Name: analysis of fecal microbiota dynamics in lupus-prone mice using a simple, cost-effective dna isolation method
Uploaded: 2022-05-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method at JoVE.com

Vi sætter pris på hjælpen fra Argonne National Laboratory og vores samarbejdende bioinformatikere. Dette arbejde understøttes af forskellige NIH og interne tilskud.

Cx3cr1 gfp/gfp-locus af B6.129P2(Cg)-Cx3cr1tm1Litt/J-mus blev tilbagekrydset til MRL/MpJ-Fas lpr/J (MRL/lpr) i 10 generationer for at generere MRL/lpr-CX 3CR1 gfp/gfp-mus. Genom screening ved hjælp af enkelt nukleotidpolymorfisme (SNP) paneler bekræftede, at den genetiske baggrund for nygenererede mus var mere end 97% identisk med MRL / lpr. Derefter blev mus opdrættet og vedligeholdt i et specifikt patogenfrit miljø efter de specifikke krav fra...

<ol>
	<li>Lee, Y. K., Mazmanian, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Has+the+microbiota+played+a+critical+role+in+the+evolution+of+the+adaptive+immune+system.">Has the microbiota played a critical role in the evolution of the adaptive immune system.</a> Science. 330 (6012), 1768-1773 (2010).</li><li>Lee, Y. K., Menezes, J. S., Umesaki, Y., Mazmanian, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proinflammatory+T-cell+responses+to+gut+microbiota+promote+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Proinflammatory T-cell responses to gut microbiota promote experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 4615-4622 (2011).</li><li>Yeoh, N., Burton, J. P., Suppiah, P., Reid, G., Stebbings, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+microbiome+in+rheumatic+diseases.">The role of the microbiome in rheumatic diseases.</a> Current Rheumatology Reports. 15 (3), 314 (2013).</li><li>Larsen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota+in+human+adults+with+type+2+diabetes+differs+from+non-diabetic+adults.">Gut microbiota in human adults with type 2 diabetes differs from non-diabetic adults.</a> PLoS One. 5 (2), 9085 (2010).</li><li>Alam, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+imbalance+in+inflammatory+bowel+disease+patients+at+different+taxonomic+levels.">Microbial imbalance in inflammatory bowel disease patients at different taxonomic levels.</a> Gut Pathogens. 12 (1), (2020).</li><li>Vieira, S. M., Pagovich, O. E., Kriegel, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet,+microbiota+and+autoimmune+diseases.">Diet, microbiota and autoimmune diseases.</a> Lupus. 23 (6), 518-526 (2014).</li><li>Mu, Q., Zhang, H., Luo, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLE:+another+autoimmune+disorder+influenced+by+microbes+and+diet.">SLE: another autoimmune disorder influenced by microbes and diet.</a> Frontiers of Immunology. 6, 608 (2015).</li><li>Tektonidou, M. G., Wang, Z., Dasgupta, A., Ward, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+serious+infections+in+adults+with+systemic+lupus+erythematosus:+a+national+population-based+study.">Burden of serious infections in adults with systemic lupus erythematosus: a national population-based study.</a> Arthritis Care &amp; Research. 67 (8), 1078-1085 (2015).</li><li>Mu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+lupus+nephritis+by+changes+of+gut+microbiota.">Control of lupus nephritis by changes of gut microbiota.</a> Microbiome. 5 (1), 73 (2017).</li><li>Panek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+challenges+in+studying+human+gut+microbiota+-+effects+of+collection,+storage,+DNA+extraction+and+next+generation+sequencing+technologies.">Methodology challenges in studying human gut microbiota - effects of collection, storage, DNA extraction and next generation sequencing technologies.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5143 (2018).</li><li>Fiedorov&#225;, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+dna+extraction+methods+on+stool+bacterial+and+fungal+microbiota+community+recovery.">The impact of dna extraction methods on stool bacterial and fungal microbiota community recovery.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 821 (2019).</li><li>Gerasimidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+DNA+extraction+methodology+on+gut+microbiota+research+applications.">The effect of DNA extraction methodology on gut microbiota research applications.</a> BMC Research Notes. 9, 365 (2016).</li><li>Bukin, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+16S+rRNA+region+choice+on+bacterial+community+metabarcoding+results.">The effect of 16S rRNA region choice on bacterial community metabarcoding results.</a> Scientific Data. 6 (1), 190007 (2019).</li><li>Galloway-Pe&#241;a, J., Hanson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tools+for+analysis+of+the+microbiome.">Tools for analysis of the microbiome.</a> Digestive Diseases and Sciences. 65 (3), 674-685 (2020).</li><li>Sharpton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+the+analysis+of+shotgun+metagenomic+data.">An introduction to the analysis of shotgun metagenomic data.</a> Frontiers in Plant Science. 5, 209 (2014).</li></ol>

Balanceret tarmmikrobiota kan beskytte menneskekroppen mod sygdomme. Når denne balance forstyrres af eksterne eller interne udløsere, kan konsekvenserne være ødelæggende. Denne metode præsenterer en måde at analysere dynamikken i tarmmikrobiota i murinemodeller. Metoden er ikke kun egnet til sammenligninger mellem grupper, men også til at spore tarmmikrobiotaen over tid for bedre at identificere tidsafhængige faktorer, der forstyrrer tarmmikrobiotaen.
Alle musene i forsøget skal hån...

Mennesker og bakterier har eksisteret sammen i lang tid. De har etableret et medafhængigt forhold med gensidige gavnlige virkninger, der påvirker værtsimmunresponser på kvantitative og kvalitative måder1. Nylige undersøgelser tyder på en sammenhæng mellem tarmmikrobiotasammensætningen og patogenesen af autoimmune sygdomme, der omfatter multipel sklerose 2, reumatoid arthritis3, type2-diabetes 4, inflammatorisk tarmsygdom5 og systemisk lupus erythematosus (SLE)6. Men om tarmmikrobiotaen er hovedårsagen eller en sekundær effekt af disse autoimmune sygdomme, er stadig uklart7. Potentielt kan tarmmikrobiota forværre sygdommen i effektorfasen af autoimmune lidelser eller spille en rolle i reguleringen af induktionen af disse sygdomme8.
Intestinal dysbiose er blevet rapporteret hos kvindelige lupus-tilbøjelige MRL / Mp-Faslpr (MRL / lpr) mus, og tarmmikrobiota ændringer med en signifikant udtømning af Lactobaciller blev observeret9. Når en blanding af fem Lactobacillus stammer blev oralt administreret, lupus-lignende symptomer blev stort set svækket i disse mus, tyder på en væsentlig rolle mikrobiota i regulering af SLE patogenese.
Følgende teknik til DNA-ekstraktion gør det muligt at følge mikrobiota-udsving og analysere dem kvalitativt og kvantitativt i løbet af murine SLE-lignende sygdom hos lupus-udsatte mus. Uanset om man skal undersøge den sunde tarmmikrobiota eller definere dysbiose, er det vigtigt at kritisk undersøge, hvordan data indsamles, og om de er nøjagtige og reproducerbare10. Hvert trin er kritisk i denne proces. Der skal anvendes en passende metode til at ekstrahere mikrobielt DNA, da ethvert muligt problem, der introducerer bias under DNA-ekstraktionsprocessen, kan resultere i unøjagtig mikrobiel repræsentation. Mens phenol-chloroformmetoden er beskrevet her, er der kommercielt tilgængelige kits til at ekstrahere DNA fra bakterier, der fungerer godt i særlige tilfælde11. Imidlertid er deres anvendelighed begrænset af omkostningerne og den krævede prøvemængde.
Protokollen, der præsenteres her, er omkostningseffektiv og kræver kun en lille mængde prøve. Det fungerer fint med enhver form for afføringsprøve og er nyttig til at studere dynamikken i tarmmikrobiotaen over tid samt sammenligninger mellem grupper. DNA isoleres med en metode til alkoholrensning, der bruger phenol, chloroform og isoamylalkohol. Alkoholbaseret ekstraktion hjælper med at rense og fjerne prøven af proteiner og lipider, hvor DNA udfældes i det sidste trin. Den foreslåede metode har betydeligt høj effektivitet og kvalitet og har vist sig at være nøjagtig til identifikation af bakteriepopulationer. En kritisk bemærkning under proceduren er, at DNA-kontaminering kan forekomme, og derfor kræves passende prøvehåndtering12.
DNA'et analyseres derefter af Next Generation Sequencing-platformene for 16S rRNA-genet, såsom Illumina MiSeq. Især analyseres V4 hypervariable region for at give en bedre kvantificering for højtrangerede taxa13. Den efterfølgende bioinformatikanalyse outsources efterfulgt af intern analyse ved hjælp af statistiske standardmetoder. Der er adskillige open source bioinformatiksoftwareprogrammer til rådighed til downstream-sekventering, og den type analyser, der udføres, afhænger i høj grad af det specifikke biologiske spørgsmål af interesse14. Denne protokol fokuserer specifikt på de eksperimentelle trin før sekventering og giver en mere alsidig, omkostningseffektiv, sammenlignelig og effektiv metode til at opnå DNA fra fækale prøver.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.1 mm glass beads</td>
			<td>BioSpec Products</td>
			<td>11079101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL screw cap tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>3488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% SDS</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP1311-1</td>
			<td>SDS 20%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96% Ethanol, Molecular Biology Grade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T032021000CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Acetate (5 M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9071</td>
			<td>NH4AC 5M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.129P2(Cg)-Cx3cr1tm1Litt/J</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>005582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bullet Blender storm 24</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>4116-BBY24M</td>
			<td>Homogenizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC-Treated Water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediamine Tetraacetic Acid</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP118-500</td>
			<td>EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil plate seal</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>NC0302491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes-Kimtech 34256</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>06-666C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRL/MpJ-Faslpr/J (MRL/lpr) mice</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>000485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotomer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND2000CLAPTOP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol: chloroform: isoamylalchohol (25:24:1)</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP1752I-400</td>
			<td>PCI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale with 4 decimals</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>MS205DU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skirted 96-well plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AB-0800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>15528154</td>
			<td>NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Hydrochloride</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>BP1757-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Scientific Industries</td>
			<td>SI-0236</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of fecal microbiota dynamics in lupus-prone mice using a simple, cost-effective dna isolation method

Tarmmikrobiota har en vigtig rolle i uddannelsen af immunsystemet. Dette forhold er ekstremt vigtigt for at forstå autoimmune sygdomme, der ikke kun er drevet af genetiske faktorer, men også miljømæssige faktorer, der kan udløse begyndelsen og / eller forværre sygdomsforløbet. En tidligere offentliggjort undersøgelse af dynamikken i tarmmikrobiotaen i lupus-tilbøjelige MRL / lpr-hunmus viste, hvordan ændringer i tarmmikrobiotaen kan ændre sygdomsprogression. Her beskrives en protokol til ekstraktion af repræsentative prøver fra tarmmikrobiotaen til undersøgelser af autoimmunitet. Mikrobiotaprøver indsamles fra anus og behandles, hvorfra DNA'et ekstraheres ved hjælp af en phenol-chloroformmetode og renses ved alkoholudfældning. Efter at PCR er udført, sekventeres rensede ampliconer ved hjælp af en Next Generation Sequencing platform på Argonne National Laboratory. Endelig analyseres 16S ribosomale RNA-gensekventeringsdata. Som et eksempel vises data opnået fra tarmmikrobiotasammenligninger af MRL / lpr-mus med eller uden CX3CR1. Resultaterne viste signifikante forskelle i slægter, der indeholder patogene bakterier, såsom dem i phylum Proteobacteria, såvel som slægten Bifidobacterium, som betragtes som en del af den sunde kommensale mikrobiota. Sammenfattende er denne enkle, omkostningseffektive DNA-isoleringsmetode pålidelig og kan hjælpe undersøgelsen af tarmmikrobiotaændringer forbundet med autoimmune sygdomme.

Resultaterne fra Argonne National Laboratory analyseres af en kvalificeret bioinformatiker efterfulgt af en intern analyse af dataene ved hjælp af standard statistiske metoder. Typiske mikrobiomanalyser involverer klyngedannelse af lignende sekvenser i operationelle taksonomiske enheder (OTU'er) eller ampliconsekvensvarianter (ASV'er) som en proxy for forskellige mikroorganismer i en prøve. Tællinger af OTU'er eller ASV'er på tværs af prøver kan derefter bruges til at teste for ændringer i diversitet inden for pr?...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method at JoVE.com

Analysis of Fecal Microbiota Dynamics in Lupus-Prone Mice Using a Simple, Cost-Effective DNA Isolation Method

Denne protokol giver en enkel, omkostningseffektiv DNA-isoleringsmetode til analyse af murine tarmmikrobiotaændringer under udviklingen af autoimmun sygdom.

Analyse af fækal mikrobiotadynamik i lupusudsatte mus ved hjælp af en enkel, omkostningseffektiv DNA-isoleringsmetode

Gut microbiota has an important role in educating the immune system. This relationship is extremely important for understanding autoimmune diseases that ...

Den foreslåede DNA-isoleringsmetode kan tjene til at studere tarmmikrobiotadynamikken i musemodeller med autoimmune sygdomme. En mere alsidig, omkostningseffektiv og effektiv metode foreslås til at opnå DNA fra fækale prøver, der kan sammenlignes med kommercielt tilgængelige kits. Til at begynde med skal du tage hver mus individuelt ud af buret, samle en fækal pellet direkte fra anus og opbevare den ved minus 80 grader Celsius, indtil den behandles.Behandl prøverne med sterile og rene tang, rør og handsker. Tilsæt en frossen pellet til et forvejet, to milliliter skruelågsrør, og registrer fækalvægten i gram, som skal være mellem 0,02 og 0,05 gram pr. Fækal pille. Tilsæt pellet et tyndt lag 0,1 millimeter glasperler, 500 mikroliter lysisbuffer og 200 mikroliter 20% natriumdodecylsulfat.Bead slog røret i fire minutter i en homogenisator, efterfulgt af tre til fem minutters hvirvel. Centrifuge rørene i kort tid for at fjerne boblerne og skummet. For at ekstrahere DNA fra mikrobiotaprøverne overføres 350 mikroliter prøvesupernatant til et nyt 1,5 ml snaphætterør uden snavs.Tilsæt 500 mikroliter phenol: chloroform: isoamylalkohol i et forhold på 25:24: 1 og hvirvel i et minut. Efter centrifugering overføres 180 mikroliter af den øverste vandige fase til et nyt 1,5 ml snaphætterør. Tilsæt 180 mikroliter chloroform, inverter og bland.Herfra overføres 180 mikroliter af den vandige fase til et nyt snaphætterør. I et biosikkerhedsskab tilsættes 180 mikroliter kold isopropanol og 36 mikroliter fem molære ammoniumacetat. Vend det et par gange for at blande, og læg røret på is i 20 minutter.Kassér supernatanten, efterfulgt af vask af pellets flere gange med 500 mikroliter kold 70% ethanol. Kassér supernatanten, og lufttør røret på hovedet på silkepapir i 20 minutter, indtil pelleten bliver klar. Suspender pelleten i 50 mikroliter molekylært vand, og opvarm væsken ved 37 grader Celsius i 10 minutter for fuldt ud at opløse store DNA-pellets.Efter opvarmning centrifugeres disse rør ved 3.400 gange G i et minut for at genvinde kondensdråberne fra låget. Mål koncentrationen, og opnå forholdet 260/280 ved hjælp af et spektrofotometer. Et forhold for DNA af god kvalitet er generelt mellem 1,8 og to.De tilberedte prøver centrifugeres ved 600 gange G i et minut ved stuetemperatur, inden de fryses ved minus 80 grader Celsius i 24 timer. Send derefter 20 mikroliter prøver med koncentrationer fra et til 50 nanogram pr. Mikroliter til Argonne National Laboratory til sekventering. Musestammen, der mangler receptoren CX3CR1, har en anden tarmmikrobiotasammensætning sammenlignet med vildtype MRL / lpr, MRL / lpr-CX3CR1 GFP / GFP-mus, viser signifikante forskelle i visse slægter, der er relevante for potentielt patogene bakterier såsom dem i phylum Proteobacteria.Vær forsigtig med at forurene prøven. Det skal være sterilt. Det er også vigtigt at pipettere med nøjagtighed, når supernatanten overføres i et nyt rør.Denne metode er velegnet til molekylær analyse såsom PCR, restriktionsenzymfordøjelse eller genomisk bibliotekskonstruktion. I lupus viste vi et stærkt forhold mellem tarmmikrobiota og lupus progression.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Comprehensive & Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

We present the video about assisting anti-retroviral therapy (ART) by an apt laboratory service - representing a South-African role model for economical ...

Cost-effective Method for Microbial Source Tracking Using Specific Human and Animal Viruses

Cost-effektiv metode til Microbial Source Tracking bruge specifikke menneskers og dyrs Vira

Microbial contamination of the environment represents a significant health risk. Classical bacterial fecal indicators have shown to have significant ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

A Simple Chelex protokol til DNA-ekstraktion fra<em&gt; Anopheles</em&gt; Spp.

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

Isolation and Genome Analysis of Single Virions using 'Single Virus Genomics'

Isolering og genom analyse af enkelte Virioner benytter &quot;enkelt virus Genomics &#39;

Whole genome amplification and sequencing of single microbial cells enables genomic characterization without the need of cultivation 1-3. Viruses, which ...

An In Vitro Batch-culture Model to Estimate the Effects of Interventional Regimens on Human Fecal Microbiota

En in vitro-batch-kultur model til at estimere virkningerne af interventionelle regimer på human fecal microbiota

The emerging role of the gut microbiome in several human diseases demands a breakthrough of new tools, techniques and technologies. Such improvements are ...

Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems

Analyse af interaktioner mellem Endobiotika og humant tarm mikrobiota ved hjælp af in vitro-bade fermenterings systemer

Human intestinal microorganisms have recently become an important target of research in promoting human health and preventing diseases. Consequently, ...

A DNA/Ki67-Based Flow Cytometry Assay for Cell Cycle Analysis of Antigen-Specific CD8 T Cells in Vaccinated Mice

En DNA/Ki67-baseret flowcytometrianalyse til cellecyklusanalyse af antigenspecifikke CD8 T-celler i vaccinerede mus

The cell cycle of antigen-specific T cells in vivo has been examined by using a few methods, all of which possess some limitations. Bromodeoxyuridine ...

Fecal (micro) RNA Isolation

Fecal micro RNA Isolation

Fækal (mikro) RNA-isolering

It is becoming clear that RNA exists in the gut lumen and feces in animals and humans. The protocol described below isolates total RNA including microRNAs ...

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

Terapeutisk evaluering af fækal mikrobiotatransplantation i en Interleukin 10-mangelfuld musemodel

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...