यह प्रोटोकॉल C.Elegans के साथ उपयोग के लिए एक एसेप्टिक तकनीक प्रस्तुत करता है जो एक खुली लौ की आवश्यकता को समाप्त करता है। इस तकनीक के मुख्य लाभ यह हैं कि यह एक खुली लौ को समाप्त करके सुरक्षा खतरों को कम करता है और गैस लाइनों के बिना प्रयोगशाला रिक्त स्थान में और लैमिनर प्रवाह हुड में उपयोग किया जा सकता है। पक्षों को छूने के बिना नसबंदी क्षेत्र के अंदर और बाहर उपकरणों को स्थानांतरित करना मुश्किल हो सकता है, लेकिन एक गाइड जोड़ना और अपने हाथ को स्थिर करना आंदोलन को आसान बनाता है।
इसे बाहरी बैरल पर काट कर माइक्रो-भस्मक के लिए एक लूप धारक गौण गाइड संलग्न करके शुरू करें। माइक्रो-भस्मक में एक मानक 120-या 230-वोल्ट विद्युत आउटलेट के रूप में उपयुक्त के रूप में प्लग करें। माइक्रो-भस्मक को उच्च सेटिंग में घुमाएं और 800 से 825 डिग्री सेल्सियस के बीच इष्टतम तापमान तक पहुंचने के लिए इसे 10 से 20 मिनट के लिए गर्म करने की अनुमति दें।
उपकरण को बेलनाकार नसबंदी क्षेत्र में डालें, बिना इसे गाइड के साथ स्लाइड करके पक्षों को छूने के बिना। पांच से सात सेकंड के लिए नसबंदी क्षेत्र में उपकरण पकड़ो। गाइड के साथ पीछे की ओर फिसलने से पक्षों को छूने के बिना उपकरण को निकालें।
पिक्स के लिए, उपकरण को जलने से बचने के लिए एक कीड़े को छूने से पहले तीन से पांच सेकंड के लिए ठंडा होने दें। कीड़े लेने के बाद, लेने पर किसी भी कीड़े को जलाने के लिए पांच से सात सेकंड के लिए कक्ष में पिक को फिर से डालें। रबर टयूबिंग का उपयोग कर गैस लाइन के लिए एक Bunsen बर्नर कनेक्ट करें।
टयूबिंग को कसकर सुरक्षित करना सुनिश्चित करें और बर्नर को ओवरहेड ऑब्जेक्ट्स से दूर रखें। गैस लाइन पर घुंडी घुमाकर गैस को चालू करें। स्ट्राइकर या लाइटर का उपयोग करके बर्नर को प्रज्वलित करें।
गैस घुंडी और हवा के सेवन का उपयोग करके लौ को समायोजित करें जब तक कि एक नीला शंकु दिखाई न दे। पिक, स्पैटुला, या स्केलपेल को लौ में तब तक रखें जब तक कि यह लाल न हो जाए। पिक्स के लिए, उपकरण को जलने से बचने के लिए एक कीड़े को छूने से पहले तीन से पांच सेकंड के लिए ठंडा होने दें।
कीड़े लेने के बाद, पिक पर किसी भी कीड़े को जलाने के लिए लौ में पिक को फिर से डालें। संस्कृति OP50 एक 37 डिग्री सेल्सियस शेकर पर रात भर लुरिया शोरबा में ई.कोलाई बैक्टीरिया. रात भर की संस्कृति के बाद, 1: 100 के अनुपात में बाँझ पानी में संस्कृति को पतला करें।
एक कृमि पिक को बैक्टीरिया के समाधान में एक बुनसेन बर्नर या एक माइक्रो-इंसिनरेटर का उपयोग करके निष्फल किया गया, फिर से निष्फल करें, और इसे बाँझ पानी के 100 माइक्रोलीटर में घुमाएं। सकारात्मक नियंत्रण के लिए, बैक्टीरिया के समाधान में पिक को डुबोएं, बाँझ पानी में घुमाएं, और नकारात्मक नियंत्रण के लिए, बैक्टीरिया के समाधान में डुबकी लगाए बिना पिक को निष्फल करें और फिर बाँझ पानी में घूमें। एक 10 सेंटीमीटर लूरिया शोरबा अगर पेट्री डिश पर पानी के 100 माइक्रोलीटर प्लेट, एक बाँझ सेल स्प्रेडर का उपयोग करके पानी फैलाएं, और ढक्कन के साथ 24 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें।
इनक्यूबेशन अवधि के बाद मैन्युअल रूप से उपनिवेशों की गणना करें। प्रति नमूना कालोनियों की संख्या की गणना करके सापेक्ष संदूषण दर को मापा गया था। नकारात्मक नियंत्रण प्लेटों में, शून्य उपनिवेश पाए गए थे।
0.3 उपनिवेशों की एक मानक त्रुटि के साथ 4.7 कालोनियों की एक औसत गिनती प्राप्त की गई थी जब बुनसेन बर्नर का उपयोग पिक्स को निष्फल करने के लिए किया गया था। 1.2 कालोनियों की मानक त्रुटि के साथ 3.3 कालोनियों की एक औसत गिनती माइक्रो-भस्मक स्थिति में देखी गई थी। हालांकि, सकारात्मक नियंत्रण स्थिति में 298.3 कालोनियों की औसत गिनती प्राप्त की गई थी।
इस प्रकार, माइक्रो-भस्मक ने बाँझपन परिणाम प्राप्त किए जो बुनसेन बर्नर के लिए समान रूप से प्रभावी हैं। इस प्रक्रिया के बाद, C.Elegans के पिकिंग या चंकिंग को शामिल करने वाली किसी भी विधि का प्रदर्शन किया जा सकता है। इस प्रकार, यह विभिन्न प्रकार के शोध प्रश्नों पर लागू होता है।
