Name: establishment of deep hypothermic circulatory arrest in rats
Uploaded: 2022-12-16T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Deep Hypothermic Circulatory Arrest in Rats at JoVE.com

يشكر المؤلفون Liang Zhang للمساعدة في جمع بيانات الفيديو أثناء التجربة. تم دعم هذه الدراسة من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم المنحة: 82070479) وصناديق البحوث الأساسية للجامعات المركزية (رقم المنحة: 3332022128).

خضعت البروتوكولات لمراجعة مؤسسية وحصلت على موافقة من اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات ، مستشفى فوواي ، الأكاديمية الصينية للعلوم الطبية (FW-2021-0005). تم تنفيذ جميع الإجراءات التجريبية وفقا لدليل رعاية واستخدام المختبر الذي نشرته المعاهد الوطنية للصحة.
ملاحظة: تم الا...

<ol>
	<li>Lewis, F. J., Taufic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Closure+of+atrial+septal+defects+with+the+aid+of+hypothermia;+experimental+accomplishments+and+the+report+of+one+successful+case.">Closure of atrial septal defects with the aid of hypothermia; experimental accomplishments and the report of one successful case.</a> Surgery. 33 (1), 52-59 (1953).</li><li>Miler, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Miller's Anesthesia., eighth edition. , (2015).</li><li>Goco&#322;, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+deep+hypothermia+in+cardiac+surgery.">The role of deep hypothermia in cardiac surgery.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 18 (13), 7061 (2021).</li><li>Zhu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+deep+hypothermic+circulatory+arrest+in+surgery+for+renal+or+adrenal+tumor+with+vena+cava+thrombus:+A+single-institution+experience.">The role of deep hypothermic circulatory arrest in surgery for renal or adrenal tumor with vena cava thrombus: A single-institution experience.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 13 (1), 85 (2018).</li><li>Poon, S. S., Estrera, A., Oo, A., Field, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+moderate+hypothermic+circulatory+arrest+with+selective+antegrade+cerebral+perfusion+superior+to+deep+hypothermic+circulatory+arrest+in+elective+aortic+arch+surgery.">Is moderate hypothermic circulatory arrest with selective antegrade cerebral perfusion superior to deep hypothermic circulatory arrest in elective aortic arch surgery.</a> Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 23 (3), 462-468 (2016).</li><li>Giuliano, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+profile+in+a+canine+model+of+hypothermic+circulatory+arrest.">Inflammatory profile in a canine model of hypothermic circulatory arrest.</a> Journal of Surgical Research. 264, 260-273 (2021).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperoxia+management+during+deep+hypothermia+for+cerebral+protection+in+circulatory+arrest+rabbit+model.">Hyperoxia management during deep hypothermia for cerebral protection in circulatory arrest rabbit model.</a> ASAIO Journal. 58 (4), 330-336 (2012).</li><li>Jungwirth, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurologic+outcome+after+cardiopulmonary+bypass+with+deep+hypothermic+circulatory+arrest+in+rats:+Description+of+a+new+model.">Neurologic outcome after cardiopulmonary bypass with deep hypothermic circulatory arrest in rats: Description of a new model.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 131 (4), 805-812 (2006).</li><li>Engels, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cardiopulmonary+bypass+with+deep+hypothermic+circulatory+arrest+rat+model+for+the+investigation+of+the+systemic+inflammation+response+and+induced+organ+damage.">A cardiopulmonary bypass with deep hypothermic circulatory arrest rat model for the investigation of the systemic inflammation response and induced organ damage.</a> Journal of Inflammation. 11, 26 (2014).</li><li>Chen, Q., Sun, K. P., Huang, J. S., Wang, Z. C., Hong, Z. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+attenuates+neuroinflammation+after+deep+hypothermia+with+circulatory+arrest+in+rats.">Resveratrol attenuates neuroinflammation after deep hypothermia with circulatory arrest in rats.</a> Brain Research Bulletin. 155, 145-154 (2020).</li><li>Chen, Q., Lei, Y. Q., Liu, J. F., Wang, Z. C., Cao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triptolide+improves+neurobehavioral+functions,+inflammation,+and+oxidative+stress+in+rats+under+deep+hypothermic+circulatory+arrest.">Triptolide improves neurobehavioral functions, inflammation, and oxidative stress in rats under deep hypothermic circulatory arrest.</a> Aging. 13 (2), 3031-3044 (2021).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+target+to+reduce+microglial+inflammation+and+neuronal+damage+after+deep+hypothermic+circulatory+arrest.">A novel target to reduce microglial inflammation and neuronal damage after deep hypothermic circulatory arrest.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 159 (6), 2431-2444 (2020).</li><li>Pinto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+isoform+of+superoxide+dismutase+has+a+significant+impact+on+cardiovascular+ischaemia+and+reperfusion+injury+during+cardiopulmonary+bypass.">The extracellular isoform of superoxide dismutase has a significant impact on cardiovascular ischaemia and reperfusion injury during cardiopulmonary bypass.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 50 (6), 1035-1044 (2016).</li><li>Hirao, S., Masumoto, H., Itonaga, T., Minatoya, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+recovery+cardiopulmonary+bypass+model+without+transfusion+or+inotropic+agents+in+rats.">A recovery cardiopulmonary bypass model without transfusion or inotropic agents in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e56986 (2018).</li><li>Ha, J. Y., Kim, J. S., Kim, S. E., Son, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+activation+of+mitophagy+and+autophagy+by+staurosporine+protects+against+dopaminergic+neuronal+cell+death.">Simultaneous activation of mitophagy and autophagy by staurosporine protects against dopaminergic neuronal cell death.</a> Neuroscience Letters. 561, 101-106 (2014).</li><li>Yamamoto, A., Yue, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+and+its+normal+and+pathogenic+states+in+the+brain.">Autophagy and its normal and pathogenic states in the brain.</a> Annual Review of Neuroscience. 37, 55-78 (2014).</li><li>You, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+cardiopulmonary+bypass+model:+Application+of+a+miniature+extracorporeal+circuit+composed+of+asanguinous+prime.">Rat cardiopulmonary bypass model: Application of a miniature extracorporeal circuit composed of asanguinous prime.</a> Journal of Extra-Corporeal Technology. 37 (1), 60-65 (2005).</li><li>Chen, Q., Lei, Y. Q., Liu, J. F., Wang, Z. C., Cao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+chlorogenic+acid+treatment+on+neuroinflammation+after+deep+hypothermic+circulatory+arrest+may+be+mediated+through+CYLD/NF-&#954;B+signaling.">Beneficial effects of chlorogenic acid treatment on neuroinflammation after deep hypothermic circulatory arrest may be mediated through CYLD/NF-&#954;B signaling.</a> Brain Research. 1767, 147572 (2021).</li><li>Li, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+profiles+of+circular+RNAs+in+the+rat+hippocampus+after+deep+hypothermic+circulatory+arrest.">Differential expression profiles of circular RNAs in the rat hippocampus after deep hypothermic circulatory arrest.</a> Artificial Organs. 45 (8), 866-880 (2021).</li><li>Linardi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slow+versus+fast+rewarming+after+hypothermic+circulatory+arrest:+effects+on+neuroinflammation+and+cerebral+oedema.">Slow versus fast rewarming after hypothermic circulatory arrest: effects on neuroinflammation and cerebral oedema.</a> European Journal of Cardiothoracic Surgery. 58 (4), 792-780 (2020).</li><li>Engelman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Society+of+Thoracic+Surgeons,+The+Society+of+Cardiovascular+Anesthesiologists,+and+The+American+Society+of+ExtraCorporeal+Technology:+Clinical+practice+guidelines+for+cardiopulmonary+bypass--Temperature+management+during+cardiopulmonary+bypass.">The Society of Thoracic Surgeons, The Society of Cardiovascular Anesthesiologists, and The American Society of ExtraCorporeal Technology: Clinical practice guidelines for cardiopulmonary bypass--Temperature management during cardiopulmonary bypass.</a> Annals of Thoracic Surgery. 100 (2), 748-757 (2015).</li><li>Jenke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AdipoRon+attenuates+inflammation+and+impairment+of+cardiac+function+associated+with+cardiopulmonary+bypass-induced+systemic+inflammatory+response+syndrome.">AdipoRon attenuates inflammation and impairment of cardiac function associated with cardiopulmonary bypass-induced systemic inflammatory response syndrome.</a> Journal of the American Heart Association. 10 (6), 018097 (2021).</li></ol>

القنية هي الإجراء الأساسي لإنشاء DHCA في الفئران. قبل القنية ، فإن نقع الشريان ب 0.5 مل من يدوكائين 2٪ سيجعل من السهل القنية. بعد القنية ، من الضروري استخدام الهيبارين ب 500 وحدة دولية / كجم من الهيبارين عبر الوريد الوداجي الخارجي لتجنب تكوين الخثرة الدقيقة17. لقد وجدنا مرارا وتك...

تم استخدام توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة (DHCA) في جراحة القلب منذ عام 19531. تتضمن سلطة مدينة دبي الطبية خفض درجة الحرارة الأساسية للمريض إلى مستويات منخفضة الحرارة بشكل عميق (15-22 درجة مئوية) قبل مقاطعة تدفق الدم إلى الجسم على مستوى العالم2. يمكن أن يوفر توقف الدورة الدموية مجال عمل غير دموي نسبيا. انخفاض حرارة الجسم العميق يقلل من عملية التمثيل الغذائي ، وخاصة في الدماغ وعضلة القلب ، وهي وسيلة فعالة للحماية من نقص التروية3. يتم تطبيق DHCA بشكل شائع أثناء العمليات الجراحية لأمراض القلب الخلقية المعقدة ، ومرض قوس الأبهر ، وحتى أورام الكلى أو الغدة الكظرية مع خثرة الوريد الأجوف 4,5. لذلك، يوفر إنشاء نماذج حيوانية لسلطة مدينة دبي الطبية مرجعا مهما لتحسين الإجراء والوقاية من المضاعفات في البيئات السريرية.
على الرغم من أنه يمكن إنشاء نماذج مع الأنياب6 والأرانب7 والحيوانات الأخرى ، فمن الأفضل استخدام الفئران بسبب قابليتها للتشغيل وتكلفتها المنخفضة. تم وصف نموذج الفئران DHCA لأول مرة في عام 2006 من قبل Jungwirth et al.8. وقد وجد أن مدة توقف الدورة الدموية كان لها تأثير على النتائج العصبية. منذ ذلك الحين ، تم التحقيق في نماذج الفئران DHCA على نطاق واسع. تم توضيح أن سلطة مدينة دبي الطبية يمكن أن تثير متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية (SIRS)9. في دراسات لاحقة ، وجد علماء الصيدلة أن الالتهاب العصبي المرتبط ب DHCA الناجم عن SIRS يمكن تخفيفه بواسطة ريسفيراترول10 وتريبتوليد11. وجد فريقنا أيضا أن الالتهاب العصبي المرتبط ب DHCA يمكن تخفيفه عن طريق تثبيط البروتين12 المرتبط بالحمض النووي الريبي المحرض على البارد. في نظام القلب والأوعية الدموية ، يكون لديسموتاز الفائق تأثير وقائي للقلب على إصابات نقص التروية / التروية (I / R) خلال DHCA13. ووسعت هذه النتائج من فهم العمليات الفيزيولوجية المرضية المتعلقة بسلطة مدينة دبي الطبية وقدمت اتجاهات جديدة لتحسين نتائج سلطة مدينة دبي الطبية. ومع ذلك ، فإن النتائج المتعلقة بالتسمم الداخلي ، والإجهاد التأكسدي ، والالتهام الذاتي بعد DHCA غير حاسمة. تستخدم سلطة مدينة دبي الطبية نفس التكنولوجيا التشغيلية مثل المجازة القلبية الرئوية (CPB)14 ، لكن استراتيجية إدارتها مختلفة ، وتختلف خطوات إنشاء DHCA عبر فرق مختلفة8،9،10،11. تهدف الدراسة الحالية إلى توفير طريقة لإنشاء إجراء DHCA في الفئران.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Heat Exchanger</td>
			<td>Xi&#8217;an Xijing Medical Appliance Co., Ltd</td>
			<td>Animal-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane Oxygenator</td>
			<td>Dongguan Kewei Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Micro-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitor</td>
			<td>Chengdu Techman Co., Ltd</td>
			<td>BL-420s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller Pump</td>
			<td>Changzhou Prefluid Technology Co.,Ltd</td>
			<td>BL100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SD Rat</td>
			<td>HFK Bioscience Co.,Ltd.</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Maruishi Pharmaceutical Co. Ltd</td>
			<td>H20150020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaver</td>
			<td>Hangzhou Huayuan Pet Products Co.,Ltd.</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporizer</td>
			<td>SPACECABS</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ventilator</td>
			<td>Shanghai Alcott Biotech Co., Ltd</td>
			<td>ALC-V8S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Tank</td>
			<td>Maquet Critical Care AB</td>
			<td>Jostra HCU20-600</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of deep hypothermic circulatory arrest in rats

يتم تطبيق توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة (DHCA) بشكل روتيني أثناء العمليات الجراحية لأمراض القلب الخلقية المعقدة ومرض قوس الأبهر. تهدف الدراسة الحالية إلى توفير طريقة لإنشاء DHCA في الفئران. لتقييم تأثير عملية DHCA على العلامات الحيوية ، تم استخدام نموذج فئران المجازة القلبية الرئوية ذات درجة الحرارة العادية (CPB) دون توقف الدورة الدموية كعنصر تحكم. كما هو متوقع ، أدت مدينة دبي الطبية إلى انخفاض كبير في درجة حرارة الجسم ومتوسط ضغط الدم الشرياني. أشار تحليل غازات الدم إلى أن DHCA زادت من مستويات حمض اللاكتيك ولكنها لم تؤثر على درجة الحموضة في الدم وتركيزات الهيموجلوبين والهيماتوكريت و Na + و Cl− و K + والجلوكوز. علاوة على ذلك ، بالمقارنة مع فئران CPB ذات درجة الحرارة العادية ، أظهرت نتائج المجهر الإلكتروني النافذ زيادة طفيفة في البلعمة الذاتية الحصين في فئران DHCA.

كمجموعة مراقبة ، أظهرت فئران درجة الحرارة العادية CPB (NtCPB) دون توقف الدورة الدموية متوسط ضغط الدم الشرياني (MAP) ودرجة حرارة الجسم خلال الإجراء بأكمله ، بينما انخفضت MAP لفئران DHCA أثناء السكتة القلبية (p < 0.01 ، الشكل 3A). انخفضت درجة حرارة فئران DHCA بسرعة خلال مرحلة التبريد وتع?...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Deep Hypothermic Circulatory Arrest in Rats at JoVE.com

Establishment of Deep Hypothermic Circulatory Arrest in Rats

يقدم هذا البروتوكول إنشاء توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة في الفئران ، والذي يمكن تطبيقه للتحقيق في متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية ، وإصابة نقص التروية / التروية ، والإجهاد التأكسدي ، والتهاب الأعصاب ، وما إلى ذلك.

إنشاء توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة في الفئران

Deep hypothermic circulatory arrest (DHCA) is routinely applied during surgeries for complex congenital heart disease and aortic arch disease. The present ...

إنشاء اعتقال الدورة الدموية انخفاض حرارة الجسم العميق في الفئران. توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة ، يتم تطبيق DHCA بشكل روتيني أثناء العمليات الجراحية لأمراض القلب الخلقية المعقدة ومرض قوس الأبهر. تهدف الدراسة الحالية إلى توفير طريقة لإنشاء DHCA في الفئران.تلقت البروتوكولات مراجعة مؤسسية وحصلت على موافقة من اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات ، مستشفى Fuwai ، الأكاديمية الصينية للعلوم الطبية. العمل التحضيري. تأكد من أن دوائر CPB تحتوي على خزان معدل من قطارة مورفس ، ومضخة أسطوانية ، ومبادل حراري ، وأكسجين غشائي ، وأنبوب توصيل ، وخزان مياه متصل بالدائرة ويجعل 12 ملليلتر من نشا الهيدروكسي مع ملليلتر واحد من الهيبارين الصوديوم وملحة واحدة من الملليلتر رئيس الدائرة بمحلول فتيلة 40 ملليلتر مع تدوير المضخة الدوارة برفق.اثنان ، التخدير والقنية. قم بتوصيل الأنبوب بجهاز التنفس الصناعي والمعلمات الجانبية. ضع بطانية تدفئة كهربائية واليمين وواجه اليمين بشريط.ضع مرهم العيون على العينين لمنع الجفاف. حلق الشعر على المنطقة الأربية اليمنى ومنطقة عنق الرحم اليمنى والذيل باستخدام ماكينة الحلاقة. ثم تطهير الجلد مع الألدهيد والكحول.قطع الجلد والمنطقة الأربية اليسرى وتشريح العضلات والأنسجة العظم الرخو لفضح الوريد الفخذي الأيسر والشريان. افصل الشريان بعناية. قنية 22 قياس قسطرة في الوريد في الشريان الفخذي الأيسر.الشريان المربوط والقسطرة مع الحرير. استخدم محلول ملحي يحتوي على الهيبارين لطرد القنية لتجنب التجلط. قم بتوصيل القسطرة بمستشعر الضغط لمراقبة ضغط الدم.قطع جلد الذيل ثم استخدام مشرط لقطع النوعية السطحية لشريان الذيل لكشف شريان الذيل الذي يقع في منتصف المجال الجراحي. قنية الشريان الخلفي مع القسطرة الوريدية قياس 22. ربط الشريان والقسطرة مع الحرير.استخدم محلول ملحي يحتوي على الهيبارين لغسل القسطرة لتجنب التجلط. قطع جلد الوداجي الأيمن من الوريد ثم فصل العضلات والأنسجة لكشف الوريد. أدخل قسطرة وريدية متعددة الأعمار محلية الصنع بقياس 16 في الوداجي الخارجي الأيمن للوريد وضعها في الوريد الأجوف السفلي الأيمن أو الأذين الأيمن بعناية.إدارة الهيبارين الصوديوم حيث يغطي الوريد الخارجي الأيمن كل منطقة قنية بالكرات الرطبة لتجنب التلوث. ثالثا ، قم بتوصيل الدائرة بالقسطرة في الشريان الخلفي وحافظ على معدل المضخة منخفضا من واحد إلى ملليلتر في الدقيقة. ثم قم بتوصيل الخزان بالقسطرة في الوريد الوداجي الخارجي الأيمن.تأكد من وجود مستوى دم دائما يبلغ حوالي سنتيمتر واحد في الخزان. قم بتشغيل خزان المياه واضبط درجة حرارة الماء على 37 درجة مئوية أولا. بعد استقرار ضغط الدم ، قم بزيادة مضخة التدفق برفق حتى 80 إلى 100 ملليلتر في الدقيقة.أربعة ، التبريد. اضبط درجة حرارة الغرفة على حوالي 20 درجة مئوية. ضع مكعبات الثلج في هذه القفازات التي تستخدم لمرة واحدة ثم ضعها على الرأس والجانبين الأيمن.تم اقتراح درجة حرارة الخزان في الوقت الفعلي وفقا لدرجة حرارة المستقيم للأرز. قم بتغيير المعلمات ذات الصلة لجهاز التنفس الصناعي بشكل صحيح وفقا لنتائج تحليل غازات الدم. خمسة ، انخفاض حرارة الجسم العميق توقف الدورة الدموية.ثم تنخفض درجة حرارة المستقيم إلى 15 إلى 20 درجة مئوية. قم بتغيير كيس الثلج وتخلص من القفازات لضمان الحفاظ على انخفاض حرارة الجسم العميق أثناء توقف الدورة الدموية. أوقف مضخة الأسطوانة.حافظ على الخزان على اتصال بالبيئة واستنزاف الدم ببطء من الوريد الوداجي الخارجي إلى الخزان. إيلاء الاهتمام لإصلاح ضغط الدم. بعد عدم وجود ضغط الدم ونبض القلب ، أوقف الصرف وأغلق الخزان.قم بإيقاف تشغيل جهاز التنفس الصناعي. ستة ، الاحماء وإعادة التروية. قم بإزالة جميع القفازات التي تستخدم لمرة واحدة وزيادة درجة حرارة الغرفة إلى 25 درجة مئوية.استعادة الذاكرة الأكسجين بين التهوية مع الحفاظ على قص أنبوب الصرف الوريدي. قم بتشغيل المضخة الدوارة للتأكد من عودة الدم في الخزان ببطء إلى الجسم الصحيح. قم بتشغيل جهاز التنفس الصناعي بعد بقاء مستوى الدم في الخزان سنتيمترا واحدا.باستخدام أنبوب الصرف وتصريف الدم من الأذين الأيمن إلى الخزان ببطء. قم بتشغيل مصباح التدفئة ووسادة التدفئة وخزان المياه. ضبط درجة حرارة خزان المياه إلى 25 درجة مئوية.ثم اضبطه على درجة الحرارة اليسرى في الوقت المناسب. قم بإزالة مصباح التسخين بعد عودة درجة حرارة المستقيم إلى 34 درجة مئوية. سبعة ، الفطام قبالة CPB.قم بتقليل أسطوانة معدل تدفق المضخة ببطء وتدريجيا واضبط سرعة جنس الوريد في معدل التدفق إلى ملليلتر واحد في الدقيقة. الحفاظ على الخزان في اتصال مع البيئة. ضخ الدم المتبقي في دائرة بمعدل تدفق واحد ملليلتر في الدقيقة.أوقف أكسجة الذاكرة ومضخة الأسطوانة. القتل الرحيم بعد فترة من التهوية الميكانيكية والتخدير العميق. النتائج التمثيلية.كمجموعة تحكم ، درجة الحرارة العادية CPB ، NtCPB ، الفئران. دون توقف الدورة الدموية أظهرت استقرار متوسط ضغط الدم الشريان MAP ودرجة حرارة الجسم خلال الإجراء بأكمله. في حين انخفضت خريطة الفئران DHCA خلال السكتة القلبية.انخفضت درجة حرارة فئران مدينة دبي الطبية بسرعة خلال مرحلة التبريد وتعافت تدريجيا خلال المرحلة الدوارة. الفطام من دائرة مدينة دبي الطبية عادت درجة حرارة الفئران سلطة مدينة دبي الطبية إلى وضعها الطبيعي. أشارت البيانات المذكورة أعلاه إلى أن إجراء سلطة مدينة دبي الطبية لدينا يقلد درجة الحرارة الفعلية وتغيرات MAP للمرضى في العيادات.تم التحقيق في تأثير معالج DHCA وارتفاعه عن طريق تحليل غازات الدم. بعد ملامسة الدم بالكامل للمحلول الأساسي ، كان تركيز الهيموجلوبين أعلى من ستة جرامات لكل ديسيلتر في كلا المجموعتين. الفطام عن سطح DHCA ، زاد إلى تسعة غرامات لكل ديسيلتر بسبب إعادة ضخ الدم المتبقي في دائرة CPB في اليمين.أظهر الهيماتوكريت ، HCT ، ميلا مشابها ل HB. بعد إعادة التروية في سلطة مدينة دبي الطبية ، زاد حمض اللاكتات بسرعة وهو ما كان أكثر وضوحا في مجموعة DHCA. انخفض الرقم الهيدروجيني بعد إجراء DHCA ، والذي كان على الأرجح نتيجة لتراكم حمض اللاكتات. خلال التجربة بأكملها ، لم يظهر تركيز الصوديوم والكلوريد وأيونات البوتاسيوم والجلوكوز اختلافات كبيرة في كل 10 نقاط.تشير هذه النتيجة إلى أن DHCA تسببت فقط في زيادة حمض اللاكتات ولكنها لم تؤثر على درجة الحموضة في الدم وتركيز الهيموجلوبين والهيماتوكريت وأيونات الصوديوم وأيونات الكلوريد وأيونات البوتاسيوم والجلوكوز. من أجل تقييم تأثير DHCA على الالتهام الذاتي العصبي ، استخدمنا المجهر الكهربائي للإرسال ووجدنا بشكل مدهش وزدنا عدد البلعمة الذاتية في الحصين لفئران DHCA. أشارت البيانات المذكورة أعلاه إلى أن نموذج DHCA الخاص بنا يقلد تغيرات درجة الحرارة الفعلية و MAP للمرضى في العيادات.يمكن تطبيق هذا النموذج للتحقيق في متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية ، والتهاب الأعصاب ، وما إلى ذلك.

establishment-of-deep-hypothermic-circulatory-arrest-in-rats

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel therapeutic entity in reconstructive surgery. However, long term high-dose multi-drug immunosuppressive therapy is required to ensure graft survival, bearing the risk of serious side effects which halters broader application. Further progression in this field may depend on better understanding of basic immunology and ischemia reperfusion injury in composite tissue grafts.
To date, orthotopic hind limb transplantation in rats has been the preferred rodent model for reconstructive transplantation (RT), however, it is an extremely demanding procedure that requires extraordinary microsurgical skills for reattachment of vasculature, bones, muscles and nerves.
We have introduced the vascular cuff anastomosis technique to this model, providing a rapid and reliable approach to rat hind limb transplantation. This technique simplifies and shortens the surgical procedure and enables surgeons with basic microsurgical experience to successfully perform the operation with high survival and low complication rates. The technique seems to be well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury (IRI) studies.

Here we describe the orthotopic rat hind-limb transplantation procedure, which seems to be the gold standard in vivo model for composite tissue allotransplantation research.

مثلي هند زرع الأطراف الاصطناعية في الفئران

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel ...

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized animals. Before embarking on an examination of animals for parasites, two things should be considered. One: what use will be made of the information collected, and two: which test is the most appropriate. Knowing that animals are parasitized may be something that the facility accepts, but there is often a need to treat animals and then to determine the efficacy of treatment. Parasites may be detected in animals through various techniques, including samples taken from live or euthanized animals. Historically, the tests with the greatest diagnostic sensitivity required euthanasia of the animal, although PCR has allowed high-sensitivity testing for several types of parasite. This article demonstrates procedures for the detection of endo- and ectoparasites in mice and rats. The same procedures are applicable to other rodents, although the species of parasites found will differ.

This article describes various procedures for screening rats and mice to detect endo- or ectoparasitism. Several diagnostic assays will be demonstrated, both those suitable for use on live animals and those used after euthanasia of the animal. Photographs to aid in identification of rat and mouse parasites will be included.

تشخيص وEndoparasites Ecto في الجرذان والفئران المعملية

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized ...

Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines

Infection of B cells with Epstein-Barr virus (EBV) leads to proliferation and subsequent immortalization, resulting in establishment of lymphoblastoid cell lines (LCL) in vitro. Since LCL are latently infected with EBV, they provide a model system to investigate EBV latency and virus-driven B cell proliferation and tumorigenesis1. LCL have been used to present antigens in a variety of immunologic assays2, 3. In addition, LCL can be used to generate human monoclonal antibodies4, 5 and provide a potentially unlimited source when access to primary biologic materials is limited6, 7.
A variety of methods have been described to generate LCL. Earlier methods have included the use of mitogens such as phytohemagglutinin, lipopolysaccharide8, and pokeweed mitogen9 to increase the efficiency of EBV-mediated immortalization. More recently, others have used immunosuppressive agents such as cyclosporin A to inhibit T cell-mediated killing of infected B cells7, 10-12.
The considerable length of time from EBV infection to establishment of cell lines drives the requirement for quicker and more reliable methods for EBV-driven B cell growth transformation. Using a combination of high titer EBV and an immunosuppressive agent, we are able to consistently infect, transform, and generate LCL from B cells in peripheral blood. This method uses a small amount of peripheral blood mononuclear cells that are infected in vitroclusters of cells can be demonstrated. The presence of CD23 with EBV in the presence of FK506, a T cell immunosuppressant. Traditionally, outgrowth of proliferating B cells is monitored by visualization of microscopic clusters of cells about a week after infection with EBV. Clumps of LCL can be seen by the naked eye after several weeks. We describe an assay to determine early if EBV-mediated growth transformation is successful even before microscopic clusters of cells can be demonstrated. The presence of CD23hiCD58+ cells observed as early as three days post-infection indicates a successful outcome.

We describe a method for generating transformed B cell lines using Epstein-Barr virus. We also illustrate a novel assay that can identify B cells destined to undergo transformation as early as three days after infection.

إنشاء فيروس ابشتاين بار النمو وتحولت خطوط الخليوي Lymphoblastoid

Infection of B cells with Epstein-Barr virus (EBV) leads to proliferation and subsequent immortalization, resulting in establishment of lymphoblastoid ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable alternative to animal model systems for the study of a specific step of microbial pathogen infection. A human monocytic cell line THP-1 which, upon phorbol ester treatment, is differentiated into macrophages, has previously been used to study virulence strategies of many intracellular pathogens including Mycobacterium tuberculosis. Here, we discuss a protocol to enact an in vitro cell culture model system using THP-1 macrophages to delineate the interaction of an opportunistic human yeast pathogen Candida glabrata with host phagocytic cells. This model system is simple, fast, amenable to high-throughput mutant screens, and requires no sophisticated equipment. A typical THP-1 macrophage infection experiment takes approximately 24 hr with an additional 24-48 hr to allow recovered intracellular yeast to grow on rich medium for colony forming unit-based viability analysis. Like other in vitro model systems, a possible limitation of this approach is difficulty in extrapolating the results obtained to a highly complex immune cell circuitry existing in the human host. However, despite this, the current protocol is very useful to elucidate the strategies that a fungal pathogen may employ to evade/counteract antimicrobial response and survive, adapt, and proliferate in the nutrient-poor environment of host immune cells.

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

The current article outlines a protocol to establish an in vitro cell culture model system to study the interaction of a facultative intracellular human fungal pathogen Candida glabrata with human macrophages which will be a useful tool to advance our knowledge of fungal virulence mechanisms.

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and pneumothorax from pleural disruption can result in a significant mortality rate. This protocol is a simple method of rat thymectomy that utilizes a mini-sternotomy and endotracheal intubation. Intubation is accomplished with a non-invasive and easily reproducible method and allows for positive pressure ventilation to prevent pneumothorax and a controlled airway that allows sufficient time for careful thymus dissection to minimize pleural disruption. A 1.5 cm sternal incision decreases contact with mediastinal vessels and pleura, while still providing full visualization of the thymus. Following exposure of the mediastinum, the thymus is removed by blunt dissection under magnification. The pleural space is then sealed by suture closure of the pre-tracheal muscles followed by the application of surgical glue. The thorax is then closed by suture closure of the sternum, followed by suture closure of the skin. All thymectomies were complete as evidenced by immunohistochemical (IHC) staining of mediastinal tissue, and absence of na&#239;ve T-cells by flow cytometry, and the procedure had a 96% survival rate. This method is suitable when complete thymectomy with minimal complications is desired for further immunological studies in athymic adult rats.

Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described.

التيموس كاملة في الجرذان الكبار مع غير الغازية التنبيب الرغامي

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two Sprague-Dawley rats were used in this study. Animals were orally treated twice a day for two days with B. subtilis BSB3 strain or PBS. The next day after the last treatment, each group was divided and two experimental groups (one treated with PBS and one treated with B. subtilis) were placed at 45 oC for 25 min. Two control groups stayed for 25 min at room temperature. All rats were euthanized and different parameters were analyzed in all groups. Adverse effects of heat stress are registered by the decrease of villi height and total mucosal thickness in the intestinal epithelium; translocation of bacteria from the lumen; increased vesiculation of erythrocytes and elevation of the lipopolysaccharides (LPS) level in the blood. The protective efficacy of treatment is evaluated by prevention of these side effects. The protocol was set up for the oral treatment of rats with bacteria for prevention of heat stress complications, but this protocol can be modified and used for other routes of administration and for analysis of different compounds.

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

We described a protocol for prevention of heat stress effects in rats by oral pre-treatment with beneficial bacteria. This protocol can be modified and used for various routes of administration and for analysis of different compounds.

الوقاية من الإجهاد الحراري الآثار السلبية في الجرذان التي كتبها<emالعصوية الرقيقة&gt;</em&gt; الانفعال

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus formation in veins remain obscure. Lack of mobility (e.g., after surgery or long-haul flights) is one of the main factors leading to DVT. The pathophysiological consequence of the lack of mobility is blood flow stagnation in venous valves. Here, a model is described that mimics such flow disturbance as a thrombosis-driving factor. In this model, partial flow restriction (stenosis) in the inferior vena cava (IVC) is created. Closure of about 90% of the IVC lumen for 48 h results in development of thrombi structurally similar to those in humans. The similarities are: i) most of the thrombus volume is red, i.e., consists of red blood cells and fibrin, ii) presence of a white part (lines of Zahn), iii) non-denuded endothelial monolayer, iv) elevated plasma D-Dimer levels, and v) possibility to prevent thrombosis by low molecular weight heparin. Limitations include variable size of thrombi and the fact that a certain percentage of wild-type mice (0 - 35%) may not produce a thrombus. In addition to visual observation and measurement, thrombi may be visualized by non-invasive technologies, such as ultrasonography, which allows for monitoring the dynamics of thrombus development. At shorter time points (1 - 6 h), intravital microscopy may be applied to directly observe events (e.g., recruitment of cells to the vessel wall) preceding thrombus formation. Use of this method by several teams around the world has made it possible to uncover basic mechanisms of DVT initiation and identify potential targets that might be beneficial for its prevention.

We describe here stenosis in the inferior vena cava as a murine model of deep vein thrombosis. This model recapitulates blood flow restriction, one of the major triggers of venous thrombosis in humans.

تضيق الأجوف فينا أدنى: نموذج موريني تجلط الوريد العميق

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

تجلط الوريد العميق الناجم عن ركود في الفئران التي يرصدها الموجات فوق الصوتية عالية التردد

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily lead to infections in the dermis which can, in turn, result in the dissemination of pathogens into the bloodstream. Understanding how the immune system fights infections at the very early stage and how the host can eliminate the pathogens is an important step to set the base for future therapeutic interventions. Here we describe a model of Candida albicans infection that can visualize the processes that occur early during an infection, including when the pathogen has passed the epithelial barrier, as well as the immune response elicited by the C. albicans invasion. We used this infection model to perform histological analyses that show the immune cells that infiltrate the skin as well as the presence and localization of the pathogen. Samples collected after the infection can be processed for RNA extraction.

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Here we describe a protocol that allows histological and molecular analysis of skin samples after Candida albicans intradermal injection. This protocol maintains the structural integrity of the skin and allows for the localization of tissue-resident or newly recruited immune cells as well as the pathogen distribution.

العميق "الجلد حقن كنموذج" "عدوى الجلد" المبيضات البيض "التحليل النسيجي"

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our knowledge of prevention and treatment of viral infection. The fruit fly Drosophila melanogaster has proven to be one of the most efficient and productive model organisms to screen for antiviral factors and investigate virus-host interaction, due to powerful genetic tools and highly conserved innate immune signaling pathways. The procedure described here demonstrates a nano-injection method to establish viral infection and induce systemic antiviral responses in adult flies. The precise control of the viral injection dose in this method enables high experimental reproducibility. Protocols described in this study include the preparation of flies and the virus, the injection method, survival rate analysis, the virus load measurement, and an antiviral pathway assessment. The influence effects of viral infection by the flies' background were mentioned here. This infection method is easy to perform and quantitatively repeatable; it can be applied to screen for host/viral factors involved in virus-host interaction and to dissect the crosstalk between innate immune signaling and other biological pathways in response to viral infection.

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

This protocol describes how to establish viral infection in vivo in Drosophila melanogaster using the nano-injection method and basic techniques to analyze virus-host interaction.

إنشاء العدوى الفيروسية، وتحليل التفاعل المضيف للفيروسات في Melanogaster المورفولوجية

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...