Name: three-dimensional, serum-free culture system for lacrimal gland stem cells
Uploaded: 2022-06-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס '31871413) ושתי תוכניות של מדע וטכנולוגיה של גואנגדונג (2017B020230002 ו- 2016B030231001). אנו אסירי תודה לחוקרים שעזרו לנו במהלך המחקר ולאנשי הצוות העובדים במרכז לבעלי החיים על תמיכתם בטיפול בבעלי חיים.

כל הניסויים בפרוטוקול זה פעלו בהתאם להנחיות הטיפול בבעלי חיים של הוועדה האתית לניסוי בבעלי חיים של אוניברסיטת סון יאט-סן. כל הפעולות הקשורות לתאים יבוצעו על שולחן העבודה האולטרה-קליאני בחדר הניתוח של התא. כל הפעולות באמצעות קסילן אמורות להתבצע במנדפי אדים.
1. התרבות הראש...

<ol>
	<li>Zoukhri, D., Macari, E., Kublin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+injection+of+interleukin-1+induces+reversible+aqueous+tear+deficiency,+lacrimal+gland+inflammation,+and+acinar+and+ductal+cell+proliferation.">A single injection of interleukin-1 induces reversible aqueous tear deficiency, lacrimal gland inflammation, and acinar and ductal cell proliferation.</a> Experimental Eye Research. 84 (5), 894-904 (2007).</li><li>Gromova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lacrimal+gland+repair+using+progenitor+cells.">Lacrimal gland repair using progenitor cells.</a> Stem Cells Translational Medicine. 6 (1), 88-98 (2016).</li><li>Buzhor, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-based+therapy+approaches:+the+hope+for+incurable+diseases.">Cell-based therapy approaches: the hope for incurable diseases.</a> Regenerative Medicine. 9 (5), 649-672 (2014).</li><li>Tiwari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+human+lacrimal+gland+cultures+with+secretory+function.">Establishing human lacrimal gland cultures with secretory function.</a> PLoS One. 7 (1), 29458 (2012).</li><li>You, S., Kublin, C. L., Avidan, O., Miyasaki, D., Zoukhri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+mesenchymal+stem+cells+from+the+lacrimal+gland.">Isolation and propagation of mesenchymal stem cells from the lacrimal gland.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 52 (5), 2087-2094 (2011).</li><li>Ackermann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+investigation+of+presumptive+murine+lacrimal+gland+stem+cells.">Isolation and investigation of presumptive murine lacrimal gland stem cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 56 (8), 4350-4363 (2015).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Lugli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R-spondin+1+and+noggin+facilitate+expansion+of+resident+stem+cells+from+non-damaged+gallbladders.">R-spondin 1 and noggin facilitate expansion of resident stem cells from non-damaged gallbladders.</a> EMBO Reports. 17 (5), 769-779 (2016).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver.">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1), 299-312 (2015).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1), 324-338 (2015).</li><li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lgr5+(ve)+stem+cells+drive+self-renewal+in+the+stomach+and+build+long-lived+gastric+units+in+vitro.">Lgr5+(ve) stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro.</a> Cell Stem Cell. 6 (1), 25-36 (2010).</li><li>Linnemann, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+regenerative+potential+in+primary+human+mammary+epithelial+cells.">Quantification of regenerative potential in primary human mammary epithelial cells.</a> Development. 142 (18), 3239-3251 (2015).</li><li>Rock, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basal+cells+as+stem+cells+of+the+mouse+trachea+and+human+airway+epithelium.">Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (31), 12771-12775 (2009).</li><li>Chua, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+luminal+epithelial+progenitors+can+generate+prostate+organoids+in+culture.">Single luminal epithelial progenitors can generate prostate organoids in culture.</a> Nature Cell Biology. 16 (1), 951-961 (2014).</li><li>Maimets, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vitro+expansion+of+salivary+gland+stem+cells+driven+by+Wnt+signals.">Long-term in vitro expansion of salivary gland stem cells driven by Wnt signals.</a> Stem Cell Reports. 6 (1), 150-162 (2016).</li><li>Xiao, S., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+long-term+serum-free+culture+for+lacrimal+gland+stem+cells+aiming+at+lacrimal+gland+repair.">Establishment of long-term serum-free culture for lacrimal gland stem cells aiming at lacrimal gland repair.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 11 (1), 20 (2020).</li><li>Shatos, M. A., Haugaard-Kedstrom, L., Hodges, R. R., Dartt, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+progenitor+cells+in+uninjured,+adult+rat+lacrimal+gland.">Isolation and characterization of progenitor cells in uninjured, adult rat lacrimal gland.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (6), 2749-2759 (2012).</li><li>Mishima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+side+population+cells+restores+the+function+of+damaged+exocrine+glands+through+clusterin.">Transplantation of side population cells restores the function of damaged exocrine glands through clusterin.</a> Stem Cells. 30 (9), 1925-1937 (2012).</li><li>Aluri, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+improves+tear+production+in+a+mouse+model+of+sj&#246;gren's+syndrome.">Delivery of bone marrow-derived mesenchymal stem cells improves tear production in a mouse model of sj&#246;gren's syndrome.</a> Stem Cells International. 2017, 1-10 (2017).</li><li>Dietrich, J., Schrader, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+lacrimal+gland+regeneration:+current+concepts+and+experimental+approaches.">Towards lacrimal gland regeneration: current concepts and experimental approaches.</a> Current Eye Research. 45 (3), 230-240 (2020).</li><li>Sato, T., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+growing+organoids+from+stem+cells.">SnapShot: growing organoids from stem cells.</a> Cell. 161 (7), 1700 (2015).</li><li>Kleinman, H. K., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+basement+membrane+matrix+with+biological+activity.">Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.</a> Seminars in Cancer Biology. 15 (5), 378-386 (2005).</li><li>Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Benton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+matrix+(BME)+has+multiple+uses+with+stem+cells.">Basement membrane matrix (BME) has multiple uses with stem cells.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 8 (1), 163-169 (2012).</li></ol>

ישנן שיטות מבוססות היטב לבידוד ותרבית חוץ גופית של תאי גזע דמעתיים לתרבית תאי גזע דמעה ותיקון פציעת LG. Shatos et al.17 ו- Ackermannet al. 6 תאי גזע דמע תת-תרבותיים בתרבית ותת-תרבותית של חולדות ועכברים בהצלחה בשיטות תרבית דו-ממדיות, בהתאמה, מה שמאפשר להשתיל תאי גזע דמעות...

תאי גזע של בלוטת הדמעות (LGSCs) שומרים על התחדשות תאי בלוטת הדמעות (LG) והם המקור לתאי אצינר ותאים דוקטליים. לכן, השתלת LGSC נחשבת לגישה חלופית לטיפול בנזק דלקתי חמור ובמחלת עיניים יבשות עם מחסור מימי (ADDED)1,2,3. מספר שיטות תרבית יושמו כדי להעשיר את הלהט"בים. Tiwari et al. הפרידו ותרבית תאי LG ראשוניים בתרבית באמצעות קולגן I וג'ל מטריקס בתוספת מספר גורמי גדילה; עם זאת, תאי LG לא יכלו להיות בתרבית רציפה4. באמצעות תרבית דו-ממדית (דו-ממדית), תאי גזע שמקורם בעכבר LG בודדו על ידי You et al.5 ו-Ackermann et al. 6, שנמצא כמבטא את הגנים של סמן תאי גזע/אב, Oct4, Sox2, Nanog ו-nestin, וניתן היה לתת-תרבות. עם זאת, אין אינדיקציה ברורה לכך שתאים אלה יכולים להתמיין לתאי אצינר או צינור, ואין ניסוי השתלה כדי לאמת את פוטנציאל ההתמיינות in vivo.
לאחרונה, תאי c-kit+ dim/EpCAM+/Sca1-/CD34-/CD45- בודדו מתאי LGs של עכברים על ידי ציטומטריית זרימה, נמצאו כמבטאים סמני תאי אב LG, כגון Pax6 ו-Runx1, והתמיינו לתעלות ואצ'יני במבחנה. בעכברים עם ADDED, הזרקה אורתוטופית עם תאים אלה יכולה לתקן LGs פגומים ולשחזר את תפקוד ההפרשה של LGs2. עם זאת, מספר תאי הגזע שבודדו בשיטה זו היה קטן, ואין תנאי תרבית מתאימים להרחבת הלהט"בים המבודדים. לסיכום, יש להקים מערכת תרביות מתאימה כדי לבודד ולתרבות ביעילות LGSCs בוגרים עם התרחבות יציבה ומתמשכת לחקר LGSCs בטיפול ב- ADDED.
אורגנואידים המופקים מתאי גזע או מתאי גזע פלוריפוטנטיים הם קבוצה של תאים הדומים מבחינה היסטולוגית לאיברים הקשורים ויכולים לשמור על התחדשות משלהם. לאחר שהאורגנואיד של מעי העכבר תרבית בהצלחה על ידי Sato et al. בשנת 20097, אורגנואידים מאיברים אחרים הועתקו ברצף, בהתבסס על מערכת התרבית של סאטו, כגון כיס המרה8, כבד9, לבלב10, קיבה11, שד12, ריאה13, ערמונית14 ובלוטת הרוק15 . בשל השיעור הגבוה של תאי גזע בוגרים לפני התמיינות תאים בתרבית אורגנואידים, שיטת תרבית האורגנואידים התלת-ממדית (3D) נחשבת אופטימלית לבידוד ולתרבית של תאי גזע בוגרים של LG.
מערכת תרבית LGSC של עכבר בוגר הוקמה במחקר הנוכחי על ידי אופטימיזציה של שיטת התרבות התלת-ממדית, ללא סרום. הוכח כי הלהט"בים שעברו תרבית הן מעכברים רגילים והן מעכברים שנוספו הראו יכולת יציבה של התחדשות עצמית והתפשטות. לאחר השתלה ב-LGs של העכברים הנוספו, LGSCs התיישבו ב-LGs הפגומים ושיפרו את ייצור הקרעים. בנוסף, LGSCs פלואורסצנטיים אדומים בודדו מעכברי ROSA26mT/mG ועברו תרבית. עבודה זו מספקת התייחסות אמינה להעשרת LGSC במבחנה ול- LGSC autograft ביישום קליני לטיפול נוסף.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animal(Mouse)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bal B/C</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57 BL/6J</td>
			<td>Laboratory Animal Center of Sun Yat-sen University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD/ShiLtJ</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROSA26mT/mG</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic dehydrator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood counting chamber</td>
			<td>BLAU</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counter</td>
			<td>CountStar</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 constant temperature incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL Gel imaging system</td>
			<td>GE healthcare</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric bath for water bath</td>
			<td>Yiheng Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis apparatus</td>
			<td>BioRad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence quantitative PCR instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen tissue slicer</td>
			<td>Lecia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal centrifuge</td>
			<td>CENCE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser lamellar scanning micrograph</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen container</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature high speed centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop ultraviolet spectrophotometer</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>measure RNA concentration</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin slicing machine</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Amplifier</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH value tester</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 &#176;C Refrigerator</td>
			<td>Haier</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic culture oscillator</td>
			<td>ZHICHENG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paraffin embedding instrument</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;-80&#176;C Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;-20&#176;C Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra pure water purification system</td>
			<td>ELGA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Experiment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCG</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-61-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSG</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>14158-65-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17018029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>BD</td>
			<td>354235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A500895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>04-001-1ACS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF10</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel (Matrix gel)</td>
			<td>BD</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Noggin</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>250-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Wnt3A</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>315-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine EGF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>315-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-spondin 1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Inhibitor (TI)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6522</td>
			<td>Derived from Glycine max; can inhibit trypsin, chymotrypsin, and plasminase to a lesser extent. One mg will inhibit 1.0-3.0 mg of trypsin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;T4799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Selleck</td>
			<td>S1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE staining &#38; Immunostaining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>Used dilution: IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 0.2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-10037</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-10042</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 4 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-AQP5 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104751</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 0.1 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-E-cadherin Rat antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab11512</td>
			<td>Used dilution: (IF)&#160; 5 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Keratin14 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab181595</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ki67 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab15580</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 1 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mCherry mouse antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab125096</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mCherry rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab167453</td>
			<td>Used dilution: (IF)&#160; 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C6H8O7</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501702-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>201-069-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB Kit (20x)</td>
			<td>CWBIO</td>
			<td>CW0125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>BASO</td>
			<td>68115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Mounting Medium</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501912-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG antibody (HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6789</td>
			<td>Used dilution: 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG antibody(HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6721</td>
			<td>Used dilution: 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>BASO</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel (Embedding hydrogel)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>HG-400-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% H2O2</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>KD10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Hydrogen Peroxide Solution</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>7722-84-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na3C6H5O7.2H2O</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501293-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>SHANGHAI YIYANG</td>
			<td>YY-Neutral balsam</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-immunized Goat Serum</td>
			<td>BOSTER</td>
			<td>AR0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A601891-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>DAMAO</td>
			<td>200-001-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharose</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>57-50-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>200-675-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>IB11-AR-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.T.C. Compound</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>SAKURA.4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>DINGGUO</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>128686-03-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RT-PCR &#38; qRT-PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9012-36-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>865-49-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>214-984-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl Alcohol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>67-63-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LightCycler 480 SYBR Green I Master Mix</td>
			<td>Roche</td>
			<td>488735200H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ReverTra Ace qPCR RT Master Mix</td>
			<td>TOYOBO</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq DNA Polymerase</td>
			<td>TAKARA</td>
			<td>R10T1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goldview (nucleic acid stain)</td>
			<td>BioSharp</td>
			<td>BS357A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol</td>
			<td>Magen</td>
			<td>R4801-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector Construction &#38; Cell Transfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>69-52-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-75-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotoxin-free Plasmid Extraction Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A36227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>25389-94-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipo3000 Plasmid Transfection Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L3000015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LR Reaction Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>11791019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid Extraction Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans5&#945; Chemically Competent Cell</td>
			<td>TRANSGEN</td>
			<td>CD201-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trytone</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers and Sequence</td>
			<td>Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: AQP5 
			Sequence: 
			F: CATGAACCCAGCCCGATCTT 
			R: CTTCTGCTCCCATCCCATCC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: &#946;-actin 
			Sequence: 
			F: AGATCAAGATCATTGCTCCTCCT 
			R: AGATCAAGATCATTGCTCCTCCT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Epcam 
			Sequence: 
			F: CATTTGCTCCAAACTGGCGT 
			R: TGTCCTTGTCGGTTCTTCGG</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt5 
			Sequence: 
			F: AGCAATGGCGTTCTGGAGG 
			R: GCTGAAGGTCAGGTAGAGCC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt14 
			Sequence: 
			F: CGGACCAAGTTTGAGACGGA 
			R: GCCACCTCCTCGTGGTTC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt19 
			Sequence: 
			F: TCTTTGAAAAACACTGAACCCTG 
			R: TGGCTCCTCAGGGCAGTAAT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Ltf 
			Sequence: 
			F: CACATGCTGTCGTATCCCGA 
			R: CGATGCCCTGATGGACGA</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Nestin 
			Sequence: 
			F: GGGGCTACAGGAGTGGAAAC 
			R: GACCTCTAGGGTTCCCGTCT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: P63 
			Sequence: 
			F: TCCTATCACGGGAAGGCAGA 
			R: GTACCATCGCCGTTCTTTGC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX302 lentivirus no-load vector</td>
			<td>Addgene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pENRTY-mCherry</td>
			<td>Xiaofeng Qin laboratory, Sun Yat-sen University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional, serum-free culture system for lacrimal gland stem cells

טיפול מבוסס תאי גזע בבלוטת הדמעות (LG) הוא אסטרטגיה מבטיחה למחלות בלוטות הדמעות. עם זאת, היעדרה של שיטת תרבית אמינה ונטולת סרום להשגת מספר מספיק של תאי גזע LG (LGSCs) הוא מכשול אחד למחקר ויישום נוספים. שיטת התרבות התלת-ממדית (התלת-ממדית) ללא סרום עבור LGSCs של עכברים בוגרים מבוססת היטב ומוצגת כאן. ניתן היה להעביר את ה-LGSCs באופן רציף ולגרום להם להתמיין לתאים דמויי אצינר או דמויי צינור.
עבור התרבות העיקרית של LGSC, LGs מעכברים בני 6-8 שבועות עוכלו עם דיספנס, קולגן I וטריפסין-EDTA. בסך הכל 1 × 104 תאים בודדים נזרעו לתוך 80 μL של מטריצה ג'ל-בלוטת דמעה של מטריצה בלוטת גזע בינונית (LGSCM) בכל באר של צלחת 24 בארות, מצופה מראש עם 20 μL של מטריצה ג'ל-LGSCM מטריצה. התערובת התמצקה לאחר הדגירה במשך 20 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, ו-600 μL של LGSCM נוספו.
לצורך תחזוקת LGSC, LGSCs בתרבית במשך 7 ימים פורקו לתאים בודדים על ידי פירוק וטריפסין-EDTA. התאים הבודדים הושתלו ותרבית על פי השיטה ששימשה בתרבית הראשונית של LGSC. LGSCs יכולים לעבור למעלה מ-40 פעמים ולבטא באופן רציף סמני תאי גזע/אב Krt14, Krt5, P63 ונסטין. LGSCs בתרבית LGSCM הם בעלי יכולת התחדשות עצמית ויכולים להתמיין לתאים דמויי אצינר או צינור במבחנה וב-in vivo.

הקמת מערכת תרביות תלת-ממדית, ללא סרום במחקר זה פותח LGSCM המכיל EGF, Wnt3A, FGF10 ו-Y-27632 עבור LGSCs של עכברים, ו-LGSCs בודדו בהצלחה ותורבתו על ידי שיטת תרבית תלת-ממדית (איור 1A). מערכת תרבית תלת-ממדית מוצלחת ללא סרום של LGSCs מעכברי C57BL/6, עכברי NOD/ShiLtJ, עכברי BALB/c ועכברי ROSA26mT/mG הוקמה ...

Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells at JoVE.com

Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells

שיטת התרבית התלת-ממדית, ללא סרום, לתאי גזע של בלוטת דמעה בוגרת (LG) מבוססת היטב על אינדוקציה של היווצרות והתמיינות של אורגנואידים LG לתאים דמויי אצינר או צינור.

מערכת תרבית תלת-ממדית, ללא סרום, לתאי גזע של בלוטת הדמעות

Lacrimal gland (LG) stem cell-based therapy is a promising strategy for lacrimal gland diseases. However, the lack of a reliable, serum-free culture ...

פרוטוקול זה מספק אסטרטגיה מועילה להעשרת תאי גזע של בלוטת הדמעות לצורך התחדשות ושחזור של בלוטת הדמעות. תאי גזע של בלוטת הדמעות מראים יכולת התרחבות ארוכת טווח ופוטנציאל התמיינות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שמדיום התרבית לתאי גזע של בלוטת הדמעות הוא נטול סרום, מה שמראה את הערך העצום לתיקון בלוטת הדמעות בגין על ידי קבלת עכבר זכר BALB/c בן שישה עד שמונה שבועות מורדם וחתך העור מאחורי האוזן כדי לחשוף את בלוטת הדמעות ואת רקמת החיבור סביבו.מקלפים את רקמת החיבור על ידי דיסקציה קהה בעזרת פינצטה ומסירים את בלוטת הדמעות. לטבול את בלוטות הדמעות בצלחת של שישה סנטימטרים עם ארבעה מיליליטרים של 75% אתנול למשך 10 שניות ולשטוף מיד עם תמיסת PBS 10 מילימולרית פעמיים. חותכים את בלוטות הדמעות לרסיסים קטנים של כמילימטר אחד.מעבירים אותם לצינור צנטריפוגה סטרילי של 15 מיליליטר ומטפלים ברקמות עם 500 מיקרוליטרים של 25 יחידות למיליליטר דיספוזה ו-500 מיקרוליטרים של 0.1% קולגן I למשך שעה אחת ב-37 מעלות צלזיוס. טפל בשברי בלוטת הדמעות עם מיליליטר אחד של 0.05%טריפסין EDTA למשך 10 דקות ב 37 מעלות צלזיוס ונתק את השברים לתאים בודדים על ידי צנרת שוב ושוב. מסננים את ההשעיה דרך מסנן של 70 מיקרומטר, אוספים את המסנן לתוך צינור צנטריפוגה סטרילי של 15 מיליליטר, וצנטריפוגה ב-150 פעמים G למשך חמש דקות.לאחר צנטריפוגה, הסר את הסופרנאטנט, הוסף 10 מיליליטרים של תמיסת PBS 10-millimolar כדי לשטוף את גלולת התא, וצנטריפוגה את המתלים ב 150 פעמים G במשך חמש דקות. חזור על שטיפת גלולת התא. לאחר מכן, הסר את הסופרנאטנט והוסף מיליליטר אחד של יחס של 1:1 של מדיום הנשרים המהונדסים של דולבקו וה-F-12 של האם כדי לבצע החייאה של כדורי התא.הוסיפו 20 מיקרוליטרים של מטריצה ג'ל בלוטת הדמעות של מטריצה מטריצה בינונית של תאי גזע במרכז הבאר של צלחת של 24 בארות. השתמשו בקצה פיפטה כדי להרחיב אותה למעגל בקוטר של כשישה עד שמונה מילימטרים ולדגום את התערובת במשך 20 דקות ב-37 מעלות צלזיוס כדי לצפות מראש את הבאר. השתמש במונה תאים כדי לקבוע את מספר התאים ולהוסיף 40 מיקרוליטרים של מדיום תאי גזע של בלוטת הדמעות, או LGSCM, עם סך של 10, 000 תאים לתוך 40 מיקרוליטרים של ג'ל המטריצה.מערבבים אותם בעדינות עם פיפטה. השתמשו בפיפטה כדי להפיל בזהירות 80 מיקרוליטרים של התערובת על האזור המצופה מראש בכל באר של הצלחת בת 24 הבארות. דגירה של התערובת למשך 20 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס והוספת 600 מיקרוליטרים של LGSCM.שנה את המדיום התרבותי בכל באר פעם ביומיים. לאחר שבעה ימים של תרבית, חפש כדורי LGSC בקוטר של 100 עד 300 מיקרומטר מתחת למיקרוסקופ ההפוך. השתמש בפרוטוקול זה כדי לבודד ולתרבת תאי גזע ראשוניים של בלוטת הדמעות של עכברי Rosa26 ו- NOD.לאחר שבעה ימים של תרבות, הסר את המדיום התרבותי מתרבות המרחב היטב. פרקו את כדורי ה-LGSC על ידי דגירה ב-20 מיקרוליטרים של 10 יחידות למיליליטר ו-100 מיקרוליטרים של PBS 10-מילימולרי למשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס. מעבירים את המתלים לצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר וצנטריפוגה ב-150 פעמים G למשך ארבע דקות.הסר את ה-supernatant. טפלו בכדורים עם מיליליטר אחד של 0.05%טריפסין EDTA למשך חמש דקות ב-37 מעלות צלזיוס הוסיפו מיליליטר אחד של מעכב טריפסין של 0.05% טריפסין ופיפטה שוב ושוב כדי לנטרל את הטריפסין ולנתק את הכדורים לתאים בודדים. צנטריפוגה ב 150 פעמים G במשך חמש דקות ולהסיר את supernatant כדי גלולה LGSCs.הוסיפו מיליליטר אחד של LGSCM כדי להחיות את גלולת תאי הגזע של בלוטת הדמעות ולצלוח את התאים כפי שהוכח קודם לכן. אם מבצעים הליך אחד, האריכו את זמן התרבית של ה- LGSCs משבעה ל -14 יום עם מערכת תרבית תאי הגזע של בלוטת הדמעות להתמיינות אקראית. עבור הליך שני, שנה את היחס בין ג'ל המטריצה ל- LGSCM מ- 1:1 ל- 1:2 בתחילת תרבית תאי הגזע של בלוטת הדמעות לצורך התמיינות של תאי צינור.זרעו את תאי הגזע של בלוטת הדמעות לתוך המטריצה לצורך אינדוקציה למשך 14 יום. עבור הליך שלישי, לאחר המעבר, החלף את ה- LGSCM ב- LGSCM 10% FBS להתמיינות של תאים אסינאריים. לגרום להבחנה במשך 14 יום.לאחר שבוע אחד של תרבית, Kr14 ו- Ki67 באו לידי ביטוי בכל הכדורים שנוצרו על ידי תאי גזע של בלוטת הדמעות. הכדורים הגיעו לקוטר של 100 מיקרומטר. ההמטוקסילין והכתמים של אאוזין הראו את התאים ביום השביעי.גורמי ההעשרה של תאי גזע של בלוטת הדמעות שהתקבלו לאחר שבעה ימים של תרבית ראשונית ותת-תרבות הצביעו על כך שהתאים שהועשרו בשיטה זו היו בעלי יכולת התפשטות חזקה. במערכת זו, תאי גזע של בלוטת הדמעות יכולים לעבור למעלה מ-40 פעמים ועדיין לשמור על מאפייני תאי הגזע. תאי גזע של בלוטת הדמעות הושרו ליצור יותר ניצנים על ידי סרום בקר עוברי ושיעור נמוך של ג'ל מטריקס.צביעת המטוקסילין ואאוזין הצביעה על כך שסרום בקר עוברי יכול לגרום לכדורים לייצר יותר מבנים מחלחלים. לאחר הזרקה אורתוטופית של תאי גזע של בלוטת הדמעות רוזה בעכברי NOD, נוצרו אונות דמעות חדשות בצמוד לבלוטות הדמעות. רוב הלובולים היו מורכבים מתאים אסינאריים בוגרים עם ביטוי גבוה של AQP5 והייתה היווצרות צינורות אינטראוליים עם ביטוי AQP5 נמוך.כמות הפרשת הדמעות בצד הזרקת תאי הגזע של בלוטת הדמעות רוזה הייתה גבוהה יותר מאשר בצד הבקרה, אך נמוכה יותר מאשר בעכברים מסוג בר ג'ל המטריצה והתערובת הקשורה אליו חייבים תמיד להישמר על קרח לפני השימוש ויש לקרר מראש את צינור המיקרוצנטריפוגה והקצות במגע עם ג'ל מטריקס. המערכת מספקת מודל אידיאלי למחקר נוסף של תאי גזע של בלוטת הדמעות, תיקון בלוטת הדמעות ובדיקת תרופות למחלות בלוטות הדמעות.

Research

JoVE Journal

Biology

Chip-based Three-dimensional Cell Culture in Perfused Micro-bioreactors

שבב מבוסס תלת ממדי נייד תרבות Micro-bioreactors perfused

We have developed a chip-based cell culture system for the three-dimensional cultivation of cells. The chip is typically manufactured from ...

Microfabrication of Chip-sized Scaffolds for Three-dimensional Cell cultivation

Microfabrication של שבב בגודל פיגומים לעיבוד תלת ממדי נייד

Using microfabrication technologies is a prerequisite to create scaffolds of reproducible geometry and constant quality for three-dimensional cell ...

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

הכנת lysate משולב טסיות דם האדם (pHPL) כתוסף יעיל עבור בעלי חיים סרום ללא בתרביות תאים האדם גזע

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

בידוד בעלי חיים הרחבת חינם סרום של טבורי האדם נגזר תאים סטרומה mesenchymal (MSCs) ו האנדותל יצירת המושבה ובתאים (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

בידוד של בלוטת הרוק עכבר תאים גזע

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation of Mammary Epithelial Cells from Three-dimensional Mixed-cell Spheroid Co-culture

בידוד של תאים אפיתל החלב של תלת ממדי תאים משולבים תרבות משותפת אליפטית

While enormous efforts have gone into identifying signaling pathways and molecules involved in normal and malignant cell behaviors1-2, much of this work ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

עכבר עוברי פיתוח במערכת סרום ללא תרבות שלמה עובר

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

מערכת תרבות עכבר העוברי שלם מעי ל<em&gt; Ex Vivo</em&gt; מניפולציה של מסלולי איתות והדמית חיה תלת ממדית של פיתוח שליה

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

Non-enzymatic, Serum-free Tissue Culture of Pre-invasive Breast Lesions for Spontaneous Generation of Mammospheres

אינו אנזימטית, תרבות רקמות סרום ללא נגעי שד טרום פולשני לדור ספונטני של Mammospheres

Breast ductal carcinoma in situ (DCIS), by definition, is proliferation of neoplastic epithelial cells within the confines of the breast duct, without ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

המניפולציה Murine דמעות בלוטת

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...