Name: generation of mesenchymal stem cells from human umbilical cord tissue and their differentiation into the skeletal muscle lineage
Uploaded: 2022-08-31T13:00:00
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촬영 및 비디오 제작에 도움을 주신 Ojas Tikoo 씨에게 감사드립니다. 우리는 또한 GARBH-Ini (Advanced Research and Birth Outcome-DBT India)의 직원, 간호사 및 Gurugram Civil Hospital의 선임 연구원 및 Pallavi Kshetrapal 박사로부터 물류에 대한 도움을받은 도움을 인정합니다. 이 작업은 인도 생명 공학부의 Suchitra Gopinath에게 수여 된 보조금으로 지원되었습니다 (BT / 09 / IYBA / 2015; BT / PR29599 / PFN / 20 / 1393 / 2018).

이 연구에서 탯줄 조직의 사용은 줄기 세포 연구 기관위원회 (IC-SCR), 기관 윤리위원회, 번역 건강 과학 기술 연구소 (IEC-THSTI), 민간 병원의 기관 윤리위원회, Gurugram, Haryana 및 기관 생물 안전위원회, THSTI에 의해 승인되었습니다. 인간 탯줄 조직 샘플은 출생시의 용어 전달로부터 수확되었다. 피험자로부터 정보에 입각한 서면 동의를 얻었다. 모든 방법은 관련 지침 및 규정에 따라 수행되었습니다.</...

<ol>
	<li>Kuroda, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+multipotent+cells+in+adult+human+mesenchymal+cell+populations.">Unique multipotent cells in adult human mesenchymal cell populations.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (19), 8639-8643 (2010).</li><li>Troyer, D. L., Weiss, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wharton's+jelly-derived+cells+are+a+primitive+stromal+cell+population.">Wharton's jelly-derived cells are a primitive stromal cell population.</a> Stem Cells. 26 (3), 591-599 (2008).</li><li>Karahuseyinoglu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+stem+cells+in+human+umbilical+cord+stroma:+In+situ+and+in+vitro+surveys.">Biology of stem cells in human umbilical cord stroma: In situ and in vitro surveys.</a> Stem Cells. 25 (2), 319-331 (2007).</li><li>Kita, K., Gauglitz, G. G., Phan, T. T., Herndon, D. N., Jeschke, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mesenchymal+stem+cells+from+the+sub-amniotic+human+umbilical+cord+lining+membrane.">Isolation and characterization of mesenchymal stem cells from the sub-amniotic human umbilical cord lining membrane.</a> Stem Cells and Development. 19 (4), 491-502 (2010).</li><li>Sarugaser, R., Lickorish, D., Baksh, D., Hosseini, M. M., Davies, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+umbilical+cord+perivascular+(HUCPV)+cells:+A+source+of+mesenchymal+progenitors.">Human umbilical cord perivascular (HUCPV) cells: A source of mesenchymal progenitors.</a> Stem Cells. 23 (2), 220-229 (2005).</li><li>Mishra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Umbilical+cord+tissue+is+a+robust+source+for+mesenchymal+stem+cells+with+enhanced+myogenic+differentiation+potential+compared+to+cord+blood.">Umbilical cord tissue is a robust source for mesenchymal stem cells with enhanced myogenic differentiation potential compared to cord blood.</a> Scientific Reports. 10 (1), 18978 (2020).</li><li>Lu, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+human+umbilical+cord+mesenchymal+stem+cells+with+hematopoiesis-supportive+function+and+other+potentials.">Isolation and characterization of human umbilical cord mesenchymal stem cells with hematopoiesis-supportive function and other potentials.</a> Haematologica. 91 (8), 1017-1026 (2006).</li><li>Seshareddy, K., Troyer, D., Weiss, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+to+isolate+mesenchymal-like+cells+from+Wharton's+Jelly+of+umbilical+cord.">Method to isolate mesenchymal-like cells from Wharton's Jelly of umbilical cord.</a> Methods in Cell Biology. 86, 101-119 (2008).</li><li>Sotiropoulou, P. A., Perez, S. A., Salagianni, M., Baxevanis, C. N., Papamichail, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+optimal+culture+conditions+for+clinical+scale+production+of+human+mesenchymal+stem+cells.">Characterization of the optimal culture conditions for clinical scale production of human mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 24 (2), 462-471 (2006).</li><li>Yoon, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+explant-derived+and+enzymatic+digestion-derived+MSCs+and+the+growth+factors+from+Wharton's+jelly.">Comparison of explant-derived and enzymatic digestion-derived MSCs and the growth factors from Wharton's jelly.</a> BioMed Research International. 2013, 428726 (2013).</li><li>Ishige, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+arterial,+venous,+and+Wharton's+jelly+explants+of+human+umbilical+cord.">Comparison of mesenchymal stem cells derived from arterial, venous, and Wharton's jelly explants of human umbilical cord.</a> International Journal of Hematology. 90 (2), 261-269 (2009).</li><li>Chal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+pluripotent+stem+cells+to+muscle+fiber+to+model+Duchenne+muscular+dystrophy.">Differentiation of pluripotent stem cells to muscle fiber to model Duchenne muscular dystrophy.</a> Nature Biotechnology. 33 (9), 962-969 (2015).</li></ol>

중요한 단계 이 프로토콜의 중요한 단계는 전달 시점부터 멸균 배양물의 유지에 이르기까지 전파의 전체 기간 동안 무균 조건 하에서 조직을 수집하는 것입니다. 코드 수집 중에 탯줄은 살균되지 않은 표면에 닿지 않고 항생제가 보충 된 PBS가 함유 된 튜브에 수집하기 전에 70 % 에탄올로 외부에서 면도하는 것이 중요합니다. uMSC 단리를 위한 탯줄 수집과 조직의 처리 사이의 시간을 ...

인간 탯줄은 강력한 증식 및 분화 속도, 면역 조절 특성 및 세 배아층 모두에서 세포를 생성하는 능력으로 인해 재생 요법을 위해 현재 탐구되고있는 중간엽 줄기 세포의 견고한 저장소를 보유하고있는 것으로 인정 받고 있습니다1. 탯줄 조직은 탯줄 혈, 탯줄 정맥 내피 및 와튼 젤리 (WJ)와 같은 여러 구획으로 구성되며, 그 자체로 혈관 주위 영역, 혈관 간 영역 및 양막 하부 또는 코드 라이닝 (CL)2의 세 가지 불분명 한 영역을 포함합니다. uMSCs가 이러한 모든 상이한 영역으로부터 단리되고 주요 MSC 마커를 광범위하게 발현할 수 있지만, 이들 구획이 uMSCs의 동일한 집단을 포함하는지 또는 그들의 분화 효능에서 차이를 나타내는지에 대한 명확성은 없다3. 따라서 uMSC의 분리를 위한 프로토콜은 격리 모드 및 영역에서 더 높은 정밀도, 차별화 전위의 강력한 특성화, 그리고 마지막으로 코드의 다른 구획으로부터의 비교 분석이 필요합니다. 
이러한 맥락에서, 탯줄의 다른 부분 사이의 uMSC 증식 및 분화 잠재력의 차이를 입증 한 연구는 거의 없습니다. 이들 중, CL 및 WJ 영역으로부터 분리된 uMSCs 사이의 비교 분석은 CL 유래 uMSCs 3,4에서 더 큰 증식 가능성을 나타냈다. 별도의 연구에서, WJ 유래 uMSCs는 혈관주위 세포 (HUCPV)5에 비해 증식 분석에서 더 잘 수행되었다. 혈관 오염이 없는 제대혈 유래 uMSCs와 탯줄 조직 유래 uMSCs 사이의 차이를 조사함에 있어서, 주요 MSC 마커의 차등적 발현은 두 구획 사이에서 보고되었고, 탯줄 조직 유래 uMSCs6에서 증식 속도 증가가 보고되었다.
uMSCs의 분화 가능성을 주로 골형성, 지방형성 및 연골 혈통과 같은 중배엽 혈통의 조직으로 조사하는 여러 연구 중 극소수만이 근인성 분화 및 후속 특성화에 대한 상세한 프로토콜뿐만 아니라 다양한 탯줄 구획 간의 비교 분석을 제공했습니다. 이러한 맥락에서, 우리는 강력한 근육 분화 프로토콜을 개발하여 탯줄 조직 유래 uMSC가 제대혈6에 비해 우수한 근형성 분화 능력을 나타낸다는 것을 관찰했다. 여기서, 단계적 프로토콜은 혈관구조와 관련된 세포가 결여된 전체 탯줄 조직으로부터 uMSCs의 단리, 이들의 특성화, 및 근인성 계보로의 이들의 분화에 대해 상세히 기술되어 있다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic solution 100x Liquid, endotoxin tested (10,000 U Penicillin and 10 mg Streptomycin/mL in 0.9% normal saline)</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>A001A-50mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GAPDH antibody</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G8795</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MyHC antibody (My32)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-50401AF647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MyoD antibody (5.8A)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB100-56511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Myogenin antibody (Clone F5D)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-34616AF594</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Pax7 antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>DSHB-C1-576</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse anti-human CD90 clone 5E10</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>559869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type 1</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C8919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D (+) Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCanto II or FACSAria III</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, qualified Brazil</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10270106</td>
			<td>not to be heat-inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD106 clone 51-10C9</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>551146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD14 clone M5E2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD31 clone WM59</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD34 clone 581</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD45 clone HI30</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555482</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD49D clone 9F10</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human CD90 clone 5E10</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human HLA-A,B,C clone G46-2.6</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557348</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse anti-human IgG clone G18-145</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G1264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>RM1239</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Alpha Modification without L-glutamine, ribo- and deoxyribonucleosides</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30568.FS</td>
			<td>Basal medium for uMSCs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse anti-human CD105 clone 266</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560839</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse anti-human CD44 clone 515</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse anti-human CD49E clone llA1</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555617</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse anti-human IgG clone G18-145</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7 Mouse anti-human CD73 CLONE AD2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS), pH=7.4</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>M1866</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA solution (1x 0.25% Trypsin and 0.02% EDTA in Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>TCL049-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of mesenchymal stem cells from human umbilical cord tissue and their differentiation into the skeletal muscle lineage

중간엽 줄기 세포의 치료 잠재력을 탐구하는 것은 분리의 용이성, 분화에 대한 효능 및 공급원의 신뢰성과 견고성에 달려 있습니다. 우리는 인간 탯줄 조직 (uMSCs)으로부터 중간엽 줄기 세포의 단리, 그들의 면역 표현형, 및 여러 계대에 걸쳐 그러한 배양물의 전파를 위한 단계적 프로토콜을 여기에서 설명한다. 이 절차에서 uMSCs의 생존력은 효소 소화가 없기 때문에 높습니다. 또한, 탯줄 동맥과 정맥을 포함한 혈관을 제거하면 내피 기원의 세포가 오염되지 않도록합니다. 유세포 분석기를 사용하여, 단리시 uMSC는 CD45-CD34-이며, 이는 조혈 혈통으로부터 세포의 부재를 나타낸다. 중요하게도, 이들은 키 표면 마커, CD105, CD90 및 CD73을 발현한다. 배양물의 확립시, 이 논문은 이들 uMSCs에서 골격근 계통으로의 분화를 유도하는 효율적인 방법을 기술한다. 분화된 uMSCs에서의 근인성 진행에 대한 상세한 분석은 uMSCs가 분화의 초기 단계에서 근인성 선조에 대한 마커인 Pax7을 발현하고, 이어서 MyoD 및 Myf5의 발현, 그리고 마지막으로 말단 분화 마커인 미오신 중쇄(MyHC)를 발현한다는 것을 밝혀낸다.

탯줄 조직에서 uMSCs의 분리의 성공은 전체 제대혈에서 성공의 가난한 비율과 달리 >95 %입니다. uMSCs의 성공적인 단리시, FACS 분석은 모든 세포가 CD34-CD45-CD105+CD90+임을 밝혀내었다. 그러나, 비교 분석에서, 제대혈로부터 분리된 uMSCs는 이종 집단을 표시하며, 여기서 세포의 비율은 CD34+CD45+CD105+(~15%)를 나타낸다. 추가적으로, 이중 양성 CD105+<...

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Generation of Mesenchymal Stem Cells from Human Umbilical Cord Tissue and their Differentiation into the Skeletal Muscle Lineage

우리는 인간 탯줄 조직으로부터 중간엽 줄기 세포를 분리하고 골격근 혈통으로의 분화를 위한 프로토콜을 기술한다.

인간 탯줄 조직에서 중간엽 줄기 세포의 생성과 골격근 계보로의 분화

Exploring the therapeutic potential of mesenchymal stem cells is contingent upon the ease of isolation, potency toward differentiation, and the ...

우리는 인간 탯줄 조직에서 중간엽 줄기 세포를 분리하는 우리의 프로토콜과 골격근 혈통으로 분화시키는 강력한 방법을 설명합니다. 이 기술을 통해 우리는 내피 기원의 세포의 오염이 거의 없거나 전혀없는 높은 생존력과 열을 가진 중간엽 줄기 세포를 분리하고 이러한 질병에서 효율적으로 근형성 분화를 유도 할 수 있습니다. 코드 비틀림과 점액 일관성으로 인해 코드를 다루기가 어렵습니다.우리는 코드를 처리하고, 와튼의 젤리를 긁지 않고, 내피 세포를 개체군에서 배제하는 방법을 보여줍니다. 전달 시간에 탯줄 조직을 수집한 후, 수집 튜브로부터 탯줄 조직 조각을 10 평방 센티미터 조직 배양 처리 접시로 옮기고, 신선한 PBS로 조직을 철저히 세척한다. 코드 비틀림과 점액 표면을 관리하려면 한 손에 한 쌍의 포셉으로 조직을 고정하십시오.메스를 사용하여 탯줄 조직을 세로 접근을 따라 수직으로 슬라이스하여 두 개의 반 원통형 조각을 얻습니다. 이 시점에서 탯줄 동맥과 정맥을 관찰하십시오. 메스를 사용하여, 표면으로부터 일방향으로 이들을 긁어내어 혈관을 제거하고 PBS로 탯줄 조직을 헹구어 조직과 관련된 잔류 혈액을 모두 제거하였다.탯줄 조직의 각 절반을 0.5 입방 센티미터 크기의 조각으로 다듬는다. 발광 표면이 아래를 향하게하는 파편을 접시에 놓고 접시를 10 분 동안 잠깐 배양하십시오. 인큐베이션이 끝날 때, MEM 알파 변형을 함유하는 배지 20 밀리리터를 탯줄 조직을 함유하는 접시의 측면을 따라 부드럽게 첨가한다.외식편이 그들의 배향에서 벗어나지 않도록하고 조직 외식편이 배양 중에 흡수 될 분율을 설명하기 위해 과도한 배지를 추가하십시오. 그런 다음 접시를 사흘 동안 인큐베이터에 놓습니다. 배양이 끝나면 배양물에 신선한 배지를 첨가하고 접시를 취급하는 동안 배양물이 외식재의 충격과 움직임으로부터 보호되도록하십시오.일주일 후, 멸균 포셉을 사용하여 조직 파편을 개별적으로 제거하고 폐기를 위해 적절한 생물학적 위험 백을 사용하여 폐기하십시오. 기존 배지를 유지하고 10 밀리리터의 신선한 성장 배지를 첨가하십시오. 개별 콜로니가 70%의 합류점에 도달할 때까지 나흘마다 성장 배지를 교체하고, 원고에 기재된 바와 같이 세포를 염색한 후, 표지된 세포를 유세포 분석기로 분석하고, CD105 CD90 양성 및 CD105 CD73 양성 세포의 백분율을 결정한다.CD105 양성 및 CD34 CD45 음성 세포를 별도로 분석한다. 조직 배양 플레이트를 PBS 중 밀리리터 당 0.01% 콜라겐 및 20 마이크로그램의 라미닌으로 코팅하고 실온에서 최소 네 시간 동안 로커 상에 놓는다. 인큐베이션 후, 콜라겐을 제거하고 플레이트를 PBS로 세척한 다음, 성장 배지에서 평방 센티미터 밀도 당 10, 000 세포 밀도에서 uMSCs를 플레이트화하였다.일단 세포가 70% 컨플루언시를 달성하면, 성장 배지를 흡인하고, 배양 플레이트를 PBS로 두 번 헹구었다. 근인성 진행의 동역학을 결정하기 위해, 배양물에 격일로 M1 배지를 첨가하고, 각각 이틀, 사흘 내지 5일, 육 내지 7일, 및 10 내지 10일 내지 10일에 pax7, MyoD, 미오게닌 및 미오신 중쇄의 발현에 대한 uMSCs를 분석한다. uMSCs는 CD105 및 CD90의 발현을 표시하고, 조혈 마커 CD34 및 CD45를 발현하지 않는다.uMSCs는 또한 uMSCs 마커 CD73의 발현에 대해 양성이었고, 이는 uMSCs가 다수의 키 마커를 발현한다는 것을 나타낸다. uMSCs는 M1의 첨가 후 처음 이틀 이내에 pax7의 발현을 나타냈고, 이어서 M1 첨가의 처음 나흘 이내에 MyoD 발현이 나타났다. 세포는 분화 6일에 미오게닌 단백질을 발현하고, 이어서 분화 유도 후 10일에서 14일 사이에 미오신 중쇄를 발현한다.970개의 유전자는 미분화된 uMSCs와 비교하여 근인성 분화의 유도에 반응하여 상향조절되었다. 더 많은 근인성 유전자는 제대혈 유래 uMSCs에 비해 제대혈 유래 uMSCs에서 상향조절되었다. 제대혈 조직과 제대혈 모두 액틴 결합 및 사르코머 조립과 관련된 세포골격 단백질, 수축 기능과 관련된 수송체, 근육량 유지, 칼슘 신호 전달 및 효소 기능과 관련된 유전자의 상향 조절을 보였다.조직을 무균 조건 하에서 수집하고 멸균 배양을 유지하십시오. 코드는 외부에서 70 % 에탄올로 스윕하고 가능한 한 빨리 처리해야합니다. 많은 재생 요법은 초기 계대에서 많은 수의 세포를 필요로합니다.또한 전체 건조 환경을 모방하고 산후 신진 대사를 반영하는 모델로 사용할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Human Mesenchymal Stem Cells and their Cultivation on the Porous Bone Matrix

인간 중간 엽 줄기 세포의 분리 및 다공성 뼈 매트릭스에 자신의 재배

Mesenchymal stem cells (MSCs) have a differentiation potential towards osteoblastic lineage when they are stimulated with soluble factors or specific ...

연구

발생학

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

인간의 골격근에서 기본 근육 조직 세포와 섬유 아 세포의 분리 및 정량 면역 세포 화학 특성

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

에반스 블루 염료와 Zebrafish의 애벌레 골격 근육 무결성 분석

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

인간 태반 조직에서 추출 분리 및 중간 엽 줄기의 확장 / 기질 세포

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

인간 제대혈 및 태아 태반에서 중간 엽 기질 세포의 분리 및 특성

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

생체 외에서 기능 Cardiomyocyte-같은 세포로 인간 중간 엽 줄기 세포의 분화

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Human Umbilical Cord Blood

인간 탯 줄 혈액에서 내 피 조상 세포의 고립

The existence of endothelial progenitor cells (EPCs) in peripheral blood and its involvement in vasculogenesis was first reported by Ashara and ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Pax7 Laminin 항 체와 면역 형광에 의해 골격 근육 인공위성 세포의 식별

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

파생 및 개 난소 중간 엽 줄기 세포의 분화

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...