Name: the caco-2 cell bioassay for measurement of food iron bioavailability
Uploaded: 2022-04-28T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Caco-2 Cell Bioassay for Measurement of Food Iron Bioavailability at JoVE.com

De auteur is zeer dankbaar voor de technische inspanningen van Yongpei Chang en Mary Bodis. De uiterst succesvolle toepassing van dit model op het gebied van voeding is een direct gevolg van hun expertise en aandacht voor detail. De ontwikkeling van dit model werd volledig gefinancierd door het Amerikaanse ministerie van Landbouw, Agricultural Research Service.

OPMERKING: Als een handig referentiepunt voor lezers, beschrijft de volgende methodologie de specifieke kweekomstandigheden en materialen die nodig zijn voor het meten van de biologische beschikbaarheid van Fe uit 20 experimentele monsters, plus de vereiste kwaliteitscontroles, in een run van de bioassay. Het verhogen van het aantal monsters boven deze capaciteit wordt niet aanbevolen vanwege de tijd die nodig is voor verschillende celkweek- en in vitro verteringsstappen binnen de bioassay.
<p class="jove_ti...

<ol>
	<li>Fairweather-Tait, S. J., Dainty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+stable+isotopes+to+assess+the+bioavailability+of+trace+elements:+a+review.">Use of stable isotopes to assess the bioavailability of trace elements: a review.</a> Food Additives Contaminants. 19 (10), 939-947 (2002).</li><li>Hadley, K. B., Johnson, L. K., Hunt, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+absorption+by+healthy+women+is+not+associated+with+either+serum+or+urinary+prohepcidin.">Iron absorption by healthy women is not associated with either serum or urinary prohepcidin.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 84 (1), 150-155 (2006).</li><li>Glahn, R. P., Cheng, Z., Giri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrinsic+labeling+of+staple+food+crops+with+isotopic+iron+does+not+consistently+result+in+full+equilibration:+revisiting+the+methodology.">Extrinsic labeling of staple food crops with isotopic iron does not consistently result in full equilibration: revisiting the methodology.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 63 (43), 9621-9628 (2015).</li><li>Consaul, J. R., Lee, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrinsic+tagging+in+iron+bioavailability+research:+a+critical+review.">Extrinsic tagging in iron bioavailability research: a critical review.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 31 (4), 684-689 (1983).</li><li>Jin, F., Cheng, Z., Rutzke, M. A., Welch, R. M., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrinsic+labeling+method+may+not+accurately+measure+Fe+absorption+from+cooked+pinto+beans+(Phaseolus+vulgaris):+comparison+of+extrinsic+and+intrinsic+labeling+of+beans.">Extrinsic labeling method may not accurately measure Fe absorption from cooked pinto beans (Phaseolus vulgaris): comparison of extrinsic and intrinsic labeling of beans.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 56 (16), 6881-6885 (2008).</li><li>Junqueira-Franco, M. V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+absorption+from+beans+with+different+contents+of+iron,+evaluated+by+stable+isotopes.">Iron absorption from beans with different contents of iron, evaluated by stable isotopes.</a> Clinical Nutrition ESPEN. 25, 121-125 (2018).</li><li>Petry, N., Egli, I., Zeder, C., Walczyk, T., Hurrell, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyphenols+and+phytic+acid+contribute+to+the+low+iron+bioavailability+from+common+beans+in+young+women.">Polyphenols and phytic acid contribute to the low iron bioavailability from common beans in young women.</a> Journal of Nutrition. 140 (11), 1977-1982 (2010).</li><li>Petry, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+iron+isotope+studies+in+Rwandese+women+indicate+that+the+common+bean+has+limited+potential+as+a+vehicle+for+iron+biofortification.">Stable iron isotope studies in Rwandese women indicate that the common bean has limited potential as a vehicle for iron biofortification.</a> Journal of Nutrition. 142 (3), 492-497 (2012).</li><li>Petry, N., Egli, I., Campion, B., Nielsen, E., Hurrell, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+reduction+of+phytate+in+common+bean+(Phaseolus+vulgaris+L.)+seeds+increases+iron+absorption+in+young+women.">Genetic reduction of phytate in common bean (Phaseolus vulgaris L.) seeds increases iron absorption in young women.</a> Journal of Nutrition. 143 (8), 1219-1224 (2013).</li><li>Petry, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phytic+acid+concentration+influences+iron+bioavailability+from+biofortified+beans+in+Rwandese+women+with+low+iron+status.">Phytic acid concentration influences iron bioavailability from biofortified beans in Rwandese women with low iron status.</a> Journal of Nutrition. 144 (11), 1681-1687 (2014).</li><li>Petry, N., Boy, E., Wirth, J. P., Hurrell, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+The+potential+of+the+common+bean+(Phaseolus+vulgaris)+as+a+vehicle+for+iron+biofortification.">Review: The potential of the common bean (Phaseolus vulgaris) as a vehicle for iron biofortification.</a> Nutrients. 7 (2), 1144-1173 (2015).</li><li>Petry, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Rwandese+women+with+low+iron+status,+iron+absorption+from+low-phytic+acid+beans+and+biofortified+beans+is+comparable,+but+low-phytic+acid+beans+cause+adverse+gastrointestinal+symptoms.">In Rwandese women with low iron status, iron absorption from low-phytic acid beans and biofortified beans is comparable, but low-phytic acid beans cause adverse gastrointestinal symptoms.</a> Journal of Nutrition. 146 (5), 970-975 (2016).</li><li>Donangelo, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+and+zinc+absorption+from+two+bean+(Phaseolus+vulgaris+L.)+genotypes+in+young+women.">Iron and zinc absorption from two bean (Phaseolus vulgaris L.) genotypes in young women.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 51 (17), 5137-5143 (2003).</li><li>Dellavalle, D. M., Glahn, R. P., Shaff, J. E., O'Brien, K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+absorption+from+an+intrinsically+labeled+lentil+meal+is+low+but+upregulated+in+women+with+poor+iron+status.">Iron absorption from an intrinsically labeled lentil meal is low but upregulated in women with poor iron status.</a> Journal of Nutrition. 145 (10), 2253-2257 (2015).</li><li>Miller, D. D., Schricker, B. R., Rasmussen, R. R., Van Campen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+method+for+estimation+of+iron+availability+from+meals.">An in vitro method for estimation of iron availability from meals.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 34 (10), 2248-2256 (1981).</li><li>Glahn, R. P., Wien, E. M., Van Campen, D. R., Miller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caco-2+cell+iron+uptake+from+meat+and+casein+digests+parallels+in+vivo+studies:+use+of+a+novel+in+vitro+method+for+rapid+estimation+of+iron+bioavailability.">Caco-2 cell iron uptake from meat and casein digests parallels in vivo studies: use of a novel in vitro method for rapid estimation of iron bioavailability.</a> Journal of Nutrition. 126 (1), 332-339 (1996).</li><li>Martini, L. A., Tchack, L., Wood, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+treatment+downregulates+DMT1+and+IREG1+mRNA+expression+in+Caco-2+cells.">Iron treatment downregulates DMT1 and IREG1 mRNA expression in Caco-2 cells.</a> Journal of Nutrition. 132 (4), 693-696 (2002).</li><li>Glahn, R. P., Wortley, G. M., South, P. K., Miller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+iron+uptake+by+phytic+acid,+tannic+acid,+and+ZnCl2:+studies+using+an+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+model.">Inhibition of iron uptake by phytic acid, tannic acid, and ZnCl2: studies using an in vitro digestion/Caco-2 cell model.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (2), 390-395 (2002).</li><li>Glahn, R. P., Lee, O. A., Yeung, A., Goldman, M. I., Miller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caco-2+cell+ferritin+formation+predicts+nonradiolabeled+food+iron+availability+in+an+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+culture+model.">Caco-2 cell ferritin formation predicts nonradiolabeled food iron availability in an in vitro digestion/Caco-2 cell culture model.</a> Journal of Nutrition. 128 (9), 1555-1561 (1998).</li><li>Yun, S., Habicht, J. P., Miller, D. D., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+culture+system+accurately+predicts+the+effects+of+ascorbic+acid+and+polyphenolic+compounds+on+iron+bioavailability+in+humans.">An in vitro digestion/Caco-2 cell culture system accurately predicts the effects of ascorbic acid and polyphenolic compounds on iron bioavailability in humans.</a> Journal of Nutrition. 134 (10), 2717-2721 (2004).</li><li>Pach&#243;n, H., Stoltzfus, R. J., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homogenization,+lyophilization+or+acid-extraction+of+meat+products+improves+iron+uptake+from+cereal-meat+product+combinations+in+an+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+model.">Homogenization, lyophilization or acid-extraction of meat products improves iron uptake from cereal-meat product combinations in an in vitro digestion/Caco-2 cell model.</a> British Journal of Nutrition. 101 (6), 816-821 (2009).</li><li>Tako, E., Bar, H., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+combined+application+of+the+Caco-2+cell+bioassay+coupled+with+in+vivo+(Gallus+gallus)+feeding+trial+represents+an+effective+approach+to+predicting+Fe+bioavailability+in+humans.">The combined application of the Caco-2 cell bioassay coupled with in vivo (Gallus gallus) feeding trial represents an effective approach to predicting Fe bioavailability in humans.</a> Nutrients. 8 (11), 732-757 (2016).</li><li>Engle-Stone, R., Yeung, A., Welch, R., Glahn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meat+and+ascorbic+acid+can+promote+Fe+availability+from+Fe-phytate+but+not+from+Fe-tannic+acid+complexes.">Meat and ascorbic acid can promote Fe availability from Fe-phytate but not from Fe-tannic acid complexes.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53 (26), 10276-10284 (2005).</li><li>Tako, E., Blair, M. W., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofortified+red+mottled+beans+(Phaseolus+vulgaris+L.)+in+a+maize+and+bean+diet+provide+more+bioavailable+iron+than+standard+red+mottled+beans:+studies+in+poultry+(Gallus+gallus)+and+an+in+vitro+digestion/Caco-2+model.">Biofortified red mottled beans (Phaseolus vulgaris L.) in a maize and bean diet provide more bioavailable iron than standard red mottled beans: studies in poultry (Gallus gallus) and an in vitro digestion/Caco-2 model.</a> Nutrition Journal. 10, 113 (2011).</li><li>Pach&#243;n, H., Stoltzfus, R. J., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+thigh,+chicken+liver,+and+iron-fortified+wheat+flour+increase+iron+uptake+in+an+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+model.">Chicken thigh, chicken liver, and iron-fortified wheat flour increase iron uptake in an in vitro digestion/Caco-2 cell model.</a> Nutrition Research. 28 (12), 851-858 (2008).</li><li>Beasley, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+engineering+of+bread+wheat+improves+grain+iron+concentration+and+bioavailability.">Metabolic engineering of bread wheat improves grain iron concentration and bioavailability.</a> Plant Biotechnology Journal. 17 (8), 1514-1526 (2019).</li><li>Zhu, L., Glahn, R. P., Nelson, D., Miller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+soluble+ferric+pyrophosphate+to+common+iron+salts+and+chelates+as+sources+of+bioavailable+iron+in+a+Caco-2+cell+culture+model.">Comparing soluble ferric pyrophosphate to common iron salts and chelates as sources of bioavailable iron in a Caco-2 cell culture model.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (11), 5014-5019 (2009).</li><li>Wortley, G., Leusner, S., Good, C., Gugger, E., Glahn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+availability+of+a+fortified+processed+wheat+cereal:+a+comparison+of+fourteen+iron+forms+using+an+in+vitro+digestion/human+colonic+adenocarcinoma+(Caco-2)+cell+model.">Iron availability of a fortified processed wheat cereal: a comparison of fourteen iron forms using an in vitro digestion/human colonic adenocarcinoma (Caco-2) cell model.</a> British Journal of Nutrition. 93 (1), 65-71 (2005).</li><li>Jumarie, C., Malo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkaline+phosphatase+and+peptidase+activities+in+Caco-2+cells:+differential+response+to+triiodothyronine.">Alkaline phosphatase and peptidase activities in Caco-2 cells: differential response to triiodothyronine.</a> In Vitro Cellular and Developmental Biology - Animal. 30 (11), 753-760 (1994).</li><li>Engle, M. J., Goetz, G. S., Alpers, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caco-2+cells+express+a+combination+of+colonocyte+and+enterocyte+phenotypes.">Caco-2 cells express a combination of colonocyte and enterocyte phenotypes.</a> Journal of Cellular Physiology. 174 (3), 362-369 (1998).</li><li>Ferruzza, S., Rossi, C., Sambuy, Y., Scarino, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-reduced+and+serum-free+media+for+differentiation+of+Caco-2+cells.">Serum-reduced and serum-free media for differentiation of Caco-2 cells.</a> Alternatives to Animal Experimentation. 30 (2), 159-168 (2013).</li><li>Wiesinger, J. A., Cichy, K. A., Tako, E., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fast+cooking+and+enhanced+iron+bioavailability+properties+of+the+Manteca+yellow+bean+(Phaseolus+vulgaris+L).">The fast cooking and enhanced iron bioavailability properties of the Manteca yellow bean (Phaseolus vulgaris L).</a> Nutrients. 10 (11), 1609 (2018).</li><li>Wiesinger, J. A., Cichy, K. A., Hooper, S. D., Hart, J. J., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+white+or+yellow+dry+beans+(Phaseolus+vulgaris+L.)+into+a+heat+treated+flour+enhances+the+iron+bioavailability+of+bean-based+pastas.">Processing white or yellow dry beans (Phaseolus vulgaris L.) into a heat treated flour enhances the iron bioavailability of bean-based pastas.</a> Journal of Functional Foods. 71, 104018 (2020).</li></ol>

Sinds de oprichting zijn er talloze studies gepubliceerd die deze methode beschrijven voor de Caco-2 celbioassay. De basisvoorwaarden zijn sinds de eerste publicatie in 1998 relatief ongewijzigd gebleven18. In de afgelopen 20 jaar zijn echter tal van technische details verfijnd en gestandaardiseerd om een ongekende consistentie in de reactie van de bioassay te verkrijgen. Zorgvuldige en nauwkeurige naleving van de celkweek en in vitro verteringsvoorwaarden zijn de sleutel tot de consisten...

Om de onderzoeksbehoefte en het voordeel van de Caco-2 celbioassay voor fe biologische beschikbaarheid volledig te begrijpen, moet men eerst de benaderingen begrijpen die vóór de komst van dit model van kracht waren. Het meten van de biologische beschikbaarheid van fe fe uit een levensmiddel of maaltijd in vivo is een uitdagende taak, vooral wanneer combinaties van voedsel moeten worden beoordeeld in een maaltijd of dieet. Isotopische etikettering is de afgelopen 50 jaar de meest gebruikelijke benadering geweest voor het meten van de biologische beschikbaarheid van fe1. Isotopische etikettering wordt gebruikt voor studies met één maaltijd en meerdere maaltijden en is onpraktisch voor langetermijnstudies. Stabiele isotopen van Fe zoals 57Fe en 58Fe worden het meest gebruikt; er zijn echter studies uitgevoerd met radio-isotopen zoals 59Fe, waarbij gebruik wordt gemaakt van het tellen van het hele lichaam2. Voor plantaardig voedsel is isotopische etikettering gedaan via extrinsieke of intrinsieke etikettering. Voor extrinsieke etikettering wordt een bekende hoeveelheid isotoop aan het voedsel of de maaltijd toegevoegd. Het voedsel wordt vervolgens gemengd en een evenwichtsperiode van 15-30 minuten wordt opgenomen in het protocol voorafgaand aan de consumptie. Hydroponische cultuur - het toevoegen van de isotoop aan de voedingsoplossing om het in de plant op te nemen terwijl het groeit en zich ontwikkelt - is vereist voor de intrinsieke etikettering van plantaardig voedsel. De voor- en nadelen van elke aanpak worden hieronder besproken.
Extrinsieke isotopische etikettering In het begin tot het midden van de jaren 1970 werd de menselijke Fe-absorptie bestudeerd door extrinsieke etikettering van Fe in voedingsmiddelen, waarbij een bekende hoeveelheid isotoop wordt toegevoegd aan de bekende hoeveelheid Fe in het voedsel of de maaltijd, gemengd en in evenwicht gebracht gedurende 15-30 minuten vóór de metingen. Er zijn verschillende hoeveelheden extrinsieke isotopen gebruikt, variërend van 1% tot 100% van de intrinsieke Fe, maar meestal in het bereik van 7% -30% 3. Extrinsieke etikettering is gebaseerd op de veronderstelling dat de extrinsieke Fe-isotoop volledig in evenwicht wordt gebracht met de intrinsieke Fe van het voedsel of de maaltijd. Extrinsieke isotoopabsorptie wordt vervolgens gemeten en elk atoom van de extrinsieke isotoop wordt berekend om een bepaald aantal intrinsieke Fe-atomen te vertegenwoordigen. Deze berekening is gebaseerd op de relatieve molaire bedragen. In 1983 werden meerdere validatiestudies van de techniek samengevat in een overzichtsartikel4. Validatie van de techniek werd gedaan door tegelijkertijd de procentuele absorptie van het extrinsieke isotopische label te vergelijken met de procentuele absorptie van een intrinsiek isotopisch label. Een verhouding van de extrinsieke tot intrinsieke absorptie dicht bij 1 suggereert dus dat elke pool van Fe gelijkelijk werd geabsorbeerd. In die tijd werd een verhouding dicht bij 1 ook beschouwd als een evenwicht tussen de extrinsieke isotoop en de intrinsieke Fe van het voedsel of de maaltijd. Verhoudingen van extrinsieke tot intrinsieke Fe-absorptie varieerden van gemiddelde waarden van 0,40 tot 1,62, met een gemiddelde (±SD) ratio van 1,08 ± 0,14 in 63 vergelijkingen. Het is belangrijk op te merken dat in alle studies die in deze review worden samengevat, geen enkele direct de equilibratie van het extrinsieke label met de intrinsieke Fe heeft getest. Samenvattend concludeerden de auteurs van de review het volgende:
"De extrinsieke tagtechniek is geldig gebleken voor verschillende voedingsmiddelen onder bepaalde experimentele omstandigheden. Maar deze methode kan nog niet als bewezen worden beschouwd met betrekking tot alle soorten voedsel. De extrinsieke tagmethode is niet geschikt voor het controleren van de ijzerabsorptie van een dieet dat onoplosbare vormen van ijzer bevat. De validiteit van deze techniek is gebaseerd op de basisaanname dat de extrinsieke tag volledig wordt uitgewisseld met alle endogene nonheme voedselijzers. Op dit moment is niet bekend hoe volledig de verschillende vormen van nonheme ijzer worden gelabeld door een extrinsieke tag. Dit is belangrijk in het licht van studies die hebben gesuggereerd dat ijzerremmers de extrinsieke tag anders kunnen beïnvloeden dan sommige vormen van nonheme ijzer in voedingsmiddelen. Onderzoek naar voedselfactoren die een volledige isotopische uitwisseling kunnen belemmeren, is schaars. De interpretatie van gegevens over de biologische beschikbaarheid van extrinsieke tag-onderzoek vereist dus dat rekening wordt gehouden met remmers van uitwisseling die aanwezig kunnen zijn in het voedsel of dieet. "
Sinds 1983 zijn er slechts twee studies gepubliceerd die de nauwkeurigheid van extrinsieke etikettering van Fe 3,5 evalueerden. In beide studies werd de equilibratie van een extrinsiek isotopisch etiket direct vergeleken met de intrinsieke Fe van de voedingsmiddelen, die in deze studies basisvoedselgewassen waren. Witte, rode en zwarte bonenvariëteiten werden getest, samen met linzen en maïs. Met behulp van gevestigde in vitro verteringstechnieken en de meting van fe-oplosbaarheid en neerslag, toonden beide studies aan dat extrinsieke isotopische etikettering niet consequent resulteert in volledige evenwicht, met bewijs dat voor sommige bonenvariëteiten de misequilibratie zeer hoog kan zijn, afhankelijk van de hoeveelheid extrinsieke isotoop en zaadlaagkleur3. Ondanks de conclusies van het overzichtsartikel van 1983, gingen extrinsieke etiketteringsstudies van bonen doormet 6,7,8,9,10,11,12. Geen van deze studies omvatte het testen van de equilibratie van het extrinsieke label met de intrinsieke Fe.
Intrinsieke etikettering Intrinsieke etikettering van plantaardig voedsel voor de beoordeling van de biologische beschikbaarheid van fe elimineert de nauwkeurigheidsproblemen van equilibratie bij extrinsieke etikettering. Deze aanpak kan echter geen grote hoeveelheden materiaal opleveren vanwege de behoefte aan kasruimte voor hydrocultuur. Hydrocultuur is arbeidsintensief, vereist een grote hoeveelheid dure stabiele isotoop en resulteert vaak in plantengroei die verschilt in termen van opbrengst en zaad Fe-concentratie. Vanwege de kosten is intrinsieke etikettering alleen geschikt voor kleinschalige studies gericht op het begrijpen van mechanismen die ten grondslag liggen aan Fe-opname of factoren die de opname van Fe uit voedingsmiddelen beïnvloeden. De productie van 1-2 kg van een basisvoedselgewas kost ongeveer $ 20.000 - $ 30.000 voor materialen alleen, afhankelijk van de isotoop- en hydrocultuurbenadering13,14.
Gezien de uitdagingen die gepaard gaan met isotopische etikettering, probeerden onderzoekers in vitro benaderingen te ontwikkelen. Vroege methoden gebruikten gesimuleerd maag- en darmvoedsel, gekoppeld aan de meting van fe-oplosbaarheid of fe-dialyseerbaarheid als een schatting van de biologische beschikbaarheid15. Dergelijke studies toonden al snel aan dat fe-dialyseerbaarheid geen consistente maat was voor de biologische beschikbaarheid, omdat Fe oplosbaar kan zijn, nauw gebonden aan verbindingen en daarom niet uitwisselbaar, wat leidt tot de overschatting van de biologische beschikbaarheid. Om deze problemen aan te pakken, evolueerde de methodologie om een menselijke darmcellijn te gebruiken, waardoor een levende component werd toegevoegd en de meting van Fe-opnamemogelijk werd gemaakt 16. De menselijke darmcellen - Caco-2-cellen - zijn afkomstig van een humaan darmcarcinoom en zijn op grote schaal gebruikt in voedingsopnamestudies. Deze cellijn is nuttig omdat de cellen in cultuur differentiëren tot enterocyten die op dezelfde manier functioneren als de borstelrandcellen van de dunne darm. Studies hebben aangetoond dat Caco-2-cellen de juiste transporters en respons op factoren vertonen die fe-opnamebeïnvloeden 17,18.
De eerste studies, waarbij radio-isotopen werden gebruikt om fe-opname in Caco-2-cellen te meten, werden verfijnd om fe-opname te meten op basis van caco-2-celferritinevorming. Caco-2-celferritinemeting verbeterde de monsterdoorvoer en elimineerde problemen met de behandeling van radio-isotopen en de equilibratie van extrinsieke Fe met intrinsieke Fe19,20. Meting van fe-opname via ferritinevorming stelde onderzoekers in staat om een breed scala aan voedingsmiddelen te bestuderen, waaronder complexe maaltijden21. Gesimuleerde (in vitro) spijsvertering in combinatie met Caco-2 cel Fe opname zorgde dus voor een betere fysiologische beoordeling van Fe opname uit voedingsmiddelen. Het is belangrijk op te merken dat dit model voornamelijk relatieve verschillen in fe biologische beschikbaarheid bepaalt. Zoals veel nuttige cellijnen, hebben Caco-2-cellen ook variabiliteit in responsiviteit aangetoond, maar hebben ze consistente relatieve verschillen in Fe-opname tussen voedingsmiddelen behouden. Een goede techniek en zorgvuldige aandacht voor detail kunnen de consistente reactie op celferritinevorming in Caco-2-cellen verbeteren.
Het in vitro digestie/Caco-2 celmodel staat ook bekend als Caco-2 cel bioassay. Deze test is grondig gevalideerd via directe vergelijking met studies bij mens en dier22. Naast de directe parallelle vergelijking van de bioassay met menselijke werkzaamheidsproeven, is aangetoond dat dit model een kwalitatief vergelijkbare respons vertoont in Fe-opname als die van mensen 18,19,23. Daarom, als een in vitro benadering, rechtvaardigt de Caco-2 cel bioassay een hoge geloofwaardigheid als een screeningsinstrument voor het evalueren van Fe-voeding uit voedingsmiddelen. Het is op grote schaal toegepast op tal van voedingsmiddelen en voedingsmiddelen 21,24,25,26,27,28.
Sinds de oprichting in 1998 heeft de Caco-2-celbioassay het gebied van Fe-voeding vooruitgeholpen, omdat het heeft geholpen bij het identificeren van factoren die de intestinale Fe-opname beïnvloeden. Daarbij heeft dit model onderzoeksdoelstellingen ontwikkeld en verfijnd voor meer definitieve en minder kostbare menselijke studies. Men zou ook kunnen stellen dat het gebruik van het model de noodzaak van sommige menselijke proeven tenietdoet.
Samenvattend kan de relatieve levering van Fe uit een voedingsmiddel of maaltijd worden gemeten met de Caco-2 celbioassay. Ongeacht de hoeveelheid Fe in de testmaaltijd, definieert de bioassay de relatieve hoeveelheid Fe die in de enterocyt wordt opgenomen - de eerste stap van het absorptieproces. Dit is de belangrijkste stap in het definiëren van de biologische beschikbaarheid van Fe, omdat het meestal het doel is om te meten met de bedoeling om de voedingskwaliteit van Fe in een voedingsmiddel te verbeteren of op zijn minst te bewaken. Aangezien de ijzerstatus wordt gereguleerd door absorptie, en dus fe-opname wordt gereguleerd bij fe-deficiënte individuen om aan de voedingsbehoeften te voldoen, zijn de standaardvoorwaarden van het model zo ontworpen dat fe-opname door de cellen maximaal is. Op deze manier biedt de bioassay een echte maat voor het potentieel van het voedsel om Fe te leveren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 M HCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A508-4 Hydrochloric Acid TraceMetal Grade</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 megaohm water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Also known as distilled, deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3&#8242;,5-Triiodo-L-thyronine sodium salt</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>T6397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3506</td>
			<td>Use for bioassay experiments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ascorbic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>A0278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bile extract</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>B8631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caco-2 cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>HTB-37</td>
			<td>HTB-37 is a common variety.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flasks T225</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>&#160;353138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flasks T25</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flasks T75</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chelex-100</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Inc</td>
			<td>142832</td>
			<td>Known as the weak cation exchange resin in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis membrane</td>
			<td>Spectrum Laboratories</td>
			<td>Spectra/Por 7 Pretreated RC Dialysis Tubing 15,000 MWCO</td>
			<td>Spectra/Por 7 Pretreated RC Dialysis Tubing 15,000 MWCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12100046</td>
			<td>DMEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epidermal growth factor</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>E4127-5X.1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferritin ELISA Assay Kit</td>
			<td>Eagle Biosciences</td>
			<td>FRR31-K01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>S12450</td>
			<td>Optima</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone-Water Soluble</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>H0396</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insert ring</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>not sold</td>
			<td>Transwell, for 6 well plate, without membrane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insulin</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>I2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>large column</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>KT420400-1530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum Essential Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>41500034</td>
			<td>MEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pancreatin</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>P1750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PIPES disodium salt</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid) disodium salt P3768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>porcine pepsin</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>P6887 or (P7012-25G Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein assay kit</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Inc</td>
			<td>Bio-Rad DC protein assay kit 500-0116</td>
			<td>Measurement of Caco-2 cell protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicone o rings</td>
			<td>Web Seal, Inc Rochester NY</td>
			<td>2-215S500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium bicarbonate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium selenite</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>S5261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZellShield</td>
			<td>Minerva Biolabs</td>
			<td>13-0050</td>
			<td>Use at 1% as antibiotic/antimycotic ordered through Thomas Scientific</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the caco-2 cell bioassay for measurement of food iron bioavailability

Kennis van de biologische beschikbaarheid van Fe is van cruciaal belang voor de beoordeling van de voedingskwaliteit van Fe in voedingsmiddelen. In vivo meting van de biologische beschikbaarheid van Fe wordt beperkt door de kosten, doorvoer en de kanttekeningen die inherent zijn aan isotopische etikettering van het voedsel Fe. Er bestaat dus een kritieke behoefte aan een aanpak met een hoge doorvoer en kosteneffectief. De Caco-2 cel bioassay is ontwikkeld om aan deze behoefte te voldoen. De Caco-2 celbioassay voor fe biobeschikbaarheid maakt gebruik van gesimuleerde maag- en darmvertering in combinatie met cultuur van een menselijke intestinale epitheelcellijn die bekend staat als Caco-2. In Caco-2-cellen stimuleert Fe-opname de intracellulaire vorming van ferritine, een Fe-opslageiwit dat gemakkelijk kan worden gemeten door enzymgebonden immunosorbent assay (ELISA). Ferritine vormt in verhouding tot fe opname; dus, door de productie van Caco-2-celferritine te meten, kan men de intestinale Fe-opname van gesimuleerde voedselvertelling in de enterocyt beoordelen. 
Via deze aanpak repliceert het model de belangrijkste eerste stap die de biologische beschikbaarheid van voedsel bepaalt. Sinds de oprichting in 1998 is deze modelbenadering rigoureus vergeleken met factoren waarvan bekend is dat ze de biologische beschikbaarheid van menselijke fe beïnvloeden. Bovendien is het toegepast in parallelle studies, met drie menselijke werkzaamheidsstudies die fe biofortified gewassen evalueren. In alle gevallen voorspelde de bioassay correct de relatieve hoeveelheden fe biologische beschikbaarheid van de factoren, gewassen en het algehele dieet. Dit artikel biedt gedetailleerde methoden over Caco-2 celcultuur in combinatie met het in vitro verteringsproces en cel ferritine ELISA die nodig is om de Caco-2 cel bioassay voor Fe biologische beschikbaarheid uit te voeren.

Identificatie en meting van de biologische beschikbaarheid van fe in basisvoedselgewassen Een van de belangrijkste redenen voor het ontwikkelen van dit model was om factoren te identificeren die van invloed zijn op de biologische beschikbaarheid van fe in basisvoedselgewassen en een hulpmiddel te bieden voor plantenveredelaars waarmee ze rassen met verbeterde fe-biologische beschikbaarheid kunnen identificeren en ontwikkelen. De gewone boon (Phaseolus vulgaris) is wereldwijd doelwit geweest a...

Watch this Scientific Journal Video about The Caco-2 Cell Bioassay for Measurement of Food Iron Bioavailability at JoVE.com

The Caco-2 Cell Bioassay for Measurement of Food Iron Bioavailability

De Caco-2 cel bioassay voor ijzer (Fe) biologische beschikbaarheid vertegenwoordigt een kosteneffectieve en veelzijdige aanpak om fe biologische beschikbaarheid te beoordelen van voedingsmiddelen, voedingsproducten, supplementen, maaltijden en zelfs dieetregimes. Grondig gevalideerd voor menselijke studies, vertegenwoordigt het de state-of-the-art voor studies van fe biologische beschikbaarheid.

De Caco-2 Cell Bioassay voor het meten van de biologische beschikbaarheid van ijzer in levensmiddelen

Knowledge of Fe bioavailability is critical to the assessment of the nutritional quality of Fe in foods. In vivo measurement of Fe bioavailability is ...

Kennis van de biologische beschikbaarheid van ijzer is essentieel voor de beoordeling van de voedingskwaliteit van ijzer in voedingsmiddelen. De Caco-2 cel bioassay is ontwikkeld om aan deze kritische onderzoeksbehoefte te voldoen. Deze bioassay is een kosteneffectieve en high throughput-benadering voor het bepalen van de biologische beschikbaarheid van ijzer uit verschillende diëten.Het kan worden gebruikt om factoren te karakteriseren die van invloed zijn op de biologische beschikbaarheid van ijzer en het verfijnen van in vivo studiedoelstellingen. Yongpei Chang, een onderzoekstechnicus van mijn laboratorium, demonstreert de procedure. Om te beginnen kweek je de Caco-2-cellen gedurende 7 tot 10 dagen en zodra er voldoende cellen beschikbaar zijn, zaai je de cellen in een niet met collageen gecoate kolf.Laat de cellen vervolgens zeven dagen in kolven groeien en verander het medium op een andere dag. Gebruik op de zevende dag de cellen voor het zaaien van de multi-well platen. Zaai de Caco-2 cellen met een dichtheid van 50.000 cellen per vierkante centimeter in zes goed collageen gecoate platen.Voeg DMEM aangevuld met HEPES, FBS en 1% antibiotische antimycotische oplossing toe aan de platen. Incubeer vervolgens gedurende 12 dagen bij 37 graden Celsius met 5% koolstofdioxide. Blijf het medium minstens om de twee dagen veranderen volgens een consistent dagelijks schema.Bereid vervolgens minimaal essentieel medium aangevuld met pijpen, antibiotische antimycotische oplossing, hydrocortison, insuline, selenium, triiodothyronine en epidermale groeifactor. Vervang het kweekmedium door twee milliliter van dit geprepareerde medium. Vervang het de volgende dag door een milliliter van het minimaal essentiële medium bij pH 7.Maak nu een gesteriliseerde insertring met behulp van een siliconen O-ring uitgerust met een zuur gewassen dialysemembraan. Verwijder op de 13e dag de inzetstukken uit de koelkast, giet af en vervang het water door 0,5 molair zoutzuur. Laat het minstens een uur voor gebruik in een laminaire stromingskap zitten.Giet vervolgens 0,5 molair zoutzuur af en spoel af met steriel water van 18 megaohm. Bewaren in steriel water van 18 megaohm in een laminaire stromingskap tot het klaar is voor gebruik. Maak een tweekamersysteem door een ring in de putten te steken die de cellen van de zes putplaat bevatten en vervolgens de plaat met de inzetstukken terug te brengen naar de incubator.Voeg voor het bereiden van de pancreatine-galoplossing 87,5 gram zwakke kationenuitwisselingshars toe aan de opgeloste pancreatine en galextract en gebruik een shaker gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur om de componenten te mengen. Giet de drijfmest in een grote kolom en giet de kolom af. Centrifugeer vervolgens het kolomontgrendeling.Weeg het monster af in een steriele centrifugebuis van 50 milliliter. Pas de pH aan met zoutzuur en voeg 10 milliliter fysiologische zoutoplossing toe die 140 millimol natriumchloride en vijf millimolair kaliumchloride bevat. Stel vervolgens het maagvergistingsproces in door 0,5 milliliter van de bereide pepsine-oplossing van het varkens aan het monster toe te voegen.Incubeer vervolgens op een schommelende shaker op een zachte stand gedurende een uur bij 37 graden Celsius en start het intestinale verteringsproces van elk monster door de pH aan te passen aan 5,5 tot 6,0 met 1,0 molair natriumbicarbonaat. Voeg 2,5 milliliter van de pancreasgaloplossing toe aan elke monsterbuis en pas de pH aan op 6,9 tot 7,0 met 1,0 molair natriumbicarbonaat. Gebruik de oplossing die 140 millimol natriumchloride en vijf millimolair kaliumchloride bevat, voeg vloeistoffen toe zodat elke buis precies 15 gram totaal materiaal bevat.Breng nu 1,5 milliliter van elke darmvertering over naar de bovenste kamer van de put met de Caco-2-cellen van de zes putkweekplaat. Vervang het plaatdeksel en incubeer bij 37 graden Celsius in 5% koolstofdioxide op een schommelende shaker met zes oscillaties per minuut gedurende twee uur. Verwijder de insteekring met de digest.Voeg vervolgens een milliliter minimaal essentieel medium bij pH 7 toe aan elke put en houd de plaat 22 uur terug in de incubator. Verwijder nu het celkweekmedium en voeg twee milliliter water van 18 megaohm toe aan de celmonolaag. Breng het over naar een sonicator en oogst het hele cellysaat in microcentrifugebuizen voor celeiwit- en celferritineanalyses.De mantecavariëteiten vertoonden een hogere ijzerbeschikbaarheid ten opzichte van referentiecontroles van de wit- en rood gemodelleerde kleurklassen gedurende twee opeenvolgende oogstjaren. De biologische beschikbaarheid van ijzer van witte en gele bonenvariëteiten vertoonde een toename na verwerking tot meel. De biologische beschikbaarheid van ijzer toonde echter een afname van de cranberry-, rode nier- en zwarte variëteiten.Een goede Caco-2 cel monolaag kweek is essentieel voor het succesvolle gebruik van deze bioassay. Nauwkeurige aandacht voor de details van de groei en het onderhoud is de sleutel tot de consistente respons van de bioassay. Dit model ontkent de nadelen en hoge kosten van andere benaderingen en stelt onderzoekers in staat om mechanismen te identificeren en factoren die de biologische beschikbaarheid van ijzer remmen en bevorderen, vollediger te evalueren.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Biology

Unit 1

Pharmacokinetics

SCIENTISTS IN ACTION

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

Etikettering hESC &#39;s en hMSCs met ijzeroxide nanodeeltjes voor niet-invasieve in vivo Tracking met MR Imaging

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative ...

Human In-Vivo Bioassay for the Tissue-Specific Measurement of Nociceptive and Inflammatory Mediators

Mens in-vivo Bioassay voor de weefsel-specifieke meting van nociceptieve en ontstekingsmediatoren

This in-vivo human bioassay can be used to study human volunteers and patients. Samples are collected from pertinent tissue sites such as the skin via ...

Modified Annexin V/Propidium Iodide Apoptosis Assay For Accurate Assessment of Cell Death

Modified Annexine V / propidiumjodide Apoptosis Assay Voor een nauwkeurige beoordeling van Dood van de Cel

Studies of cellular apoptosis have been significantly impacted since the introduction of flow cytometry-based methods. Propidium iodide (PI) is widely ...

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

Detectie van Levende<em&gt; Escherichia coli</em&gt; O157: H7 cellen door PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

Meting van Heme Synthesis Levels in zoogdiercellen

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

Bone Geconditioneerd Medium: Voorbereiding en Bioassay

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Using Caco-2 Cells to Study Lipid Transport by the Intestine

Met behulp van Caco-2 cellen te Lipid Transport studie van de Darm

Studies of dietary fat absorption are generally conducted by using an animal model equipped with a lymph cannula. Although this animal model is widely ...

A Simple Bioassay for the Evaluation of Vascular Endothelial Growth Factors

Een eenvoudige bioassays voor de beoordeling van de vasculaire endotheliale groeifactoren

The analysis of receptor tyrosine kinases and their interacting ligands involved in vascular biology is often challenging due to the constitutive ...

Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

Methoden om te studeren epitheliale Transport Protein functie en de expressie in Inheemse darm en Caco-2-cellen gekweekt in 3D

The intestinal epithelium has important transport and barrier functions that play key roles in normal physiological functions of the body while providing ...