Name: three-dimensional, serum-free culture system for lacrimal gland stem cells
Uploaded: 2022-06-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por una subvención de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (No. 31871413) y dos Programas de Ciencia y Tecnología de Guangdong (2017B020230002 y 2016B030231001). Estamos realmente agradecidos a los investigadores que nos han ayudado durante el estudio y a los miembros del personal que trabajan en el centro de animales por su apoyo en el cuidado de los animales.

Todos los experimentos en este protocolo siguieron las pautas de cuidado animal del Comité Ético de Ensayos con Animales de la Universidad Sun Yat-sen. Todas las operaciones relacionadas con la célula deben realizarse en el banco de trabajo ultralimpio en la sala de operaciones de la celda. Todas las operaciones con xileno deben llevarse a cabo en campanas extractoras.
1. Cultura primaria LGSC
<ol><li>Aislamiento LG<ol>
<li>Obtenga un ratón macho BALB / c de 6 a 8 semana...

<ol>
	<li>Zoukhri, D., Macari, E., Kublin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+injection+of+interleukin-1+induces+reversible+aqueous+tear+deficiency,+lacrimal+gland+inflammation,+and+acinar+and+ductal+cell+proliferation.">A single injection of interleukin-1 induces reversible aqueous tear deficiency, lacrimal gland inflammation, and acinar and ductal cell proliferation.</a> Experimental Eye Research. 84 (5), 894-904 (2007).</li><li>Gromova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lacrimal+gland+repair+using+progenitor+cells.">Lacrimal gland repair using progenitor cells.</a> Stem Cells Translational Medicine. 6 (1), 88-98 (2016).</li><li>Buzhor, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-based+therapy+approaches:+the+hope+for+incurable+diseases.">Cell-based therapy approaches: the hope for incurable diseases.</a> Regenerative Medicine. 9 (5), 649-672 (2014).</li><li>Tiwari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+human+lacrimal+gland+cultures+with+secretory+function.">Establishing human lacrimal gland cultures with secretory function.</a> PLoS One. 7 (1), 29458 (2012).</li><li>You, S., Kublin, C. L., Avidan, O., Miyasaki, D., Zoukhri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+mesenchymal+stem+cells+from+the+lacrimal+gland.">Isolation and propagation of mesenchymal stem cells from the lacrimal gland.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 52 (5), 2087-2094 (2011).</li><li>Ackermann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+investigation+of+presumptive+murine+lacrimal+gland+stem+cells.">Isolation and investigation of presumptive murine lacrimal gland stem cells.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 56 (8), 4350-4363 (2015).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Lugli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R-spondin+1+and+noggin+facilitate+expansion+of+resident+stem+cells+from+non-damaged+gallbladders.">R-spondin 1 and noggin facilitate expansion of resident stem cells from non-damaged gallbladders.</a> EMBO Reports. 17 (5), 769-779 (2016).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver.">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1), 299-312 (2015).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1), 324-338 (2015).</li><li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lgr5+(ve)+stem+cells+drive+self-renewal+in+the+stomach+and+build+long-lived+gastric+units+in+vitro.">Lgr5+(ve) stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro.</a> Cell Stem Cell. 6 (1), 25-36 (2010).</li><li>Linnemann, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+regenerative+potential+in+primary+human+mammary+epithelial+cells.">Quantification of regenerative potential in primary human mammary epithelial cells.</a> Development. 142 (18), 3239-3251 (2015).</li><li>Rock, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basal+cells+as+stem+cells+of+the+mouse+trachea+and+human+airway+epithelium.">Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (31), 12771-12775 (2009).</li><li>Chua, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+luminal+epithelial+progenitors+can+generate+prostate+organoids+in+culture.">Single luminal epithelial progenitors can generate prostate organoids in culture.</a> Nature Cell Biology. 16 (1), 951-961 (2014).</li><li>Maimets, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vitro+expansion+of+salivary+gland+stem+cells+driven+by+Wnt+signals.">Long-term in vitro expansion of salivary gland stem cells driven by Wnt signals.</a> Stem Cell Reports. 6 (1), 150-162 (2016).</li><li>Xiao, S., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+long-term+serum-free+culture+for+lacrimal+gland+stem+cells+aiming+at+lacrimal+gland+repair.">Establishment of long-term serum-free culture for lacrimal gland stem cells aiming at lacrimal gland repair.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 11 (1), 20 (2020).</li><li>Shatos, M. A., Haugaard-Kedstrom, L., Hodges, R. R., Dartt, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+progenitor+cells+in+uninjured,+adult+rat+lacrimal+gland.">Isolation and characterization of progenitor cells in uninjured, adult rat lacrimal gland.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (6), 2749-2759 (2012).</li><li>Mishima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+side+population+cells+restores+the+function+of+damaged+exocrine+glands+through+clusterin.">Transplantation of side population cells restores the function of damaged exocrine glands through clusterin.</a> Stem Cells. 30 (9), 1925-1937 (2012).</li><li>Aluri, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+improves+tear+production+in+a+mouse+model+of+sj&#246;gren's+syndrome.">Delivery of bone marrow-derived mesenchymal stem cells improves tear production in a mouse model of sj&#246;gren's syndrome.</a> Stem Cells International. 2017, 1-10 (2017).</li><li>Dietrich, J., Schrader, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+lacrimal+gland+regeneration:+current+concepts+and+experimental+approaches.">Towards lacrimal gland regeneration: current concepts and experimental approaches.</a> Current Eye Research. 45 (3), 230-240 (2020).</li><li>Sato, T., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+growing+organoids+from+stem+cells.">SnapShot: growing organoids from stem cells.</a> Cell. 161 (7), 1700 (2015).</li><li>Kleinman, H. K., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+basement+membrane+matrix+with+biological+activity.">Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.</a> Seminars in Cancer Biology. 15 (5), 378-386 (2005).</li><li>Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Benton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+matrix+(BME)+has+multiple+uses+with+stem+cells.">Basement membrane matrix (BME) has multiple uses with stem cells.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 8 (1), 163-169 (2012).</li></ol>

Existen métodos bien establecidos para el aislamiento y el cultivo in vitro de células madre lagrimales para el cultivo de células madre lagrimales y la reparación de lesiones LG. Shatos et al.17 y Ackermannet al. 6 células madre lagrimales cultivadas y subcultivadas con éxito de ratas y ratones mediante métodos de cultivo 2D, respectivamente, lo que permite trasplantar células madre lagrimales para el tratamiento del TDA. Los estudios sobre célul...

Las células madre de la glándula lagrimal (LGSC) mantienen la renovación celular de la glándula lagrimal (LG) y son la fuente de células acinares y ductales. Por lo tanto, el trasplante lgsc se considera un enfoque alternativo para tratar el daño inflamatorio severo y la enfermedad del ojo seco con deficiencia acuosa (AÑAD)1,2,3. Se han aplicado varios métodos de cultivo para enriquecer LGSCs. Tiwari et al. separaron y cultivaron células primarias de LG utilizando colágeno I y gel de matriz complementado con varios factores de crecimiento; sin embargo, las células LG no pudieron ser cultivadas continuamente4. Utilizando cultivo bidimensional (2D), las células madre derivadas de LG de ratón fueron aisladas por You et al.5 y Ackermann et al. 6, se encontró que expresa los genes marcadores de células madre / progenitoras, Oct4, Sox2, Nanog y nestina, y podría ser subcultivado. Sin embargo, no hay indicios claros de que estas células puedan diferenciarse en células acinares o ductales, y no existe un experimento de trasplante para verificar el potencial de diferenciación in vivo.
Recientemente, las células c-kit+ dim/EpCAM+/Sca1-/CD34-/CD45- se aislaron de LIG de ratón mediante citometría de flujo, se encontró que expresaban marcadores de células progenitoras LG, como Pax6 y Runx1, y se diferenciaron en conductos y acini in vitro. En ratones con ADD, la inyección ortotópica con estas células podría reparar las GL dañadas y restaurar la función secretora de lasGL 2. Sin embargo, el número de células madre aisladas por este método fue pequeño, y no hay condiciones de cultivo adecuadas para expandir las LGSC aisladas. En resumen, es necesario establecer un sistema de cultivo adecuado para aislar y cultivar eficazmente las LGSC adultas con expansión estable y continua para el estudio de las LGSC en el tratamiento de la ADICIÓN.
Los organoides derivados de células madre o células madre pluripotentes son un grupo de células que son histológicamente similares a los órganos relacionados y pueden mantener su propia renovación. Después de que el organoide del intestino de ratón fue cultivado con éxito por Sato et al. en 20097, se cultivaron organoides de otros órganos en sucesión, según el sistema de cultivo de Sato, como la vesícula biliar8, el hígado9, el páncreas10, el estómago11, la mama12, el pulmón13, la próstata14 y la glándula salival15 . Debido a la alta proporción de células madre adultas antes de la diferenciación celular en cultivo organoide, el método de cultivo organoide tridimensional (3D) se considera óptimo para el aislamiento y cultivo de células madre adultas de LG.
En el presente estudio se estableció un sistema de cultivo LGSC de ratón adulto mediante la optimización del método de cultivo 3D, libre de suero. Está comprobado que las LGSC cultivadas tanto en ratones normales como en ratones ADDED mostraron una capacidad estable de autorrenovación y proliferación. Después del trasplante en los GL de ratón ADDED, los LGSC colonizaron los LGs deteriorados y mejoraron la producción de lágrimas. Además, se aislaron LGSC fluorescentes rojos de ratones ROSA26mT/mG y se cultivaron. Este trabajo proporciona una referencia confiable para el enriquecimiento LGSC in vitro y el autoinjerto LGSC en aplicación clínica para la terapia CON ADD.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animal(Mouse)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bal B/C</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57 BL/6J</td>
			<td>Laboratory Animal Center of Sun Yat-sen University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD/ShiLtJ</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROSA26mT/mG</td>
			<td>Model Animal Research Center of Nanjing University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic dehydrator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood counting chamber</td>
			<td>BLAU</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counter</td>
			<td>CountStar</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 constant temperature incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL Gel imaging system</td>
			<td>GE healthcare</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric bath for water bath</td>
			<td>Yiheng Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis apparatus</td>
			<td>BioRad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence quantitative PCR instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen tissue slicer</td>
			<td>Lecia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal centrifuge</td>
			<td>CENCE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser lamellar scanning micrograph</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen container</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature high speed centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop ultraviolet spectrophotometer</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>measure RNA concentration</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin slicing machine</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Amplifier</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH value tester</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 &#176;C Refrigerator</td>
			<td>Haier</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic culture oscillator</td>
			<td>ZHICHENG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue paraffin embedding instrument</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;-80&#176;C Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;-20&#176;C Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra pure water purification system</td>
			<td>ELGA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Experiment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCG</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9002-61-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSG</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>14158-65-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital Sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17018029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>BD</td>
			<td>354235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A500895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>04-001-1ACS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF10</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel (Matrix gel)</td>
			<td>BD</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Noggin</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>250-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Wnt3A</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>315-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine EGF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>315-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-spondin 1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>120-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Inhibitor (TI)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6522</td>
			<td>Derived from Glycine max; can inhibit trypsin, chymotrypsin, and plasminase to a lesser extent. One mg will inhibit 1.0-3.0 mg of trypsin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;T4799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Selleck</td>
			<td>S1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE staining &#38; Immunostaining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-21202</td>
			<td>Used dilution: IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 0.2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 donkey anti-Mouse IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-10037</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A-10042</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 4 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-AQP5 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104751</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 0.1 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-E-cadherin Rat antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab11512</td>
			<td>Used dilution: (IF)&#160; 5 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Keratin14 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab181595</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ki67 rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab15580</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 1 &#956;g/mL, (IF) 1 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mCherry mouse antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab125096</td>
			<td>Used dilution: (IHC) 2 &#956;g/mL, (IF) 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mCherry rabbit antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab167453</td>
			<td>Used dilution: (IF)&#160; 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C6H8O7</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501702-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>201-069-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB Kit (20x)</td>
			<td>CWBIO</td>
			<td>CW0125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>BASO</td>
			<td>68115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Mounting Medium</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501912-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG antibody (HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6789</td>
			<td>Used dilution: 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG antibody(HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6721</td>
			<td>Used dilution: 2 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>BASO</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel (Embedding hydrogel)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>HG-400-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% H2O2</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>KD10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Hydrogen Peroxide Solution</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>7722-84-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na3C6H5O7.2H2O</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501293-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>SHANGHAI YIYANG</td>
			<td>YY-Neutral balsam</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-immunized Goat Serum</td>
			<td>BOSTER</td>
			<td>AR0009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A601891-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>DAMAO</td>
			<td>200-001-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharose</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>57-50-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>200-675-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>IB11-AR-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.T.C. Compound</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>SAKURA.4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>DINGGUO</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>128686-03-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RT-PCR &#38; qRT-PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9012-36-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>865-49-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium Bromide</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>214-984-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl Alcohol</td>
			<td>Guangzhou Chemistry</td>
			<td>67-63-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LightCycler 480 SYBR Green I Master Mix</td>
			<td>Roche</td>
			<td>488735200H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ReverTra Ace qPCR RT Master Mix</td>
			<td>TOYOBO</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq DNA Polymerase</td>
			<td>TAKARA</td>
			<td>R10T1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goldview (nucleic acid stain)</td>
			<td>BioSharp</td>
			<td>BS357A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol</td>
			<td>Magen</td>
			<td>R4801-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector Construction &#38; Cell Transfection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>69-52-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>56-75-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotoxin-free Plasmid Extraction Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>A36227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>25389-94-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipo3000 Plasmid Transfection Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>L3000015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LR Reaction Kit</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>11791019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid Extraction Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans5&#945; Chemically Competent Cell</td>
			<td>TRANSGEN</td>
			<td>CD201-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trytone</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>OXID</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers and Sequence</td>
			<td>Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: AQP5 
			Sequence: 
			F: CATGAACCCAGCCCGATCTT 
			R: CTTCTGCTCCCATCCCATCC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: &#946;-actin 
			Sequence: 
			F: AGATCAAGATCATTGCTCCTCCT 
			R: AGATCAAGATCATTGCTCCTCCT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Epcam 
			Sequence: 
			F: CATTTGCTCCAAACTGGCGT 
			R: TGTCCTTGTCGGTTCTTCGG</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt5 
			Sequence: 
			F: AGCAATGGCGTTCTGGAGG 
			R: GCTGAAGGTCAGGTAGAGCC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt14 
			Sequence: 
			F: CGGACCAAGTTTGAGACGGA 
			R: GCCACCTCCTCGTGGTTC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Krt19 
			Sequence: 
			F: TCTTTGAAAAACACTGAACCCTG 
			R: TGGCTCCTCAGGGCAGTAAT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Ltf 
			Sequence: 
			F: CACATGCTGTCGTATCCCGA 
			R: CGATGCCCTGATGGACGA</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: Nestin 
			Sequence: 
			F: GGGGCTACAGGAGTGGAAAC 
			R: GACCTCTAGGGTTCCCGTCT</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer: P63 
			Sequence: 
			F: TCCTATCACGGGAAGGCAGA 
			R: GTACCATCGCCGTTCTTTGC</td>
			<td>Synbio Tech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLX302 lentivirus no-load vector</td>
			<td>Addgene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pENRTY-mCherry</td>
			<td>Xiaofeng Qin laboratory, Sun Yat-sen University</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional, serum-free culture system for lacrimal gland stem cells

La terapia basada en células madre de la glándula lagrimal (LG) es una estrategia prometedora para las enfermedades de la glándula lagrimal. Sin embargo, la falta de un método de cultivo confiable y libre de suero para obtener un número suficiente de células madre LG (LGSC) es un obstáculo para futuras investigaciones y aplicaciones. El método de cultivo tridimensional (3D), libre de suero para LGSC de ratones adultos está bien establecido y se muestra aquí. Las LGSC podrían ser continuamente pasajeras e inducidas a diferenciarse a células acinares o similares a las ductales.
Para el cultivo primario lgsc, los LGs de ratones de 6-8 semanas de edad fueron digeridos con dispasa, colagenasa I y tripsina-EDTA. Un total de 1 × 104 células individuales fueron sembradas en 80 μL de matriz de células madre de células madre de gel-glándula lagrimal (LGSCM) en cada pocillo de una placa de 24 pocillos, precubierta con 20 μL de matriz gel-LGSCM. La mezcla se solidificó después de la incubación durante 20 min a 37 °C, y se agregaron 600 μL de LGSCM.
Para el mantenimiento de LGSC, los LGSC cultivados durante 7 días se desagregaron en células individuales por dispasa y tripsina-EDTA. Las células individuales fueron implantadas y cultivadas de acuerdo con el método utilizado en el cultivo primario LGSC. Las LGSC podrían pasar más de 40 veces y expresar continuamente los marcadores de células madre/progenitoras Krt14, Krt5, P63 y nestina. Las LGSC cultivadas en LGSCM tienen capacidad de autorrenovación y pueden diferenciarse en células acinares o ductales in vitro e in vivo.

Establecer un sistema de cultivo 3D sin suero En este estudio, se desarrolló LGSCM que contiene EGF, Wnt3A, FGF10 e Y-27632 para LGSC de ratón, y los LGSC se aislaron y cultivaron con éxito mediante un método de cultivo 3D (Figura 1A). Un exitoso sistema de cultivo 3D, libre de suero de LGSCs de ratones C57BL / 6, ratones NOD / ShiLtJ, ratones BALB / c y ratones ROSA26mT / mG se ha establecido utilizando este método16. Para un rató...

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Three-Dimensional, Serum-Free Culture System for Lacrimal Gland Stem Cells

El método tridimensional de cultivo sin suero para células madre adultas de la glándula lagrimal (LG) está bien establecido para la inducción de la formación y diferenciación de organoides LG en células acinares o similares a las ductales.

Sistema de cultivo tridimensional sin suero para células madre de la glándula lagrimal

Lacrimal gland (LG) stem cell-based therapy is a promising strategy for lacrimal gland diseases. However, the lack of a reliable, serum-free culture ...

Este protocolo proporciona una estrategia ventajosa para enriquecer las células madre de la glándula lagrimal para la regeneración y reconstrucción de la glándula lagrimal. Las células madre de la glándula lagrimal muestran capacidad de expansión a largo plazo y el potencial de diferenciación. La principal ventaja de esta técnica es que el medio de cultivo para las células madre de la glándula lagrimal está libre de suero, lo que muestra el enorme valor para la reparación de la glándula lagrimal Comience por obtener un ratón macho BALB / c de seis a ocho semanas de edad sacrificado y corte la piel detrás de la oreja para exponer la glándula lagrimal y el tejido conectivo que lo rodea.Pelar el tejido conectivo mediante disección roma con la ayuda de pinzas y eliminar la glándula lagrimal. Sumerja las glándulas lagrimales en un plato de seis centímetros con cuatro mililitros de etanol al 75% durante 10 segundos y enjuague inmediatamente con una solución de PBS 10 milimolar dos veces. Cortar las glándulas lagrimales en pequeños fragmentos de aproximadamente un milímetro cúbico.Transfiéralos a un tubo centrífugo estéril de 15 mililitros y trate los tejidos con 500 microlitros de 25 unidades por mililitro de dispase y 500 microlitros de 0,1% colagenasa I durante una hora a 37 grados centígrados. Trate los fragmentos de la glándula lagrimal con un mililitro de EDTA de tripsina al 0,05% durante 10 minutos a 37 grados centígrados y disocie los fragmentos en células individuales pipeteando repetidamente. Filtre la suspensión a través de un filtro de 70 micrómetros, recoja el filtro en un tubo de centrífuga estéril de 15 mililitros y centrífuga a 150 veces G durante cinco minutos.Después de la centrifugación, retire el sobrenadante, agregue 10 mililitros de solución de PBS de 10 milimolares para lavar el gránulo celular y centrifugue la suspensión a 150 veces G durante cinco minutos. Repita el lavado del pellet celular. Luego, retire el sobrenadante y agregue un mililitro de una proporción de 1: 1 de Modified Eagles Medium de Dulbecco y F-12 de Ham para resuspendir los gránulos celulares.Agregue 20 microlitros de matriz de células madre de células madre de la glándula lagrimal en el centro del pozo de una placa de 24 pocillos. Use una punta de pipeta para expandirla a un círculo de aproximadamente seis a ocho milímetros de diámetro e incube la mezcla durante 20 minutos a 37 grados Celsius para cubrir previamente el pozo. Use un contador celular para determinar el número de células y agregue 40 microlitros de medio de células madre de la glándula lagrimal, o LGSCM, con un total de 10, 000 células en 40 microlitros del gel de matriz.Mézclalos suavemente con una pipeta. Use una pipeta para dejar caer cuidadosamente 80 microlitros de la mezcla sobre el área pre-recubierta en cada pocillo de la placa de 24 pocillos. Incubar la mezcla durante 20 minutos a 37 grados centígrados y añadir 600 microlitros de LGSCM.Cambie el medio de cultivo en cada pozo una vez cada dos días. Después de siete días de cultivo, busque esferas LGSC que tengan un diámetro de 100 a 300 micrómetros bajo el microscopio invertido. Utilice este protocolo para aislar y cultivar células madre primarias de la glándula lagrimal de ratones Rosa26 y NOD.Después de siete días de cultura, retire bien el medio de cultivo de la esfera de la cultura. Desagregar las esferas LGSC mediante incubación en 20 microlitros de 10 unidades por mililitro de dispase y 100 microlitros de PBS 10 milimolares durante 30 minutos a 37 grados centígrados. Transfiera la suspensión a un tubo de centrífuga de 15 mililitros y centrífuga a 150 veces G durante cuatro minutos.Retire el sobrenadante. Trate las esferas con un mililitro de EDTA de tripsina al 0,05% durante cinco minutos a 37 grados Celsius Agregue un mililitro de inhibidor de tripsina al 0,05% y pipetee repetidamente para neutralizar la tripsina y disociar las esferas en células individuales. Centrifugar a 150 veces G durante cinco minutos y retirar el sobrenadante para peletizar los LGSC.Agregue un mililitro de LGSCM para resuspendir el pellet de células madre de la glándula lagrimal y placa las células como se demostró anteriormente. Si realiza el procedimiento uno, extienda el tiempo de cultivo de las LGSC de siete a 14 días con el sistema de cultivo de células madre de la glándula lagrimal para la diferenciación aleatoria. Para el procedimiento dos, cambie la proporción del gel de matriz a LGSCM de 1: 1 a 1: 2 al comienzo del cultivo de células madre de la glándula lagrimal para la diferenciación de células ductales.Sembrar las células madre de la glándula lagrimal en la matriz para la inducción durante 14 días. Para el procedimiento tres, después del paso, reemplace el LGSCM con LGSCM 10% FBS para la diferenciación de las células acinares. Inducir la diferenciación durante 14 días.Después de una semana de cultivo, Kr14 y Ki67 se expresaron en todas las esferas formadas por células madre de la glándula lagrimal. Las esferas alcanzaron un diámetro de 100 micrómetros. La tinción de hematoxilina y eosina mostró celularidad en el séptimo día.Los factores de enriquecimiento de las células madre de la glándula lagrimal obtenidos después de siete días de cultivo primario y subcultivo indicaron que las células enriquecidas por este método tenían una fuerte capacidad proliferativa. En este sistema, las células madre de la glándula lagrimal podrían pasar más de 40 veces y aún así mantener las características de las células madre. Las células madre de la glándula lagrimal fueron inducidas a formar más brotes por el suero fetal bovino y una baja proporción de gel de matriz.La tinción de hematoxilina y eosina indicó que el suero fetal bovino podría inducir a las esferas a producir estructuras más cavitantes. Después de la inyección ortotópica de células madre de la glándula lagrimal rosa en ratones NOD, se formaron nuevos lóbulos lagrimales adyacentes a las glándulas lagrimales. La mayoría de los lóbulos estaban compuestos por células acinares maduras con alta expresión de AQP5 y había formación de conductos intralobulares con baja expresión de AQP5.La cantidad de secreción lagrimal en el lado de la inyección de células madre de la glándula lagrimal rosa fue mayor que en el lado de control, pero menor que en los ratones de tipo salvaje El gel de matriz y su mezcla relacionada siempre deben mantenerse en hielo antes de su uso y el tubo de microcentrífuga y las puntas en contacto con el gel de matriz deben enfriarse previamente. El sistema proporciona un modelo ideal para el estudio adicional de las células madre de la glándula lagrimal, la reparación de la glándula lagrimal y la detección de medicamentos para enfermedades de la glándula lagrimal.

Research

JoVE Journal

Biology

Chip-based Three-dimensional Cell Culture in Perfused Micro-bioreactors

Basada en el chip tridimensional de cultivo celular en perfundido Micro-biorreactores

We have developed a chip-based cell culture system for the three-dimensional cultivation of cells. The chip is typically manufactured from ...

Investigación

Biología

Microfabrication of Chip-sized Scaffolds for Three-dimensional Cell cultivation

Microfabricación de chip del tamaño de andamios para el cultivo de células en tres dimensiones

Using microfabrication technologies is a prerequisite to create scaffolds of reproducible geometry and constant quality for three-dimensional cell ...

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparación de combinados lisado plaquetario humano (pHPL) como un suplemento eficaz de los animales libres de suero humano culturas de células madre

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

Aislamiento y suero animal expansión libre de cordón umbilical humano derivado de células mesenquimales del estroma (MSC) y endoteliales formadoras de colonias Células Progenitoras (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Aislamiento de células de la glándula salival del ratón madre

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation of Mammary Epithelial Cells from Three-dimensional Mixed-cell Spheroid Co-culture

Aislamiento de células epiteliales mamarias de tridimensional mixto de células Esferoide Co-cultura

While enormous efforts have gone into identifying signaling pathways and molecules involved in normal and malignant cell behaviors1-2, much of this work ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Embriones de ratón con el desarrollo en todo un sistema de cultivo de embriones sin suero

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Mouse Fetal Whole Intestine Culture System for Ex Vivo Manipulation of Signaling Pathways and Three-dimensional Live Imaging of Villus Development

Sistema de Cultura ratón fetal Whole Intestino para<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Manipulación de vías de señalización y tridimensional de imágenes en vivo del desarrollo de vellosidades

Most morphogenetic processes in the fetal intestine have been inferred from thin sections of fixed tissues, providing snapshots of changes over ...

Non-enzymatic, Serum-free Tissue Culture of Pre-invasive Breast Lesions for Spontaneous Generation of Mammospheres

No enzimática, libre de suero Cultivo de Tejidos de lesiones de mama pre-invasivas para la generación espontánea de mammospheres

Breast ductal carcinoma in situ (DCIS), by definition, is proliferation of neoplastic epithelial cells within the confines of the breast duct, without ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

La manipulación de la murino Glándula Lagrimal

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...