Name: three-dimensional, serum-free culture system for lacrimal gland stem cells
Uploaded: 2022-06-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch ein Stipendium der National Natural Science Foundation of China (Nr. 31871413) und zwei Programme von Guangdong Science and Technology (2017B020230002 und 2016B030231001) unterstützt. Wir sind den Forschern, die uns während der Studie geholfen haben, und den Mitarbeitern des Tierzentrums für ihre Unterstützung bei der Tierpflege wirklich dankbar.

Alle Experimente in diesem Protokoll folgten den Tierpflegerichtlinien des Ethikkomitees für Tierversuche der Sun Yat-sen Universität. Alle zellbezogenen Operationen sind an der ultrasauberen Werkbank im Zellenoperationssaal durchzuführen. Alle Operationen, bei denen Xylol verwendet wird, sind in Abzügen durchzuführen.
1. LGSC-Primärkultur
<ol><li>LG-Isolation<ol>
<li>Holen Sie sich eine 6-8 Wochen alte BALB / c männliche Maus und schneiden Sie die Haut hinter dem Ohr...

<ol>
	<li>Zoukhri, D., Macari, E., Kublin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+injection+of+interleukin-1+induces+reversible+aqueous+tear+deficiency,+lacrimal+gland+inflammation,+and+acinar+and+ductal+cell+proliferation.">A single injection of interleukin-1 induces reversible aqueous tear deficiency, lacrimal gland inflammation, and acinar and ductal cell proliferation.</a> Experimental Eye Research. 84 (5), 894-904 (2007).</li><li>Gromova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lacrimal+gland+repair+using+progenitor+cells.">Lacrimal gland repair using progenitor cells.</a> Stem Cells Translational Medicine. 6 (1), 88-98 (2016).</li><li>Buzhor, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-based+therapy+approaches:+the+hope+for+incurable+diseases.">Cell-based therapy approaches: the hope for incurable diseases.</a> Regenerative Medicine. 9 (5), 649-672 (2014).</li><li>Tiwari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+human+lacrimal+gland+cultures+with+secretory+function.">Establishing human lacrimal gland cultures with secretory function.</a> PLoS One. 7 (1), 29458 (2012).</li><li>You, S., Kublin, C. L., Avidan, O., Miyasaki, D., Zoukhri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+mesenchymal+stem+cells+from+the+lacrimal+gland.">Isolation and propagation of mesenchymal stem cells from the lacrimal gland.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 52 (5), 2087-2094 (2011).</li><li>Ackermann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+investigation+of+presumptive+murine+lacrimal+gland+stem+cells.">Isolation and investigation of presumptive murine lacrimal gland stem cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 56 (8), 4350-4363 (2015).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Lugli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R-spondin+1+and+noggin+facilitate+expansion+of+resident+stem+cells+from+non-damaged+gallbladders.">R-spondin 1 and noggin facilitate expansion of resident stem cells from non-damaged gallbladders.</a> EMBO Reports. 17 (5), 769-779 (2016).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver.">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1), 299-312 (2015).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1), 324-338 (2015).</li><li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lgr5+(ve)+stem+cells+drive+self-renewal+in+the+stomach+and+build+long-lived+gastric+units+in+vitro.">Lgr5+(ve) stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro.</a> Cell Stem Cell. 6 (1), 25-36 (2010).</li><li>Linnemann, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+regenerative+potential+in+primary+human+mammary+epithelial+cells.">Quantification of regenerative potential in primary human mammary epithelial cells.</a> Development. 142 (18), 3239-3251 (2015).</li><li>Rock, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basal+cells+as+stem+cells+of+the+mouse+trachea+and+human+airway+epithelium.">Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (31), 12771-12775 (2009).</li><li>Chua, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+luminal+epithelial+progenitors+can+generate+prostate+organoids+in+culture.">Single luminal epithelial progenitors can generate prostate organoids in culture.</a> Nature Cell Biology. 16 (1), 951-961 (2014).</li><li>Maimets, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vitro+expansion+of+salivary+gland+stem+cells+driven+by+Wnt+signals.">Long-term in vitro expansion of salivary gland stem cells driven by Wnt signals.</a> Stem Cell Reports. 6 (1), 150-162 (2016).</li><li>Xiao, S., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+long-term+serum-free+culture+for+lacrimal+gland+stem+cells+aiming+at+lacrimal+gland+repair.">Establishment of long-term serum-free culture for lacrimal gland stem cells aiming at lacrimal gland repair.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 11 (1), 20 (2020).</li><li>Shatos, M. A., Haugaard-Kedstrom, L., Hodges, R. R., Dartt, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+progenitor+cells+in+uninjured,+adult+rat+lacrimal+gland.">Isolation and characterization of progenitor cells in uninjured, adult rat lacrimal gland.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (6), 2749-2759 (2012).</li><li>Mishima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+side+population+cells+restores+the+function+of+damaged+exocrine+glands+through+clusterin.">Transplantation of side population cells restores the function of damaged exocrine glands through clusterin.</a> Stem Cells. 30 (9), 1925-1937 (2012).</li><li>Aluri, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+improves+tear+production+in+a+mouse+model+of+sj&#246;gren's+syndrome.">Delivery of bone marrow-derived mesenchymal stem cells improves tear production in a mouse model of sj&#246;gren's syndrome.</a> Stem Cells International. 2017, 1-10 (2017).</li><li>Dietrich, J., Schrader, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+lacrimal+gland+regeneration:+current+concepts+and+experimental+approaches.">Towards lacrimal gland regeneration: current concepts and experimental approaches.</a> Current Eye Research. 45 (3), 230-240 (2020).</li><li>Sato, T., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+growing+organoids+from+stem+cells.">SnapShot: growing organoids from stem cells.</a> Cell. 161 (7), 1700 (2015).</li><li>Kleinman, H. K., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+basement+membrane+matrix+with+biological+activity.">Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.</a> Seminars in Cancer Biology. 15 (5), 378-386 (2005).</li><li>Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Benton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+matrix+(BME)+has+multiple+uses+with+stem+cells.">Basement membrane matrix (BME) has multiple uses with stem cells.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 8 (1), 163-169 (2012).</li></ol>

Es gibt etablierte Methoden zur Isolierung und In-vitro-Kultur von Tränenstammzellen für die Tränenstammzellkultur und die LG-Verletzungsreparatur. Shatos et al.17 und Ackermannet al. 6 erfolgreich kultivierte und subkultivierte Tränenstammzellen von Ratten und Mäusen durch 2D-Kulturmethoden, wodurch es möglich ist, Tränenstammzellen für die Behandlung von ADDED zu transplantieren. Studien an Stammzellen18 und mesenchymalen ...

Tränendrüsenstammzellen (LGSCs) erhalten die Zellerneuerung der Tränendrüse (LG) und sind die Quelle von Acin- und duktalen Zellen. Daher gilt die LGSC-Transplantation als alternativer Ansatz zur Behandlung schwerer entzündlicher Schäden und einer wässrig-defizienten Erkrankung des trockenen Auges (ADDED)1,2,3. Mehrere Kulturmethoden wurden angewendet, um LGSCs anzureichern. Tiwari et al. trennten und kultivierten primäre LG-Zellen mit Kollagen I und Matrixgel, ergänzt mit mehreren Wachstumsfaktoren; Die LG-Zellen konnten jedoch nicht kontinuierlich kultiviert werden4. Unter Verwendung einer zweidimensionalen (2D) Kultur wurden von der Maus LG-abgeleitete Stammzellen von You et al.5 und Ackermann et al. isoliert. 6, die die Stamm- / Vorläuferzellmarkergene Oct4, Sox2, Nanog und Nestin exprimieren und subkultiviert werden könnten. Es gibt jedoch keinen eindeutigen Hinweis darauf, dass sich diese Zellen in Acinare oder duktale Zellen differenzieren können, und es gibt kein Transplantationsexperiment, um das Differenzierungspotenzial in vivo zu überprüfen.
Kürzlich wurden c-kit+ dim/EpCAM+/Sca1-/CD34-/CD45-Zellen durch Durchflusszytometrie von Maus-LGs isoliert, es wurde festgestellt, dass sie LG-Vorläuferzellmarker wie Pax6 und Runx1 exprimieren und in vitro in Kanäle und Acini differenzieren. Bei Mäusen mit ADDED konnte die orthotope Injektion mit diesen Zellen beschädigte LGs reparieren und die sekretorische Funktion von LGs2 wiederherstellen. Die Anzahl der mit dieser Methode isolierten Stammzellen war jedoch gering, und es gibt keine geeigneten Kulturbedingungen für die Expansion der isolierten LGSCs. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass ein geeignetes Kultursystem eingerichtet werden muss, um erwachsene LGSCs mit stabiler und kontinuierlicher Expansion für die Untersuchung von LGSCs bei der Behandlung von ADDED effektiv zu isolieren und zu kultivieren.
Organoide, die aus Stammzellen oder pluripotenten Stammzellen gewonnen werden, sind eine Gruppe von Zellen, die den verwandten Organen histologisch ähnlich sind und ihre eigene Erneuerung aufrechterhalten können. Nachdem das Darmorganoid der Maus 20097 erfolgreich von Sato et al. kultiviert wurde, wurden Organoide aus anderen Organen nacheinander kultiviert, basierend auf Satos Kultursystem, wie z.B. Gallenblase8, Leber9, Bauchspeicheldrüse 10, Magen 11, Brust12, Lunge 13, Prostata 14 und Speicheldrüse 15 . Aufgrund des hohen Anteils an adulten Stammzellen vor der Zelldifferenzierung in Organoidkultur gilt die dreidimensionale (3D) Organoidkulturmethode als optimal für die Isolierung und Kultur adulter Stammzellen von LG.
Ein LGSC-Kultursystem für erwachsene Mäuse wurde in der vorliegenden Studie durch Optimierung der 3D-, serumfreien Kulturmethode etabliert. Es ist erwiesen, dass die LGSCs, die sowohl von normalen als auch von ADDED-Mäusen kultiviert wurden, eine stabile Fähigkeit zur Selbsterneuerung und Proliferation zeigten. Nach der Transplantation in die ADDED-Maus-LGs kolonisierten LGSCs die beeinträchtigten LGs und verbesserten die Tränenproduktion. Darüber hinaus wurden rot fluoreszierende LGSCs aus ROSA26mT/mG-Mäusen isoliert und kultiviert. Diese Arbeit bietet eine zuverlässige Referenz für die LGSC-Anreicherung in vitro und LGSC-Autotransplantat in der klinischen Anwendung für die ADDED-Therapie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animal(Mouse)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bal B/C</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57 BL/6J</td>
			<td>Laboratory Animal Center of Sun Yat-sen University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD/ShiLtJ</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROSA26mT/mG</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic dehydrator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood counting chamber</td>
			<td>BLAU</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counter</td>
			<td>CountStar</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 constant temperature incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL Gel imaging system</td>
			<td>GE healthcare</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric bath for water bath</td>
			<td>Yiheng Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis apparatus</td>
			<td>BioRad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence quantitative PCR instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen tissue slicer</td>
			<td>Lecia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal centrifuge</td>
			<td>CENCE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser lamellar scanning micrograph</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen container</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature high speed centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop ultraviolet spectrophotometer</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>measure RNA concentration</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin slicing machine</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Amplifier</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH value tester</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 &#176;C Refrigerator</td>
			<td>Haier</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic culture oscillator</td>
			<td>ZHICHENG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paraffin embedding instrument</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;-80&#176;C Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;-20&#176;C Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra pure water purification system</td>
			<td>ELGA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Experiment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCG</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-61-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSG</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>14158-65-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17018029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>BD</td>
			<td>354235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A500895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>04-001-1ACS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF10</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel (Matrix gel)</td>
			<td>BD</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Noggin</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>250-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Wnt3A</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>315-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine EGF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>315-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-spondin 1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Inhibitor (TI)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6522</td>
			<td>Derived from Glycine max; can inhibit trypsin, chymotrypsin, and plasminase to a lesser extent. One mg will inhibit 1.0-3.0 mg of trypsin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;T4799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Selleck</td>
			<td>S1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE staining &#38; Immunostaining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>Used dilution: IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 0.2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-10037</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-10042</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 4 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-AQP5 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104751</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 0.1 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-E-cadherin Rat antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab11512</td>
			<td>Used dilution: (IF)&#160; 5 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Keratin14 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab181595</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ki67 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab15580</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 1 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mCherry mouse antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab125096</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mCherry rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab167453</td>
			<td>Used dilution: (IF)&#160; 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C6H8O7</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501702-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>201-069-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB Kit (20x)</td>
			<td>CWBIO</td>
			<td>CW0125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>BASO</td>
			<td>68115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Mounting Medium</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501912-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG antibody (HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6789</td>
			<td>Used dilution: 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG antibody(HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6721</td>
			<td>Used dilution: 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>BASO</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel (Embedding hydrogel)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>HG-400-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% H2O2</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>KD10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Hydrogen Peroxide Solution</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>7722-84-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na3C6H5O7.2H2O</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501293-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>SHANGHAI YIYANG</td>
			<td>YY-Neutral balsam</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-immunized Goat Serum</td>
			<td>BOSTER</td>
			<td>AR0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A601891-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>DAMAO</td>
			<td>200-001-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharose</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>57-50-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>200-675-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>IB11-AR-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.T.C. Compound</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>SAKURA.4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>DINGGUO</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>128686-03-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RT-PCR &#38; qRT-PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9012-36-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>865-49-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>214-984-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl Alcohol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>67-63-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LightCycler 480 SYBR Green I Master Mix</td>
			<td>Roche</td>
			<td>488735200H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ReverTra Ace qPCR RT Master Mix</td>
			<td>TOYOBO</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq DNA Polymerase</td>
			<td>TAKARA</td>
			<td>R10T1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goldview (nucleic acid stain)</td>
			<td>BioSharp</td>
			<td>BS357A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol</td>
			<td>Magen</td>
			<td>R4801-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector Construction &#38; Cell Transfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>69-52-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-75-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotoxin-free Plasmid Extraction Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A36227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>25389-94-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipo3000 Plasmid Transfection Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L3000015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LR Reaction Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>11791019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid Extraction Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans5&#945; Chemically Competent Cell</td>
			<td>TRANSGEN</td>
			<td>CD201-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trytone</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers and Sequence</td>
			<td>Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: AQP5 
			Sequence: 
			F: CATGAACCCAGCCCGATCTT 
			R: CTTCTGCTCCCATCCCATCC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: &#946;-actin 
			Sequence: 
			F: AGATCAAGATCATTGCTCCTCCT 
			R: AGATCAAGATCATTGCTCCTCCT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Epcam 
			Sequence: 
			F: CATTTGCTCCAAACTGGCGT 
			R: TGTCCTTGTCGGTTCTTCGG</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt5 
			Sequence: 
			F: AGCAATGGCGTTCTGGAGG 
			R: GCTGAAGGTCAGGTAGAGCC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt14 
			Sequence: 
			F: CGGACCAAGTTTGAGACGGA 
			R: GCCACCTCCTCGTGGTTC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt19 
			Sequence: 
			F: TCTTTGAAAAACACTGAACCCTG 
			R: TGGCTCCTCAGGGCAGTAAT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Ltf 
			Sequence: 
			F: CACATGCTGTCGTATCCCGA 
			R: CGATGCCCTGATGGACGA</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Nestin 
			Sequence: 
			F: GGGGCTACAGGAGTGGAAAC 
			R: GACCTCTAGGGTTCCCGTCT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: P63 
			Sequence: 
			F: TCCTATCACGGGAAGGCAGA 
			R: GTACCATCGCCGTTCTTTGC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX302 lentivirus no-load vector</td>
			<td>Addgene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pENRTY-mCherry</td>
			<td>Xiaofeng Qin laboratory, Sun Yat-sen University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional, serum-free culture system for lacrimal gland stem cells

Die auf Tränendrüsen (LG) basierende Therapie ist eine vielversprechende Strategie für Tränendrüsenerkrankungen. Das Fehlen einer zuverlässigen, serumfreien Kulturmethode, um eine ausreichende Anzahl von LG-Stammzellen (LGSCs) zu erhalten, ist jedoch ein Hindernis für die weitere Forschung und Anwendung. Die dreidimensionale (3D), serumfreie Kulturmethode für erwachsene Maus-LGSCs ist hier gut etabliert und gezeigt. Die LGSCs könnten kontinuierlich durchgangen und dazu gebracht werden, sich zu Acinare oder duktalen Zellen zu differenzieren.
Für die LGSC-Primärkultur wurden die LGs von 6-8 Wochen alten Mäusen mit Dispase, Kollagenase I und Trypsin-EDTA verdaut. Insgesamt 1 × 104 Einzelzellen wurden in 80 μL Matrix-Gel-Tränendrüsen-Stammzell-Medium-Matrix (LGSCM) in jeder Vertiefung einer 24-Well-Platte gesät, die mit 20 μL Matrix-Gel-LGSCM-Matrix vorbeschichtet war. Die Mischung wurde nach der Inkubation für 20 min bei 37 °C erstarrt und 600 μL LGSCM zugegeben.
Für die LGSC-Wartung wurden LGSCs, die 7 Tage lang kultiviert wurden, durch Dispase und Trypsin-EDTA in einzelne Zellen disaggregiert. Die einzelnen Zellen wurden nach der in der LGSC-Primärkultur verwendeten Methode implantiert und kultiviert. LGSCs konnten über 40 Mal durchgangen werden und kontinuierlich die Stamm- / Vorläuferzellmarker Krt14, Krt5, P63 und Nestin exprimieren. LGSCs, die in LGSCM kultiviert werden, haben eine Selbsterneuerungskapazität und können sich in vitro und in vivo in Acinare oder duktale Zellen differenzieren.

Etablierung eines serumfreien 3D-Kultursystems In dieser Studie wurde LGSCM mit EGF, Wnt3A, FGF10 und Y-27632 für Maus-LGSCs entwickelt, und LGSCs wurden erfolgreich isoliert und mit einer 3D-Kulturmethode kultiviert (Abbildung 1A). Ein erfolgreiches 3D-serumfreies Kultursystem aus LGSCs von C57BL/6-Mäusen, NOD/ShiLtJ-Mäusen, BALB/c-Mäusen und ROSA26mT/mG-Mäusen wurde mit dieser Methode16 etabliert. Für eine männliche Maus wurden ...

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Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells

Die dreidimensionale, serumfreie Kulturmethode für adulte Tränendrüsenstammzellen (LG) ist für die Induktion der Bildung und Differenzierung von LG-Organoiden in Acinare oder duktale Zellen gut etabliert.

Dreidimensionales, serumfreies Kultursystem für Tränendrüsenstammzellen

Lacrimal gland (LG) stem cell-based therapy is a promising strategy for lacrimal gland diseases. However, the lack of a reliable, serum-free culture ...

Dieses Protokoll bietet eine vorteilhafte Strategie zur Anreicherung von Tränendrüsenstammzellen für die Regeneration und Rekonstruktion der Tränendrüse. Tränendrüsenstammzellen zeigen eine langfristige Expansionskapazität und das Potenzial der Differenzierung. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass das Kulturmedium für Tränendrüsenstammzellen serumfrei ist, was den enormen Wert für die Reparatur der Tränendrüse zeigt Beginnen Sie, indem Sie eine sechs bis acht Wochen alte BALB / c-männliche Maus erhalten und die Haut hinter dem Ohr schneiden, um die Tränendrüse und das sie umgebende Bindegewebe freizulegen.Ziehen Sie das Bindegewebe durch stumpfe Dissektion mit Hilfe einer Pinzette ab und entfernen Sie die Tränendrüse. Tauchen Sie die Tränendrüsen 10 Sekunden lang in eine sechs Zentimeter große Schale mit vier Millilitern 75% Ethanol und spülen Sie sie sofort zweimal mit 10-Millimolar-PBS-Lösung ab. Schneiden Sie die Tränendrüsen in kleine Fragmente von etwa einem Millimeter gewürfelt.Geben Sie sie in ein steriles 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen und behandeln Sie das Gewebe mit 500 Mikrolitern von 25 Einheiten pro Milliliterdispase und 500 Mikrolitern 0,1% Kollagenase I für eine Stunde bei 37 Grad Celsius. Behandeln Sie die Tränendrüsenfragmente mit einem Milliliter 0,05% Trypsin EDTA für 10 Minuten bei 37 Grad Celsius und dissoziieren Sie die Fragmente in einzelne Zellen durch wiederholtes Pipettieren. Filtern Sie die Suspension durch einen 70-Mikrometer-Filter, sammeln Sie den Filter in ein steriles 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen und zentrifugieren Sie fünf Minuten lang bei 150 mal G.Entfernen Sie nach der Zentrifugation den Überstand, fügen Sie 10 Milliliter 10-millimolare PBS-Lösung hinzu, um das Zellpellet zu waschen, und zentrifugieren Sie die Suspension bei 150 mal G für fünf Minuten. Wiederholen Sie das Waschen des Zellpellets. Entfernen Sie dann den Überstand und fügen Sie einen Milliliter eines Verhältnisses von 1: 1 von Dulbecco's Modified Eagles Medium und Ham's F-12 hinzu, um die Zellpellets zu resuspendieren.Fügen Sie 20 Mikroliter Matrix-Gel-Tränendrüsen-Stammzell-Medium-Matrix in der Mitte des Brunnens einer 24-Well-Platte hinzu. Verwenden Sie eine Pipettenspitze, um sie auf einen Kreis von etwa sechs bis acht Millimetern Durchmesser auszudehnen, und inkubieren Sie die Mischung für 20 Minuten bei 37 Grad Celsius, um den Brunnen vorzubeschichten. Verwenden Sie einen Zellzähler, um die Anzahl der Zellen zu bestimmen, und fügen Sie 40 Mikroliter Tränendrüsenstammzellmedium oder LGSCM mit insgesamt 10.000 Zellen in 40 Mikroliter des Matrixgels hinzu.Mischen Sie sie vorsichtig mit einer Pipette. Verwenden Sie eine Pipette, um 80 Mikroliter der Mischung vorsichtig über den vorbeschichteten Bereich in jeder Vertiefung der 24-Well-Platte fallen zu lassen. Inkubieren Sie die Mischung für 20 Minuten bei 37 Grad Celsius und fügen Sie 600 Mikroliter LGSCM hinzu.Wechseln Sie das Kulturmedium in jedem Brunnen alle zwei Tage. Suchen Sie nach sieben Tagen Kultur nach LGSC-Kugeln mit einem Durchmesser von 100 bis 300 Mikrometern unter dem inversen Mikroskop. Verwenden Sie dieses Protokoll, um primäre Tränendrüsenstammzellen von Rosa26- und NOD-Mäusen zu isolieren und zu kultivieren.Nach sieben Tagen Kultur das Kulturmedium aus der Sphäre Kultur gut entfernen. Disaggregieren Sie die LGSC-Kugeln durch Inkubation in 20 Mikroliter von 10 Einheiten pro Milliliter Dispase und 100 Mikroliter 10-Millimolar PBS für 30 Minuten bei 37 Grad Celsius. Übertragen Sie die Suspension vier Minuten lang auf ein 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen und eine Zentrifuge bei 150 x G.Entfernen Sie den Überstand. Behandeln Sie die Kugeln mit einem Milliliter 0,05% Trypsin EDTA für fünf Minuten bei 37 Grad Celsius Fügen Sie einen Milliliter 0,05% Trypsin-Inhibitor hinzu und pipettieren Sie wiederholt, um das Trypsin zu neutralisieren und die Kugeln in einzelne Zellen zu dissoziieren. Zentrifugieren Sie bei 150 mal G für fünf Minuten und entfernen Sie den Überstand, um die LGSCs zu pelletieren.Fügen Sie einen Milliliter LGSCM hinzu, um das Stammzellpellet der Tränendrüse zu resuspendieren und die Zellen zu beschichten, wie zuvor gezeigt. Wenn Sie das erste Verfahren durchführen, verlängern Sie die Kulturzeit der LGSCs von sieben auf 14 Tage mit dem Tränendrüsen-Stammzellkultursystem zur zufälligen Differenzierung. Für das zweite Verfahren ändern Sie das Verhältnis des Matrixgels zu LGSCM von 1:1 auf 1:2 zu Beginn der Tränendrüsen-Stammzellkultur zur Differenzierung der duktalen Zellen.Samen Sie die Tränendrüsenstammzellen in die Matrix zur Induktion für 14 Tage. Für Verfahren drei, nach der Passage, ersetzen Sie die LGSCM durch LGSCM 10% FBS zur Differenzierung von Acinarenzellen. Differenzierung für 14 Tage induzieren.Nach einer Woche Kultur wurden Kr14 und Ki67 in allen Sphären exprimiert, die von Tränendrüsenstammzellen gebildet wurden. Die Kugeln erreichten einen Durchmesser von 100 Mikrometern. Hämatoxylin- und Eosinfärbungen zeigten am siebten Tag Zellularität.Die Anreicherungsfaktoren von Tränendrüsenstammzellen, die nach sieben Tagen Primärkultur und Subkultur gewonnen wurden, deuteten darauf hin, dass die mit dieser Methode angereicherten Zellen eine starke proliferative Fähigkeit aufwiesen. In diesem System könnten Tränendrüsenstammzellen über 40 Mal durchgangen werden und dennoch Stammzelleigenschaften beibehalten. Tränendrüsenstammzellen wurden durch fetales Rinderserum und einen geringen Anteil an Matrixgel dazu gebracht, mehr Knospen zu bilden.Hämatoxylin- und Eosinfärbungen deuteten darauf hin, dass fetales Rinderserum die Kugeln dazu bringen könnte, mehr kavitierende Strukturen zu produzieren. Nach der orthotopen Injektion von Rosa-Tränendrüsenstammzellen in NOD-Mäuse wurden neue Tränenläppchen neben den Tränendrüsen gebildet. Die meisten Läppchen bestanden aus reifen Acinarenzellen mit hoher Expression von AQP5 und es gab eine intralobuläre Kanalbildung mit niedriger AQP5-Expression.Die Menge an Tränensekretion auf der Injektionsseite der Rosa-Tränendrüsenstammzellen war höher als auf der Kontrollseite, aber niedriger als bei den Wildtyp-Mäusen Das Matrixgel und die zugehörige Mischung müssen vor dem Gebrauch immer auf Eis gehalten werden und das Mikrozentrifugenröhrchen und die Spitzen in Kontakt mit Matrixgel sollten vorgekühlt werden. Das System bietet ein ideales Modell für die weitere Untersuchung von Tränendrüsenstammzellen, die Reparatur von Tränendrüsen und das Arzneimittelscreening auf Tränendrüsenerkrankungen.

Research

JoVE Journal

Biology

Chip-based Three-dimensional Cell Culture in Perfused Micro-bioreactors

Chip-basierte dreidimensionale Zellkultur in perfundierten Micro-Bioreaktoren

We have developed a chip-based cell culture system for the three-dimensional cultivation of cells. The chip is typically manufactured from ...

Forschung

Biologie

Microfabrication of Chip-sized Scaffolds for Three-dimensional Cell cultivation

Microfabrication der Chip-Größe Gerüste für die dreidimensionale Kultivierung der Zellen

Using microfabrication technologies is a prerequisite to create scaffolds of reproducible geometry and constant quality for three-dimensional cell ...

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Vorbereitung der gepoolten menschlichen Thrombozyten-Lysat (PHPL) als effiziente Ergänzung zum tierischen Serum-freien menschlichen Stammzell-Kulturen

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

Isolation und tierisches Serum Freie Expansion der menschlichen Nabelschnur Derived mesenchymale Stromazellen (MSCs) und Endothelial Colony Forming Progenitorzellen (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Isolierung von Maus Speicheldrüsen Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation of Mammary Epithelial Cells from Three-dimensional Mixed-cell Spheroid Co-culture

Isolierung von Brustepithelzellen aus dreidimensionalen Mixed-Zelle Spheroid Co-Kultur

While enormous efforts have gone into identifying signaling pathways and molecules involved in normal and malignant cell behaviors1-2, much of this work ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Maus embryonalen Entwicklung in einem Serum-freien Whole Embryo Culture-System

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Maus Fetal ganze Darm-System für Kultur<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Manipulation von Signalwegen und dreidimensionale Live-Imaging von Zotte Entwicklung

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

Non-enzymatic, Serum-free Tissue Culture of Pre-invasive Breast Lesions for Spontaneous Generation of Mammospheres

Nicht-enzymatische, Serumfreie Zellkultur von Pre-invasive Brustläsionen für Spontane Erzeugung Mammospheres

Breast ductal carcinoma in situ (DCIS), by definition, is proliferation of neoplastic epithelial cells within the confines of the breast duct, without ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

Manipulation der Murine Lakrimal

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...