Orthotopische niertransplantatie bij ratten is een belangrijk model om het mechanisme van renale allograftafstoting in preklinische studies te onderzoeken en kan helpen bij het ontwikkelen van een nieuwe benadering voor het verbeteren van de overleving op lange termijn van niertransplantaten. End-to-end anastomose van niervaten in deze operatie vermijdt ischemie van het onderlichaam en de trombose van inferieure vena cava, terwijl anastomose van urineleider in een end-to-side tunnelmethode postoperatieve urinelekkage en de draaiing van de urineleider vermindert. Deze methode geeft inzicht in het onderzoeken van de mechanismen van immuunafstoting en letsel van niertransplantaten na niertransplantatie.
Begin met het insnijden van de buik met een chirurgische schaar langs de middellijn van de symfyse pubis naar de subxiphoid. Trek vervolgens de incisie open met behulp van een retractor. Haal de darmen uit de rechterkant van de incisie en wikkel ze met bevochtigd gaas om te voorkomen dat ze uitdrogen.
Stel vervolgens de linker nier bloot. Dissociëer de linker nierslagader en ader met behulp van micro-tang en wattenstaafjes onder 20 keer vergroting. Ligate en transect de bijnierader en genitale ader indien nodig.
Dissociëer de urineleider met behulp van een micro-tang, waarbij de perifere bindweefsels behouden blijven om de bloedtoevoer naar de urineleider te garanderen. Dissociëren en clip of ligate de aorta ongeveer vijf millimeter boven de linker nierslagader met een vaatklem of 4-0 polyamide monofilament hechtdraad. Transect vervolgens de linker nierader distal naar de conjunctie van de linker genitale ader en de bijnier ader.
Spoel met behulp van een 24 gauge scalpelnaald de nier uit de aorta onder de linker nierslagader met ijskoude UW-oplossing aangevuld met 100 eenheden per milliliter Heparine totdat het bloed in kleur vervaagt. Transect de linker nierslagader naast de aorta, transect vervolgens de urineleider naast de blaas en dissociëren de nier met behulp van micro-tang en schaar. Bewaar de linker nier van de donor in ijskoude UW-oplossing.
Dissociëer minder dan 20 keer de linker nierslagader en nierader van de ontvangende rat met behulp van wattenstaafjes en micro-tangen. Laat indien nodig de bijnierader en genitale ader los. Klem de linker nierslagader en nierader bij de wortel met behulp van microvasculaire klemmen en transect vervolgens de nierslagader en nierader op drie millimeter afstand van de microvasculaire klem.
Dissociëren en ligaat de linker urineleider ongeveer twee tot drie centimeter onder de nier met een 8-0 polyamide monofilament hechting en transect het bij de ligatie. Reseceer de inheemse linker nier van de ontvanger door de nier te dissociëren met behulp van een micro-tang en schaar. Implanteer de donornier in de linker renale fossa van de ontvangende rat en plaats ijs rond de geïmplanteerde donornier.
Schakel over naar 45 keer vergroting en anastomoseer vervolgens de nierslagader en nierader van de donor naar de nierslagader en nierader van de ontvanger in een end-to-end patroon met behulp van 10-0 polyamide monofilament hechtingen. Om de nierslagader te anastomose met onderbroken hechtingen, plaatst u de verblijfsnaden op 12 en zes uur posities van anastomose. Hecht onmiddellijk één kant van de anastomose tussen de twee blijfnaden met twee tot drie hechtingen.
Draai de verblijfsnaden om en hecht op dezelfde manier de andere kant van de anastomose tussen de twee verblijfsnaden met twee tot drie hechtingen. Om de nierader te anastomose met continue hechtingen, plaatst u de verblijfsnaden op de zes- en 12-uursposities van de anastomose. Hecht één kant van de anastomose vanaf de 12 uur positie met vier tot vijf hechtingen met behulp van de lopende hechtingen.
Draai de verblijfs hechtingen om en hecht op dezelfde manier de andere kant van de anastomose vanuit de zes uur positie. Reperfuseer de donornier door de niet-invasieve microvasculaire klem van de nierader vrij te geven, identificeer de bloedingsplaatsen en maak indien nodig extra hechtingen. Laat vervolgens de niet-invasieve microvasculaire klem van de nierslagader los, identificeer de bloedingsplaatsen en maak indien nodig extra hechtingen.
Minder dan 20 keer vergroting, ligaat of hecht het uiteinde van de donorureter met een 4-0 polyamide monofilament hechtdraad als een sleep om het uiteinde door de tunnel van de blaas van de ontvanger te slepen. Fixeer de donorureter met de blaas van de ontvanger door de adventitia van de donorureter te hechten met de spierlaag van de blaas van de ontvanger buiten op vier equidistante posities met behulp van een 8-0 polyamide monofilament hechtdraad. Transecteer daarna het uiteinde van de donorureter met de hechting buiten de blaas van de ontvanger en laat de donorureter terug krimpen in de blaas van de ontvanger.
Plaats de darmen terug in de buikholte en sluit de abdominale incisie met continue hechtingen in de spierlaag en vervolgens de huidlaag met een 4-0 polyamide monofilament hechtdraad. Tien weken na transplantatie onthulden hematoxyline- en eosinekleuring en periodieke zuurverschuivingskleuring glomerulaire sclerose, interstitiële fibrose, tubulaire atrofie en interstitiële arteriële sclerose in het renale allograft in tegenstelling tot de isograftnier. Zilverkleuring toonde de verdikking van het glomerulaire keldermembraan in de allograftnier in vergelijking met de isograftnier, wat wijst op het succes van het orthotopische niertransplantatiemodel bij ratten.
Omdat het vasculaire gat van de nier erg dun is, om de verkeerde hechting te voorkomen, vergeet niet om de anastomose uit te voeren op het hoge vergrotingsveld.