Name: mass-rearing and molecular studies in tortricidae pest insects
Uploaded: 2022-03-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mass-Rearing and Molecular Studies in Tortricidae Pest Insects at JoVE.com

Les auteurs souhaitent reconnaître le soutien de la Société japonaise pour la promotion de la science (JSPS) Bourses de recherche pour jeunes scientifiques [numéro de subvention 19J13123 et 21J00895].

1. Collecte d’insectes et élevage de masse
<ol><li>Collectez des insectes tortricides dans les champs en suivant les références 8,12 publiées précédemment. REMARQUE : Les larves de H. magnanima et d’A. honmai sont prélevées sur des feuilles de thé endommagées (figure 1A); les adultes sont attirés par la lumière UV portable de 4 W (longueur d’onde de 365 nm, voir tablea...

<ol>
	<li>Gaston, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+magnitude+of+global+insect+species+richness.">The magnitude of global insect species richness.</a> Conservation Biology. 5 (3), 283-296 (1991).</li><li>Pogue, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+world+revision+of+the+genus+Spodoptera+Guen&#233;e+(Lepidoptera:+Noctuidae).">A world revision of the genus Spodoptera Guen&#233;e (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Memoirs of the American Entomological Society. 43, 1 (2002).</li><li>Matsuura, H., Naito, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+cold-hardiness+and+overwintering+of+Spodoptera+litura+F.+(Lepidoptera:+Noctuidae):+VI.+Possible+overwintering+areas+predicted+from+meteorological+data+in+Japan.">Studies on the cold-hardiness and overwintering of Spodoptera litura F. (Lepidoptera: Noctuidae): VI. Possible overwintering areas predicted from meteorological data in Japan.</a> Applied Entomology and Zoology. 32 (1), 167-177 (1997).</li><li>Mita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+construction+of+an+EST+database+for+Bombyx+mori+and+its+application.">The construction of an EST database for Bombyx mori and its application.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (24), 14121-14126 (2003).</li><li>Kawamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-quality+genome+assembly+of+the+silkworm,+Bombyx+mori.">High-quality genome assembly of the silkworm, Bombyx mori.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 107, 53-62 (2019).</li><li>Fukui, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+masculinizing+function+of+the+Ostrinia+furnacalis+Masculinizer+gene.">In vivo masculinizing function of the Ostrinia furnacalis Masculinizer gene.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 503 (3), 1768-1772 (2018).</li><li>Arai, H., Ishitsubo, Y., Nakai, M., Inoue, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+to+disperse+eggs+from+lepidopteran+scale-like+egg+masses+and+to+observe+embryogenesis.">A simple method to disperse eggs from lepidopteran scale-like egg masses and to observe embryogenesis.</a> Entomological Science. 25 (1), 12497 (2022).</li><li>vander Geest, L. P., Evenhuis, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Tortricid pests: their biology, natural enemies and control. , (1991).</li><li>Kiuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+female-specific+piRNA+is+the+primary+determiner+of+sex+in+the+silkworm.">A single female-specific piRNA is the primary determiner of sex in the silkworm.</a> Nature. 509 (7502), 633-636 (2014).</li><li>Rand, M. D., Kearney, A. L., Dao, J., Clason, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+of+Drosophila+embryos+for+introduction+of+small+molecules.">Permeabilization of Drosophila embryos for introduction of small molecules.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 40 (11), 792-804 (2010).</li><li>Kageyama, D., Traut, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+sex-specific+effects+of+Wolbachia+and+interference+with+the+sex+determination+of+its+host+Ostrinia+scapulalis.">Opposite sex-specific effects of Wolbachia and interference with the sex determination of its host Ostrinia scapulalis.</a> Proceedings of the Royal Society B. 271 (1536), 251-258 (2004).</li><li>Arai, H., Lin, S. R., Nakai, M., Kunimi, Y., Inoue, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Closely+related+male-killing+and+nonmale-killing+Wolbachia+strains+in+the+oriental+tea+tortrix+Homona+magnanima.">Closely related male-killing and nonmale-killing Wolbachia strains in the oriental tea tortrix Homona magnanima.</a> Microbial Ecology. 79 (4), 1011-1020 (2020).</li><li>Schalamun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+the+MinION:+An+example+of+how+to+establish+long-read+sequencing+in+a+laboratory+using+challenging+plant+tissue+from+Eucalyptus+pauciflora.">Harnessing the MinION: An example of how to establish long-read sequencing in a laboratory using challenging plant tissue from Eucalyptus pauciflora.</a> Molecular Ecology Resources. 19 (1), 77-89 (2019).</li><li>Winnebeck, E. C., Millar, C. D., Warman, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+does+insect+RNA+look+degraded.">Why does insect RNA look degraded.</a> Journal of Insect Science. 10 (1), 159 (2010).</li><li>Ivey, C. T., Carr, D. E., Eubanks, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inbreeding+in+Mimulus+guttatus+on+tolerance+to+herbivory+in+natural+environments.">Effects of inbreeding in Mimulus guttatus on tolerance to herbivory in natural environments.</a> Ecology. 85 (2), 567-574 (2004).</li><li>Saccheri, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inbreeding+and+extinction+in+a+butterfly+metapopulation.">Inbreeding and extinction in a butterfly metapopulation.</a> Nature. 392 (6675), 491-494 (1998).</li><li>Crnokrak, P., Roff, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inbreeding+depression+in+the+wild.">Inbreeding depression in the wild.</a> Heredity. 83 (3), 260-270 (1999).</li><li>Keller, L. F., Waller, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inbreeding+effects+in+wild+populations.">Inbreeding effects in wild populations.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 17 (5), 230-241 (2002).</li><li>Margaritis, L. H., Kafatos, F. C., Petri, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+eggshell+of+Drosophila+melanogaster.+I.+Fine+structure+of+the+layers+and+regions+of+the+wild-type+eggshell.">The eggshell of Drosophila melanogaster. I. Fine structure of the layers and regions of the wild-type eggshell.</a> Journal of Cell Science. 43 (1), 1-35 (1980).</li><li>Sugimoto, T. N., Ishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+male-killing+Wolbachia+carries+a+feminizing+factor+and+is+associated+with+degradation+of+the+sex-determining+system+of+its+host.">A male-killing Wolbachia carries a feminizing factor and is associated with degradation of the sex-determining system of its host.</a> Biology Letters. 8 (3), 412-415 (2012).</li></ol>

Tortricid comprend plusieurs ravageurs agricoles et forestiers; la présente étude a présenté des méthodes pour élever la tortrix au fil des générations, observer l’embryogenèse et le sexe des insectes, et effectuer une analyse moléculaire à l’aide d’embryons matures.
L’un des obstacles à l’étude des insectes nuisibles est d’établir des méthodes d’élevage. En particulier, la consanguinité affecte parfois négativement la condition physique de l’espèce. La rédu...

Les insectes lépidoptères représentent plus de 10 % de toutes les espèces vivantes décrites1, et certaines espèces de taxons causent de graves dommages aux plantes et de graves pertes agricoles 2,3. Bien que des études moléculaires et génétiques aient été développées à l’aide d’insectes modèles tels que le ver à soie Bombyx mori 4,5, les insectes nuisibles n’ont pas encore fait l’objet d’enquêtes, en partie à cause des difficultés d’élevage et de manipulation 6,7. Par conséquent, des études et des techniques fondamentales sont nécessaires pour comprendre la biologie de ces insectes nuisibles non modèles.
Les Tortricidae (Lépidoptères), communément appelés tortrix ou tordeuses, comprennent de nombreux ravageurs agricoles et forestiers8. Parmi les taxons d’insectes, la tortrix de thé orientale Homona magnanima Diakonoff et la tortrix de fruits d’été Adoxophyes honmai Yasuda sont de graves ravageurs polyphages connus pour endommager les théiers en Asie de l’Est7. Les deux espèces pondent des grappes d’œufs plates et ovales en forme d’écailles (ou masses d’œufs) constituées d’œufs minces, mous et fragiles recouverts de sécrétions maternelles. Bien que les stades de l’embryogenèse soient cruciaux pour le développement des insectes et la détermination du sexe9, les structures des œufs empêchent une analyse plus approfondie de comprendre la biologie des insectes. Il est important de surmonter les difficultés pour une étude plus approfondie sur les ravageurs ovipositant une masse d’œufs aussi complexe.
Ici, pour comprendre la biologie des tortricides, des méthodes d’élevage de masse, des observations et des études moléculaires ont été développées à l’aide de A. honmai et H. magnanima. Tout d’abord, les méthodes d’élevage de masse maintiennent les deux tortricides sur 100 générations par consanguin. La séparation des œufs de la masse d’œufs concaténée en forme d’écailles a facilité l’observation de l’embryogenèse des tortricides à l’aide de solvants alcalins et organiques précédemment développés à partir de techniques utilisées chez les mouches10. En outre, la présente étude a établi la discrimination sexuelle des petits embryons en développant des méthodes de coloration de la chromatine sexuelle des femelles lépidoptères utilisant l’orcéine lactique-acétique11. En combinant ces méthodes, des acides nucléiques de haute qualité et de grande quantité ont été extraits d’embryons déterminés par le sexe, ce qui était autrement difficile à établir6. L’ARN extrait a été utilisé pour le séquençage de nouvelle génération. Collectivement, les méthodes présentées ici s’appliquent à d’autres insectes lépidoptères et à d’autres taxons d’insectes.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1/2 ounce cup</td>
			<td>FP CHUPA</td>
			<td>CP070009</td>
			<td>insect rearing; https://www.askul.co.jp/p/6010417/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2 ounce cup lid</td>
			<td>FP CHUPA</td>
			<td>CP070011</td>
			<td>insect rearing; https://www.askul.co.jp/p/6010434/?int_id=recom_DtTogether</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>99.7% acetic acid</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>36289</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01ALF036289.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.agilent.com/en/product/automated-electrophoresis/bioanalyzer-systems/bioanalyzer-instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent RNA6000 nano kit</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G2938-90034_RNA6000Nano_KG 
			.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>benzalkonium chloride solution</td>
			<td>Nihon Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td>No.4987123116046</td>
			<td>Sterilization; https://www.nihon-pharm.co.jp/consumer/products/disinfection.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton</td>
			<td>AOUME</td>
			<td>8-1611-02</td>
			<td>insect rearing; https://item.rakuten.co.jp/athlete-med/10006937/?scid=af_pc_etc&#38;sc2id=af_113_0_1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Dojindo, Tokyo, Japan</td>
			<td>340-07971</td>
			<td>stainings; https://www.dojindo.co.jp/products/D523/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium Hydrogenphosphate</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Na2HPO4; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0286.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dsDNA HS quantification kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q33231</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q33230?SID=srch-srp-Q33230</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Econospin RNA II column</td>
			<td>Epoch Life Science Inc.</td>
			<td>EP-11201</td>
			<td>RNA extraction; http://www.epochlifescience.com/Product/SpinColumn/minispin.aspx</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0105-0045.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediamine-N,N,N&#39;,N&#39;-tetraacetic Acid Tetrasodium Salt Tetrahydrate (4NA)</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Cell lysis buffer (EDTA); https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01T02N003.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glassine paper</td>
			<td>HEIKO</td>
			<td>2100010</td>
			<td>insect rearing; https://www.monotaro.com/p/8927/0964/?utm_id=g_pla&#38; 
			utm_medium=cpc&#38;utm_source= 
			Adw</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heat block WSC-2620 PowerBLOCK</td>
			<td>ATTO, Tokyo, Japan</td>
			<td>4002620</td>
			<td>incubation; https://www.attoeng.site/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heptane</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0108-0015.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>INSECTA LF</td>
			<td>Nosan Co., Ltd</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Artificial diet; https://www.nosan.co.jp/business/fodder/ist.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ISOGENII</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>311-07361</td>
			<td>RNA extraction; https://www.nippongene.com/siyaku/product/extraction/isogen2/isogen2.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropanol</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>nucleic acids extraction; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0232-0004.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactic acid</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Stainings; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0112-0005.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0113-0182.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSV-3500 vortex</td>
			<td>Biosan</td>
			<td>BS-010210-TAK</td>
			<td>Voltex mixer; https://biosan.lv/products/-msv-3500-multi-speed-vortex/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano Photometer NP 80</td>
			<td>Implen</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.implen.de/product-page/implen-nanophotometer-np80-microvolume-cuvette-spectrophotometer/tech-specs/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Natural pack wide</td>
			<td>Inomata chemical</td>
			<td>1859</td>
			<td>insect rearing; https://www.monotaro.com/g/03035766/?t.q=%E3%83%8A%E3%83%81%E3%83%A5%E3% 
			83%A9%E3%83%AB%E3%83%91% 
			E3%83%83%E3%82%AF%E3%83% 
			AF%E3%82%A4%E3%83%89</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBNext Ultra II RNA Library Prep Kit for Illumina</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>E7770S</td>
			<td>Library preparation; https://www.nebj.jp/products/detail/2039</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>orcein</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Stainings; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0115-0094.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>160-16061</td>
			<td>fixation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-1606.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monolaurate</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Tween-20; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-2121.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable UV Black Light (4W, 365nm wavelength)</td>
			<td>Southwalker Co., Ltd., Kanagawa, Japan</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Insect collection; http://www.southwalker.com/shopping/?pid=1364614057-467328</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>KCl; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-0354.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Dihydrogen Phosphate</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>KH2PO4; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-0424.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>Invitrogen, MA, USA</td>
			<td>P36965</td>
			<td>antifade; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/P36965</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K Solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>71049-4CN</td>
			<td>DNA extraction; https://www.merckmillipore.com/JP/ja/product/Proteinase-K-Solution-600-mAU-ml,EMD_BIO-71049</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein precipitation solution</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>158912</td>
			<td>DNA extraction; https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/lab-essentials/buffers-reagents/puregene-accessories/?cmpid=PC_DA_NON_ 
			BIOCOMPARE_ProductListing_ 
			0121_RD_MarketPlace_ProductC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit V4</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q33238</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q33238</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rifampicin</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Sterilization; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0118-0100.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA HS quantification kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q32855</td>
			<td>Nucleic acids quantification; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q32852</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase solution</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>313-01461</td>
			<td>RNA extraction; https://www.nippongene.com/siyaku/product/modifying-enzymes/rnase-a/rnase-s.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Mate 2S</td>
			<td>Nosan Co., Ltd</td>
			<td>not shown</td>
			<td>Artificial diet; https://www.nosan.co.jp/business/fodder/ist.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>NaCl; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0166.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Cell lysis buffer (SDS); https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-1398.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium hypochlorite aqueous solution</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>egg separation; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0220.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetracycline Hydrochloride</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japan</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Sterilization; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0120-1656.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>FUJIFILM Wako Chemicals Co.</td>
			<td>4.98748E+12</td>
			<td>Cell lysis buffer; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0120-1536.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultra-pure distilled water</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10977023</td>
			<td>RNA extraction; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10977015</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mass-rearing and molecular studies in tortricidae pest insects

Les tortricidae (lépidoptères), communément appelés tortrix ou tordeuses, comprennent de nombreux ravageurs agricoles et forestiers, qui causent de graves pertes agricoles. Pour comprendre la biologie de ces papillons nuisibles, les techniques fondamentales ont été très demandées. Ici, des méthodes d’élevage de masse, d’observations et d’études moléculaires sont développées à l’aide de deux tortrix de thé, Homona magnanima et Adoxophyes honmai (Lepidoptera: Tortricidae). Les insectes ont été élevés en masse avec un régime artificiel tranché et maintenus par consanguinité pendant plus de 100 générations en tenant compte de leurs caractéristiques biologiques. Les insectes ont divers dimorphismes sexuels; par conséquent, il est difficile de distinguer le sexe pendant les stades de développement, qui ont empêché les tests ultérieurs. Le présent travail a mis en évidence que le sexe des larves de tortricides pouvait être déterminé en observant les testicules ou la coloration lactique-acétique de l’orcéine pour visualiser le chromosome W spécifique à la femelle. De plus, en utilisant les méthodes de détermination du sexe, la présente étude a permis d’extraire des acides nucléiques d’embryons déterminés par le sexe et de les appliquer au séquençage à haut débit. Ces conseils sont applicables à d’autres insectes nuisibles et faciliteront d’autres études morphologiques et génétiques.

Mise en place des lignes hôtes et leur maintenance La viabilité des larves collectées sur le terrain est attribuée différemment à l’emplacement, aux saisons et aux conditions d’élevage sur le terrain (p. ex., 90 % de la viabilité à Taïwan, Taoyuan, comme le montrent Arai et al.12). Environ 30% à 50% des paires généreront la prochaine génération comme d’habitude. Pour H. magnanima et A. honmai, les matrilines sont maintenues par consanguini...

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Mass-Rearing and Molecular Studies in Tortricidae Pest Insects

Le présent protocole décrit la méthode d’élevage des insectes ravageurs tortricides dans les laboratoires. Les procédures permettant de distinguer le sexe des insectes et d’extraire les acides nucléiques pour le séquençage à haut débit sont établies à l’aide de deux ravageurs tortricides.

Élevage de masse et études moléculaires chez les insectes nuisibles tortricidae

Tortricidae (Lepidoptera), commonly known as tortrix or leafroller moths, comprises many agricultural and forestry pests, which cause serious agricultural ...

Nous présentons des masses fondamentales, mais très demandées pour l’élevage de masse, des observations et des études moléculaires utilisant des masses de Tortrix nuisibles graves, pour étudier leur biologie. Jusqu’à présent, la structure des œufs d’insectes a empêché une analyse plus approfondie. Nous avons notamment permis l’étude d’ovules fins, mous et fragiles recouverts de sécrétion maternelle.Il existe des techniques simples qui devraient être applicables pour d’autres recherches sur la tortrix, en essayant d’autres insectes et d’autres taxons. Commencez par placer une femelle et deux mâles dans un gobelet en plastique de 120 millilitres avec un morceau de papier paraffine pour établir une ligne Matra. Trancher environ 60 grammes de régimes artificiels à l’aide d’une râpe pour l’élevage de masse.Placez la masse d’œufs remplie d’embryons matures sur le régime artificiel tranché dans un récipient en plastique. Placez des papiers de paraffine sur la masse d’œufs avec les régimes tranchés. Placez 15 mâles et 10 femelles dans une boîte en plastique pour l’accouplement à 25 degrés Celsius.Recueillez les œufs tous les cinq à sept jours et répétez les étapes d’élevage en masse pour chaque génération. Faire tremper la masse d’œufs dans 1000 microlitres de solution aqueuse d’hypochlorite de sodium à 1,2% pendant 10 minutes ou dans 1000 microlitres de solution aqueuse d’hydroxyde de potassium à cinq molaires pendant 30 minutes pour séparer les œufs. Lavez les œufs séparés dans 1000 microlitres de PBSt.Faire tremper les œufs dans un mélange poids par volume de 500 microlitres de 100% heptane et de 500 microlitres de solution de 4% de paraformaldéhyde PBSt. Mélanger pendant 10 minutes à 1500 rotations par minute à l’aide d’un mélangeur vortex. Faire tremper les œufs dans un mélange de 500 microlitres de 100% heptane et de 500 microlitres de 100% de méthanol.Mélanger pendant 10 minutes à 1500 rotations par minute. Lavez les œufs deux fois avec 1000 microlitres de 100% de méthanol et conservez-les à quatre degrés Celsius dans du méthanol à 100%. Faire tremper les œufs séquentiellement dans de l’éthanol à 99 % 70 % et 50 % et du PBSt pendant cinq minutes chacun pour l’hydrophilisation.Lavez les œufs avec PBSt. Immergez les œufs dans une solution de DAPI d’un microgramme par millilitre pendant cinq minutes, puis lavez les œufs avec du PBS deux fois. Faire tremper les œufs dans 20 microlitres de solution lactique, acétique ou CN à 1,25%, pour visualiser l’hétérochromatine jusqu’à ce que les noyaux présentent une couleur rouge brillant.Transférez les œufs tachés à l’aide d’une pipette sur une lame en verre, puis entourez-les d’un réactif antidérapant et d’un verre de couverture. Extraire les larves de Ferrate, D’Amonamagnetama et d’Adoxophyes honmai des masses d’œufs à l’aide de pinces. Disséquez les larves sur la lame de verre.Fixez les tissus avec un mélange d’un à trois acide ascétique à 99,7% dans du méthanol à 100% pendant cinq minutes. Colorez ceux qui ont une solution lactique, ascétique ou CN de 1,25% poids par poids jusqu’à ce que les noyaux soient colorés. Déterminer le sexe de chaque spécimen en observant la présence d’hétérochromatine chez les femelles ou l’absence chez les mâles au microscope.Pour extraire l’ADN et l’ARN des larves de ferrate déterminées par le sexe, regroupez 12 larves de ferrate mâle ou femelle déterminées par le sexe et ajoutez un tampon de lyse cellulaire ou des réactifs d’extraction d’ARN dans un tube de 1,5 millilitre. Les étapes de fixation, de perméabilisation et de coloration permettent la visualisation des noyaux avec la solution DAPI. La coloration lactique, ascétique ou CN à l’aide des larves de Ferrate disséquées a révélé que les femelles présentent de l’hétérochromatine sous forme de point, mais que les mâles n’ont pas d’hétérochromatine.Les protocoles modifiés utilisant une colonne de spin ont amélioré la qualité de l’ARN produisant 900 à 1500 nanogrammes de produit avec un rapport de 260 à 200 de 1,9 à 2,1 et un rapport de 260 à 280 de 1,9 à 2,3. Le rapport de concentration d’ARN pour le protocole modifié était inférieur à 1,2, répondant aux exigences de qualité pour le séquençage de nouvelle génération. L’intégrité de l’ARN extrait des larves de ferrate déterminées par le sexe à l’aide du protocole modifié a été confirmée par électrophorèse par micropuce.Il a été confirmé que les bibliothèques préparées produisaient des lectures de score Q 30 élevées. Notre message contribue aux études fondamentales sur les insectes et aux outils nuisibles. De plus, nos protocoles ont le potentiel d’être utilisés pour évaluer l’efficacité des pesticides chimiques ou des microbes intercellulaires au cours de l’embryogenèse.

Research

JoVE Journal

Environment

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Double-stranded RNA Oral Delivery Methods to Induce RNA Interference in Phloem and Plant-sap-feeding Hemipteran Insects

Méthodes de prestation orale ARN double-brin d’induire l’interférence d’ARN dans le phloème et insectes hémiptères plante-sap-alimentation

Phloem and plant sap feeding insects invade the integrity of crops and fruits to retrieve nutrients, in the process damaging food crops. Hemipteran ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Le Test de Infection de plantes : Spray et induite par la plaie de l’Inoculation avec la plante pathogène Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

Récolte de venin toxines d’Assassin Bugs et autres insectes hétéroptères

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Generating Homo- and Heterografts Between Watermelon and Bottle Gourd for the Study of Cold-responsive MicroRNAs

Générant des Homo - et xénogreffe entre la pastèque et la gourde pour l’étude des microARN froid-sensible

MicroRNAs (miRNAs) are endogenous small non-coding RNAs of about 20 - 24 nt, known to play important roles in plant development and adaptation. There is ...