Name: three-dimensional, serum-free culture system for lacrimal gland stem cells
Uploaded: 2022-06-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من خلال منحة من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 31871413) وبرنامجين من قوانغدونغ للعلوم والتكنولوجيا (2017B020230002 و 2016B030231001). نحن ممتنون حقا للباحثين الذين ساعدونا خلال الدراسة وللموظفين العاملين في مركز الحيوانات لدعمهم في رعاية الحيوانات.

اتبعت جميع التجارب في هذا البروتوكول المبادئ التوجيهية لرعاية الحيوان للجنة الأخلاقية المعنية بالتجارب على الحيوانات بجامعة صن يات سن. يجب إجراء جميع العمليات المتعلقة بالخلايا على طاولة العمل فائقة النظافة في غرفة عمليات الخلية. يجب تنفيذ جميع العمليات باستخدام الزيلين في أغطية الدخا?...

<ol>
	<li>Zoukhri, D., Macari, E., Kublin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+injection+of+interleukin-1+induces+reversible+aqueous+tear+deficiency,+lacrimal+gland+inflammation,+and+acinar+and+ductal+cell+proliferation.">A single injection of interleukin-1 induces reversible aqueous tear deficiency, lacrimal gland inflammation, and acinar and ductal cell proliferation.</a> Experimental Eye Research. 84 (5), 894-904 (2007).</li><li>Gromova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lacrimal+gland+repair+using+progenitor+cells.">Lacrimal gland repair using progenitor cells.</a> Stem Cells Translational Medicine. 6 (1), 88-98 (2016).</li><li>Buzhor, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-based+therapy+approaches:+the+hope+for+incurable+diseases.">Cell-based therapy approaches: the hope for incurable diseases.</a> Regenerative Medicine. 9 (5), 649-672 (2014).</li><li>Tiwari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+human+lacrimal+gland+cultures+with+secretory+function.">Establishing human lacrimal gland cultures with secretory function.</a> PLoS One. 7 (1), 29458 (2012).</li><li>You, S., Kublin, C. L., Avidan, O., Miyasaki, D., Zoukhri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+mesenchymal+stem+cells+from+the+lacrimal+gland.">Isolation and propagation of mesenchymal stem cells from the lacrimal gland.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 52 (5), 2087-2094 (2011).</li><li>Ackermann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+investigation+of+presumptive+murine+lacrimal+gland+stem+cells.">Isolation and investigation of presumptive murine lacrimal gland stem cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 56 (8), 4350-4363 (2015).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Lugli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R-spondin+1+and+noggin+facilitate+expansion+of+resident+stem+cells+from+non-damaged+gallbladders.">R-spondin 1 and noggin facilitate expansion of resident stem cells from non-damaged gallbladders.</a> EMBO Reports. 17 (5), 769-779 (2016).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver.">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1), 299-312 (2015).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1), 324-338 (2015).</li><li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lgr5+(ve)+stem+cells+drive+self-renewal+in+the+stomach+and+build+long-lived+gastric+units+in+vitro.">Lgr5+(ve) stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro.</a> Cell Stem Cell. 6 (1), 25-36 (2010).</li><li>Linnemann, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+regenerative+potential+in+primary+human+mammary+epithelial+cells.">Quantification of regenerative potential in primary human mammary epithelial cells.</a> Development. 142 (18), 3239-3251 (2015).</li><li>Rock, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basal+cells+as+stem+cells+of+the+mouse+trachea+and+human+airway+epithelium.">Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (31), 12771-12775 (2009).</li><li>Chua, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+luminal+epithelial+progenitors+can+generate+prostate+organoids+in+culture.">Single luminal epithelial progenitors can generate prostate organoids in culture.</a> Nature Cell Biology. 16 (1), 951-961 (2014).</li><li>Maimets, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vitro+expansion+of+salivary+gland+stem+cells+driven+by+Wnt+signals.">Long-term in vitro expansion of salivary gland stem cells driven by Wnt signals.</a> Stem Cell Reports. 6 (1), 150-162 (2016).</li><li>Xiao, S., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+long-term+serum-free+culture+for+lacrimal+gland+stem+cells+aiming+at+lacrimal+gland+repair.">Establishment of long-term serum-free culture for lacrimal gland stem cells aiming at lacrimal gland repair.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 11 (1), 20 (2020).</li><li>Shatos, M. A., Haugaard-Kedstrom, L., Hodges, R. R., Dartt, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+progenitor+cells+in+uninjured,+adult+rat+lacrimal+gland.">Isolation and characterization of progenitor cells in uninjured, adult rat lacrimal gland.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (6), 2749-2759 (2012).</li><li>Mishima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+side+population+cells+restores+the+function+of+damaged+exocrine+glands+through+clusterin.">Transplantation of side population cells restores the function of damaged exocrine glands through clusterin.</a> Stem Cells. 30 (9), 1925-1937 (2012).</li><li>Aluri, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+improves+tear+production+in+a+mouse+model+of+sj&#246;gren's+syndrome.">Delivery of bone marrow-derived mesenchymal stem cells improves tear production in a mouse model of sj&#246;gren's syndrome.</a> Stem Cells International. 2017, 1-10 (2017).</li><li>Dietrich, J., Schrader, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+lacrimal+gland+regeneration:+current+concepts+and+experimental+approaches.">Towards lacrimal gland regeneration: current concepts and experimental approaches.</a> Current Eye Research. 45 (3), 230-240 (2020).</li><li>Sato, T., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+growing+organoids+from+stem+cells.">SnapShot: growing organoids from stem cells.</a> Cell. 161 (7), 1700 (2015).</li><li>Kleinman, H. K., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+basement+membrane+matrix+with+biological+activity.">Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.</a> Seminars in Cancer Biology. 15 (5), 378-386 (2005).</li><li>Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Benton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+matrix+(BME)+has+multiple+uses+with+stem+cells.">Basement membrane matrix (BME) has multiple uses with stem cells.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 8 (1), 163-169 (2012).</li></ol>

هناك طرق راسخة لعزل الخلايا الجذعية الدمعية وزراعتها في المختبر لزراعة الخلايا الجذعية الدمعية وإصلاح إصابات LG. شاتوس وآخرون.17 وأكرمانوآخرون. 6 الخلايا الجذعية الدمعية المستزرعة بنجاح وشبه المستزرعة من الجرذان والفئران بطرق زراعة 2D ، على التوالي ، مما...

تحافظ الخلايا الجذعية للغدة الدمعية (LGSCs) على تجديد خلايا الغدة الدمعية (LG) وهي مصدر الخلايا القنوية والقنوية. لذلك ، تعتبر زراعة LGSC نهجا بديلا لعلاج الأضرار الالتهابية الشديدة ومرض جفاف العين الناجم عن نقص مائي (ADDED) 1،2،3. تم تطبيق العديد من طرق الاستزراع لإثراء LGSCs. Tiwari et al. فصل وزراعة خلايا LG الأولية باستخدام الكولاجين I وهلام المصفوفة المكملة بالعديد من عوامل النمو. ومع ذلك ، لا يمكن زراعة خلايا LG باستمرار4. باستخدام ثقافة ثنائية الأبعاد (2D) ، تم عزل الخلايا الجذعية المشتقة من LG بواسطة You et al.5 و Ackermann et al. 6 ، وجدت للتعبير عن جينات علامة الخلية الجذعية / السلف ، Oct4 ، Sox2 ، Nanog ، و nestin ، ويمكن زراعتها الفرعية. ومع ذلك ، لا يوجد مؤشر واضح على أن هذه الخلايا يمكن أن تتمايز إلى خلايا أسينار أو أقنية ، ولا توجد تجربة زرع للتحقق من إمكانات التمايز في الجسم الحي.
في الآونة الأخيرة ، تم عزل خلايا c-kit + dim / EpCAM + / Sca1-/CD34-/CD45- من LGs الفأر عن طريق قياس التدفق الخلوي ، ووجد أنها تعبر عن علامات الخلايا السلفية LG ، مثل Pax6 و Runx1 ، وتم تمييزها إلى قنوات و acini في المختبر. في الفئران التي تحتوي على ADD ، يمكن للحقن التقويمي بهذه الخلايا إصلاح LGs التالفة واستعادة الوظيفة الإفرازية ل LGs2. ومع ذلك ، كان عدد الخلايا الجذعية المعزولة بهذه الطريقة صغيرا ، ولا توجد ظروف استزراع مناسبة لتوسيع LGSCs المعزولة. وباختصار، يلزم إنشاء نظام استزراع مناسب لعزل وزراعة LGSCs البالغة بشكل فعال مع التوسع المستقر والمستمر لدراسة LGSCs في علاج ADDED.
المواد العضوية المشتقة من الخلايا الجذعية أو الخلايا الجذعية متعددة القدرات هي مجموعة من الخلايا التي تشبه نسيجيا الأعضاء ذات الصلة ويمكنها الحفاظ على تجديدها الخاص. بعد أن تم استزراع أمعاء الفئران بنجاح من قبل ساتو وآخرون في عام 20097 ، تم استزراع المواد العضوية من الأعضاء الأخرى على التوالي ، استنادا إلى نظام زراعة ساتو ، مثل المرارة8 والكبد9 والبنكرياس10 والمعدة 11 والثدي12 والرئة 13 والبروستاتا 14 والغدة اللعابية 15 . نظرا لارتفاع نسبة الخلايا الجذعية البالغة قبل تمايز الخلايا في الثقافة العضوية ، تعتبر طريقة الزراعة العضوية ثلاثية الأبعاد (3D) مثالية لعزل وزراعة الخلايا الجذعية البالغة من LG.
تم إنشاء نظام ثقافة LGSC للفئران البالغة في هذه الدراسة من خلال تحسين طريقة الثقافة 3D الخالية من المصل. ثبت أن LGSCs المستزرعة من كل من الفئران العادية و ADDED أظهرت قدرة مستقرة على التجديد الذاتي والانتشار. بعد الزرع في LGs الماوس المضافة ، استعمرت LGSCs LGs الضعيفة وحسنت إنتاج المسيل للدموع. بالإضافة إلى ذلك ، تم عزل LGSCs الفلورسنت الأحمر من الفئران ROSA26mT / mG وزرعها. يوفر هذا العمل مرجعا موثوقا به لإثراء LGSC في المختبر والطعم الذاتي LGSC في التطبيق السريري للعلاج المضاف.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animal(Mouse)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bal B/C</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57 BL/6J</td>
			<td>Laboratory Animal Center of Sun Yat-sen University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD/ShiLtJ</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROSA26mT/mG</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic dehydrator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood counting chamber</td>
			<td>BLAU</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counter</td>
			<td>CountStar</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 constant temperature incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL Gel imaging system</td>
			<td>GE healthcare</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric bath for water bath</td>
			<td>Yiheng Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis apparatus</td>
			<td>BioRad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence quantitative PCR instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen tissue slicer</td>
			<td>Lecia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal centrifuge</td>
			<td>CENCE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser lamellar scanning micrograph</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen container</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature high speed centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop ultraviolet spectrophotometer</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>measure RNA concentration</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin slicing machine</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Amplifier</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH value tester</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 &#176;C Refrigerator</td>
			<td>Haier</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic culture oscillator</td>
			<td>ZHICHENG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paraffin embedding instrument</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;-80&#176;C Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;-20&#176;C Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra pure water purification system</td>
			<td>ELGA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Experiment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCG</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-61-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSG</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>14158-65-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17018029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>BD</td>
			<td>354235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A500895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>04-001-1ACS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF10</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel (Matrix gel)</td>
			<td>BD</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Noggin</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>250-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Wnt3A</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>315-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine EGF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>315-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-spondin 1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Inhibitor (TI)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6522</td>
			<td>Derived from Glycine max; can inhibit trypsin, chymotrypsin, and plasminase to a lesser extent. One mg will inhibit 1.0-3.0 mg of trypsin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;T4799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Selleck</td>
			<td>S1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE staining &#38; Immunostaining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>Used dilution: IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 0.2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-10037</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-10042</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 4 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-AQP5 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104751</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 0.1 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-E-cadherin Rat antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab11512</td>
			<td>Used dilution: (IF)&#160; 5 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Keratin14 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab181595</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ki67 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab15580</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 1 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mCherry mouse antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab125096</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mCherry rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab167453</td>
			<td>Used dilution: (IF)&#160; 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C6H8O7</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501702-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>201-069-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB Kit (20x)</td>
			<td>CWBIO</td>
			<td>CW0125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>BASO</td>
			<td>68115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Mounting Medium</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501912-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG antibody (HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6789</td>
			<td>Used dilution: 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG antibody(HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6721</td>
			<td>Used dilution: 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>BASO</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel (Embedding hydrogel)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>HG-400-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% H2O2</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>KD10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Hydrogen Peroxide Solution</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>7722-84-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na3C6H5O7.2H2O</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501293-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>SHANGHAI YIYANG</td>
			<td>YY-Neutral balsam</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-immunized Goat Serum</td>
			<td>BOSTER</td>
			<td>AR0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A601891-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>DAMAO</td>
			<td>200-001-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharose</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>57-50-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>200-675-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>IB11-AR-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.T.C. Compound</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>SAKURA.4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>DINGGUO</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>128686-03-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RT-PCR &#38; qRT-PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9012-36-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>865-49-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>214-984-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl Alcohol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>67-63-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LightCycler 480 SYBR Green I Master Mix</td>
			<td>Roche</td>
			<td>488735200H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ReverTra Ace qPCR RT Master Mix</td>
			<td>TOYOBO</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq DNA Polymerase</td>
			<td>TAKARA</td>
			<td>R10T1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goldview (nucleic acid stain)</td>
			<td>BioSharp</td>
			<td>BS357A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol</td>
			<td>Magen</td>
			<td>R4801-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector Construction &#38; Cell Transfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>69-52-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-75-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotoxin-free Plasmid Extraction Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A36227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>25389-94-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipo3000 Plasmid Transfection Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L3000015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LR Reaction Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>11791019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid Extraction Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans5&#945; Chemically Competent Cell</td>
			<td>TRANSGEN</td>
			<td>CD201-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trytone</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers and Sequence</td>
			<td>Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: AQP5 
			Sequence: 
			F: CATGAACCCAGCCCGATCTT 
			R: CTTCTGCTCCCATCCCATCC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: &#946;-actin 
			Sequence: 
			F: AGATCAAGATCATTGCTCCTCCT 
			R: AGATCAAGATCATTGCTCCTCCT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Epcam 
			Sequence: 
			F: CATTTGCTCCAAACTGGCGT 
			R: TGTCCTTGTCGGTTCTTCGG</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt5 
			Sequence: 
			F: AGCAATGGCGTTCTGGAGG 
			R: GCTGAAGGTCAGGTAGAGCC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt14 
			Sequence: 
			F: CGGACCAAGTTTGAGACGGA 
			R: GCCACCTCCTCGTGGTTC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt19 
			Sequence: 
			F: TCTTTGAAAAACACTGAACCCTG 
			R: TGGCTCCTCAGGGCAGTAAT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Ltf 
			Sequence: 
			F: CACATGCTGTCGTATCCCGA 
			R: CGATGCCCTGATGGACGA</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Nestin 
			Sequence: 
			F: GGGGCTACAGGAGTGGAAAC 
			R: GACCTCTAGGGTTCCCGTCT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: P63 
			Sequence: 
			F: TCCTATCACGGGAAGGCAGA 
			R: GTACCATCGCCGTTCTTTGC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX302 lentivirus no-load vector</td>
			<td>Addgene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pENRTY-mCherry</td>
			<td>Xiaofeng Qin laboratory, Sun Yat-sen University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional, serum-free culture system for lacrimal gland stem cells

يعد العلاج القائم على الخلايا الجذعية في الغدة الدمعية (LG) استراتيجية واعدة لأمراض الغدة الدمعية. ومع ذلك ، فإن عدم وجود طريقة استزراع موثوقة وخالية من المصل للحصول على عدد كاف من الخلايا الجذعية LG (LGSCs) هو أحد العقبات أمام مزيد من البحث والتطبيق. طريقة الثقافة ثلاثية الأبعاد (3D) الخالية من المصل ل LGSCs للفئران البالغة راسخة ومعروضة هنا. يمكن تمرير LGSCs باستمرار وحثها على التمايز إلى خلايا تشبه الخلايا الشبيهة بالقنوات.
بالنسبة للثقافة الأولية LGSC ، تم هضم LGs من الفئران التي يتراوح عمرها بين 6 و 8 أسابيع باستخدام dispase و collagenase I و trypsin-EDTA. تم زرع ما مجموعه 1 × 104 خلايا مفردة في 80 ميكرولتر من مصفوفة الخلايا الجذعية المتوسطة للغدة الهلامية الدمعية (LGSCM) في كل بئر من صفيحة من 24 بئرا ، مغلفة مسبقا ب 20 ميكرولتر من مصفوفة هلام LGSCM المصفوفة. تم تصلب المزيج بعد الحضانة لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، وإضافة 600 ميكرولتر من LGSCM.
لصيانة LGSC ، تم تصنيف LGSCs المستزرعة لمدة 7 أيام إلى خلايا مفردة عن طريق dispase و trypsin-EDTA. تم زرع الخلايا المفردة وزراعتها وفقا للطريقة المستخدمة في الثقافة الأولية LGSC. يمكن تمرير LGSCs أكثر من 40 مرة والتعبير باستمرار عن علامات الخلايا الجذعية / السلفية Krt14 و Krt5 و P63 و nestin. تتمتع LGSCs المستزرعة في LGSCM بقدرة على التجديد الذاتي ويمكن أن تتمايز إلى خلايا تشبه الخلايا الشبيهة بالقنوات في المختبر وفي الجسم الحي.

إنشاء 3D ، نظام ثقافة خالية من المصل في هذه الدراسة ، تم تطوير LGSCM التي تحتوي على EGF و Wnt3A و FGF10 و Y-27632 ل LGSCs الفأر ، وتم عزل LGSCs بنجاح وزراعتها بطريقة ثقافة ثلاثية الأبعاد (الشكل 1A). تم إنشاء نظام استزراع ثلاثي الأبعاد ناجح خال من المصل من LGSCs من الفئران C57BL/6 وفئران NOD / ShiL...

Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells at JoVE.com

Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells

إن طريقة الاستزراع ثلاثية الأبعاد الخالية من المصل للخلايا الجذعية للغدة الدمعية البالغة (LG) راسخة لتحريض تكوين LG العضوي والتمايز إلى خلايا تشبه الخلايا الشبيهة بالقنوات.

نظام استزراع ثلاثي الأبعاد خال من المصل للخلايا الجذعية للغدة الدمعية

Lacrimal gland (LG) stem cell-based therapy is a promising strategy for lacrimal gland diseases. However, the lack of a reliable, serum-free culture ...

يوفر هذا البروتوكول استراتيجية مفيدة لإثراء الخلايا الجذعية للغدة الدمعية لتجديد وإعادة بناء الغدة الدمعية. تظهر الخلايا الجذعية للغدة الدمعية قدرة توسع طويلة الأجل وإمكانات التمايز. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الوسط الزرعي للخلايا الجذعية للغدة الدمعية خال من المصل ، مما يدل على القيمة الهائلة لإصلاح الغدة الدمعية ابدأ بالحصول على فأر ذكر BALB / c يبلغ من العمر ستة إلى ثمانية أسابيع وقطع الجلد خلف الأذن لفضح الغدة الدمعية والنسيج الضام من حولها.قشر النسيج الضام عن طريق تشريح حاد بمساعدة ملاقط وإزالة الغدة الدمعية. اغمر الغدد الدمعية في طبق طوله ستة سنتيمترات مع أربعة ملليلترات من الإيثانول بنسبة 75٪ لمدة 10 ثوان وشطفها على الفور بمحلول PBS 10 ملليمولار مرتين. قطع الغدد الدمعية إلى شظايا صغيرة من حوالي ملليمتر واحد مكعب.انقلها إلى أنبوب طرد مركزي معقم سعة 15 ملليلتر وعالج الأنسجة ب 500 ميكرولتر من 25 وحدة لكل ملليلتر ديسباز و 500 ميكرولتر من 0.1٪ كولاجيناز I لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. عالج شظايا الغدة الدمعية بملليلتر واحد من 0.05٪ من التربسين EDTA لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية وقم بفصل الشظايا إلى خلايا مفردة عن طريق السحب بشكل متكرر. قم بتصفية التعليق من خلال مرشح 70 ميكرومتر ، وجمع المرشح في أنبوب طرد مركزي معقم سعة 15 ملليلتر ، وأجهزة طرد مركزي بسرعة 150 مرة G لمدة خمس دقائق.بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة السوبرنات ، وأضف 10 ملليلتر من محلول PBS 10 ملليمولار لغسل حبيبات الخلية ، وقم بالطرد المركزي للتعليق عند 150 مرة G لمدة خمس دقائق. كرر غسل بيليه الخلية. بعد ذلك ، قم بإزالة supernatant وإضافة ملليلتر واحد من نسبة 1: 1 من Dulbecco's Modified Eagles Medium و Ham's F-12 لإعادة تعليق كريات الخلايا.أضف 20 ميكرولتر من مصفوفة الخلايا الجذعية للغدة الدمعية في وسط بئر صفيحة 24 بئرا. استخدم طرف ماصة لتوسيعه إلى دائرة قطرها حوالي ستة إلى ثمانية ملليمترات واحتضن الخليط لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية لتغطية البئر مسبقا. استخدم عداد الخلايا لتحديد عدد الخلايا وإضافة 40 ميكرولتر من وسط الخلايا الجذعية للغدة الدمعية ، أو LGSCM ، مع ما مجموعه 10،000 خلية في 40 ميكرولتر من هلام المصفوفة.امزجها بلطف مع ماصة. استخدم ماصة لإسقاط 80 ميكرولتر من الخليط بعناية فوق المنطقة المطلية مسبقا في كل بئر من الصفيحة المكونة من 24 بئرا. احتضن الخليط لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية وأضف 600 ميكرولتر من LGSCM.تغيير الوسط الثقافي في كل بئر مرة كل يومين. بعد سبعة أيام من الثقافة ، ابحث عن كرات LGSC التي يتراوح قطرها بين 100 و 300 ميكرومتر تحت المجهر المقلوب. استخدم هذا البروتوكول لعزل وزراعة الخلايا الجذعية الأولية للغدة الدمعية لفئران Rosa26 و NOD.بعد سبعة أيام من الثقافة ، قم بإزالة الوسط الثقافي من ثقافة المجال جيدا. قم بتصنيف كرات LGSC عن طريق الحضانة في 20 ميكرولتر من 10 وحدات لكل ملليلتر ديسباز و 100 ميكرولتر من PBS 10 ملليمولار لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. انقل التعليق إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلتر وجهاز طرد مركزي بسرعة 150 مرة G لمدة أربع دقائق.إزالة supernatant. عالج الكرات بملليلتر واحد من 0.05٪ تريبسين EDTA لمدة خمس دقائق عند 37 درجة مئوية أضف ملليلتر واحد من مثبط التربسين 0.05٪ وماصة مرارا وتكرارا لتحييد التربسين وفصل الكرات إلى خلايا مفردة. جهاز طرد مركزي بسرعة 150 مرة G لمدة خمس دقائق وقم بإزالة السوبرنات لتكوير LGSCs.أضف ملليلتر واحد من LGSCM لإعادة تعليق حبيبات الخلايا الجذعية للغدة الدمعية ولوحة الخلايا كما هو موضح سابقا. في حالة تنفيذ الإجراء الأول ، قم بتمديد وقت زراعة LGSCs من سبعة إلى 14 يوما باستخدام نظام زراعة الخلايا الجذعية للغدة الدمعية للتمايز العشوائي. بالنسبة للإجراء الثاني ، قم بتغيير نسبة هلام المصفوفة إلى LGSCM من 1: 1 إلى 1: 2 في بداية زراعة الخلايا الجذعية للغدة الدمعية لتمايز الخلايا القنوية.زرع الخلايا الجذعية للغدة الدمعية في المصفوفة للحث لمدة 14 يوما. بالنسبة للإجراء الثالث ، بعد المرور ، استبدل LGSCM ب LGSCM 10٪ FBS لتمايز الخلايا الأسينارية. حث التمايز لمدة 14 يوما.بعد أسبوع واحد من الثقافة ، تم التعبير عن Kr14 و Ki67 في جميع المجالات التي شكلتها الخلايا الجذعية للغدة الدمعية. وصلت الكرات إلى قطر 100 ميكرومتر. أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين خلوية في اليوم السابع.أشارت عوامل إثراء الخلايا الجذعية للغدة الدمعية التي تم الحصول عليها بعد سبعة أيام من الزراعة الأولية والزراعة الفرعية إلى أن الخلايا المثرية بهذه الطريقة لديها قدرة تكاثرية قوية. في هذا النظام ، يمكن تمرير الخلايا الجذعية للغدة الدمعية أكثر من 40 مرة ولا تزال تحافظ على خصائص الخلايا الجذعية. تم حث الخلايا الجذعية للغدة الدمعية على تكوين المزيد من البراعم بواسطة مصل البقر الجنيني ونسبة منخفضة من هلام المصفوفة.أشار تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين إلى أن مصل البقر الجنيني يمكن أن يحفز الكرات على إنتاج المزيد من الهياكل التجويفية. بعد الحقن التقويمي للخلايا الجذعية للغدة الدمعية روزا في فئران NOD ، تم تشكيل فصيصات دمعية جديدة بجوار الغدد الدمعية. كانت معظم الفصيصات تتكون من خلايا أسينار ناضجة ذات تعبير عال عن AQP5 وكان هناك تكوين قناة داخل الفصيص مع تعبير AQP5 منخفض.كانت كمية إفراز الدموع على جانب حقن الخلايا الجذعية للغدة الدمعية روزا أعلى مما كانت عليه على جانب التحكم ، ولكنها أقل مما كانت عليه في الفئران من النوع البري يجب دائما الاحتفاظ بهلام المصفوفة والخليط المرتبط به على الجليد قبل الاستخدام ويجب تبريد أنبوب الطرد المركزي الدقيق والنصائح الملامسة لهلام المصفوفة مسبقا. يوفر النظام نموذجا مثاليا لمزيد من الدراسة للخلايا الجذعية للغدة الدمعية ، وإصلاح الغدة الدمعية ، وفحص الأدوية لأمراض الغدة الدمعية.

Research

JoVE Journal

Biology

Chip-based Three-dimensional Cell Culture in Perfused Micro-bioreactors

رقاقة المستندة إلى خلية ثقافة ثلاثي الأبعاد في المفاعلات الصغيرة Perfused

We have developed a chip-based cell culture system for the three-dimensional cultivation of cells. The chip is typically manufactured from ...

Microfabrication of Chip-sized Scaffolds for Three-dimensional Cell cultivation

التصنيع الدقيق للرقاقة الحجم السقالات لزراعة الخلايا ثلاثي الأبعاد

Using microfabrication technologies is a prerequisite to create scaffolds of reproducible geometry and constant quality for three-dimensional cell ...

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

إعداد Lysate مجمع صفائح الدم البشرية (pHPL) باعتبارها الملحق لمصل فعال خالية من الإنسان الحيوان الثقافات الخلايا الجذعية

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

العزلة والحيوان التوسع الحرة المصل الحبل السري الإنسان المستمدة الخلايا اللحمية الوسيطة (MSCS) وغشائي خلايا مستعمرة السلف التشكيل (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

عزل الخلايا الجذعية ماوس اللعابية الغدة

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation of Mammary Epithelial Cells from Three-dimensional Mixed-cell Spheroid Co-culture

عزل الخلايا الظهارية الثديية من ثلاثي الأبعاد الخلايا المختلطة الجسم الشبه الكروي ثقافة المشارك

While enormous efforts have gone into identifying signaling pathways and molecules involved in normal and malignant cell behaviors1-2, much of this work ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

الفأر الجنينية التنمية في الجامعة نظام الثقافة الأجنة الخالية من المصل

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

نظام الثقافة الماوس الجنين الأمعاء الجامعة ل<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; التلاعب في مسارات إشارات وتصوير لايف ثلاثي الأبعاد التنمية الزغبة

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

Non-enzymatic, Serum-free Tissue Culture of Pre-invasive Breast Lesions for Spontaneous Generation of Mammospheres

غير الأنزيمية، خالية من مصل زراعة الأنسجة من آفات الثدي ما قبل الغازية لتوليد عفوية من Mammospheres

Breast ductal carcinoma in situ (DCIS), by definition, is proliferation of neoplastic epithelial cells within the confines of the breast duct, without ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

التلاعب في الغدة الدمعية الفئران

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...