Name: establishment of deep hypothermic circulatory arrest in rats
Uploaded: 2022-12-16T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Deep Hypothermic Circulatory Arrest in Rats at JoVE.com

המחברים מודים לליאנג ג'אנג על שעזר לאסוף את נתוני הווידאו במהלך הניסוי. מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מספר מענק: 82070479) וקרנות המחקר הבסיסיות לאוניברסיטאות המרכזיות (מספר מענק: 3332022128).

הפרוטוקולים עברו בדיקה מוסדית וקיבלו אישור מהוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים, בית החולים פווואי, האקדמיה הסינית למדעי הרפואה (FW-2021-0005). כל הליכי הניסוי בוצעו בהתאם למדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שפורסם על ידי המכונים הלאומיים לבריאות.
הערה: חולדות ספראג-דאולי זכרי?...

<ol>
	<li>Lewis, F. J., Taufic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Closure+of+atrial+septal+defects+with+the+aid+of+hypothermia;+experimental+accomplishments+and+the+report+of+one+successful+case.">Closure of atrial septal defects with the aid of hypothermia; experimental accomplishments and the report of one successful case.</a> Surgery. 33 (1), 52-59 (1953).</li><li>Miler, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Miller's Anesthesia., eighth edition. , (2015).</li><li>Goco&#322;, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+deep+hypothermia+in+cardiac+surgery.">The role of deep hypothermia in cardiac surgery.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 18 (13), 7061 (2021).</li><li>Zhu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+deep+hypothermic+circulatory+arrest+in+surgery+for+renal+or+adrenal+tumor+with+vena+cava+thrombus:+A+single-institution+experience.">The role of deep hypothermic circulatory arrest in surgery for renal or adrenal tumor with vena cava thrombus: A single-institution experience.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 13 (1), 85 (2018).</li><li>Poon, S. S., Estrera, A., Oo, A., Field, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+moderate+hypothermic+circulatory+arrest+with+selective+antegrade+cerebral+perfusion+superior+to+deep+hypothermic+circulatory+arrest+in+elective+aortic+arch+surgery.">Is moderate hypothermic circulatory arrest with selective antegrade cerebral perfusion superior to deep hypothermic circulatory arrest in elective aortic arch surgery.</a> Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 23 (3), 462-468 (2016).</li><li>Giuliano, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+profile+in+a+canine+model+of+hypothermic+circulatory+arrest.">Inflammatory profile in a canine model of hypothermic circulatory arrest.</a> Journal of Surgical Research. 264, 260-273 (2021).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperoxia+management+during+deep+hypothermia+for+cerebral+protection+in+circulatory+arrest+rabbit+model.">Hyperoxia management during deep hypothermia for cerebral protection in circulatory arrest rabbit model.</a> ASAIO Journal. 58 (4), 330-336 (2012).</li><li>Jungwirth, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurologic+outcome+after+cardiopulmonary+bypass+with+deep+hypothermic+circulatory+arrest+in+rats:+Description+of+a+new+model.">Neurologic outcome after cardiopulmonary bypass with deep hypothermic circulatory arrest in rats: Description of a new model.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 131 (4), 805-812 (2006).</li><li>Engels, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cardiopulmonary+bypass+with+deep+hypothermic+circulatory+arrest+rat+model+for+the+investigation+of+the+systemic+inflammation+response+and+induced+organ+damage.">A cardiopulmonary bypass with deep hypothermic circulatory arrest rat model for the investigation of the systemic inflammation response and induced organ damage.</a> Journal of Inflammation. 11, 26 (2014).</li><li>Chen, Q., Sun, K. P., Huang, J. S., Wang, Z. C., Hong, Z. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+attenuates+neuroinflammation+after+deep+hypothermia+with+circulatory+arrest+in+rats.">Resveratrol attenuates neuroinflammation after deep hypothermia with circulatory arrest in rats.</a> Brain Research Bulletin. 155, 145-154 (2020).</li><li>Chen, Q., Lei, Y. Q., Liu, J. F., Wang, Z. C., Cao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triptolide+improves+neurobehavioral+functions,+inflammation,+and+oxidative+stress+in+rats+under+deep+hypothermic+circulatory+arrest.">Triptolide improves neurobehavioral functions, inflammation, and oxidative stress in rats under deep hypothermic circulatory arrest.</a> Aging. 13 (2), 3031-3044 (2021).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+target+to+reduce+microglial+inflammation+and+neuronal+damage+after+deep+hypothermic+circulatory+arrest.">A novel target to reduce microglial inflammation and neuronal damage after deep hypothermic circulatory arrest.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 159 (6), 2431-2444 (2020).</li><li>Pinto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+isoform+of+superoxide+dismutase+has+a+significant+impact+on+cardiovascular+ischaemia+and+reperfusion+injury+during+cardiopulmonary+bypass.">The extracellular isoform of superoxide dismutase has a significant impact on cardiovascular ischaemia and reperfusion injury during cardiopulmonary bypass.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 50 (6), 1035-1044 (2016).</li><li>Hirao, S., Masumoto, H., Itonaga, T., Minatoya, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+recovery+cardiopulmonary+bypass+model+without+transfusion+or+inotropic+agents+in+rats.">A recovery cardiopulmonary bypass model without transfusion or inotropic agents in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e56986 (2018).</li><li>Ha, J. Y., Kim, J. S., Kim, S. E., Son, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+activation+of+mitophagy+and+autophagy+by+staurosporine+protects+against+dopaminergic+neuronal+cell+death.">Simultaneous activation of mitophagy and autophagy by staurosporine protects against dopaminergic neuronal cell death.</a> Neuroscience Letters. 561, 101-106 (2014).</li><li>Yamamoto, A., Yue, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+and+its+normal+and+pathogenic+states+in+the+brain.">Autophagy and its normal and pathogenic states in the brain.</a> Annual Review of Neuroscience. 37, 55-78 (2014).</li><li>You, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+cardiopulmonary+bypass+model:+Application+of+a+miniature+extracorporeal+circuit+composed+of+asanguinous+prime.">Rat cardiopulmonary bypass model: Application of a miniature extracorporeal circuit composed of asanguinous prime.</a> Journal of Extra-Corporeal Technology. 37 (1), 60-65 (2005).</li><li>Chen, Q., Lei, Y. Q., Liu, J. F., Wang, Z. C., Cao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+chlorogenic+acid+treatment+on+neuroinflammation+after+deep+hypothermic+circulatory+arrest+may+be+mediated+through+CYLD/NF-&#954;B+signaling.">Beneficial effects of chlorogenic acid treatment on neuroinflammation after deep hypothermic circulatory arrest may be mediated through CYLD/NF-&#954;B signaling.</a> Brain Research. 1767, 147572 (2021).</li><li>Li, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+profiles+of+circular+RNAs+in+the+rat+hippocampus+after+deep+hypothermic+circulatory+arrest.">Differential expression profiles of circular RNAs in the rat hippocampus after deep hypothermic circulatory arrest.</a> Artificial Organs. 45 (8), 866-880 (2021).</li><li>Linardi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slow+versus+fast+rewarming+after+hypothermic+circulatory+arrest:+effects+on+neuroinflammation+and+cerebral+oedema.">Slow versus fast rewarming after hypothermic circulatory arrest: effects on neuroinflammation and cerebral oedema.</a> European Journal of Cardiothoracic Surgery. 58 (4), 792-780 (2020).</li><li>Engelman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Society+of+Thoracic+Surgeons,+The+Society+of+Cardiovascular+Anesthesiologists,+and+The+American+Society+of+ExtraCorporeal+Technology:+Clinical+practice+guidelines+for+cardiopulmonary+bypass--Temperature+management+during+cardiopulmonary+bypass.">The Society of Thoracic Surgeons, The Society of Cardiovascular Anesthesiologists, and The American Society of ExtraCorporeal Technology: Clinical practice guidelines for cardiopulmonary bypass--Temperature management during cardiopulmonary bypass.</a> Annals of Thoracic Surgery. 100 (2), 748-757 (2015).</li><li>Jenke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AdipoRon+attenuates+inflammation+and+impairment+of+cardiac+function+associated+with+cardiopulmonary+bypass-induced+systemic+inflammatory+response+syndrome.">AdipoRon attenuates inflammation and impairment of cardiac function associated with cardiopulmonary bypass-induced systemic inflammatory response syndrome.</a> Journal of the American Heart Association. 10 (6), 018097 (2021).</li></ol>

קנולציה היא ההליך הבסיסי ביותר להקמת DHCA בחולדות. לפני הצינור, השריית העורק עם 0.5 מ"ל של 2% לידוקאין תקל על הצינור. לאחר הקנולציה, יש צורך בהפריניזציה עם 500 IU/kg הפרין דרך הווריד הג'וגולרי החיצוני כדי למנוע היווצרות מיקרוטרומבוס17. מצאנו שוב ושוב כי מינון זה של הפרין יכול להשיג ?...

דום היפותרמי עמוק במחזור הדם (DHCA) משמש בניתוחי לב מאז 19531. DHCA כרוך בהורדת טמפרטורת הליבה של המטופל לרמות היפותרמיות עמוקות (15-22 מעלות צלזיוס) לפני הפרעה גלובלית לזרימת הדם לגוף2. המעצר במחזור הדם יכול לספק שדה ניתוח נטול דם יחסית. היפותרמיה עמוקה מקטינה את חילוף החומרים, במיוחד במוח ובשריר הלב, שהיא שיטה יעילה להגנה מפני איסכמיה3. DHCA מיושם בדרך כלל במהלך ניתוחים למחלות לב מולדות מורכבות, מחלת קשת אבי העורקים, ואפילו גידולים בכליות או יותרת הכליה עם פקקת קאווה ורידית 4,5. לכן, הקמת מודלים של בעלי חיים DHCA מספקת התייחסות חשובה לעידון ההליך ולמניעת סיבוכים במסגרות קליניות.
למרות שניתן להקים מודלים עם כלבים6, ארנבות7 ובעלי חיים אחרים, עדיף להשתמש בחולדות בגלל יכולת ההפעלה שלהן ועלותן הנמוכה. מודל החולדות DHCA תואר לראשונה בשנת 2006 על ידי Jungwirth et al.8. נמצא כי משך המעצר במחזור הדם השפיע על התוצאות הנוירולוגיות. מאז, מודלים של חולדות DHCA נחקרו באופן נרחב. הובהר כי DHCA עלול לעורר תסמונת תגובה דלקתית מערכתית (SIRS)9. במחקרים מאוחרים יותר, פרמקולוגים מצאו כי דלקת עצבית הקשורה ל-DHCA המושרה על-ידי SIRS יכולה להיות מוחלשת על-ידי רסברטרול10 וטריפטוליד11. הצוות שלנו מצא גם כי ניתן להחליש דלקת עצבית הקשורה ל-DHCA על-ידי עיכוב החלבון קושר ה-RNA12 הניתן להצטננות. במערכת הלב וכלי הדם, לסופראוקסיד דיסמוטאז יש השפעה קרדיו-פרוטקטיבית על פגיעות איסכמיה/רפרפוזיה (I/R) במהלך DHCA13. תוצאות אלה הרחיבו את ההבנה של תהליכים פתופיזיולוגיים הקשורים ל-DHCA והציעו כיוונים חדשים לשיפור התוצאות של DHCA. עם זאת, התוצאות לגבי אנדוטוקסמיה, עקה חמצונית ואוטופגיה לאחר DHCA אינן חד משמעיות. DHCA משתמשת באותה טכנולוגיה תפעולית כמו מעקף הלב-פולמונרי (CPB)14, אך אסטרטגיית הניהול שלה שונה, והצעדים ליצירת DHCA שונים בין צוותים שונים 8,9,10,11. המחקר הנוכחי נועד לספק שיטה לביסוס הליך DHCA בחולדות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Heat Exchanger</td>
			<td>Xi&#8217;an Xijing Medical Appliance Co., Ltd</td>
			<td>Animal-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane Oxygenator</td>
			<td>Dongguan Kewei Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Micro-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monitor</td>
			<td>Chengdu Techman Co., Ltd</td>
			<td>BL-420s</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller Pump</td>
			<td>Changzhou Prefluid Technology Co.,Ltd</td>
			<td>BL100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SD Rat</td>
			<td>HFK Bioscience Co.,Ltd.</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Maruishi Pharmaceutical Co. Ltd</td>
			<td>H20150020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaver</td>
			<td>Hangzhou Huayuan Pet Products Co.,Ltd.</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporizer</td>
			<td>SPACECABS</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ventilator</td>
			<td>Shanghai Alcott Biotech Co., Ltd</td>
			<td>ALC-V8S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Tank</td>
			<td>Maquet Critical Care AB</td>
			<td>Jostra HCU20-600</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of deep hypothermic circulatory arrest in rats

דום היפותרמי עמוק במחזור הדם (DHCA) מיושם באופן שגרתי במהלך ניתוחים למחלות לב מולדות מורכבות ומחלת קשת אבי העורקים. המחקר הנוכחי נועד לספק שיטה ליצירת DHCA בחולדות. כדי להעריך את ההשפעה של תהליך DHCA על סימנים חיוניים, נעשה שימוש במודל חולדות מעקף קרדיו-פולמונרי בטמפרטורה רגילה (CPB) ללא מעצר במחזור הדם כבקרה. כצפוי, DHCA הוביל לירידה משמעותית בטמפרטורת הגוף וללחץ דם עורקי ממוצע. ניתוח גזי הדם הצביע על כך ש-DHCA העלה את רמות החומצה הלקטית, אך לא השפיע על ה-pH בדם ועל ריכוזי ההמוגלובין, המטוקריט, Na+, Cl−, K+ וגלוקוז. יתר על כן, בהשוואה לחולדות CPB בטמפרטורה רגילה, תוצאות מיקרוסקופיית האלקטרונים של ההולכה הראו עלייה קלה באוטופגוזומים בהיפוקמפוס בחולדות DHCA.

כקבוצת הביקורת, חולדות CPB בטמפרטורה הרגילה (NtCPB) ללא דום במחזור הדם הראו לחץ דם עורקי יציב (MAP) וטמפרטורת גוף במהלך כל ההליך, בעוד שהמפה של חולדות DHCA ירדה במהלך דום הלב (p < 0.01, איור 3A). הטמפרטורה של חולדות DHCA ירדה במהירות במהלך שלב הקירור והתאוששה בהדרגה במהלך שלב החימום מחד...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Deep Hypothermic Circulatory Arrest in Rats at JoVE.com

Establishment of Deep Hypothermic Circulatory Arrest in Rats

פרוטוקול זה מציג את כינונו של דום היפותרמי עמוק במחזור הדם בחולדות, אשר ניתן ליישם כדי לחקור תסמונת תגובה דלקתית מערכתית, פגיעה איסכמיה/רפרפוזיה, עקה חמצונית, דלקת עצבית וכו '.

הקמת מעצר היפותרמי עמוק במחזור הדם בחולדות

Deep hypothermic circulatory arrest (DHCA) is routinely applied during surgeries for complex congenital heart disease and aortic arch disease. The present ...

הקמת מעצר היפותרמי עמוק במחזור הדם בחולדה. דום היפותרמי עמוק במחזור הדם, DHCA מיושם באופן שגרתי במהלך ניתוחים של מחלת לב מולדת מורכבת ומחלת קשת אבי העורקים. המחקר הנוכחי נועד לספק שיטה ליצירת DHCA בחולדות.הפרוטוקולים קיבלו סקירה מוסדית וקיבלו אישור מהוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים, בית החולים פווואי, האקדמיה הסינית למדעי הרפואה. עבודת הכנה. ודא שמעגלי CPB מכילים מאגר שונה מטפטפת מורפים, משאבת רולר, מחליף חום, מחמצן ממברנה, צינור מקשר ומיכל מים המחובר למעגל ומייצר 12 מיליליטר עמילן הידרוקסי עם נתרן הפרין מיליליטר אחד ומיליליטר אחד מלוחים פריים למעגל עם תמיסת פרימינג של 40 מיליליטר כאשר משאבת הגלילים מסתובבת בעדינות.שתיים, הרדמה וקנולציה. חבר את הצינור עם מאוורר ופרמטרים בצד. שים שמיכת חימום חשמלית וימינה ופנה ימינה עם סרט הדבקה.יש למרוח משחת עיניים על העיניים כדי למנוע יובש. לגלח את השיער על אזור המפשעה הימני, אזור צוואר הרחם הימני ואת הזנב עם מכונת הגילוח. לאחר מכן לחטא את העור עם אלדהיד ואלכוהול.חותכים את העור ואת אזור המפשעה השמאלי ולנתח את השריר והרקמות העצם הרכה כדי לחשוף את הווריד והעורק השמאלי של הירך. להפריד את העורק בזהירות. צינורית 22 מד קטטר תוך ורידי לתוך עורק הירך השמאלי.עורק קשור וצנתר עם משי. יש להשתמש במי מלח המכילים הפרין כדי לשטוף את הצינורית כדי למנוע קרישה. חבר את הקטטר לחיישן העיתונות כדי לנטר את לחץ הדם.חותכים את עור הזנב ולאחר מכן משתמשים באזמל כדי לחתוך את המעטפת השטחית של עורק הזנב כדי לחשוף את עורק הזנב שנמצא באמצע שדה הניתוח. ניתן לנטרל את עורק הזנב באמצעות קטטר תוך ורידי בעל 22 מדים. עורק ליגייט וצנתר עם משי.יש להשתמש במי מלח המכילים הפרין כדי לשטוף את הקטטר כדי למנוע קרישה. חותכים את העור של הווריד הימני ואז מפרידים שריר ורקמות כדי לחשוף את הווריד. הכנס קטטר תוך ורידי ביתי רב-ורידי בעל 16 מד לתוך הווריד החיצוני הימני והכנס אותו בזהירות לווריד הנבוב התחתון הימני או לאטריום הימני.אדמיניסטרציה הפרין נתרן שבו הווריד החיצוני הנכון לכסות כל אזור cannulated עם כדורים לחים כדי למנוע זיהום. שלוש, לחבר את המעגל עם קטטר בעורק הזנב ולשמור על המשאבה קצב נמוך אחד עד שני מיליליטר לדקה. לאחר מכן חבר את המאגר עם הקטטר בווריד הג'וגולרי החיצוני הימני.יש לוודא שתמיד יש במאגר רמה של כסנטימטר אחד. הפעל את מיכל המים וקבע את טמפרטורת המים על 37 מעלות צלזיוס תחילה. לאחר לחץ הדם יציב, בעדינות להגדיל את המשאבה של זרימה עד 80 עד 100 מיליליטר לדקה.ארבע, קירור. הגדר את טמפרטורת החדר לסביבות 20 צלזיוס. שים קוביות קרח בכפפות חד פעמיות זה ולאחר מכן לשים אותם על הראש הימני ואת הצדדים.הטמפרטורה של המיכל הוצעה בזמן אמת על פי הטמפרטורה הרקטלית של האורז. שנה את הפרמטרים הרלוונטיים של מכונת ההנשמה כראוי על פי תוצאות ניתוח גז הדם. חמש, דום היפותרמיה עמוק במחזור הדם.ואז הטמפרטורה הרקטלית יורדת ל 15 עד 20 צלזיוס. החלף את חבילת הקרח והשלך את הכפפות כדי להבטיח תחזוקה של היפותרמיה עמוקה במהלך מעצר במחזור הדם. עצור את משאבת הרולר.יש לשמור על המאגר במגע עם הסביבה ולנקז את הדם באיטיות מהווריד הג'וגולרי החיצוני למאגר. שימו לב לרפורמה בלחץ הדם. לאחר שאין לחץ דם ודופק, עצרו את הניקוז והשאירו את המאגר סגור.כבה את מכונת ההנשמה. שש, חימום וריפרפוזיה. הסירו את כל הכפפות החד פעמיות והעלו את טמפרטורת החדר ל-25 מעלות צלזיוס.שחזר את אוורור החמצן של הזיכרון תוך שמירה על חיתוך צינור הניקוז הוורידי. הפעל את משאבת הגלילים כדי לוודא שהדם במאגר חוזר לאט לגוף ימין. הפעל את מכונת ההנשמה לאחר שמפלס הדם במאגר נשאר סנטימטר אחד.באמצעות צינור הניקוז ולנקז את הדם מהאטריום הימני למאגר באיטיות. הפעל את מנורת החימום, את כרית החימום ואת מיכל המים. הגדר את הטמפרטורה של מיכל המים ל 25 צלזיוס.לאחר מכן כוונן אותו לטמפרטורה השמאלית בזמן. הסר את מנורת החימום לאחר שהטמפרטורה הרקטלית חזרה ל -34 צלזיוס. שבע, גמילה מ-CPB.לאט ובהדרגה להפחית את הרולר של קצב זרימת המשאבה ולהתאים את מהירות הוורידים לתוך קצב הזרימה להפחית מיליליטר אחד לדקה. שמור על המאגר במגע עם הסביבה. החדירו את הדם הנותר במעגל עם קצב זרימה של מיליליטר אחד לדקה.עצור את חמצון הזיכרון ואת משאבת הרולר. מורדם לאחר תקופה של הנשמה מכנית והרדמה עמוקה. תוצאות מייצגות.כקבוצת הביקורת, הטמפרטורה הרגילה CPB, NtCPB, חולדה. ללא עצירת מחזור הדם הראה מפת לחץ דם ממוצעת יציבה של העורק וטמפרטורת הגוף במהלך כל ההליך. בעוד המפה של חולדות DHCA ירד במהלך דום לב.הטמפרטורה של חולדות DHCA ירדה במהירות במהלך שלב הקירור והתאוששה בהדרגה במהלך השלב המסתובב. הגמילה של מעגל DHCA הטמפרטורה של חולדות DHCA חזרה לקדמותה. הנתונים לעיל הצביעו על כך שהליך ה- DHCA שלנו חיקה את שינויי הטמפרטורה וה- MAP בפועל של מטופלים במרפאות.ההשפעה של מעבד DHCA ועלייתו נחקרה על ידי ניתוח גזים בדם. לאחר כל מגע הדם עם התמיסה הראשונית, ריכוז ההמוגלובין היה גבוה משישה גרם לדציליטר בשתי הקבוצות. הגמילה ממשטח ה-DHCA, עלתה לתשעה גרם לדציליטר בגלל ההחדרה מחדש של הדם שנותר במעגל ה-CPB לימין.ההמטוקריט, HCT, הראה נטייה דומה ל-HB. לאחר רפרפוזיה של DHCA חומצת הלקטט עלתה במהירות וזה היה בולט יותר בקבוצת DHCA. pH ירד לאחר הליך DHCA, אשר היה ככל הנראה תוצאה של הצטברות חומצת לקטט. במהלך הניסוי כולו, ריכוז הנתרן, הכלוריד, יוני האשלגן והגלוקוז לא הראה הבדלים משמעותיים בכל 10 נקודות.תוצאה זו מצביעה על כך ש-DHCA רק גרם לעלייה בחומצה לקטט, אך לא השפיע על ה-pH בדם ועל ריכוז ההמוגלובין, המטוקריט, יוני הנתרן, יוני הכלוריד, יוני האשלגן והגלוקוז. על מנת להעריך את ההשפעה של DHCA על אוטופגיה עצבית, השתמשנו במיקרוסקופ האלקטרו הולכה ומצאנו והגדלנו באופן מפתיע את מספר האוטופגוזומים בהיפוקמפוס של חולדות DHCA. הנתונים הנ"ל הצביעו על כך שמודל ה- DHCA שלנו חיקה את שינויי הטמפרטורה וה- MAP בפועל של המטופלים במרפאות.מודל זה יכול להיות מיושם כדי לחקור תסמונת תגובה דלקתית מערכתית, דלקת עצבית, וכו '.

establishment-of-deep-hypothermic-circulatory-arrest-in-rats

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel therapeutic entity in reconstructive surgery. However, long term high-dose multi-drug immunosuppressive therapy is required to ensure graft survival, bearing the risk of serious side effects which halters broader application. Further progression in this field may depend on better understanding of basic immunology and ischemia reperfusion injury in composite tissue grafts.
To date, orthotopic hind limb transplantation in rats has been the preferred rodent model for reconstructive transplantation (RT), however, it is an extremely demanding procedure that requires extraordinary microsurgical skills for reattachment of vasculature, bones, muscles and nerves.
We have introduced the vascular cuff anastomosis technique to this model, providing a rapid and reliable approach to rat hind limb transplantation. This technique simplifies and shortens the surgical procedure and enables surgeons with basic microsurgical experience to successfully perform the operation with high survival and low complication rates. The technique seems to be well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury (IRI) studies.

Here we describe the orthotopic rat hind-limb transplantation procedure, which seems to be the gold standard in vivo model for composite tissue allotransplantation research.

השתלת orthotopic לימב הינד-בחולדות

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel ...

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized animals. Before embarking on an examination of animals for parasites, two things should be considered. One: what use will be made of the information collected, and two: which test is the most appropriate. Knowing that animals are parasitized may be something that the facility accepts, but there is often a need to treat animals and then to determine the efficacy of treatment. Parasites may be detected in animals through various techniques, including samples taken from live or euthanized animals. Historically, the tests with the greatest diagnostic sensitivity required euthanasia of the animal, although PCR has allowed high-sensitivity testing for several types of parasite. This article demonstrates procedures for the detection of endo- and ectoparasites in mice and rats. The same procedures are applicable to other rodents, although the species of parasites found will differ.

This article describes various procedures for screening rats and mice to detect endo- or ectoparasitism. Several diagnostic assays will be demonstrated, both those suitable for use on live animals and those used after euthanasia of the animal. Photographs to aid in identification of rat and mouse parasites will be included.

אבחון חיצוני ו Endoparasites בחולדות מעבדה ועכברים

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized ...

Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines

Infection of B cells with Epstein-Barr virus (EBV) leads to proliferation and subsequent immortalization, resulting in establishment of lymphoblastoid cell lines (LCL) in vitro. Since LCL are latently infected with EBV, they provide a model system to investigate EBV latency and virus-driven B cell proliferation and tumorigenesis1. LCL have been used to present antigens in a variety of immunologic assays2, 3. In addition, LCL can be used to generate human monoclonal antibodies4, 5 and provide a potentially unlimited source when access to primary biologic materials is limited6, 7.
A variety of methods have been described to generate LCL. Earlier methods have included the use of mitogens such as phytohemagglutinin, lipopolysaccharide8, and pokeweed mitogen9 to increase the efficiency of EBV-mediated immortalization. More recently, others have used immunosuppressive agents such as cyclosporin A to inhibit T cell-mediated killing of infected B cells7, 10-12.
The considerable length of time from EBV infection to establishment of cell lines drives the requirement for quicker and more reliable methods for EBV-driven B cell growth transformation. Using a combination of high titer EBV and an immunosuppressive agent, we are able to consistently infect, transform, and generate LCL from B cells in peripheral blood. This method uses a small amount of peripheral blood mononuclear cells that are infected in vitroclusters of cells can be demonstrated. The presence of CD23 with EBV in the presence of FK506, a T cell immunosuppressant. Traditionally, outgrowth of proliferating B cells is monitored by visualization of microscopic clusters of cells about a week after infection with EBV. Clumps of LCL can be seen by the naked eye after several weeks. We describe an assay to determine early if EBV-mediated growth transformation is successful even before microscopic clusters of cells can be demonstrated. The presence of CD23hiCD58+ cells observed as early as three days post-infection indicates a successful outcome.

We describe a method for generating transformed B cell lines using Epstein-Barr virus. We also illustrate a novel assay that can identify B cells destined to undergo transformation as early as three days after infection.

הקמת Epstein-Barr Virus צמיחה הפך שורות תאים Lymphoblastoid

Infection of B cells with Epstein-Barr virus (EBV) leads to proliferation and subsequent immortalization, resulting in establishment of lymphoblastoid ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable alternative to animal model systems for the study of a specific step of microbial pathogen infection. A human monocytic cell line THP-1 which, upon phorbol ester treatment, is differentiated into macrophages, has previously been used to study virulence strategies of many intracellular pathogens including Mycobacterium tuberculosis. Here, we discuss a protocol to enact an in vitro cell culture model system using THP-1 macrophages to delineate the interaction of an opportunistic human yeast pathogen Candida glabrata with host phagocytic cells. This model system is simple, fast, amenable to high-throughput mutant screens, and requires no sophisticated equipment. A typical THP-1 macrophage infection experiment takes approximately 24 hr with an additional 24-48 hr to allow recovered intracellular yeast to grow on rich medium for colony forming unit-based viability analysis. Like other in vitro model systems, a possible limitation of this approach is difficulty in extrapolating the results obtained to a highly complex immune cell circuitry existing in the human host. However, despite this, the current protocol is very useful to elucidate the strategies that a fungal pathogen may employ to evade/counteract antimicrobial response and survive, adapt, and proliferate in the nutrient-poor environment of host immune cells.

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

The current article outlines a protocol to establish an in vitro cell culture model system to study the interaction of a facultative intracellular human fungal pathogen Candida glabrata with human macrophages which will be a useful tool to advance our knowledge of fungal virulence mechanisms.

הקמתה של<em&gt; במבחנה</em&gt; מערכת ללמוד את התנהגות תאית של<em&gt; קנדידה glabrata</em&gt; בהמקרופאגים THP-1 אדם

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

Complete Thymectomy in Adult Rats with Non-invasive Endotracheal Intubation

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and pneumothorax from pleural disruption can result in a significant mortality rate. This protocol is a simple method of rat thymectomy that utilizes a mini-sternotomy and endotracheal intubation. Intubation is accomplished with a non-invasive and easily reproducible method and allows for positive pressure ventilation to prevent pneumothorax and a controlled airway that allows sufficient time for careful thymus dissection to minimize pleural disruption. A 1.5 cm sternal incision decreases contact with mediastinal vessels and pleura, while still providing full visualization of the thymus. Following exposure of the mediastinum, the thymus is removed by blunt dissection under magnification. The pleural space is then sealed by suture closure of the pre-tracheal muscles followed by the application of surgical glue. The thorax is then closed by suture closure of the sternum, followed by suture closure of the skin. All thymectomies were complete as evidenced by immunohistochemical (IHC) staining of mediastinal tissue, and absence of na&#239;ve T-cells by flow cytometry, and the procedure had a 96% survival rate. This method is suitable when complete thymectomy with minimal complications is desired for further immunological studies in athymic adult rats.

Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described.

Thymectomy מלא בחולדות מבוגרות עם לא פולשני endotracheal אינטובציה

Thymectomy in neonatal rodents is an established and reliable procedure for immunological studies. However, in adult rats, complications of hemorrhage and ...

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two Sprague-Dawley rats were used in this study. Animals were orally treated twice a day for two days with B. subtilis BSB3 strain or PBS. The next day after the last treatment, each group was divided and two experimental groups (one treated with PBS and one treated with B. subtilis) were placed at 45 oC for 25 min. Two control groups stayed for 25 min at room temperature. All rats were euthanized and different parameters were analyzed in all groups. Adverse effects of heat stress are registered by the decrease of villi height and total mucosal thickness in the intestinal epithelium; translocation of bacteria from the lumen; increased vesiculation of erythrocytes and elevation of the lipopolysaccharides (LPS) level in the blood. The protective efficacy of treatment is evaluated by prevention of these side effects. The protocol was set up for the oral treatment of rats with bacteria for prevention of heat stress complications, but this protocol can be modified and used for other routes of administration and for analysis of different compounds.

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

We described a protocol for prevention of heat stress effects in rats by oral pre-treatment with beneficial bacteria. This protocol can be modified and used for various routes of administration and for analysis of different compounds.

מניעת חום מתח תופעות לוואי בחולדות על ידי<em&gt; Subtilis Bacillus</em&gt; זנים

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus formation in veins remain obscure. Lack of mobility (e.g., after surgery or long-haul flights) is one of the main factors leading to DVT. The pathophysiological consequence of the lack of mobility is blood flow stagnation in venous valves. Here, a model is described that mimics such flow disturbance as a thrombosis-driving factor. In this model, partial flow restriction (stenosis) in the inferior vena cava (IVC) is created. Closure of about 90% of the IVC lumen for 48 h results in development of thrombi structurally similar to those in humans. The similarities are: i) most of the thrombus volume is red, i.e., consists of red blood cells and fibrin, ii) presence of a white part (lines of Zahn), iii) non-denuded endothelial monolayer, iv) elevated plasma D-Dimer levels, and v) possibility to prevent thrombosis by low molecular weight heparin. Limitations include variable size of thrombi and the fact that a certain percentage of wild-type mice (0 - 35%) may not produce a thrombus. In addition to visual observation and measurement, thrombi may be visualized by non-invasive technologies, such as ultrasonography, which allows for monitoring the dynamics of thrombus development. At shorter time points (1 - 6 h), intravital microscopy may be applied to directly observe events (e.g., recruitment of cells to the vessel wall) preceding thrombus formation. Use of this method by several teams around the world has made it possible to uncover basic mechanisms of DVT initiation and identify potential targets that might be beneficial for its prevention.

We describe here stenosis in the inferior vena cava as a murine model of deep vein thrombosis. This model recapitulates blood flow restriction, one of the major triggers of venous thrombosis in humans.

היצרות של הכלילי התחתון: מודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

פקקת ורידים עמוקה שנגזרות Stasis בעכברים המנוטרת על-ידי בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily lead to infections in the dermis which can, in turn, result in the dissemination of pathogens into the bloodstream. Understanding how the immune system fights infections at the very early stage and how the host can eliminate the pathogens is an important step to set the base for future therapeutic interventions. Here we describe a model of Candida albicans infection that can visualize the processes that occur early during an infection, including when the pathogen has passed the epithelial barrier, as well as the immune response elicited by the C. albicans invasion. We used this infection model to perform histological analyses that show the immune cells that infiltrate the skin as well as the presence and localization of the pathogen. Samples collected after the infection can be processed for RNA extraction.

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Here we describe a protocol that allows histological and molecular analysis of skin samples after Candida albicans intradermal injection. This protocol maintains the structural integrity of the skin and allows for the localization of tissue-resident or newly recruited immune cells as well as the pathogen distribution.

עמוק עורי הזרקת כמו מודל של קנדידה אלביקנס דלקת עור עבור ניתוחים היסטולוגית

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our knowledge of prevention and treatment of viral infection. The fruit fly Drosophila melanogaster has proven to be one of the most efficient and productive model organisms to screen for antiviral factors and investigate virus-host interaction, due to powerful genetic tools and highly conserved innate immune signaling pathways. The procedure described here demonstrates a nano-injection method to establish viral infection and induce systemic antiviral responses in adult flies. The precise control of the viral injection dose in this method enables high experimental reproducibility. Protocols described in this study include the preparation of flies and the virus, the injection method, survival rate analysis, the virus load measurement, and an antiviral pathway assessment. The influence effects of viral infection by the flies' background were mentioned here. This infection method is easy to perform and quantitatively repeatable; it can be applied to screen for host/viral factors involved in virus-host interaction and to dissect the crosstalk between innate immune signaling and other biological pathways in response to viral infection.

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

This protocol describes how to establish viral infection in vivo in Drosophila melanogaster using the nano-injection method and basic techniques to analyze virus-host interaction.

הקמתה של זיהום נגיפי וניתוח של התערבות מארח-וירוס דרוזופילה Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...