Name: mass-rearing and molecular studies in tortricidae pest insects
Uploaded: 2022-03-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mass-Rearing and Molecular Studies in Tortricidae Pest Insects at JoVE.com

De auteurs willen de steun van de Japan Society for the Promotion of Science (JSPS) Research Fellowships for Young Scientists erkennen [Grant Number 19J13123 and 21J00895].

1. Insectenverzameling en massale kweek
<ol><li>Verzamel tortricid insecten uit velden volgens eerder gepubliceerde referenties 8,12. OPMERKING: De larven H. magnanima en A. honmai worden verzameld uit beschadigde theebladeren (figuur 1A); volwassenen worden aangetrokken met behulp van 4 W draagbaar UV-licht (365 nm golflengte, zie Tabel met materialen, fig...

<ol>
	<li>Gaston, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+magnitude+of+global+insect+species+richness.">The magnitude of global insect species richness.</a> Conservation Biology. 5 (3), 283-296 (1991).</li><li>Pogue, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+world+revision+of+the+genus+Spodoptera+Guen&#233;e+(Lepidoptera:+Noctuidae).">A world revision of the genus Spodoptera Guen&#233;e (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Memoirs of the American Entomological Society. 43, 1 (2002).</li><li>Matsuura, H., Naito, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+cold-hardiness+and+overwintering+of+Spodoptera+litura+F.+(Lepidoptera:+Noctuidae):+VI.+Possible+overwintering+areas+predicted+from+meteorological+data+in+Japan.">Studies on the cold-hardiness and overwintering of Spodoptera litura F. (Lepidoptera: Noctuidae): VI. Possible overwintering areas predicted from meteorological data in Japan.</a> Applied Entomology and Zoology. 32 (1), 167-177 (1997).</li><li>Mita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+construction+of+an+EST+database+for+Bombyx+mori+and+its+application.">The construction of an EST database for Bombyx mori and its application.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (24), 14121-14126 (2003).</li><li>Kawamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-quality+genome+assembly+of+the+silkworm,+Bombyx+mori.">High-quality genome assembly of the silkworm, Bombyx mori.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 107, 53-62 (2019).</li><li>Fukui, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+masculinizing+function+of+the+Ostrinia+furnacalis+Masculinizer+gene.">In vivo masculinizing function of the Ostrinia furnacalis Masculinizer gene.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 503 (3), 1768-1772 (2018).</li><li>Arai, H., Ishitsubo, Y., Nakai, M., Inoue, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+to+disperse+eggs+from+lepidopteran+scale-like+egg+masses+and+to+observe+embryogenesis.">A simple method to disperse eggs from lepidopteran scale-like egg masses and to observe embryogenesis.</a> Entomological Science. 25 (1), 12497 (2022).</li><li>vander Geest, L. P., Evenhuis, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Tortricid pests: their biology, natural enemies and control. , (1991).</li><li>Kiuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+female-specific+piRNA+is+the+primary+determiner+of+sex+in+the+silkworm.">A single female-specific piRNA is the primary determiner of sex in the silkworm.</a> Nature. 509 (7502), 633-636 (2014).</li><li>Rand, M. D., Kearney, A. L., Dao, J., Clason, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+of+Drosophila+embryos+for+introduction+of+small+molecules.">Permeabilization of Drosophila embryos for introduction of small molecules.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 40 (11), 792-804 (2010).</li><li>Kageyama, D., Traut, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+sex-specific+effects+of+Wolbachia+and+interference+with+the+sex+determination+of+its+host+Ostrinia+scapulalis.">Opposite sex-specific effects of Wolbachia and interference with the sex determination of its host Ostrinia scapulalis.</a> Proceedings of the Royal Society B. 271 (1536), 251-258 (2004).</li><li>Arai, H., Lin, S. R., Nakai, M., Kunimi, Y., Inoue, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Closely+related+male-killing+and+nonmale-killing+Wolbachia+strains+in+the+oriental+tea+tortrix+Homona+magnanima.">Closely related male-killing and nonmale-killing Wolbachia strains in the oriental tea tortrix Homona magnanima.</a> Microbial Ecology. 79 (4), 1011-1020 (2020).</li><li>Schalamun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+the+MinION:+An+example+of+how+to+establish+long-read+sequencing+in+a+laboratory+using+challenging+plant+tissue+from+Eucalyptus+pauciflora.">Harnessing the MinION: An example of how to establish long-read sequencing in a laboratory using challenging plant tissue from Eucalyptus pauciflora.</a> Molecular Ecology Resources. 19 (1), 77-89 (2019).</li><li>Winnebeck, E. C., Millar, C. D., Warman, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+does+insect+RNA+look+degraded.">Why does insect RNA look degraded.</a> Journal of Insect Science. 10 (1), 159 (2010).</li><li>Ivey, C. T., Carr, D. E., Eubanks, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inbreeding+in+Mimulus+guttatus+on+tolerance+to+herbivory+in+natural+environments.">Effects of inbreeding in Mimulus guttatus on tolerance to herbivory in natural environments.</a> Ecology. 85 (2), 567-574 (2004).</li><li>Saccheri, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inbreeding+and+extinction+in+a+butterfly+metapopulation.">Inbreeding and extinction in a butterfly metapopulation.</a> Nature. 392 (6675), 491-494 (1998).</li><li>Crnokrak, P., Roff, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inbreeding+depression+in+the+wild.">Inbreeding depression in the wild.</a> Heredity. 83 (3), 260-270 (1999).</li><li>Keller, L. F., Waller, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inbreeding+effects+in+wild+populations.">Inbreeding effects in wild populations.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 17 (5), 230-241 (2002).</li><li>Margaritis, L. H., Kafatos, F. C., Petri, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+eggshell+of+Drosophila+melanogaster.+I.+Fine+structure+of+the+layers+and+regions+of+the+wild-type+eggshell.">The eggshell of Drosophila melanogaster. I. Fine structure of the layers and regions of the wild-type eggshell.</a> Journal of Cell Science. 43 (1), 1-35 (1980).</li><li>Sugimoto, T. N., Ishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+male-killing+Wolbachia+carries+a+feminizing+factor+and+is+associated+with+degradation+of+the+sex-determining+system+of+its+host.">A male-killing Wolbachia carries a feminizing factor and is associated with degradation of the sex-determining system of its host.</a> Biology Letters. 8 (3), 412-415 (2012).</li></ol>

Tortricid bestaat uit verschillende land- en bosbouwplagen; de huidige studie presenteerde methoden om tortrix generaties lang te kweken, embryogenese en geslacht van de insecten te observeren en moleculaire analyse uit te voeren met behulp van gerijpte embryo's.
Een van de obstakels voor ongedierte-insectenstudie is het vaststellen van opfokmethoden. Vooral inteelt heeft soms een negatieve invloed op de fitheid van de soort. De fitheidsvermindering door de inteelt, inteeltdepressie genaamd, i...

Lepidopteran insecten vertegenwoordigen meer dan 10% van alle beschreven levende soorten1, en bepaalde taxa soorten veroorzaken ernstige schade aan planten en ernstige landbouwverliezen 2,3. Hoewel moleculaire en genetische studies zijn ontwikkeld met behulp van modelinsecten zoals de zijderups Bombyx mori 4,5, blijven plaaginsecten onbeproefd, mede vanwege de moeilijkheden voor het fokken en hanterenvan 6,7. Daarom zijn fundamentele studies en technieken nodig om de biologie van dergelijke niet-model plaaginsecten te begrijpen.
De Tortricidae (Lepidoptera), algemeen bekend als tortrix of bladrollermotten, omvat veel land- en bosbouwplagen8. Van de insectentaxa zijn de oosterse theeschildpad Homona magnanima Diakonoff en de zomerfruittort Adoxophyes honmai Yasuda ernstige polyfagote plagen waarvan bekend is dat ze theebomen in Oost-Azië beschadigen7. De twee soorten leggen platte en ovale schubachtige eierclusters (of eimassa's) bestaande uit dunne, zachte en fragiele eieren bedekt met maternale afscheidingen. Hoewel embryogenesestadia cruciaal zijn voor de ontwikkeling van insecten en geslachtsbepalingen9, verhinderen structuren van de eieren verdere analyse om de biologie van de insecten te begrijpen. Het is belangrijk om de moeilijkheden te overwinnen voor verder onderzoek naar plagen die zo'n complexe eimassa verankeren.
Hier, om de biologie van tortriciden te begrijpen, zijn methoden voor massa-opfok, observaties en moleculaire studies ontwikkeld met behulp van A. honmai en H. magnanima. Ten eerste onderhouden massafokmethoden beide tortriciden gedurende 100 generaties door inteelt. De scheiding van eieren van de aaneengeschakelde schubachtige eimassa vergemakkelijkte embryogenese-observatie van de tortriciden met behulp van alkalische en organische oplosmiddelen die eerder waren ontwikkeld op basis van technieken die bij vliegenwerden gebruikt 10. Bovendien stelde de huidige studie geslachtsdiscriminatie van kleine embryo's vast door kleuringsmethoden van het geslachtschromatine van lepidoptera-vrouwtjes te ontwikkelen met behulp van melkzuur-azijn orceïne11. Door deze methoden te combineren, werden nucleïnezuren van hoge kwaliteit en kwantiteit geëxtraheerd uit geslachtsbepaalde embryo's, wat anders moeilijk vast te stellen was6. Het geëxtraheerde RNA werd gebruikt voor sequencing van de volgende generatie. Gezamenlijk zijn de hier gepresenteerde methoden van toepassing op andere lepidoptera-insecten en andere insectentaxa.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1/2 ounce cup</td>
			<td>FP CHUPA</td>
			<td>CP070009</td>
			<td>insect rearing; https://www.askul.co.jp/p/6010417/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2 ounce cup lid</td>
			<td>FP CHUPA</td>
			<td>CP070011</td>
			<td>insect rearing; https://www.askul.co.jp/p/6010434/?int_id=recom_DtTogether</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>99.7% acetic acid</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>36289</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01ALF036289.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.agilent.com/en/product/automated-electrophoresis/bioanalyzer-systems/bioanalyzer-instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent RNA6000 nano kit</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G2938-90034_RNA6000Nano_KG 
			.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>benzalkonium chloride solution</td>
			<td>Nihon Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td>No.4987123116046</td>
			<td>Sterilization; https://www.nihon-pharm.co.jp/consumer/products/disinfection.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton</td>
			<td>AOUME</td>
			<td>8-1611-02</td>
			<td>insect rearing; https://item.rakuten.co.jp/athlete-med/10006937/?scid=af_pc_etc&#38;sc2id=af_113_0_1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Dojindo, Tokyo, Japan</td>
			<td>340-07971</td>
			<td>stainings; https://www.dojindo.co.jp/products/D523/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium Hydrogenphosphate</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Na2HPO4; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0286.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dsDNA HS quantification kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q33231</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q33230?SID=srch-srp-Q33230</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Econospin RNA II column</td>
			<td>Epoch Life Science Inc.</td>
			<td>EP-11201</td>
			<td>RNA extraction; http://www.epochlifescience.com/Product/SpinColumn/minispin.aspx</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0105-0045.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediamine-N,N,N&#39;,N&#39;-tetraacetic Acid Tetrasodium Salt Tetrahydrate (4NA)</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Cell lysis buffer (EDTA); https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01T02N003.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glassine paper</td>
			<td>HEIKO</td>
			<td>2100010</td>
			<td>insect rearing; https://www.monotaro.com/p/8927/0964/?utm_id=g_pla&#38; 
			utm_medium=cpc&#38;utm_source= 
			Adw</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heat block WSC-2620 PowerBLOCK</td>
			<td>ATTO, Tokyo, Japan</td>
			<td>4002620</td>
			<td>incubation; https://www.attoeng.site/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heptane</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0108-0015.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INSECTA LF</td>
			<td>Nosan Co., Ltd</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Artificial diet; https://www.nosan.co.jp/business/fodder/ist.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ISOGENII</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>311-07361</td>
			<td>RNA extraction; https://www.nippongene.com/siyaku/product/extraction/isogen2/isogen2.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropanol</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>nucleic acids extraction; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0232-0004.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactic acid</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Stainings; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0112-0005.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0113-0182.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSV-3500 vortex</td>
			<td>Biosan</td>
			<td>BS-010210-TAK</td>
			<td>Voltex mixer; https://biosan.lv/products/-msv-3500-multi-speed-vortex/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano Photometer NP 80</td>
			<td>Implen</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.implen.de/product-page/implen-nanophotometer-np80-microvolume-cuvette-spectrophotometer/tech-specs/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Natural pack wide</td>
			<td>Inomata chemical</td>
			<td>1859</td>
			<td>insect rearing; https://www.monotaro.com/g/03035766/?t.q=%E3%83%8A%E3%83%81%E3%83%A5%E3% 
			83%A9%E3%83%AB%E3%83%91% 
			E3%83%83%E3%82%AF%E3%83% 
			AF%E3%82%A4%E3%83%89</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBNext Ultra II RNA Library Prep Kit for Illumina</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>E7770S</td>
			<td>Library preparation; https://www.nebj.jp/products/detail/2039</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>orcein</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Stainings; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0115-0094.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>160-16061</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-1606.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monolaurate</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Tween-20; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-2121.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable UV Black Light (4W, 365nm wavelength)</td>
			<td>Southwalker Co., Ltd., Kanagawa, Japan</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Insect collection; http://www.southwalker.com/shopping/?pid=1364614057-467328</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>KCl; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-0354.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Dihydrogen Phosphate</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>KH2PO4; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-0424.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen, MA, USA</td>
			<td>P36965</td>
			<td>antifade; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/P36965</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K Solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>71049-4CN</td>
			<td>DNA extraction; https://www.merckmillipore.com/JP/ja/product/Proteinase-K-Solution-600-mAU-ml,EMD_BIO-71049</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein precipitation solution</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>158912</td>
			<td>DNA extraction; https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/lab-essentials/buffers-reagents/puregene-accessories/?cmpid=PC_DA_NON_ 
			BIOCOMPARE_ProductListing_ 
			0121_RD_MarketPlace_ProductC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit V4</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q33238</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q33238</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rifampicin</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Sterilization; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0118-0100.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA HS quantification kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q32855</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q32852</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase solution</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>313-01461</td>
			<td>RNA extraction; https://www.nippongene.com/siyaku/product/modifying-enzymes/rnase-a/rnase-s.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Mate 2S</td>
			<td>Nosan Co., Ltd</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Artificial diet; https://www.nosan.co.jp/business/fodder/ist.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>NaCl; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0166.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Cell lysis buffer (SDS); https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-1398.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium hypochlorite aqueous solution</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>egg separation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0220.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetracycline Hydrochloride</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Sterilization; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0120-1656.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Cell lysis buffer; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0120-1536.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultra-pure distilled water</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10977023</td>
			<td>RNA extraction; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10977015</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mass-rearing and molecular studies in tortricidae pest insects

Tortricidae (Lepidoptera), algemeen bekend als tortrix of bladrollermotten, bevat veel land- en bosbouwplagen, die ernstige landbouwverliezen veroorzaken. Om de biologie van dergelijke plaagmotten te begrijpen, zijn fundamentele technieken erg in trek geweest. Hier worden methoden voor massa-opfok, observaties en moleculaire studies ontwikkeld met behulp van twee theetort, Homona magnanima en Adoxophyes honmai (Lepidoptera: Tortricidae). Insecten werden massaal gekweekt met gesneden kunstmatig dieet en onderhouden door inteelt gedurende meer dan 100 generaties door rekening te houden met hun biologische kenmerken. Insecten hebben verschillende geslachtsdimorfismen; daarom is het moeilijk om het geslacht te onderscheiden tijdens de ontwikkelingsstadia, die latere assays hebben voorkomen. Het huidige werk benadrukte dat het geslacht van tortricidslarven kon worden bepaald door testikels of melk-azijnachtige orceïnekleuring te observeren om het vrouwspecifieke W-chromosoom te visualiseren. Bovendien maakte de huidige studie, met behulp van de geslachtsbepalingsmethoden, nucleïnezuurextracties uit geslachtsbepaalde embryo's en toepassing op high throughput sequencing mogelijk. Deze tips zijn toepasbaar op andere plaaginsecten en zullen verdere morfologische en genetische studies vergemakkelijken.

Opzetten van host lines en het onderhoud ervan De levensvatbaarheid van in het veld verzamelde larven wordt anders toegeschreven aan veldlocatie, seizoenen en opfokomstandigheden (bijv. 90% van de levensvatbaarheid in Taiwan, Taoyuan, zoals weergegeven in Arai et al.12). Ongeveer 30% -50% van de paren zal zoals gewoonlijk de volgende generatie genereren. Voor H. magnanima en A. honmai worden matrilines al meer dan 100 generaties onderhouden door inteelt.
<...

Watch this Scientific Journal Video about Mass-Rearing and Molecular Studies in Tortricidae Pest Insects at JoVE.com

Mass-Rearing and Molecular Studies in Tortricidae Pest Insects

Het huidige protocol beschrijft de kweekmethode van tortricid plaaginsecten in de laboratoria. De procedures om het geslacht van insecten te onderscheiden en nucleïnezuren te extraheren voor sequencing met hoge doorvoer worden vastgesteld met behulp van twee tortricid-plagen.

Massa-opfok en moleculaire studies in Tortricidae plaaginsecten

Tortricidae (Lepidoptera), commonly known as tortrix or leafroller moths, comprises many agricultural and forestry pests, which cause serious agricultural ...

We presenteren fundamentele, maar zeer veelgevraagde massa's voor massale opfok, observaties en moleculaire studies met behulp van ernstige plaag Tortrix-massa's, om hun biologie te bestuderen. Tot nu toe heeft de structuur van de insecteneieren verdere analyse verhinderd. Met name hebben we de studie mogelijk gemaakt van dunne, zachte en fragiele eieren bedekt met maternale secretie.Er worden eenvoudige technieken verwacht toepasbaar te zijn voor verder onderzoek naar tortrix, het proberen van andere insecten en andere taxa. Begin met het plaatsen van een vrouwtje en twee mannetjes in een plastic beker van 120 milliliter met een stuk paraffinepapier om een Matra-lijn te vestigen. Snijd ongeveer 60 gram kunstmatige diëten met behulp van een rasp voor massale opfok.Plaats de eimassa gevuld met gerijpte embryo's op het gesneden kunstmatige dieet in een plastic container. Leg paraffinepapierjes op de eimassa met de gesneden diëten. Plaats 15 mannetjes en 10 vrouwtjes in een plastic doos om te paren bij 25 graden Celsius.Verzamel eieren om de vijf tot zeven dagen en herhaal massale opfokstappen voor elke generatie. Week de eimassa in 1000 microliter 1,2% natriumhypochloriet-waterige oplossing gedurende 10 minuten of in 1000 microliter van vijf molaire kaliumhydroxide waterige oplossing gedurende 30 minuten om de eieren te scheiden. Was de gescheiden eieren in 1000 microliter PBSt.Week eieren in een volumegewichtmengsel van 500 microliter 100% heptaan en 500 microliter 4%paraformaldehyde PBSt-oplossing. Meng gedurende 10 minuten met 1500 omwentelingen per minuut met behulp van een vortexmixer. Week de eieren in een mengsel van 500 microliter 100% heptaan en 500 microliter 100% methanol.Mix gedurende 10 minuten met 1500 omwentelingen per minuut. Was de eieren twee keer met 1000 microliter 100% methanol en bewaar ze bij vier graden Celsius in 100% methanol. Week de eieren achtereenvolgens in 99%70% en 50% ethanol en PBSt gedurende vijf minuten elk voor hydrofilisatie.Was de eieren met PBSt. Dompel de eieren gedurende vijf minuten onder in één microgram per milliliter DAPI-oplossing en was de eieren vervolgens tweemaal met PBS. Week de eieren in 20 microliter van 1,25% melkzuur-, azijn- of CN-oplossing om heterochromatine te visualiseren totdat de kernen een schitterende rode kleur vertonen.Breng de ingebrandschilderde eieren met een pipet over op een glasplaat en sluit ze vervolgens in met een anti-fade-reagens en een dekglas. Extract Ferrate, Amonamagnetama en Adoxophyes honmai larven uit de eimassa's met behulp van een tang. Ontleed de larven op de glasplaat.Fixeer de weefsels met een mengsel van één tot drie 99,7% ascetinezuur in 100% methanol gedurende vijf minuten. Kleur die met 1,25 gewichtsprocent melkzuur-, ascetische of CN-oplossing totdat de kernen gekleurd zijn. Bepaal het geslacht van elk exemplaar door de aanwezigheid van heterochromatine voor vrouwen of afwezigheid voor mannen onder een microscoop te observeren.Om DNA en RNA uit geslachtsbepaalde Ferrate-larven te extraheren, pool 12 geslachtsbepaalde mannelijke of vrouwelijke ferratelarven en voeg ofwel cellysisbuffer of RNA-extractiereagentia toe aan één buis van 1,5 milliliter. De fixatie-, permeabilisatie- en kleuringsstappen maken de visualisatie van kernen met DAPI-oplossing mogelijk. Melkzuur-, ascetische of CN-kleuring met behulp van de ontlede Ferrate-larven onthulde dat vrouwtjes heterochromatine als een stip vertonen, maar mannetjes missen het heterochromatine.De aangepaste protocollen met behulp van een spinkolom verbeterden de kwaliteit van het RNA dat 900 tot 1500 nanogram product produceerde met een verhouding van 260 tot 200 van 1,9 tot 2,1 en een verhouding van 260 tot 280 van 1,9 tot 2,3. De RNA-concentratieverhouding voor het gemodificeerde protocol was lager dan 1,2 en voldeed daarmee aan de kwaliteitseisen voor sequencing van de volgende generatie. De intactheid van het RNA geëxtraheerd uit geslachtsbepaalde Ferrate-larven met behulp van het gemodificeerde protocol werd bevestigd met behulp van microchip-elektroforese.De voorbereide bibliotheken bleken een hoge Q 30-score te behalen. Onze boodschap draagt bij aan fundamentele insectenstudies en plaagmiddelen. Bovendien hebben onze protocollen het potentieel om te worden gebruikt om de effectieve chemische pesticiden of intercellige microben tijdens embryogenese te beoordelen.

Research

JoVE Journal

Environment

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Toepassing van twee-gespot spintmijt<em&gt; Tetranychus urticae</em&gt; Voor Plant-pest Interaction Studies

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

Physical, Chemical and Biological Characterization of Six Biochars Produced for the Remediation of Contaminated Sites

Fysische, chemische en biologische karakterisering van Six Biochars Geproduceerd voor de sanering van verontreinigde locaties

The physical and chemical properties of biochar vary based on feedstock sources and production conditions, making it possible to engineer biochars with ...

Vegetated Treatment Systems for Removing Contaminants Associated with Surface Water Toxicity in Agriculture and Urban Runoff

Plantaardige Behandeling Systemen voor het verwijderen van verontreinigingen geassocieerd met oppervlaktewater toxiciteit in Landbouw en Urban Runoff

Urban stormwater and agriculture irrigation runoff contain a complex mixture of contaminants that are often toxic to adjacent receiving waters. Runoff may ...

Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System

Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System

Methodologie voor ontwikkeling van leven tabellen voor sessiele insecten in het veld met de wittevlieg, Bemisia tabaci, in katoen als een modelsysteem

Life tables provide a means of measuring the schedules of birth and death from populations over time. They also can be used to quantify the sources and ...

Procedures of Laboratory Fumigation for Pest Control with Nitric Oxide Gas

Procedures van laboratorium fumigatie voor ongediertebestrijding met stikstofmonoxide Gas

Nitric oxide (NO) is a newly discovered fumigant for postharvest pest control. This paper provides detailed protocols for conducting NO fumigation on ...

Double-stranded RNA Oral Delivery Methods to Induce RNA Interference in Phloem and Plant-sap-feeding Hemipteran Insects

Double-stranded RNA orale afleveringsmethoden voor het opwekken van RNA-interferentie in het floëem en Hemipteran insecten Plant-sap-voeding

Phloem and plant sap feeding insects invade the integrity of crops and fruits to retrieve nutrients, in the process damaging food crops. Hemipteran ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

De Plant infectie Test: Spray en wond-gemedieerde inoculatie met de Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

Oogsten van Venom toxines uit Assassin insecten en andere Heteropteran insecten

Heteropteran insects such as assassin bugs (Reduviidae) and giant water bugs (Belostomatidae) descended from a common predaceous and venomous ancestor, ...

Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

Experimentele Protocol voor de behandeling van de gedragsmatige reactie profielen in larvale vissen: toepassing op de Neuro-stimulerende cafeïne

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...

Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs

Genereren van Homo- en Heterografts tussen watermeloen en fles pompoen voor de studie van koude-responsieve MicroRNAs

MicroRNAs (miRNAs) are endogenous small non-coding RNAs of about 20 - 24 nt, known to play important roles in plant development and adaptation. There is ...