Name: generation of mesenchymal stem cells from human umbilical cord tissue and their differentiation into the skeletal muscle lineage
Uploaded: 2022-08-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Mesenchymal Stem Cells from Human Umbilical Cord Tissue and their Differentiation into the Skeletal Muscle Lineage at JoVE.com

We bedanken de heer Ojas Tikoo voor hun hulp bij het filmen en videoproductie. We erkennen ook de hulp die is ontvangen van het GARBH-Ini (Interdisciplinary Group on Advanced Research and Birth Outcome-DBT India) personeel, verpleegkundigen en senior onderzoeksfunctionarissen in het Gurugram Civil Hospital en Dr. Pallavi Kshetrapal voor hulp bij logistiek. Dit werk werd ondersteund door subsidies toegekend aan Suchitra Gopinath van het Department of Biotechnology, India (BT/09/IYBA/2015; BT/PR29599/PFN/20/1393/2018).

Het gebruik van navelstrengweefsel in deze studie werd goedgekeurd door de Institutional Committee for Stem Cell Research (IC-SCR), de Institutional Ethics Committee, Translational Health Science and Technology Institute (IEC-THSTI), de Institutional Ethics Committee of Civil Hospital, Gurugram, Haryana en de Institutional Biosafety Committee, THSTI. Menselijke navelstrengweefselmonsters werden geoogst van termijnbevallingen op het moment van geboorte. Geïnformeerde schriftelijke toestemming werd verkregen van proefpers...

<ol>
	<li>Kuroda, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+multipotent+cells+in+adult+human+mesenchymal+cell+populations.">Unique multipotent cells in adult human mesenchymal cell populations.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (19), 8639-8643 (2010).</li><li>Troyer, D. L., Weiss, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wharton's+jelly-derived+cells+are+a+primitive+stromal+cell+population.">Wharton's jelly-derived cells are a primitive stromal cell population.</a> Stem Cells. 26 (3), 591-599 (2008).</li><li>Karahuseyinoglu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+stem+cells+in+human+umbilical+cord+stroma:+In+situ+and+in+vitro+surveys.">Biology of stem cells in human umbilical cord stroma: In situ and in vitro surveys.</a> Stem Cells. 25 (2), 319-331 (2007).</li><li>Kita, K., Gauglitz, G. G., Phan, T. T., Herndon, D. N., Jeschke, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mesenchymal+stem+cells+from+the+sub-amniotic+human+umbilical+cord+lining+membrane.">Isolation and characterization of mesenchymal stem cells from the sub-amniotic human umbilical cord lining membrane.</a> Stem Cells and Development. 19 (4), 491-502 (2010).</li><li>Sarugaser, R., Lickorish, D., Baksh, D., Hosseini, M. M., Davies, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+umbilical+cord+perivascular+(HUCPV)+cells:+A+source+of+mesenchymal+progenitors.">Human umbilical cord perivascular (HUCPV) cells: A source of mesenchymal progenitors.</a> Stem Cells. 23 (2), 220-229 (2005).</li><li>Mishra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Umbilical+cord+tissue+is+a+robust+source+for+mesenchymal+stem+cells+with+enhanced+myogenic+differentiation+potential+compared+to+cord+blood.">Umbilical cord tissue is a robust source for mesenchymal stem cells with enhanced myogenic differentiation potential compared to cord blood.</a> Scientific Reports. 10 (1), 18978 (2020).</li><li>Lu, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+human+umbilical+cord+mesenchymal+stem+cells+with+hematopoiesis-supportive+function+and+other+potentials.">Isolation and characterization of human umbilical cord mesenchymal stem cells with hematopoiesis-supportive function and other potentials.</a> Haematologica. 91 (8), 1017-1026 (2006).</li><li>Seshareddy, K., Troyer, D., Weiss, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+to+isolate+mesenchymal-like+cells+from+Wharton's+Jelly+of+umbilical+cord.">Method to isolate mesenchymal-like cells from Wharton's Jelly of umbilical cord.</a> Methods in Cell Biology. 86, 101-119 (2008).</li><li>Sotiropoulou, P. A., Perez, S. A., Salagianni, M., Baxevanis, C. N., Papamichail, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+optimal+culture+conditions+for+clinical+scale+production+of+human+mesenchymal+stem+cells.">Characterization of the optimal culture conditions for clinical scale production of human mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 24 (2), 462-471 (2006).</li><li>Yoon, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+explant-derived+and+enzymatic+digestion-derived+MSCs+and+the+growth+factors+from+Wharton's+jelly.">Comparison of explant-derived and enzymatic digestion-derived MSCs and the growth factors from Wharton's jelly.</a> BioMed Research International. 2013, 428726 (2013).</li><li>Ishige, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+arterial,+venous,+and+Wharton's+jelly+explants+of+human+umbilical+cord.">Comparison of mesenchymal stem cells derived from arterial, venous, and Wharton's jelly explants of human umbilical cord.</a> International Journal of Hematology. 90 (2), 261-269 (2009).</li><li>Chal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+pluripotent+stem+cells+to+muscle+fiber+to+model+Duchenne+muscular+dystrophy.">Differentiation of pluripotent stem cells to muscle fiber to model Duchenne muscular dystrophy.</a> Nature Biotechnology. 33 (9), 962-969 (2015).</li></ol>

Kritieke stappen Een cruciale stap in dit protocol is het verzamelen van weefsel onder aseptische omstandigheden, vanaf het moment van levering tot het onderhoud van steriele culturen, voor de gehele duur van de vermeerdering. Tijdens het verzamelen van het snoer is het essentieel dat het snoer geen niet-gesteriliseerd oppervlak raakt en extern wordt afgeveegd met 70% ethanol voordat het wordt verzameld in buizen met PBS aangevuld met antibiotica. Het is belangrijk om de tijd tussen het verzamelen van...

De menselijke navelstreng is gecrediteerd om een robuust reservoir van mesenchymale stamcellen te bezitten, die momenteel worden onderzocht voor regeneratieve therapieën vanwege hun robuuste proliferatie- en differentiatiesnelheden, immunomodulerende eigenschappen en het vermogen om cellen te genereren uit alle drie de kiemlagen1. Het navelstrengweefsel bestaat uit meerdere compartimenten zoals het navelstrengbloed, het navelstrengsubendotheel en de Wharton's jelly (WJ), die op zichzelf drie onduidelijke regio's omvat- de perivasculaire zone, de intervasculaire zone en de subamnion of de koordvoering (CL)2. Hoewel uMSC's kunnen worden geïsoleerd van al deze verschillende regio's en in grote lijnen belangrijke MSC-markers kunnen uitdrukken, is er geen duidelijkheid over de vraag of deze compartimenten dezelfde populatie uMSC's bevatten of verschillen vertonen in hun differentiatiepotenties3. Daarom vereisen protocollen voor de isolatie van uMSCs een grotere precisie in hun modus en regio van isolatie, de robuuste karakterisering van differentiatiepotentialen en ten slotte een vergelijkende analyse van verschillende compartimenten van het snoer. 
In deze context hebben weinig studies verschillen aangetoond in uMSC proliferatieve en differentiatieve potentialen tussen verschillende delen van het koord. Hiervan onthulden vergelijkende analyses tussen uMSCs geïsoleerd van de CL- en WJ-regio's een groter proliferatief potentieel in CL-afgeleide uMSCs 3,4. In een afzonderlijke studie presteerden WJ-afgeleide uMSCs beter in proliferatietests in vergelijking met perivasculaire cellen (HUCPV)5. Bij het onderzoeken van verschillen tussen van navelstrengbloed afgeleide uMSCs en van navelstrengweefsel afgeleide uMSCs zonder vasculaire besmetting, werd differentiële expressie van belangrijke MSC-markers gemeld tussen de twee compartimenten, evenals verhoogde proliferatiesnelheden in van navelstrengweefsel afgeleide uMSCs6.
Van de verschillende studies die de differentiatiemogelijkheden van uMSCs onderzoeken, voornamelijk in weefsels van de mesoderm-afstamming, zoals osteogene, adipogene en chondrogene afstammingslijnen, hebben er maar heel weinig gedetailleerde protocollen opgeleverd voor myogene differentiatie en daaropvolgende karakterisering, evenals vergelijkende analyses tussen verschillende koordcompartimenten. In deze context hebben we een robuust spierdifferentiatieprotocol ontwikkeld en waargenomen dat van navelstrengweefsel afgeleide uMSCs superieure myogene differentiatiemogelijkheden vertonen in vergelijking met navelstrengbloed6. Hier wordt een stapsgewijs protocol beschreven voor de isolatie van uMSCs van het hele navelstrengweefsel zonder cellen geassocieerd met de vasculatuur, hun karakterisering en hun differentiatie in de myogene afstamming.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic solution 100x Liquid, endotoxin tested (10,000 U Penicillin and 10 mg Streptomycin/mL in 0.9% normal saline)</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>A001A-50mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GAPDH antibody</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G8795</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MyHC antibody (My32)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-50401AF647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MyoD antibody (5.8A)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB100-56511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Myogenin antibody (Clone F5D)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-34616AF594</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Pax7 antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>DSHB-C1-576</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse anti-human CD90 clone 5E10</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>559869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type 1</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C8919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D (+) Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCanto II or FACSAria III</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, qualified Brazil</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10270106</td>
			<td>not to be heat-inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD106 clone 51-10C9</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>551146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD14 clone M5E2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD31 clone WM59</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD34 clone 581</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD45 clone HI30</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555482</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD49D clone 9F10</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD90 clone 5E10</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human HLA-A,B,C clone G46-2.6</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557348</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human IgG clone G18-145</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G1264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>RM1239</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Alpha Modification without L-glutamine, ribo- and deoxyribonucleosides</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30568.FS</td>
			<td>Basal medium for uMSCs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse anti-human CD105 clone 266</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560839</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse anti-human CD44 clone 515</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse anti-human CD49E clone llA1</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555617</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse anti-human IgG clone G18-145</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse anti-human CD73 CLONE AD2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS), pH=7.4</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M1866</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA solution (1x 0.25% Trypsin and 0.02% EDTA in Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>TCL049-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of mesenchymal stem cells from human umbilical cord tissue and their differentiation into the skeletal muscle lineage

Het verkennen van het therapeutisch potentieel van mesenchymale stamcellen is afhankelijk van het gemak van isolatie, de potentie voor differentiatie en de betrouwbaarheid en robuustheid van de bron. We beschrijven hier een stapsgewijs protocol voor de isolatie van mesenchymale stamcellen uit menselijk navelstrengweefsel (uMSCs), hun immunofenotypering en de voortplanting van dergelijke culturen over verschillende passages. In deze procedure is de levensvatbaarheid van de uMSCs hoog omdat er geen enzymatische spijsvertering is. Verder zorgt het verwijderen van bloedvaten, inclusief de navelstrengslagaders en de ader, ervoor dat er geen besmetting is van cellen van endotheeloorsprong. Met behulp van flowcytometrie zijn uMSCs bij isolatie CD45−CD34−, wat wijst op een afwezigheid van cellen uit de hematopoietische afstamming. Belangrijk is dat ze belangrijke oppervlaktemarkeringen uitdrukken, CD105, CD90 en CD73. Bij het vaststellen van culturen beschrijft dit artikel een efficiënte methode om differentiatie in deze uMSCs in de skeletspierlijn te induceren. Een gedetailleerde analyse van myogene progressie in gedifferentieerde uMSCs onthult dat uMSCs Pax7 uitdrukken, een marker voor myogene voorlopers in de beginfase van differentiatie, gevolgd door de expressie van MyoD en Myf5, en ten slotte een terminale differentiatiemarker, myosine heavy chain (MyHC).

Het succes van isolatie van uMSCs uit navelstrengweefsel is >95%, in tegenstelling tot de slechte succespercentages van vol navelstrengbloed. Na succesvolle isolatie van uMSCs onthult FACS-analyse dat alle cellen CD34−CD45−CD105+CD90+ zijn. In vergelijkende analyse vertonen uMSCs geïsoleerd uit navelstrengbloed echter heterogene populaties, waarbij een deel van de cellen CD34 + CD45 + CD105 + (~ 15%) vertoont. Bovendien zijn dubbel-positiev...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Mesenchymal Stem Cells from Human Umbilical Cord Tissue and their Differentiation into the Skeletal Muscle Lineage at JoVE.com

Generation of Mesenchymal Stem Cells from Human Umbilical Cord Tissue and their Differentiation into the Skeletal Muscle Lineage

We beschrijven een protocol voor de isolatie van mesenchymale stamcellen uit menselijk navelstrengweefsel en hun differentiatie in de skeletspierlijn.

Generatie van mesenchymale stamcellen uit menselijk navelstrengweefsel en hun differentiatie in de skeletspierlijn

Exploring the therapeutic potential of mesenchymal stem cells is contingent upon the ease of isolation, potency toward differentiation, and the ...

We beschrijven ons protocol om mesenchymale stamcellen te isoleren van menselijk navelstrengweefsel en een robuuste methode om ze te differentiëren in skeletspierlijn. Deze techniek stelt ons in staat om mesenchymale stamcellen te isoleren die een hoge levensvatbaarheid en warmte bezitten, met weinig tot geen besmetting van cellen van endotheeloorsprong en om myogene differentiatie efficiënt te induceren bij deze ziekten. Koordtorsie en mucoid consistentie maken het moeilijk om het snoer te hanteren.We laten zien hoe je het koord verwerkt, om de gelei van de Wharton niet af te schrapen en endotheelcellen uit te sluiten van de populatie. Nadat u het navelstrengweefsel op het tijdstip van levering hebt verzameld, brengt u het navelstrengweefselstuk over van de verzamelbuis naar een met weefselkweek behandelde schaal van 10 vierkante centimeter en wast u het weefsel grondig met verse PBS. Om voor de torsie van het koord en het slijmvliesoppervlak te zorgen, pint u het weefsel vast met een tang in één hand.Snijd met behulp van een scalpel het koordweefsel verticaal langs de longitudinale toegang om twee halve cilindrische stukken te verkrijgen. Observeer op dit punt de navelstrengslagaders en aderen. Verwijder met behulp van een scalpel de bloedvaten door ze in één richting van het oppervlak af te schrapen en spoel het navelstrengweefsel in PBS om al het resterende bloed dat verband houdt met het weefsel te verwijderen.Gehakt elke helft van het navelstrengweefsel in fragmenten van 0,5 kubieke centimeter. Leg de fragmenten met het luminale oppervlak naar beneden gericht op de schaal en incubeer de schaal kort gedurende 10 minuten. Voeg aan het einde van de incubatie voorzichtig 20 milliliter medium met MEM Alpha-modificatie toe langs de zijkanten van de schaal die het navelstrengweefsel bevat.Zorg ervoor dat de explantaten niet loskomen van hun oriëntatie en voeg overtollig medium toe om rekening te houden met een fractie die de weefselexplantaten tijdens de incubatie zullen opnemen. Plaats het gerecht vervolgens drie dagen in de couveuse. Voeg na het einde van de incubatie vers medium toe aan de cultuur en zorg ervoor dat de culturen worden beschermd tegen schokken en beweging van de explantaten tijdens het hanteren van de gerechten.Verwijder na een week, met behulp van een steriele tang, de weefselfragmenten afzonderlijk en gooi ze weg met behulp van geschikte biohazard-zakken voor verwijdering. Behoud het bestaande medium en voeg 10 milliliter vers groeimedium toe. Vervang het groeimedium om de vier dagen totdat individuele kolonies een samenvloeiing van 70% bereiken Na het kleuren van de cellen zoals beschreven in het manuscript, analyseert u de gelabelde cellen door flowcytometrie en bepaalt u het percentage CD105 CD90-positieve en CD105 CD73-positieve cellen.Analyseer CD105 positieve en CD34 CD45 negatieve cellen afzonderlijk. Bedek de weefselkweekplaat met 0,01% collageen en 20 microgram per milliliter laminine in PBS en plaats het minimaal vier uur op de rocker bij kamertemperatuur. Verwijder na de incubatie het collageen en was de plaat met PBS en plaats vervolgens uMSCs met een dichtheid van 10.000 cellen per vierkante centimeter in het groeimedium.Zodra de cellen 70% samenvloeiing bereiken, aspirateer het groeimedium en spoel de kweekplaat tweemaal met PBS. Om de kinetiek van myogene progressie te bepalen, voegt u om de dag M1-medium toe aan de culturen en analyseert u uMSCs voor de expressie van pax7, MyoD, myogenine en myosine zware keten op respectievelijk twee dagen, vier tot vijf dagen, zes tot zeven dagen en tien tot veertien dagen. uMSCs geven de expressie van CD105 en CD90 weer en drukken geen hematopoëtische markers CD34 en CD45 uit.De uMSC's waren ook positief voor de expressie van uMSCs-marker CD73, wat aangeeft dat de uMSCs meerdere sleutelmarkers uitdrukten. uMSCs vertoonden expressie van pax7 binnen de eerste twee dagen na de toevoeging van M1, gevolgd door MyoD-expressie binnen de eerste vier dagen van M1-toevoeging. Cellen drukken myogenine-eiwit uit na zes dagen differentiatie, gevolgd door de expressie van myosine zware keten tussen 10 dagen en 14 dagen na de inductie van differentiatie.970 genen werden geupreguleerd als reactie op de inductie van myogene differentiatie in vergelijking met de ongedifferentieerde uMSCs. Meer myogene genen werden upreguleerd in van navelstrengweefsel afgeleide uMSCs in vergelijking met van navelstrengbloed afgeleide uMSCs. Zowel navelstrengweefsel als navelstrengbloed vertoonden upregulatie van genen gerelateerd aan cytoskeletale eiwitten, geassocieerd met actinebinding en sarcomeerassemblage, transporters geassocieerd met contractiele functie, spiermassaonderhoud, calciumsignalering en enzymatische functie.Verzamel het weefsel onder aseptische conditie en behoud steriele cultuur. Het snoer moet uitwendig worden geveegd met 70% ethanol en zo snel mogelijk worden verwerkt. Veel regeneratieve therapieën vereisen grote aantallen cellen uit vroege passages.Het kan ook worden gebruikt als een model om de hele droge omgeving na te bootsen en het postnatale metabolisme te weerspiegelen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Human Mesenchymal Stem Cells and their Cultivation on the Porous Bone Matrix

Isolatie van menselijke mesenchymale stamcellen en hun kweek op de poreuze botmatrix

Mesenchymal stem cells (MSCs) have a differentiation potential towards osteoblastic lineage when they are stimulated with soluble factors or specific ...

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

Isolatie en Kwantitatieve Immunocytochemische karakterisering van primaire Myogene cellen en fibroblasten van Human Skeletal Muscle

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse van de zebravis Larven skeletspieren Integriteit met Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

Isolatie en uitbreiding van mesenchymale stamcellen / stromale cellen afkomstig van menselijke placenta Tissue

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

Isolatie en karakterisering van mesenchymale stromale cellen uit menselijke navelstreng en foetale Placenta

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiatie van menselijke mesenchymale stamcellen in functionele Cardiomyocyte-achtige cellen

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Human Umbilical Cord Blood

Isolatie van endotheliale voorlopercellen van menselijke navelstrengbloed

The existence of endothelial progenitor cells (EPCs) in peripheral blood and its involvement in vasculogenesis was first reported by Ashara and ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Identificatie van de skeletspieren satelliet cellen met immunofluorescentie met Pax7 en Laminin antilichamen

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Afleiding en differentiatie van Canine ovariële mesenchymale stamcellen

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...