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•
06:48 min
June 16th, 2022
DOI :
10.3791/63498-v
Chapters
0:04
Introduction
0:52
Cell Culture and HuR Overexpression
2:26
The Reporter Assay
5:18
Results: MicroRNA Biogenesis Reporter Assay Analyzing Maturation in Mammalian Cells
6:17
Conclusion
Transcript
私たちのプロトコルは、細胞培養から直接、マイクロRNAの生合成と成熟に対する調節RNA結合タンパク質の影響に対処します。我々が説明する方法は、一般的な細胞培養試薬を用いて行うことができ、比較的高速である。この方法は、さまざまな種類の真核細胞におけるマイクロRNAとその標的の表現型効果を研究するために重要です。
正常または疾患様細胞を使用することができる。ルシフェラーゼ活性による標的親和性の変化を観察するためには、トランスフェクションに適した細胞株を選択し、適切なトランスフェクシ
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Summary
イントロマイクロRNA生合成レポーターアッセイを開発し、イン ビトロ の細胞で、イントロニックmiRNAの1つ、ターゲットの1つ、調節タンパク質を過剰発現させるプラスミド、ウミシイタケの4種類のプラスミドを用いました。miRNAをプロセシングし、標的配列に結合することによってルシフェラーゼ発現を制御することができた。
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