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2.2K Views
•
10:40 min
April 25th, 2022
DOI :
10.3791/63704-v
Chapters
0:04
Introduction
0:58
Preparation of CRISPR Gene Editing and Guide RNA Design to Generate miRNA Cluster Knockout Cell Lines
2:06
Generation of Stable Lentiviral Cell Lines Carrying the DOX-Inducible Cas9 Expression Cassette
3:20
Performing CRISPR Reactions by Cas9 Induction and Synthetic Guide RNA Transfection of Cells Using a High-Throughput Format
7:22
PCR Genotyping of CRISPR Cell Lines Using Crude Cell Lysates
8:37
Results: High-Throughput CRISPR Experimental Design to Generate Multiple miR-888 Cluster Deletion Combinations
9:51
Conclusion
Transcript
このプロトコルは、ハイスループットCRISPR遺伝子編集ワークフローを使用して、組織化およびクラスター化されたユニットのマイクロRNA遺伝子を分子的に解剖します。そして、これらのノンコーディングRNAネットワークが癌の進行経路をどのように調整するかを決定すること。このCRISPR遺伝子編集手順により、研究者は、時間のかかるDNAベクターサブクローニングを回避しながら、独自のマイクロRNAクラスター欠失の組み合わせを持つ細胞株のパネル全体を迅速に生成できます。
この方法は、マイク
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Summary
このプロトコルは、マイクロRNAクラスターネットワーク解析のための、規則的に間隔をあけた短い回文反復(CRISPR)遺伝子編集ワークフローをクラスター化したハイスループットのクラスター化を記述しており、1回の実験で35 kbのユニークなmiRNAクラスターメンバー欠失の組み合わせを持つ遺伝子組み換え細胞株のパネルを迅速に生成できます。
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