Genome‐Wide Substitution Mutagenesis of JFH1 Using Error‐Prone PCR
2:46
Estimation of the Proportion of Mutations in ep‐PCR Products (Mutant Libraries)
6:08
Viral RNA Transfection of the Huh7.5 Cell Line
7:57
Quantification of Virus Titers
11:59
Drug‐Resistant Viral Variant Selection
13:33
Results: Integration of ep‐PCR and Virus Reverse Genetics to Generate HCV Mutants
15:17
Conclusion
Transcript
Описанный здесь протокол позволяет генерировать случайно мутагенизированные полноразмерные библиотеки РНК вирусных геномов с одноцепочечной положительной РНК длиной до 10 килобайт и выбирать интересующие фенотипы в желаемых экспериментальных услов
Sign in or start your free trial to access this content
В протоколе описан метод введения контролируемого генетического разнообразия в геном вируса гепатита С путем комбинирования полноразмерного синтеза мутантной РНК с использованием подверженной ошибкам ПЦР и обратной генетики. Метод обеспечивает модель селекции фенотипа и может быть использован для геномов вирусов с положительной РНК длиной 10 кб.