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•
06:48 min
June 16th, 2022
DOI :
10.3791/63498-v
Chapters
0:04
Introduction
0:52
Cell Culture and HuR Overexpression
2:26
The Reporter Assay
5:18
Results: MicroRNA Biogenesis Reporter Assay Analyzing Maturation in Mammalian Cells
6:17
Conclusion
Transcript
我们的协议解决了调节性RNA结合蛋白对microRNA生物发生和成熟的影响,直接来自细胞培养物。我们描述的方法可以使用普通的细胞培养试剂进行,并且相对较快。该方法对于研究microRNA的表型效应及其靶标在不同类型的真核细胞中非常重要。
可以使用正常或疾病样细胞。重要的是选择适合转染的细胞系,进行充分的转染和诱导对照,以便通过荧光素酶活性观察靶亲和力的变化。首先,将细胞保持在DMEM中,在100毫米培养皿中补充高葡萄糖,并将细胞在37摄氏度下在含有5%二氧化碳的潮湿受控气氛培养
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Summary
我们开发了一种内旋microRNA生物发生报告基因检测方法,用于具有四种质粒 的体外 细胞:一种具有内旋性miRNA,一种具有靶标,一种用于过表达调节蛋白,另一种用于Renilla荧光素酶。miRNA经过处理,可以通过与靶序列结合来控制荧光素酶的表达。
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