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•
07:26 min
April 1st, 2022
DOI :
10.3791/63834-v
Chapters
0:04
Introduction
0:48
Harvesting E11.5 Mouse Embryos
2:31
Dissecting Maxillary Processes from E11.5 Mouse Embryos
4:12
Isolating Whole Cell Protein Lysates from Mouse Maxillary Processes
5:06
Isolating Whole Cell Protein Lysates from Primary and/or Immortalized Mouse Embryonic Palatal Mesenchyme Cells
6:22
Results: Assessing Phosphorylated Protein Levels in Cell Lysates from Cultured Mouse Embryonic Palatal Mesenchyme Cells
6:59
Conclusion
Transcript
このプロトコルは、哺乳類の頭蓋顔面発達中に活性なリンタンパク質のダイナミクスおよび役割についてのより大きな洞察を得るために使用することができる。このプロトコールは、2つの生理学的に関連する文脈、マウス顔面プロセスおよび培養マウス胚性口蓋間葉系細胞からのタンパク質単離中の脱リン酸化の共通の障壁を克服する。すべての試薬と材料を氷上に保持しながら迅速に移動し、リン酸化タンパク質の完全性を維持するためにすべての溶解バッファーにホスファターゼ阻害剤を使用することが不可欠です。
まず、腹側
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Summary
このプロトコルは、解剖されたマウス胚の顔面プロセスまたは培養マウス胚口蓋間葉系細胞から全細胞タンパク質溶解物を単離し、その後のウェスタンブロッティングを実行してリン酸化タンパク質レベルを評価する方法を提示する。
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