Name: isolation of intrapulmonary artery and smooth muscle cells to investigate vascular responses
Uploaded: 2022-06-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Intrapulmonary Artery and Smooth Muscle Cells to Investigate Vascular Responses at JoVE.com

लेखक वित्तीय सहायता प्रदान करने के लिए थाईलैंड की राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद, रसायन विज्ञान में नवाचार के लिए उत्कृष्टता केंद्र (PERCH-CIC), और अंतर्राष्ट्रीय अनुसंधान नेटवर्क (IRN61W0005) और अनुसंधान सुविधा सहायता के लिए फिजियोलॉजी फैकल्टी ऑफ मेडिकल साइंस, नरेसुआन विश्वविद्यालय के विभाग को स्वीकार करना चाहते हैं।

इस अध्ययन में किए गए प्रयोगों को वैज्ञानिक उद्देश्यों के लिए जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए नारेसुआन विश्वविद्यालय पशु देखभाल और उपयोग समिति (एनयूएसीयूसी), प्रोटोकॉल संख्या एनयू-एई 620921 की आचार समित?...

<ol>
	<li>Lyle, M. A., Davis, J. P., Brozovich, F. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pulmonary+vascular+smooth+muscle+contractility+in+pulmonary+arterial+hypertension:+Implications+for+therapy.">Regulation of pulmonary vascular smooth muscle contractility in pulmonary arterial hypertension: Implications for therapy.</a> Frontiers in Physiology. 8, 614 (2017).</li><li>Cyr, A. R., Huckaby, L. V., Shiva, S. S., Zuckerbraun, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+and+endothelial+dysfunction.">Nitric oxide and endothelial dysfunction.</a> Critical Care Clinics. 36 (2), 307-321 (2020).</li><li>Ruan, K. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advance+in+understanding+the+biosynthesis+of+prostacyclin+and+thromboxane+A2+in+the+endoplasmic+reticulum+membrane+via+the+cyclo-oxygenase+pathway.">Advance in understanding the biosynthesis of prostacyclin and thromboxane A2 in the endoplasmic reticulum membrane via the cyclo-oxygenase pathway.</a> Mini Reviews in Medicinal Chemistry. 4 (6), 639-647 (2004).</li><li>Del Pozo, R., Hernandez Gonzalez, I., Escribano-Subias, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prostacyclin+pathway+in+pulmonary+arterial+hypertension:+A+clinical+review.">The prostacyclin pathway in pulmonary arterial hypertension: A clinical review.</a> Expert Review of Respiratory Medicine. 11 (6), 491-503 (2017).</li><li>Morgado, M., Cairr&#227;o, E., Santos-Silva, A. J., Verde, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+nucleotide-dependent+relaxation+pathways+in+vascular+smooth+muscle.">Cyclic nucleotide-dependent relaxation pathways in vascular smooth muscle.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 69 (2), 247-266 (2012).</li><li>Schmidt, K., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium-derived+hyperpolarizing+factor+and+myoendothelial+coupling:+The+in+vivo+perspective.">Endothelium-derived hyperpolarizing factor and myoendothelial coupling: The in vivo perspective.</a> Frontiers in Physiology. 11, (2020).</li><li>Fan, G., Cui, Y., Gollasch, M., Kassmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elementary+calcium+signaling+in+arterial+smooth+muscle.">Elementary calcium signaling in arterial smooth muscle.</a> Channels. 13 (1), 505-519 (2019).</li><li>Wisutthathum, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extract+of+Aquilaria+crassna+leaves+and+mangiferin+are+vasodilators+while+showing+no+cytotoxicity.">Extract of Aquilaria crassna leaves and mangiferin are vasodilators while showing no cytotoxicity.</a> Journal of Traditional and Complementary Medicine. 9 (4), 237-242 (2019).</li><li>Kamkaew, N., Paracha, T. U., Ingkaninan, K., Waranuch, N., Chootip, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasodilatory+effects+and+mechanisms+of+action+of+Bacopa+monnieri+active+compounds+on+rat+mesenteric+arteries.">Vasodilatory effects and mechanisms of action of Bacopa monnieri active compounds on rat mesenteric arteries.</a> Molecules. 24 (12), 2243 (2019).</li><li>Chootip, K., Kennedy, C., Gurney, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+P2+receptors+mediating+contraction+of+the+rat+isolated+pulmonary+vasculature.">Characterization of P2 receptors mediating contraction of the rat isolated pulmonary vasculature.</a> British Journal of Pharmacology. 131, 167 (2000).</li><li>Paracha, T. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elucidation+of+vasodilation+response+and+structure+activity+relationships+of+N2,+N4-disubstituted+quinazoline+2,+4-diamines+in+a+rat+pulmonary+artery+model.">Elucidation of vasodilation response and structure activity relationships of N2, N4-disubstituted quinazoline 2, 4-diamines in a rat pulmonary artery model.</a> Molecules. 24 (2), 281 (2019).</li><li>Chootip, K., Gurney, A. M., Kennedy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+P2Y+receptors+couple+to+calcium-dependent,+chloride+channels+in+smooth+muscle+cells+of+the+rat+pulmonary+artery.">Multiple P2Y receptors couple to calcium-dependent, chloride channels in smooth muscle cells of the rat pulmonary artery.</a> Respiratory Research. 6 (1), 1-10 (2005).</li><li>Wisutthathum, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eulophia+macrobulbon+extract+relaxes+rat+isolated+pulmonary+artery+and+protects+against+monocrotaline-induced+pulmonary+arterial+hypertension.">Eulophia macrobulbon extract relaxes rat isolated pulmonary artery and protects against monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension.</a> Phytomedicine. 50, 157-165 (2018).</li><li>Kruangtip, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+analogues+inhibit+phosphodiesterase-5+and+dilate+rat+pulmonary+arteries.">Curcumin analogues inhibit phosphodiesterase-5 and dilate rat pulmonary arteries.</a> Journal of Pharmacy and Pharmacology. 67 (1), 87-95 (2015).</li></ol>

इस पांडुलिपि में, हम चूहे आईपीए और वीएसएमसी के अलगाव के लिए तकनीक का वर्णन करते हैं। विट्रो में आईपीए की संवहनी प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए कई प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल नियोजित किए गए हैं, जिसका उप?...

फुफ्फुसीय वाहिका एक निम्न दबाव संवहनी प्रणाली है जिसमें मुख्य कार्य फेफड़ों के गैस विनिमय क्षेत्र में ऑक्सीजन रहित रक्त पहुंचाना है। फेफड़ों में फुफ्फुसीय धमनियों को ब्रोन्कियल पेड़ के समानांतर शाखाओं में व्यवस्थित किया जाता है, अंततः केशिकाओं का एक व्यापक नेटवर्क बनता है जो कई एल्वियोली पर निरंतर होता है और अंत में, वेन्यूल्स और नसों में एक साथ आता है। फुफ्फुसीय धमनी की संवहनी टोन को कई कारकों द्वारा नियंत्रित किया जाता है, जिसमें एंडोथेलियम और संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं (वीएसएमसी) 1 के बीच बातचीत शामिल होती है।
इस अध्ययन में, हम इंट्रापल्मोनरी धमनी (आईपीए) के एंडोथेलियम-निर्भर और -स्वतंत्र वासोरेक्सेशन पर ध्यान केंद्रित करते हैं। एंडोथेलियम-निर्भर वैसोरलैक्सेशन के संबंध में, एंडोथेलियल कोशिकाओं की सतह पर होने वाले विभिन्न तंत्र इंट्रासेल्युलर सीए2 + एकाग्रता (जैसे, एसिटाइलकोलाइन [एसीएच] मस्केरिनिक रिसेप्टर [एम 3] के साथ बांधता है) को बढ़ा सकता है, जिससे नाइट्रिक ऑक्साइड (एनओ), प्रोस्टासाइक्लिन (पीजीएल2) और एंडोथेलियम-व्युत्पन्न हाइपरपोलराइज़िंग फैक्टर (ईडीएचएफ) का गठन होता है (चित्रा 1)। ). एनओ एंडोथेलियल नाइट्रिक ऑक्साइड सिंथेस (ईएनओएस) 2 द्वारा एल-आर्जिनिन से संश्लेषित मुख्य एंडोथेलियम-व्युत्पन्न आराम कारक है, जो तब एंडोथेलियल कोशिकाओं से वीएसएमसी (चित्रा 1) में विघटित हो जाता है और घुलनशील गुआनिल साइक्लेज (एसजीसी) एंजाइम को उत्तेजित करता है; यह एंजाइम ग्वानोसिन ट्राइफॉस्फेट (जीटीपी) को चक्रीय गुआनोसिन मोनोफॉस्फेट (सीजीएमपी) में बदल देता है, जो प्रोटीन काइनेज जी (पीकेजी) को सक्रिय करता है और साइटोसोलिक सीए2 + स्तर को कम करता है, इस प्रकार वासोरेक्सेशन (चित्रा 1) का कारण बनता है। पीजीएल2 को साइक्लो-ऑक्सीजनेज (सीओएक्स) मार्ग 3,4 के माध्यम से एंडोथेलियल कोशिकाओं द्वारा संश्लेषित किया जाता है। यह वीएसएमसी पर प्रोस्टासाइक्लिन रिसेप्टर (आईपी) के साथ बांधता है और एडेनिल साइक्लेज (एसी) एंजाइम को उत्तेजित करता है, जो तब एडेनोसिन ट्राइफॉस्फेट (एटीपी) को चक्रीय एडेनोसिन मोनोफॉस्फेट (सीएमपी) में परिवर्तित करता है (चित्रा 1)3,4)। सीएमपी प्रोटीन काइनेज ए (पीकेए) को सक्रिय करता है, साइटोसोलिक सीए2 + के स्तर को कम करता है और वासोरेक्सेशन5 (चित्रा 1) का कारण बनता है। ईडीएचएफ मार्ग विभिन्न एंडोथेलियल मध्यस्थों और विद्युत घटनाओं के माध्यम से एंडोथेलियम-निर्भर वैसोरेक्सेशन में भी भाग लेता है। ईडीएचएफ मार्ग की सक्रियता वीएसएमसी के हाइपरपोलराइजेशन की ओर ले जाती है, इस प्रकार वोल्टेज संचालित सीए2 + चैनल (वीओसी) को बंद कर देती है, इंट्रासेल्युलर सीए2 + स्तर को कम करती है, और वैसोरलैक्सेशन6 को प्रेरित करती है। एंडोथेलियम-स्वतंत्र वैसोरलैक्सेशन कई तंत्रों के माध्यम से सीधे वीएसएमसी पर होता है, जैसे कि इंट्रासेल्युलर सीए2 + स्तर में कमी, मायोसिन लाइट चेन किनेज (एमएलसीके) का निषेध, मायोसिन लाइट चेन फॉस्फेट (एमएलसीपी) की सक्रियता, और वीएसएमसी की सिकुड़ा हुआ मशीनरी के लिए सीए2 + संवेदनशीलता में कमी। इस अध्ययन में, हम विभिन्न के + चैनलों के खुलने, वीओसी की नाकाबंदी और सारकोप्लाज्मिक रेटिकुलम7 से सीए2 + रिलीज के निषेध के कारण वासोरेक्सेशन पर ध्यान केंद्रित करते हैं, जिससे इंट्रासेल्युलर सीए 2 + स्तरों में कमी आती है, इस प्रकारक्रमशः वीएसएमसी मायोसिन प्रकाश श्रृंखला फॉस्फोराइलेशन और मायोसिन-एक्टिन बाइंडिंग या क्रॉस-ब्रिज गठन कम हो जाता है। अंततः वासोरेक्सेशन के परिणामस्वरूप।
पृथक आईपीए में वाहिकासंकीर्णन और वासोरेलेक्सेशन माप का मूल्यांकन करने की तकनीक कृन्तकों के लिए अच्छी तरह से स्थापित है, लेकिन प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के आधार पर डेटा भिन्न होता है। वर्तमान अध्ययन में विट्रो में चूहे आईपीए तैयारी की संवहनी प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए उपयोग की जाने वाली विधि का वर्णन किया गया है, जो विवो में संवहनी प्रतिक्रिया को संशोधित करने वाले बाहरी कारकों की अनुपस्थिति में बनाया गया था, जैसे तंत्रिका संकेत, हार्मोन, साइटोकिन्स, रक्तचाप, आदि।
हमने आईपीए की संवहनी प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक उदाहरण के रूप में पौधे के अर्क का उपयोग करके कई प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल को नियोजित किया। पौधे के अर्क द्वारा प्रेरित एंडोथेलियम-निर्भर और -स्वतंत्र वैसोरलैक्सेशन के तंत्र की पहचान करने के लिए विभिन्न ब्लॉकर्स (चित्रा 1) का उपयोग किया गया था। फिर भी, विभिन्न फुफ्फुसीय विकृति के उपचार के लिए उपयोग की जाने वाली किसी भी दवा, अर्क या फाइटोकेमिकल्स के लिए आईपीए की संवहनी प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए एक ही प्रोटोकॉल को अनुकूलित किया जा सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,4-dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632 
			CAS NO. 348-12-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-aminopyridine (4-AP)</td>
			<td>Aldrich Chemical</td>
			<td>A78403 
			CAS NO. 504-24-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6625 
			CAS NO. 60-31-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apamin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9459 
			CAS NO. 24345-16-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2153 
			CAS NO. 9048-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium choride</td>
			<td>Ajax Finechem</td>
			<td>AJA960 
			CAS NO. 1707055184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charybdotoxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7802 
			CAS NO. 95751-30-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type 1A</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C9891 
			CAS NO. 9001-12-1</td>
			<td>From Clostridium histolyticum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+)-Glucose monohydrate</td>
			<td>Millipore Corporation</td>
			<td>K50876942 924 
			CAS NO. 14431-43-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4540 
			CAS NO. 67-68-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol-bis (2-aminoethylether)-N,N,N&#8217;,N&#8217;-tetraacetic acid (EGTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E3889 
			CAS NO. 67-42-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884 
			CAS NO. 60-00-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 11 cm.</td>
			<td>Rustless Dumoxel</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 14 cm.</td>
			<td>Rustless Dumoxel</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glibenclamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G6039 
			CAS NO. 16673-34-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism program</td>
			<td>Software version 5.0 (San Diego, CA, USA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375 
			CAS NO. 7365-45-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iberiotoxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5904 
			CAS NO. 1002546960</td>
			<td>recombinant from Mesobuthus tamulus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I7378 
			CAS NO. 53-86-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labchart Program</td>
			<td>Software version 7.0 (A.D. Instrument, Castle Hill, Australia).</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Ajax Finechem</td>
			<td>296 
			CAS NO. 1506254995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male Wistar rats</td>
			<td>Nomura Siam International Co. Ltd., Bangkok, Thailand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N5751 
			CAS NO. 51298-62-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicardipine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7510 
			CAS NO. 54527-84-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ bath 15 mL.</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Specific order by the researchers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4762 
			CAS NO. 9001-73-4</td>
			<td>FromPapaya Latex</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenal red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5530 
			CAS NO. 34487-61-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6126 
			CAS NO. 61-76-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Kemaus</td>
			<td>KA383 
			CAS NO. 7447-40-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogenphosphate</td>
			<td>Aldrich Chemical</td>
			<td>EC231-913-4 
			CAS NO. 7778-77-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S+A2:E36odium chloride</td>
			<td>Kemaus</td>
			<td>KA465 
			CAS NO. 7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors 11 cm.</td>
			<td>Spall Stainless</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors 14 cm.</td>
			<td>Spall Stainless</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Ajax Finechem</td>
			<td>475 
			CAS NO. 912466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dihydrogenphosphate</td>
			<td>Aldrich Chemical</td>
			<td>33,198-8 
			CAS NO. 7558-80-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Ajax Finechem</td>
			<td>482 
			CAS NO. 1506196602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium thiopental</td>
			<td>Anesthal</td>
			<td>JPN3010002 
			CAS NO. 1C 314/47</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625 
			CAS NO. 107-35-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterbath WBU 45</td>
			<td>Memmert</td>
			<td>2766 
			CAS NO. -</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of intrapulmonary artery and smooth muscle cells to investigate vascular responses

चूहे के फेफड़ों से अलग इंट्रापल्मोनरी धमनी (आईपीए) और संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं (वीएसएमसी) का उपयोग वाहिकासंकीर्णन और वासोरेक्सेशन के अंतर्निहित तंत्र का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है। आईपीए और वीएसएमसी को अलग करने के बाद, तंत्रिका संकेतों, हार्मोन, साइटोकिन्स आदि जैसे बाहरी कारकों की अनुपस्थिति में शारीरिक और रोग संबंधी स्थितियों में संवहनी प्रतिक्रियाओं की विशेषताओं का आकलन किया जा सकता है। इस प्रकार, आईपीए और वीएसएमसी विभिन्न प्रयोगात्मक जांचों के साथ-साथ संवहनी शरीर विज्ञान / पैथोफिज़ियोलॉजी का अध्ययन करने के लिए उत्कृष्ट मॉडल के रूप में काम करते हैं, जैसे कि फार्माकोलॉजिकल एजेंटों द्वारा मॉड्यूलेशन, पैच-क्लैंप इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल विश्लेषण, कैल्शियम इमेजिंग, आदि। यहां, हमने अंग स्नान सेटअप में संवहनी प्रतिक्रियाओं की जांच के लिए आईपीए को अलग करने के लिए एक तकनीक का उपयोग किया है। आईपीए खंडों को इंट्राल्यूमिनल तारों के माध्यम से अंग स्नान कक्ष पर रखा गया था और विभिन्न औषधीय एजेंटों द्वारा उत्तेजित किया गया था। आईपीए संवहनी टोन (यानी, वाहिकासंकीर्णन और वासोरेक्सेशन) में परिवर्तन, एक आइसोमेट्रिक बल ट्रांसड्यूसर और शारीरिक डेटा विश्लेषण सॉफ्टवेयर प्रोग्राम का उपयोग करके दर्ज किए गए थे। हमने कई प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल लागू किए, जिन्हें फाइटोकेमिकल या सिंथेटिक दवाओं की औषधीय गतिविधियों का अध्ययन करने के लिए वासोरेक्सेशन / वाहिकासंकीर्णन के तंत्र की जांच करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। प्रोटोकॉल का उपयोग फुफ्फुसीय धमनी उच्च रक्तचाप सहित विभिन्न बीमारियों को संशोधित करने में दवाओं की भूमिकाओं का मूल्यांकन करने के लिए भी किया जा सकता है। आईपीए मॉडल हमें एकाग्रता-प्रतिक्रिया वक्र की जांच करने की अनुमति देता है, जो दवाओं के फार्माकोडायनामिक मापदंडों का आकलन करने में महत्वपूर्ण है।

वर्तमान अध्ययन में प्रोटोकॉल को पृथक आईपीए तैयारी की संवहनी प्रतिक्रियाओं में देखी गई शारीरिक घटनाओं को मापने के लिए इष्टतम प्रयोगात्मक स्थितियों को निर्धारित करने के लिए विकसित किया गया है। पायलट ?...

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Isolation of Intrapulmonary Artery and Smooth Muscle Cells to Investigate Vascular Responses

धमनी फुफ्फुसीय परिसंचरण की संवहनी प्रतिक्रियाओं को इंट्रापल्मोनरी धमनी (आईपीए) और संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं (वीएसएमसी) का उपयोग करके खोजा जा सकता है। वर्तमान अध्ययन में आईपीए के अलगाव और शारीरिक उत्तेजनाओं के जवाब में वैसोरलैक्सेशन की जांच के लिए उपयोग किए जाने वाले प्रोटोकॉल का विस्तार से वर्णन किया गया है।

संवहनी प्रतिक्रियाओं की जांच के लिए इंट्रापल्मोनरी धमनी और चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं का अलगाव

The intrapulmonary artery (IPA) and vascular smooth muscle cells (VSMCs) isolated from rat lungs can be used to study the underlying mechanisms of ...

यह अध्ययन चूहे के इंट्रापल्मोनरी धमनी और संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं को अलग करने का वर्णन करता है। कई प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल नियोजित किए गए थे, जैसे कि इंट्रापल्मोनरी धमनी की संवहनी प्रतिक्रिया की जांच के लिए अंग स्नान तकनीक का उपयोग करना। इंट्रापल्मोनरी धमनियां और संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाएं संवहनी शरीर विज्ञान और पैथोफिज़ियोलॉजी का अध्ययन करने के लिए उत्कृष्ट मॉडल हैं।इस तकनीक के अनुकूलन किसी भी दवाओं, अर्क या फाइटोकेमिकल्स की संवहनी प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन कर सकते हैं। अंग स्नान में पृथक इंट्रापल्मोनरी धमनी अंगूठी को बढ़ाने से फुफ्फुसीय उच्च रक्तचाप सहित विभिन्न बीमारियों को संशोधित करने में दवा की भूमिका का मूल्यांकन करने के लिए पृथक इंट्रापल्मोनरी धमनियों का उपयोग करने में सक्षम बनाता है। प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल तकनीकी रूप से संभव हैं, लेकिन महत्वपूर्ण कदम जटिल और सफलता के लिए आवश्यक हैं, इसलिए दृश्य प्रदर्शन होने से इसे समझना और पालन करना आसान हो जाता है।प्रक्रिया का प्रदर्शन कार्डियोवैस्कुलर रिसर्च यूनिट लेबोरेटरी, फिजियोलॉजी विभाग, चिकित्सा विज्ञान संकाय, नरेसुआन विश्वविद्यालय से शरीर विज्ञान में मास्टर डिग्री छात्र किटिवूट टू-ऑन होगा। 11 सेंटीमीटर कैंची के साथ फेफड़े के एक लोब को काटकर शुरू करें और इसे नौ सेंटीमीटर पेट्री डिश पर रखें, जिसमें औसत दर्जे की तरफ, या फेफड़े की जड़, ऊपर की ओर हो। ऊपर से नीचे तक नस, ब्रोंचिया और धमनी के संरेखण का निरीक्षण और पहचान करें।ब्रोन्कस को कैंची से अनुदैर्ध्य रूप से काटें। फिर ब्रोंकस की नोक को पकड़ने के लिए 11 सेंटीमीटर बल का उपयोग करें। धीरे से विच्छेदन करें और ब्रोंकस और नसों को फेफड़ों से बाहर निकालें।इंट्रापल्मोनरी धमनी की नोक को पकड़ने के लिए बल का उपयोग करें और कैंची के साथ फेफड़ों के ऊतकों से सावधानीपूर्वक विच्छेदन करें। पृथक इंट्रापल्मोनरी धमनी को ठंडे क्रेब्स समाधान में रखें जब तक कि अंग स्नान असेंबली स्थापित न हो जाए। इंट्रापल्मोनरी धमनी को अलग करने के बाद, इंट्रापल्मोनरी धमनी की मुख्य शाखा को 11 सेंटीमीटर कैंची के साथ अनुदैर्ध्य रूप से खोलें और दो मिलीमीटर स्ट्रिप्स में काट लें।इंट्रापल्मोनरी धमनी स्ट्रिप्स को डीएम में डुबोएं, फिर एक मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर पपैन, 0.04% बीएसए और 0.4 मिलीमोलर डीटीटी युक्त डीएम में चार डिग्री सेल्सियस पर एक घंटे के लिए स्ट्रिप्स को इनक्यूबेट करें। फिर 15 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। डीएम में कोलेजनेज टाइप आईए के एक मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर जोड़ें, और फिर से पांच मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।ऊतकों को ताजा डीएम में स्थानांतरित करें और ग्लास पाश्चर पिपेट का उपयोग करके सौम्य ट्राइट्यूरेशन द्वारा फैलें। माइक्रोस्कोप के नीचे स्नान समाधान में पृथक संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाएं दिखाई देने तक ट्राइट्यूरिंग करते रहें। जैसा कि पहले दिखाया गया है, इंट्रापल्मोनरी धमनी को अलग करें और इंट्रापल्मोनरी धमनी की मुख्य शाखा को लंबाई में लगभग दो मिलीमीटर के छल्ले में काट दें।इंट्रापल्मोनरी धमनी के छल्ले को अंग स्नान कक्षों में दो 40-माइक्रोमीटर-व्यास स्टेनलेस स्टील के तारों पर थ्रेड करके चिपकाएं। डेटा अधिग्रहण डिवाइस से जुड़े आइसोमेट्रिक बल ट्रांसड्यूसर और डेटा रिकॉर्डिंग और विश्लेषण के लिए उपयुक्त शारीरिक सॉफ्टवेयर के साथ स्थापित कंप्यूटर सिस्टम में इंट्रापल्मोनरी धमनी के छल्ले के साथ लगाए गए स्टेनलेस स्टील के तारों को संलग्न करें। फिर धीरे से इंट्रापल्मोनरी धमनी रिंग के तनाव को एक ग्राम तक बढ़ाएं।एक ग्राम के आराम के तनाव पर जहाज के खंडों को लगभग 45 मिनट के लिए बराबर करने दें। संतुलन अवधि के दौरान, सुनिश्चित करें कि क्रेब्स समाधान नियमित रूप से हर 15 मिनट में बदला जाता है। संतुलन के बाद, उच्च बाह्य पोटेशियम समाधान के लिए उनके वाहिकासंकीर्णन को मापकर वाहिकाओं की व्यवहार्यता का परीक्षण करें।पीई के साथ पूर्व अनुबंधित छल्ले में एसिटाइलकोलाइन के लिए विश्राम प्रतिक्रिया की गणना करके एंडोथेलियम की उपस्थिति या अनुपस्थिति का आकलन करें। यांत्रिक रूप से एंडोथेलियम को एक छोटे तार के साथ धीरे से रगड़कर एंडोथेलियम को हटा दें ताकि निर्जलीकरण को प्रेरित किया जा सके। फिर परीक्षण प्रयोगों की शुरुआत से पहले 30 मिनट के लिए धमनी के छल्ले को बराबर करें। पीई के साथ इंट्रापल्मोनरी धमनी के छल्ले को प्रीकॉन्ट्रैक्ट करके पौधे के अर्क के आराम प्रभाव की जांच करें। फिर वासोरेलेक्सेशन को प्रेरित करने और एकाग्रता-निर्भर प्रतिक्रिया वक्र प्राप्त करने के लिए एंडोथेलियम बरकरार छल्ले और एंडोथेलियम-डिन्यूडेड रिंग्स में संचयी रूप से पौधे के अर्क के 0.1 से 1000 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर को सावधानीपूर्वक जोड़ें।सुनिश्चित करें कि विलायक के रूप में उपयोग किए जाने वाले प्रभावी डीएमएसओ का भी नकारात्मक नियंत्रण के रूप में सेवा करने के लिए मूल्यांकन किया जाता है। पाठ पांडुलिपि में उल्लिखित पौधे के अर्क की कार्रवाई के वासोरलैक्सेंट तंत्र का मूल्यांकन करें। फिर पीई के संकुचन स्थिर होने के बाद, पौधे के अर्क की संचयी सांद्रता जोड़ें।अवरोधकों के बिना इंट्रापल्मोनरी धमनी के छल्ले की प्रतिक्रिया की तुलना में अवरोधकों की उपस्थिति में इंट्रापल्मोनरी धमनी के छल्ले के प्रतिशत छूट के रूप में पौधे के अर्क के प्रभाव को प्रस्तुत करें और एकाग्रता प्रतिक्रिया वक्र का निर्माण करें। एंडोथेलियम बरकरार इंट्रापल्मोनरी धमनी में, पौधे के अर्क ने वासोरेक्सेशन की एकाग्रता-निर्भर प्रतिक्रिया प्राप्त की। एंडोथेलियम के उन्मूलन ने पौधे के अर्क द्वारा प्रेरित वासोरेक्सेशन को गहराई से कम कर दिया, जैसा कि ईसी 50 में 2.2 गुना की वृद्धि से परिलक्षित होता है, ईएनओएस और ईडीएचएफ के निषेध ने स्पष्ट रूप से पौधे के अर्क के लिए वासोरेलेक्सेंट प्रतिक्रिया को कम कर दिया।इसने एकाग्रता प्रतिक्रिया वक्र को दाईं ओर स्थानांतरित कर दिया और ई अधिकतम मूल्यों को बदले बिना ईसी 50 में वृद्धि की। इसके विपरीत, इंडोमेथेसिन ने पौधे के अर्क के लिए वासोरलैक्सेंट प्रतिक्रिया पर कोई प्रभाव नहीं दिखाया। एंडोथेलियम-डिन्यूडेड इंट्रापल्मोनरी धमनी के छल्ले में, कैल्शियम-सक्रिय पोटेशियम चैनल ब्लॉकर्स ने पौधे के अर्क के लिए वैसोरलैक्सेंट प्रतिक्रिया को कम कर दिया।जबकि वोल्टेज-गेटेड या एटीपी-संवेदनशील पोटेशियम चैनलों के ब्लॉकर्स ने कोई विचलन नहीं दिखाया। पौधे के अर्क के साथ प्रीइन्क्यूबेशन ने कैल्शियम-क्लोराइड-प्रेरित संकुचन को रोक दिया। एंडोथेलियम-डिन्यूडेड इंट्रापल्मोनरी धमनी के छल्ले कैल्शियम-मुक्त क्रेब्स समाधान और पीई के साथ प्रीक्यूबेट किए गए थे, जो क्षणिक संकुचन प्रदान करते थे।वाहन की तुलना में, पौधे के अर्क ने पीई द्वारा प्रेरित संकुचन को काफी कम कर दिया। प्रक्रिया के दौरान, किसी को स्पष्ट रूप से नस, ब्रोंचिया और धमनी की पहचान करनी चाहिए। धमनी को काटने या नुकसान पहुंचाने से इसकी लंबाई कम हो जाएगी और संवहनी प्रतिक्रियाओं को प्रभावित किया जाएगा। इस तकनीक को यौगिकों की जांच करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है जो फुफ्फुसीय संवहनी रोगों जैसे फुफ्फुसीय धमनी उच्च रक्तचाप के उपचार के लिए प्रोटोटाइप के रूप में काम कर सकते हैं।

Research

JoVE Journal

Medicine

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Mesenteric धमनी संकुचन और विश्राम अध्ययन स्वचालित वायर Myography का उपयोग

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

चूहों में आम मन्या धमनी में बाहरी गले नस भ्रष्टाचार के दखल: एक परिष्कृत microsurgical तकनीक प्रशिक्षण

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

Assessment of Right Ventricular Structure and Function in Mouse Model of Pulmonary Artery Constriction by Transthoracic Echocardiography

Transthoracic इकोकार्डियोग्राफी द्वारा पल्मोनरी धमनी कसना के माउस मॉडल में सही निलय संरचना और समारोह का आकलन

Emerging clinical data support the notion that RV dysfunction is critical to the pathogenesis of cardiovascular disease and heart failure1-3. Moreover, ...

Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

कम मूत्र पथ औषध मूल्यांकन करने के लिए एक विधि के रूप मूत्राशय चिकनी पेशी पट्टी सिकुड़ना

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

चूहे में मुताबिक़ रक्त के थक्के के साथ ischemic स्ट्रोक के लिए embolic मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Vascular Balloon Injury and Intraluminal Administration in Rat Carotid Artery

चूहा मन्या धमनी में संवहनी गुब्बारा चोट और Intraluminal प्रशासन

The carotid artery balloon injury model in rats has been well established for over two decades. It remains an important method to study the molecular and ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

चूहे में वाम पूर्वकाल अवरोही कोरोनरी धमनी के स्थायी Ligation: पोस्ट-रोधगलन पुनर्गठन और दिल की विफलता का एक मॉडल

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

चूहे में दबाव अधिभार मॉडल का उपयोग कर कोरोनरी धमनी फ्लो और कोरोनरी फ्लो रिजर्व के अल्ट्रासाउंड आधारित मूल्यांकन

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

Ferric क्लोराइड प्रेरित कैरोटिड धमनी और अन्त्रपेशी पोत पर घनास्त्रता माउस मॉडल

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं और महाधमनी कड़ा हो जाना और सूजन की इमेजिंग की हड्डी बन जाना

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...