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•
07:45 min
June 6th, 2022
DOI :
10.3791/63665-v
Chapters
0:04
Introduction
0:53
Coverslip Preparation
3:18
Functionalization of Array with Biotinylated Antibody
4:09
SiMPull of Proteins of Interest from Whole-Cell Lysates
4:40
Image Acquisition
5:45
Results: Capture of EGFR-GFP from Protein Lysates Using SiMPull
7:19
Conclusion
Transcript
このSiMPullプロトコルは、抗体の標識および固定条件を改善し、緑色チャネルに見られる自己蛍光を低減し、堅牢な単一分子分析アルゴリズムを提供することにより、タンパク質リン酸化の定量を可能にします。SiMPullの主な利点は、個々のインタクトなタンパク質のリン酸化状態を調べることができることです。この方法では、ウェスタンブロッティングや質量分析などの従来の技術ではアクセスできない新しい情報を得ることができます。
私たちは、プロトコルの実証を支援する研究者のチームを持っています。
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Summary
本プロトコルは、改良された一分子プルダウン(SiMPull)アッセイを用いてタンパク質リン酸化を定量するためのサンプル調製およびデータ分析について記載する。
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