए माउस पर क्रीम छोड़ना महत्वपूर्ण है। आवेदन के 10 से 30 सेकंड के बाद, क्रीम को पूरी तरह से हटाने के लिए धुंध पर गर्म पानी का उपयोग करें।
साफ धुंध के साथ त्वचा को सुखाने से पहले पूरी तरह से हटाने को सुनिश्चित करने के लिए दो से चार कुल्ला का उपयोग करें। अच्छी दृश्यता और निपल्स तक पहुंच की पुष्टि करने के लिए फर हटाने के क्षेत्रों की जांच करें। यदि आवश्यक हो तो depilatory प्रक्रिया को दोहराएं।
संज्ञाहरण से ठीक होने के लिए माउस को वार्मिंग पैड पर एक साफ वसूली पिंजरे में रखें। वसूली के बाद अपने घर के पिंजरे में चूहों को तैयार करने के लिए एक कार्प्रोफेन कप दें। आप फिर से आइसोफ्लुरेन संज्ञाहरण का उपयोग करके जानवर को एनेस्थेटिक करके शुरू करेंगे और माउस को पूरी तरह से प्रेरित होने के बाद नाक शंकु में ले जाएंगे।
इंजेक्शन के लिए जानवर को अपनी पीठ पर रखने से पहले आंख स्नेहक लागू किया जाएगा। यह स्तन ग्रंथियों के पास पैरों को टेप करने में सहायक हो सकता है जिन्हें इंजेक्ट किया जाएगा, लेकिन आवश्यक नहीं है। इंजेक्शन समाधान की वांछित मात्रा के साथ सिरिंज तैयार करें और एक माइक्रोलीटर मामले में सुई हटाने के बाद कुछ फैल जाता है।
इंजेक्शन से तुरंत पहले समाधान के मुक्त प्रवाह के लिए सुई का परीक्षण करने के लिए अतिरिक्त मात्रा के साथ भरना सहायक हो सकता है। यदि एक से अधिक स्तन ग्रंथि को इंजेक्ट किया जाता है, तो यह उपलब्ध होने पर कई सिरिंज को प्रीफिल करने के लिए समय बचा सकता है। ध्यान रखें कि यह बहुत जल्दी न करें यदि समाधान बैठने के लिए छोड़ दिया जाता है तो समाधान को बंद करने के लिए प्रवण है।
यदि संभव हो तो ठीक इत्तला संदंश का उपयोग करके किसी भी दृश्यमान मृत त्वचा को हटाकर निप्पल तैयार करें। सभी मृत त्वचा को हटाने के लिए आवश्यक नहीं है यदि यह निप्पल खोलने को अवरुद्ध नहीं कर रहा है और यह टगिंग के लिए प्रतिरोधी है। यह कभी-कभी निप्पल को चोट और सूजन का कारण बन सकता है यदि मृत त्वचा को जीवित त्वचा के लिए बहुत कसकर चिपकाया जाता है।
दिखाई देने वाली सुई के बेवेल के साथ, सुई को निप्पल के उद्घाटन में ठीक इत्तला संदंश से मार्गदर्शन सहायता के साथ डालें। निप्पल की लंबाई और दृढ़ता के आधार पर, सुई में मार्गदर्शन करते समय निप्पल को पकड़ना हमेशा संभव नहीं हो सकता है। कभी-कभी सुई के साथ निप्पल को पैंतरेबाज़ी करना आवश्यक होता है ताकि संदंश को सुई को निप्पल में नीचे निर्देशित करने के बजाय सुई पर निप्पल को ऊपर खींचने की अनुमति मिल सके।
एक बार जब सुई बेवल पूरी तरह से निप्पल से घिरा हुआ है और मुख्य वाहिनी में है, तो धीरे-धीरे समाधान को इंजेक्ट करना शुरू करें। वांछित दर लगभग 40 माइक्रोलीटर प्रति मिनट है। डक्टल पेड़ को संभावित नुकसान को रोकने के लिए इससे अधिक तेज़ी से इंजेक्शन लगाने से बचें।
पूर्ण इंजेक्शन के बाद, संदंश की सहायता से निप्पल से सुई को हटाने से पहले 30 सेकंड प्रतीक्षा करें। यह निप्पल से किसी भी रिसाव को कम करेगा। एक असफल इंजेक्शन के किसी भी संकेत के लिए क्षेत्र का आकलन करें।
एक गुंबददार उपस्थिति क्षेत्र में एक वसा पैड इंजेक्शन या आघात का संकेत दे सकती है। यह अक्सर यह देखना संभव है कि वसा पैड में एक इंजेक्शन हो रहा है यदि समाधान में डाई है या यदि आप इंजेक्शन साइट पर डोमिंग के लिए सावधानीपूर्वक देख रहे हैं जैसा कि यहां देखा जा सकता है। इसी तरह के फैशन में अपने प्रयोग के लिए आवश्यक शेष स्तन ग्रंथियों को इंजेक्ट करने के लिए आगे बढ़ें, इंजेक्शन की मात्रा और रिसाव की किसी भी घटना को ध्यान में रखते हुए।
माउस के कुछ क्षेत्रों में अजीब हाथ प्लेसमेंट या साँस लेने में हस्तक्षेप जैसे मुद्दों के कारण इंजेक्ट करना अधिक कठिन हो सकता है। उदाहरण के लिए, एक दाएं हाथ के इंजेक्टर में संभवतः माउस के ऊपरी दाईं ओर ग्रंथियों को इंजेक्ट करने का सबसे कठिन समय होगा जो यहां देखा गया है। ये फेफड़ों की निकटता के कारण अधिक चलते हैं और सतह पर कलाई को आराम करने के तरीके में जानवर के शरीर के साथ अच्छे हाथ प्लेसमेंट को ढूंढना मुश्किल हो सकता है।
कुछ लोगों को माउस को पुनर्स्थापित करना आसान हो सकता है यदि नाक शंकु अनुमति देता है। इथेनॉल युक्त समाधान को इंजेक्ट करते समय, प्रणालीगत शराब के नशे से बचने के लिए सावधानी बरतनी चाहिए। इसके लिए यह जानने की आवश्यकता होती है कि एक सत्र में कितना इथेनॉल इंजेक्ट किया जा सकता है और प्रभावों का मुकाबला करने के लिए प्रक्रिया के दौरान सुक्रोज युक्त समाधान आईपी का प्रशासन किया जा सकता है।
इंट्राडक्टल प्रक्रिया के बाद, जानवरों को हीटिंग पैड पर एक साफ पिंजरे में बरामद किया जा सकता है या भरे डक्टल पेड़ों की इमेजिंग के लिए माइक्रो-सीटी सिस्टम में ले जाया जा सकता है। माउस को किसी भी इमेजिंग सत्र के बाद भी पुनर्प्राप्त किया जाना चाहिए। इंजेक्ट किए गए जानवर को माइक्रो-सीटी सिस्टम में ले जाने के बाद, इमेजिंग के दौरान संज्ञाहरण बनाए रखने के लिए आइसोफ्लुरान का प्रशासन जारी रखें।
यह साइट के पास पैरों को टैप करके इमेजिंग स्थिति को मानकीकृत करने में सहायक हो सकता है। उदाहरण के लिए, एक विस्तारित स्थिति में हिंद पैरों को नीचे टैप करने से पैरों की हड्डी को इंजेक्टेड ग्रंथियों के दृश्य को बाधित करने से रोका जा सकता है। सामने के पैरों को ऊपर की ओर विस्तारित स्थिति में टैप करना इसी तरह ऊपरी ग्रंथियों को देखने में सहायता कर सकता है।
हमने यह भी पाया है कि माउस के पेट में टैपिंग निचले ग्रंथियों के लिए श्वास विरूपण साक्ष्य को कम करने में सहायता कर सकती है। डक्टल पेड़ के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए कई स्वीकार्य स्कैनिंग पैरामीटर हैं। यह सुनिश्चित करने के लिए हमेशा ध्यान रखा जाना चाहिए कि इन स्कैनों के परिणामस्वरूप विकिरण खुराक चूहों के किसी दिए गए तनाव के लिए विकिरण सीमा से अधिक न हो।
विकिरण खुराक को फ्लोरोस्कोपी को देखकर और लंबे समय तक एक्सपोजर समय के साथ छवियों को प्राप्त करने के बजाय वितरण की सफलता को नोट करके बहुत कम किया जा सकता है। हमारे मानक स्कैन पैरामीटर दोहराने इमेजिंग के लिए स्वीकार्य हैं यदि केवल दो मिनट के मानक स्कैन प्राप्त करते हैं। 14 मिनट तक उच्च रिज़ॉल्यूशन लंबे समय तक स्कैन इच्छामृत्यु से पहले टर्मिनल प्रक्रिया के रूप में स्वीकार्य हैं।
ये लंबे स्कैन अनुदैर्ध्य अध्ययनों के लिए स्वीकार्य नहीं हैं क्योंकि वे जानवरों में विकिरण बीमारी का कारण बन सकते हैं। इस जानवर को एक इथेनॉल समाधान के साथ इंजेक्ट किया गया था जिसमें चार और नौ ग्रंथियों में 100 मिलीमोलर टैंटलम ऑक्साइड कंट्रास्ट शामिल थे। वर्तमान अधिग्रहण इंजेक्ट किए गए निचले ग्रंथियों का 14 मिनट का उच्च-रिज़ॉल्यूशन स्कैन है।
जानवर की फ्लोरोस्कोपी हमें इंजेक्शन समाधान के भीतर इसके विपरीत द्वारा हाइलाइट किए जा रहे डक्टल ट्री आर्किटेक्चर को देखने की अनुमति देती है। हमारे द्वारा उपयोग की जाने वाली माइक्रो-सीटी प्रणाली में अंतर्निहित सॉफ़्टवेयर है जो औपचारिक विश्लेषण के बिना इंजेक्शन की सफलता का आकलन करने के लिए त्वरित प्रस्तुतियों के निर्माण की अनुमति देता है। इस सुविधा में एक सरल विपरीत स्लाइडर है जो उचित सिग्नल-टू-शोर कमी की अनुमति देता है।
इन प्रस्तुतियों की सीमा यह है कि एक ही संकेत थ्रेसहोल्ड पूरी छवि पर लागू होते हैं। यह उज्ज्वल संकेतों की अनुमति देता है जो स्पष्ट रूप से डक्टल पेड़ का हिस्सा नहीं हैं, जैसे कि आहार में लोहा, प्रस्तुतीकरण में बने रहने के लिए। बेहतर औपचारिक प्रस्तुतियों को अधिक परिष्कृत विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके बनाया जा सकता है जो ब्याज के क्षेत्र के विभाजन की अनुमति देता है।
एकमात्र डक्टल पेड़ का सबसे अच्छा प्रतिपादन प्राप्त करने के लिए, हम आगे की छवि प्रसंस्करण के लिए स्तन वसा पैड को विभाजित करने की सलाह देते हैं। इस प्रक्रिया के लिए जानवर की पूरी मोटाई में वसा पैड की सीमाओं का पता लगाने की आवश्यकता होती है। हमने पाया है कि हर तीसरे स्लाइस का पता लगाना और वस्तु का प्रचार करना वाहिनी की संपूर्णता को पकड़ने के लिए पर्याप्त है।
यह एक व्यक्तिपरक प्रक्रिया हो सकती है, जिसके लिए स्कैन का विश्लेषण करने वाले सभी व्यक्तियों से समान आउटपुट सुनिश्चित करने के लिए ट्रेसिंग के लिए प्रयोगशाला मानकों के पालन की आवश्यकता होती है। शरीर रचना विज्ञान के साथ परिचितता किन क्षेत्रों को शामिल करने के बारे में निर्णय कॉल के साथ मदद कर सकती है। निशान का प्रचार करने के बाद, स्तन ग्रंथि के भीतर निहित केवल कंट्रास्ट को प्रदर्शित करने के लिए एक निश्चित सीमा के भीतर प्रस्तुतीकरण को थ्रेशोल्ड करना संभव है।
यह डक्टल पेड़ के भीतर समाधान होना चाहिए, साथ ही साथ तत्काल आसपास के क्षेत्र में कोई रिसाव भी होना चाहिए। 300 से 3, 000 एचयू की एक सीमा टैंटलम ऑक्साइड युक्त समाधानों के मामले में अच्छी तरह से काम करती है। एक पूरी तरह से संसाधित प्रस्तुति का एक उदाहरण यहां कई पहलुओं में देखा जा सकता है।
इस बात पर निर्भर करता है कि जानवर माइक्रो-सीटी में कैसे उन्मुख है, छवि के शीर्ष पर जानवर के सिर के साथ सहज ज्ञान युक्त शारीरिक स्थिति का प्रतिनिधित्व करने के लिए विश्लेषण सॉफ़्टवेयर में DICOM फ़ाइलों को फिर से शुरू करना आवश्यक हो सकता है। यह निर्धारित करना भी मुश्किल हो सकता है कि कौन सी ग्रंथि देखी जा रही है यदि आप हर बार छवि को समान फैशन में घुमाने का ध्यान नहीं रखते हैं। आगे के माप जैसे कि मात्रा या लंबाई एक बार जब आप डक्टल पेड़ का पुनर्निर्माण बना लेते हैं तो किए जा सकते हैं।
इस प्रक्रिया के माध्यम से सफल वितरण के लिए सत्यापन न केवल 3 डी माइक्रो-सीटी प्रस्तुतियों द्वारा प्रदर्शित किया जा सकता है जैसा कि यहां वर्णित है, बल्कि इंजेक्शन इवांस नीले रंग के साथ दोहरे दाग वाले पूरे माउंट के माध्यम से भी कार्माइन फिटकरी के साथ हाइलाइट किए गए पूरे डक्टल पेड़ को ओवरलैप किया जा सकता है। 3 डी confocal माइक्रोस्कोपी ई-कैडरिन के साथ दाग एक साफ ग्रंथि में डक्टल पेड़ की वास्तुकला को उजागर कर सकते हैं। स्ट्रेन-टू-स्ट्रेन और माउस-टू-माउस परिवर्तनशीलता और निप्पल एनाटॉमी ग्रंथियों को इंजेक्ट करना कम या ज्यादा मुश्किल बना सकता है।
यह पकड़ने में आसानी के लिए एक उच्च प्रोफ़ाइल के साथ इंजेक्शन के लिए एक आदर्श निप्पल का एक उदाहरण है। कम प्रोफाइल वाले निपल्स, जैसे कि यह एक, सफलतापूर्वक कैनुलेट करना अधिक कठिन हो सकता है। ये अंतर बिना किसी आघात या डोमिंग के साथ एक सफल इंजेक्शन प्राप्त करने की अधिक संभावना बना सकते हैं जैसा कि यहां देखा गया है या इस वसा पैड इंजेक्शन की गुंबददार उपस्थिति द्वारा दिखाए गए असफल होने की अधिक संभावना है।
जब स्तन कैंसर की रोकथाम की बात आती है, तो वर्तमान में दो मुख्य रणनीतियों को नियोजित किया जा रहा है। पहला, सतर्क प्रतीक्षा, कोई सच्चा हस्तक्षेप शामिल नहीं है। इस पथ का पीछा करने वाले व्यक्तियों को नियमित रूप से उनके स्तन ऊतकों में किसी भी गांठ के लिए निगरानी की जाती है जो इंगित करता है कि कैंसर का गठन हो रहा है।
रोग का पता लगाने तो उपचार के लिए शीघ्र होगा. रोगनिरोधी मास्टेक्टॉमी एक अधिक आक्रामक प्रक्रिया है जो सभी उपकला कोशिकाओं को हटा देती है जिसमें से स्तन कैंसर आसपास के स्ट्रोमा के साथ उत्पन्न हो सकता है। इस सर्जरी के गंभीर प्रतिकूल दुष्प्रभाव हो सकते हैं और शायद ही कभी बीमारी के कम या मध्यम जोखिम वाले व्यक्तियों के लिए रोगनिरोधी विकल्प के रूप में चुना जाता है।
हमारे दृष्टिकोण में स्तन डक्टल पेड़ में सीधे एक एब्लेटिव समाधान के इंजेक्शन के माध्यम से स्थानीय उपकला एब्लेशन शामिल है। यह विधि संपार्श्विक क्षति को कम करती है और संभवतः उन व्यक्तियों के लिए एक अधिक आकर्षक विकल्प होगी जो बीमारी के गंभीर जोखिम में नहीं हैं। तत्काल इमेजिंग पोस्ट-इंजेक्शन के लिए इसके विपरीत के अलावा भी इसे क्लिनिक में आसानी से अनुवाद योग्य बनाता है।
विवो इमेजिंग और स्तन कैंसर की रोकथाम के लिए माउस स्तन डक्टल पेड़ के लिए इथेनॉल-आधारित एब्लेटिव समाधान के लिए अभिकर्मकों के इंट्राडक्टल इंजेक्शन की एक विधि का वर्णन किया गया है। निप्पल खोलने में सीधे इंजेक्शन न्यूनतम संपार्श्विक ऊतक क्षति के साथ स्तन उपकला कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए अनुमति देता है।
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