يقارن هذا البروتوكول حمل لوحة أميلويد بيتا في أقسام كاملة من الاهتمام والمناطق الفرعية ذات الأهمية في أقسام الدماغ من الفئران المعدلة وراثيا APP / PS1. ستمكن الطريقة والنتائج المقدمة في هذا البروتوكول بالذات القراء أو الباحثين من الاختيار إما بين المنطقة الكاملة ذات الاهتمام أو تحليل المنطقة الفرعية ذات الاهتمام لتحديد حمل بيتا في أقسام دماغ الفأر. للبدء ، قم بتنزيل برنامج تحليل الصور.
عند التثبيت ، ابدأ تشغيل البرنامج وانقر فوق الملف ، ثم افتح الصورة المراد تحليلها واخترها. من شريط أدوات البرامج، حدد الأداة المستقيمة وارسم خطا مستقيما على طول شريط المقياس. انقر على التحليل، ثم انقر على علامات تبويب المقياس المحددة.
مرة أخرى ، انقر فوق التحليل ، ثم قم بقياس علامات التبويب لملاحظة طول أو مسافة شريط المقياس بالبكسل. في النافذة المنبثقة، أدخل المسافة بالبكسل، والمسافة المعروفة لشريط المقياس، وأدخل وحدة الطول كميكرومتر. ثم حدد المربع العمومي لتطبيق إعداد المقياس الجديد على جميع الصور التالية، إذا تمت معالجة صور متعددة.
انقر فوق موافق لتطبيق الإعدادات. لتعيين القياس المطلوب إلى مساحة القسم، انتقل إلى التحليل، ثم قم بتعيين القياسات، وحدد المساحة وعرض مربعات الملصقات. تأكد من تحديد الصورة التي يتم تحليلها ضمن علامة التبويب إعادة التوجيه إلى.
لسهولة تصور الحصين أو القشرة ، انتقل إلى الصورة واضبط السطوع أو التباين. اسحب شريط الشريحة الأقصى تدريجيا إلى اليسار لزيادة وضوح الأنسجة حتى يتم تحديد مناطق الدماغ ذات الأهمية أو عائد الاستثمار. استخدم أداة التحديد المضلع أو الحر لتحديد منطقة الحصين.
بمجرد تحديد المنطقة ، انقر فوق خيار إعادة التعيين لإعدادات السطوع أو التباين للعودة إلى السطوع الأصلي. لقياس إجمالي مساحة الأنسجة في المنطقة المحددة ، انقر فوق تحرير ومسح الخارج. بمجرد أن تصبح المنطقة المحددة هي الصورة الوحيدة التي تظهر على الشاشة، انقر على التحليل، ثم قم بقياس علامات التبويب للحصول على إجمالي مساحة الأنسجة التي تم تحليلها في نافذة منبثقة.
ثم احفظ البيانات في ملف Excel. لقياس المساحة الموجبة الملطخة 6-E10، انتقل إلى علامات تبويب الصورة وضبط وعتبة اللون بالترتيب. يوفر المرشح المصنوع مسبقا تحت طريقة العتبة النتائج المرجوة التي تسلط الضوء على أقوى الإشارات باللون الأحمر.
بعد تحديد العتبة المناسبة ، تحقق من الخلفية المظلمة لتسليط الضوء على بقع بيتا أميلويد على خلفية سوداء. انقر فوق التحديد ، ثم الأصلي ، وحدد مرة أخرى ، مما يعطي الإشارات المظلمة لرواسب بيتا أميلويد على خلفية بيضاء. عندما تولد النافذة المنبثقة ، انقر فوق علامة التبويب تحليل وتحليل الجسيمات ، واضغط على موافق. انسخ مخرجات الملخص التي تم إنشاؤها بواسطة البرنامج بالنقر فوق زري التحرير والنسخ.
بعد ذلك، الصق في ملف Excel الذي تم تشغيله مسبقا باستخدام التسميات ذات الصلة. احسب النسبة المئوية للمنطقة الموجبة 6E-10 باستخدام الصيغة بعد تنزيل برنامج تحليل الصور ، قم بتنفيذ الخطوات حتى يمكن التعرف على عائد الاستثمار في الدماغ ، كما هو موضح سابقا. ثم، باستخدام أداة المستطيل، حدد عائد الاستثمار في القشرة أو الحصين.
في شريط الأدوات، انقر فوق تحرير، ثم حدد وحدد علامة تبويب تغير الارتفاع والعرض إلى قيمة محددة مسبقا. اضبط الصندوق بحيث يتم تغطيته بالكامل بواسطة الأنسجة. أعد ضبط السطوع أو التباين على السطوع الأصلي.
قم بتكرار عائد الاستثمار المحدد بالنقر بزر الماوس الأيمن فوق المربع والنقر فوق التكرار. سيتم فتح نافذة جديدة مع المنطقة المحددة. أعد تسمية الصورة المكررة لعرض المنطقة التي توجد فيها.
اضبط نوع الصورة المكررة باستخدام شريط الأدوات والنقر على الصورة، ثم اكتب مفاتيح 8 بت لتحويل صورة RGB المكررة إلى 8 بت، لتحليل اللويحات بشكل أفضل. عكس الصورة بالنقر فوق تحرير، ثم عكسها. لقياس المنطقة الموجبة 6E-10 ، انتقل إلى الصورة ، ثم اضبط وعتبة.
سيوفر مرشح محدد مسبقا تحت طريقة العتبة النتائج المرجوة ، مع تسليط الضوء على أقوى الإشارات باللون الأحمر. بعد تحديد الحد الأدنى المناسب، اضغط على تطبيق. لتحليل المنطقة الإيجابية 6E-10 ، استخدم شريط الأدوات وانقر فوق علامات التبويب تحليل وتحليل الجسيمات ، مما يضمن التحقق من نتائج الملخص.
انسخ إخراج الملخص باستخدام منطقة النسبة المئوية بالنقر فوق علامتي التبويب تحرير ونسخ. ثم الصق إخراج الملخص في ملف Excel الذي تم تشغيله مسبقا مع التسميات ذات الصلة. كرر الإجراء الخاص بالمناطق المختلفة في الأنسجة، مما يضمن أن يكون موضع كل مربع لتحديد عائد الاستثمار متسقا بين كل صورة.
في هذا التقييم التمثيلي ، تتم مقارنة طرق تحليل العائد على الاستثمار الكاملة والفرعية لتحديد المنطقة الإيجابية 6E-10 في القشرة وأنسجة المخ الحصين. يتضمن تحليل عائد الاستثمار الكامل تحديد عائد الاستثمار بأكمله. في المقابل، يتضمن تحليل عائد الاستثمار الفرعي اختيار منطقة محددة مسبقا داخل عائد الاستثمار.
يتم عرض الإجراء التدريجي لقياس المنطقة الإيجابية الكاملة والفرعية لعائد الاستثمار 6E-10 ، مع دوران عائد الاستثمار لتحديد كمية عائد الاستثمار الفرعي ، هنا. يتم توضيح العلاقة بين تحليلات العائد على الاستثمار الكاملة والفرعية هنا. لوحظت علاقة إيجابية كبيرة بين المنطقة الإيجابية 6E-10 التي أبلغ عنها القارئان اللذان أجريا تحليل عائد الاستثمار الفرعي للقشرة والحصين.
وعلاوة على ذلك، فإن متوسط المنطقة الإيجابية لعائد الاستثمار الفرعي 6E-10 يشترك في علاقة إيجابية قوية وكبيرة مع المنطقة التي تم الحصول عليها باستخدام عائد الاستثمار الكامل. بالنسبة للمنطقة الإيجابية المتوسطة 6E-10 من خلال التحليلات الكاملة في عائد الاستثمار الفرعي ، لم يلاحظ أي فرق كبير في القشرة والحصين. لوحظت علاقة كبيرة بين تجانس الدماغ بالكامل وقياسات أميلويد بيتا 1-42 القابلة للذوبان ، بواسطة إليزا ، وتحليل عائد الاستثمار الكامل من الدراسة اختيار العتبة هو المفتاح في الحصول على كمية بيانات دقيقة.
مطلوب تدخل المستخدم لضمان اختيار البقع الإيجابية بدقة باستخدام المرشح المحدد. بصرف النظر عن تحديد كمية بيتا أميلويد ، يمكن استخدام هذه الطريقة لبقع المناعة الفلورية الأخرى. على سبيل المثال ، Iba-1 ، من تحديد كمية المنطقة الموجبة الدبقية الصغيرة.
