Name: the caco-2 cell bioassay for measurement of food iron bioavailability
Uploaded: 2022-04-28T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Caco-2 Cell Bioassay for Measurement of Food Iron Bioavailability at JoVE.com

המחבר אסיר תודה על המאמצים הטכניים של יונגפיי צ'אנג ומרי בודיס. היישום המוצלח ביותר של מודל זה בתחום התזונה הוא תוצאה ישירה של מומחיותם ותשומת הלב לפרטים הקטנים. פיתוח מודל זה מומן כולו על ידי משרד החקלאות של ארצות הברית, שירות המחקר החקלאי.

הערה: כנקודת התייחסות נוחה לקוראים, המתודולוגיה הבאה מתארת את תנאי התרבות והחומרים הספציפיים הנדרשים למדידת הזמינות הביולוגית של Fe מ-20 דגימות ניסיוניות, בתוספת בקרות האיכות הנדרשות, בהרצת הבדיקה הביולוגית. הגדלת מספר הדגימות מעבר לקיבולת זו אינה מומלצת בשל הזמן הנדרש לתרביות תאים שונות ?...

<ol>
	<li>Fairweather-Tait, S. J., Dainty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+stable+isotopes+to+assess+the+bioavailability+of+trace+elements:+a+review.">Use of stable isotopes to assess the bioavailability of trace elements: a review.</a> Food Additives Contaminants. 19 (10), 939-947 (2002).</li><li>Hadley, K. B., Johnson, L. K., Hunt, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+absorption+by+healthy+women+is+not+associated+with+either+serum+or+urinary+prohepcidin.">Iron absorption by healthy women is not associated with either serum or urinary prohepcidin.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 84 (1), 150-155 (2006).</li><li>Glahn, R. P., Cheng, Z., Giri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrinsic+labeling+of+staple+food+crops+with+isotopic+iron+does+not+consistently+result+in+full+equilibration:+revisiting+the+methodology.">Extrinsic labeling of staple food crops with isotopic iron does not consistently result in full equilibration: revisiting the methodology.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 63 (43), 9621-9628 (2015).</li><li>Consaul, J. R., Lee, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrinsic+tagging+in+iron+bioavailability+research:+a+critical+review.">Extrinsic tagging in iron bioavailability research: a critical review.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 31 (4), 684-689 (1983).</li><li>Jin, F., Cheng, Z., Rutzke, M. A., Welch, R. M., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrinsic+labeling+method+may+not+accurately+measure+Fe+absorption+from+cooked+pinto+beans+(Phaseolus+vulgaris):+comparison+of+extrinsic+and+intrinsic+labeling+of+beans.">Extrinsic labeling method may not accurately measure Fe absorption from cooked pinto beans (Phaseolus vulgaris): comparison of extrinsic and intrinsic labeling of beans.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 56 (16), 6881-6885 (2008).</li><li>Junqueira-Franco, M. V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+absorption+from+beans+with+different+contents+of+iron,+evaluated+by+stable+isotopes.">Iron absorption from beans with different contents of iron, evaluated by stable isotopes.</a> Clinical Nutrition ESPEN. 25, 121-125 (2018).</li><li>Petry, N., Egli, I., Zeder, C., Walczyk, T., Hurrell, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyphenols+and+phytic+acid+contribute+to+the+low+iron+bioavailability+from+common+beans+in+young+women.">Polyphenols and phytic acid contribute to the low iron bioavailability from common beans in young women.</a> Journal of Nutrition. 140 (11), 1977-1982 (2010).</li><li>Petry, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+iron+isotope+studies+in+Rwandese+women+indicate+that+the+common+bean+has+limited+potential+as+a+vehicle+for+iron+biofortification.">Stable iron isotope studies in Rwandese women indicate that the common bean has limited potential as a vehicle for iron biofortification.</a> Journal of Nutrition. 142 (3), 492-497 (2012).</li><li>Petry, N., Egli, I., Campion, B., Nielsen, E., Hurrell, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+reduction+of+phytate+in+common+bean+(Phaseolus+vulgaris+L.)+seeds+increases+iron+absorption+in+young+women.">Genetic reduction of phytate in common bean (Phaseolus vulgaris L.) seeds increases iron absorption in young women.</a> Journal of Nutrition. 143 (8), 1219-1224 (2013).</li><li>Petry, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phytic+acid+concentration+influences+iron+bioavailability+from+biofortified+beans+in+Rwandese+women+with+low+iron+status.">Phytic acid concentration influences iron bioavailability from biofortified beans in Rwandese women with low iron status.</a> Journal of Nutrition. 144 (11), 1681-1687 (2014).</li><li>Petry, N., Boy, E., Wirth, J. P., Hurrell, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+The+potential+of+the+common+bean+(Phaseolus+vulgaris)+as+a+vehicle+for+iron+biofortification.">Review: The potential of the common bean (Phaseolus vulgaris) as a vehicle for iron biofortification.</a> Nutrients. 7 (2), 1144-1173 (2015).</li><li>Petry, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Rwandese+women+with+low+iron+status,+iron+absorption+from+low-phytic+acid+beans+and+biofortified+beans+is+comparable,+but+low-phytic+acid+beans+cause+adverse+gastrointestinal+symptoms.">In Rwandese women with low iron status, iron absorption from low-phytic acid beans and biofortified beans is comparable, but low-phytic acid beans cause adverse gastrointestinal symptoms.</a> Journal of Nutrition. 146 (5), 970-975 (2016).</li><li>Donangelo, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+and+zinc+absorption+from+two+bean+(Phaseolus+vulgaris+L.)+genotypes+in+young+women.">Iron and zinc absorption from two bean (Phaseolus vulgaris L.) genotypes in young women.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 51 (17), 5137-5143 (2003).</li><li>Dellavalle, D. M., Glahn, R. P., Shaff, J. E., O'Brien, K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+absorption+from+an+intrinsically+labeled+lentil+meal+is+low+but+upregulated+in+women+with+poor+iron+status.">Iron absorption from an intrinsically labeled lentil meal is low but upregulated in women with poor iron status.</a> Journal of Nutrition. 145 (10), 2253-2257 (2015).</li><li>Miller, D. D., Schricker, B. R., Rasmussen, R. R., Van Campen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+method+for+estimation+of+iron+availability+from+meals.">An in vitro method for estimation of iron availability from meals.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 34 (10), 2248-2256 (1981).</li><li>Glahn, R. P., Wien, E. M., Van Campen, D. R., Miller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caco-2+cell+iron+uptake+from+meat+and+casein+digests+parallels+in+vivo+studies:+use+of+a+novel+in+vitro+method+for+rapid+estimation+of+iron+bioavailability.">Caco-2 cell iron uptake from meat and casein digests parallels in vivo studies: use of a novel in vitro method for rapid estimation of iron bioavailability.</a> Journal of Nutrition. 126 (1), 332-339 (1996).</li><li>Martini, L. A., Tchack, L., Wood, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+treatment+downregulates+DMT1+and+IREG1+mRNA+expression+in+Caco-2+cells.">Iron treatment downregulates DMT1 and IREG1 mRNA expression in Caco-2 cells.</a> Journal of Nutrition. 132 (4), 693-696 (2002).</li><li>Glahn, R. P., Wortley, G. M., South, P. K., Miller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+iron+uptake+by+phytic+acid,+tannic+acid,+and+ZnCl2:+studies+using+an+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+model.">Inhibition of iron uptake by phytic acid, tannic acid, and ZnCl2: studies using an in vitro digestion/Caco-2 cell model.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (2), 390-395 (2002).</li><li>Glahn, R. P., Lee, O. A., Yeung, A., Goldman, M. I., Miller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caco-2+cell+ferritin+formation+predicts+nonradiolabeled+food+iron+availability+in+an+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+culture+model.">Caco-2 cell ferritin formation predicts nonradiolabeled food iron availability in an in vitro digestion/Caco-2 cell culture model.</a> Journal of Nutrition. 128 (9), 1555-1561 (1998).</li><li>Yun, S., Habicht, J. P., Miller, D. D., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+culture+system+accurately+predicts+the+effects+of+ascorbic+acid+and+polyphenolic+compounds+on+iron+bioavailability+in+humans.">An in vitro digestion/Caco-2 cell culture system accurately predicts the effects of ascorbic acid and polyphenolic compounds on iron bioavailability in humans.</a> Journal of Nutrition. 134 (10), 2717-2721 (2004).</li><li>Pach&#243;n, H., Stoltzfus, R. J., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homogenization,+lyophilization+or+acid-extraction+of+meat+products+improves+iron+uptake+from+cereal-meat+product+combinations+in+an+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+model.">Homogenization, lyophilization or acid-extraction of meat products improves iron uptake from cereal-meat product combinations in an in vitro digestion/Caco-2 cell model.</a> British Journal of Nutrition. 101 (6), 816-821 (2009).</li><li>Tako, E., Bar, H., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+combined+application+of+the+Caco-2+cell+bioassay+coupled+with+in+vivo+(Gallus+gallus)+feeding+trial+represents+an+effective+approach+to+predicting+Fe+bioavailability+in+humans.">The combined application of the Caco-2 cell bioassay coupled with in vivo (Gallus gallus) feeding trial represents an effective approach to predicting Fe bioavailability in humans.</a> Nutrients. 8 (11), 732-757 (2016).</li><li>Engle-Stone, R., Yeung, A., Welch, R., Glahn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meat+and+ascorbic+acid+can+promote+Fe+availability+from+Fe-phytate+but+not+from+Fe-tannic+acid+complexes.">Meat and ascorbic acid can promote Fe availability from Fe-phytate but not from Fe-tannic acid complexes.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53 (26), 10276-10284 (2005).</li><li>Tako, E., Blair, M. W., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofortified+red+mottled+beans+(Phaseolus+vulgaris+L.)+in+a+maize+and+bean+diet+provide+more+bioavailable+iron+than+standard+red+mottled+beans:+studies+in+poultry+(Gallus+gallus)+and+an+in+vitro+digestion/Caco-2+model.">Biofortified red mottled beans (Phaseolus vulgaris L.) in a maize and bean diet provide more bioavailable iron than standard red mottled beans: studies in poultry (Gallus gallus) and an in vitro digestion/Caco-2 model.</a> Nutrition Journal. 10, 113 (2011).</li><li>Pach&#243;n, H., Stoltzfus, R. J., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chicken+thigh,+chicken+liver,+and+iron-fortified+wheat+flour+increase+iron+uptake+in+an+in+vitro+digestion/Caco-2+cell+model.">Chicken thigh, chicken liver, and iron-fortified wheat flour increase iron uptake in an in vitro digestion/Caco-2 cell model.</a> Nutrition Research. 28 (12), 851-858 (2008).</li><li>Beasley, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+engineering+of+bread+wheat+improves+grain+iron+concentration+and+bioavailability.">Metabolic engineering of bread wheat improves grain iron concentration and bioavailability.</a> Plant Biotechnology Journal. 17 (8), 1514-1526 (2019).</li><li>Zhu, L., Glahn, R. P., Nelson, D., Miller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+soluble+ferric+pyrophosphate+to+common+iron+salts+and+chelates+as+sources+of+bioavailable+iron+in+a+Caco-2+cell+culture+model.">Comparing soluble ferric pyrophosphate to common iron salts and chelates as sources of bioavailable iron in a Caco-2 cell culture model.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (11), 5014-5019 (2009).</li><li>Wortley, G., Leusner, S., Good, C., Gugger, E., Glahn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+availability+of+a+fortified+processed+wheat+cereal:+a+comparison+of+fourteen+iron+forms+using+an+in+vitro+digestion/human+colonic+adenocarcinoma+(Caco-2)+cell+model.">Iron availability of a fortified processed wheat cereal: a comparison of fourteen iron forms using an in vitro digestion/human colonic adenocarcinoma (Caco-2) cell model.</a> British Journal of Nutrition. 93 (1), 65-71 (2005).</li><li>Jumarie, C., Malo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alkaline+phosphatase+and+peptidase+activities+in+Caco-2+cells:+differential+response+to+triiodothyronine.">Alkaline phosphatase and peptidase activities in Caco-2 cells: differential response to triiodothyronine.</a> In Vitro Cellular and Developmental Biology - Animal. 30 (11), 753-760 (1994).</li><li>Engle, M. J., Goetz, G. S., Alpers, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caco-2+cells+express+a+combination+of+colonocyte+and+enterocyte+phenotypes.">Caco-2 cells express a combination of colonocyte and enterocyte phenotypes.</a> Journal of Cellular Physiology. 174 (3), 362-369 (1998).</li><li>Ferruzza, S., Rossi, C., Sambuy, Y., Scarino, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-reduced+and+serum-free+media+for+differentiation+of+Caco-2+cells.">Serum-reduced and serum-free media for differentiation of Caco-2 cells.</a> Alternatives to Animal Experimentation. 30 (2), 159-168 (2013).</li><li>Wiesinger, J. A., Cichy, K. A., Tako, E., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fast+cooking+and+enhanced+iron+bioavailability+properties+of+the+Manteca+yellow+bean+(Phaseolus+vulgaris+L).">The fast cooking and enhanced iron bioavailability properties of the Manteca yellow bean (Phaseolus vulgaris L).</a> Nutrients. 10 (11), 1609 (2018).</li><li>Wiesinger, J. A., Cichy, K. A., Hooper, S. D., Hart, J. J., Glahn, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+white+or+yellow+dry+beans+(Phaseolus+vulgaris+L.)+into+a+heat+treated+flour+enhances+the+iron+bioavailability+of+bean-based+pastas.">Processing white or yellow dry beans (Phaseolus vulgaris L.) into a heat treated flour enhances the iron bioavailability of bean-based pastas.</a> Journal of Functional Foods. 71, 104018 (2020).</li></ol>

מאז הקמתה, פורסמו מחקרים רבים המתארים שיטה זו עבור bioassay תא Caco-2. התנאים הבסיסיים נותרו יחסית ללא שינוי מאז הפרסום הראשוני בשנת1998 18. עם זאת, במהלך 20 השנים האחרונות, פרטים טכניים רבים שוכללו וסטנדרטיים כדי להניב עקביות חסרת תקדים בתגובה של bioassay. היצמדות זהירה ומדויקת לתרבית התאים...

כדי להבין באופן מלא את הצורך והתועלת המחקריים של בדיקת הביו-אסאי של תאי Caco-2 עבור זמינות ביולוגית של Fe, יש להבין תחילה את הגישות שהיו קיימות לפני הופעתו של מודל זה. מדידת הזמינות הביולוגית של Fe ממזון או מארוחה in vivo היא משימה מאתגרת, במיוחד כאשר יש צורך להעריך שילובים של מזון בארוחה או בדיאטה. תיוג איזוטופי היה הגישה הנפוצה ביותר למדידת הזמינות הביולוגית של Fe במהלך 50 השנים האחרונות1. תיוג איזוטופי משמש למחקרים של ארוחה אחת וארוחות מרובות והוא אינו מעשי למחקרים ארוכי טווח. איזוטופים יציבים של Fe כגון 57Fe ו- 58Fe הם הנפוצים ביותר; עם זאת, מחקרים נערכו עם רדיואיזוטופים כגון 59Fe, תוך שימוש בספירת כל הגוף2. עבור מזונות צמחיים, הסימון האיזוטופי נעשה באמצעות תיוג חיצוני או פנימי. עבור תיוג חיצוני, כמות ידועה של איזוטופ מתווספת למזון או לארוחה. לאחר מכן מערבבים את המזון, ותקופת שיווי משקל של 15-30 דקות משולבת בפרוטוקול לפני הצריכה. תרבית הידרופונית - הוספת האיזוטופ לתמיסת ההזנה כדי לשלב אותו בצמח בזמן שהוא גדל ומתפתח - נדרשת לסימון פנימי של מזונות צמחיים. היתרונות והחסרונות של כל גישה נדונים להלן.
תיוג איזוטופי חיצוני בתחילת עד אמצע שנות ה-70 של המאה ה-20, ספיגת Fe אנושית נחקרה על ידי סימון חיצוני של Fe במזונות, כאשר כמות ידועה של איזוטופים מתווספת לכמות הידועה של Fe במזון או בארוחה, מעורבבת ומאוזנת במשך 15-30 דקות לפני המדידות. נעשה שימוש בכמויות שונות של איזוטופים חיצוניים, הנעים בין 1% ל-100% מה-Fe הפנימי, אך לרוב בטווח של 7%-30%3. תיוג חיצוני מבוסס על ההנחה שהאיזוטופ החיצוני Fe מקבל שיווי משקל מלא עם Fe הפנימי של המזון או הארוחה. לאחר מכן נמדדת ספיגת איזוטופים חיצוניים, וכל אטום של האיזוטופ החיצוני מחושב כך שייצג מספר נתון של אטומי Fe פנימיים. חישוב זה מבוסס על הסכומים הטוחנים היחסיים. בשנת 1983, מחקרי אימות מרובים של הטכניקה סוכמו במאמר סקירה4. תיקוף הטכניקה נעשה על ידי השוואה בו זמנית של אחוז הקליטה של התווית האיזוטופית החיצונית לאחוזי הקליטה של תווית איזוטופית פנימית. לפיכך, יחס בין הספיגה החיצונית לקליטה הפנימית קרוב ל-1 מצביע על כך שכל מאגר של Fe נספג באופן שווה. באותה תקופה, יחס קרוב ל-1 נחשב גם כמייצג שיווי משקל של האיזוטופ החיצוני עם Fe הפנימי של המזון או הארוחה. היחסים בין ספיגת Fe חיצונית לפנימית נעו בין ערכים ממוצעים של 0.40 ל-1.62, עם יחס ממוצע (±SD) של 1.08 ± 0.14 ב-63 השוואות. חשוב לציין כי בכל המחקרים שסוכמו בסקירה זו, אף אחד מהם לא בדק באופן ישיר את שיווי המשקל של התווית החיצונית עם Fe הפנימי. לסיכום, מחברי הסקירה סיכמו את הדברים הבאים:
"טכניקת התג החיצוני הוכחה כתקפה למספר מזונות בתנאי ניסוי מסוימים. אבל, שיטה זו עדיין לא יכולה להיחשב מוכחת לגבי כל סוגי המזונות. שיטת התג החיצוני אינה מתאימה לניטור ספיגת ברזל מתזונה המכילה צורות בלתי מסיסות של ברזל. תקפותה של טכניקה זו נשענת על ההנחה הבסיסית שהתג החיצוני מתחלף לחלוטין עם כל ברזל המזון האנדוגני. נכון לעכשיו לא ידוע כיצד צורות שונות לחלוטין של ברזל nonheme מסומנים על ידי תג חיצוני. זה חשוב לאור מחקרים שהציעו כי מעכבי ברזל עשויים להשפיע על התג החיצוני באופן שונה מאשר צורות מסוימות של ברזל nonheme במזונות. המחקר על גורמי מזון שיכולים לפגוע בחילוף איזוטופי שלם הוא דל. לפיכך, פרשנות של נתוני זמינות ביולוגית ממחקר תגים חיצוניים דורשת התחשבות במעכבי החלפה שעשויים להיות נוכחים במזון או בתזונה".
מאז 1983 פורסמו רק שני מחקרים שהעריכו את הדיוק של תיוג חיצוני שלFe 3,5. בשני המחקרים הללו, שיווי המשקל של תווית איזוטופית חיצונית הושווה ישירות ל-Fe הפנימי של המזונות, שבמחקרים אלה היו גידולי מזון בסיסיים. נבדקו זני שעועית לבנה, אדומה ושחורה, יחד עם עדשים ותירס. באמצעות טכניקות עיכול מבוססות במבחנה ומדידת מסיסות Fe ומשקעים, שני המחקרים הראו כי תיוג איזוטופי חיצוני אינו מביא באופן עקבי לשיווי משקל מלא, עם ראיות לכך שעבור זני שעועית מסוימים, חוסר שיווי המשקל יכול להיות גבוה מאוד בהתאם לכמות האיזוטופים החיצוניים וצבע ציפוי הזרעים3. למרות מסקנות מאמר הסקירה משנת 1983, מחקרי סימון חיצוניים של שעועית נמשכו 6,7,8,9,10,11,12. אף אחד מהמחקרים הללו לא כלל בדיקת שיווי המשקל של התווית החיצונית עם Fe הפנימי.
תיוג פנימי סימון פנימי של מזון צמחי לצורך הערכת הזמינות הביולוגית של Fe מבטל את בעיות הדיוק של שיווי משקל בהתוויה חיצונית. עם זאת, גישה זו אינה יכולה להניב כמויות גדולות של חומר בגלל הדרישה של שטח חממה לתרבית הידרופונית. תרבית הידרופונית דורשת עבודה רבה, דורשת כמות גבוהה של איזוטופ יציב יקר, ולעתים קרובות גורמת לצמיחת צמחים שונה מבחינת היבול וריכוז Fe של הזרעים. בשל העלות, סימון פנימי מתאים רק למחקרים בקנה מידה קטן שמטרתם להבין מנגנונים העומדים בבסיס ספיגת Fe או גורמים המשפיעים על ספיגת Fe ממזונות. ייצור של 1-2 ק"ג של יבול מזון בסיסי עולה כ-20,000-30,000 דולר לחומרים בלבד, תלוי באיזוטופ ובגישה ההידרופונית13,14.
בהתחשב באתגרים הקשורים לתיוג איזוטופי, החוקרים ביקשו לפתח גישות חוץ גופיות. שיטות מוקדמות השתמשו במזון מדומה בקיבה ובמעיים, יחד עם מדידת מסיסות Fe או Fe dialyzability כאומדן לזמינות ביולוגית15. מחקרים כאלה מצאו במהרה כי יכולת הדיאליזה של Fe אינה מדד עקבי לזמינות ביולוגית, שכן Fe יכול להיות מסיס, קשור בחוזקה לתרכובות, ולכן אינו ניתן להחלפה, מה שמוביל להערכת יתר של זמינות ביולוגית. כדי להתמודד עם בעיות אלה, התפתחה מתודולוגיה לשימוש בקו תאי מעיים אנושיים, ובכך הוסיפה מרכיב חי ואפשרה מדידה של קליטת Fe16. תאי המעי האנושי - תאי Caco-2 - מקורם בקרצינומה אנושית של המעי הגס והיו בשימוש נרחב במחקרי ספיגת חומרים מזינים. קו תאים זה שימושי, שכן בתרבית, התאים מתמיינים לאנטרוציטים המתפקדים באופן דומה לתאי גבול המברשת של המעי הדק. מחקרים הראו כי תאי Caco-2 מציגים את הטרנספורטרים המתאימים ואת התגובה לגורמים המשפיעים על ספיגתFe 17,18.
המחקרים הראשוניים, שהשתמשו ברדיואיזוטופים למדידת ספיגת Fe בתאי Caco-2, שוכללו כדי למדוד את ספיגת Fe בהתבסס על היווצרות פריטין של תאי Caco-2. מדידת פריטין של תאי Caco-2 שיפרה את תפוקת הדגימה ושללה בעיות של טיפול ברדיואיזוטופים ושיווי משקל של Fe חיצוני עם Fe19,20 פנימי. מדידת ספיגת Fe באמצעות היווצרות פריטין אפשרה לחוקרים לחקור מגוון רחב של מזונות, כולל ארוחות מורכבות21. לפיכך, עיכול מדומה (במבחנה) בשילוב עם ספיגת Fe של תאי Caco-2 סיפקו הערכה פיזיולוגית טובה יותר של ספיגת Fe ממזונות. חשוב לציין כי מודל זה קובע בעיקר הבדלים יחסיים בזמינות הביולוגית של Fe. בדומה לקווי תאים שימושיים רבים, גם תאי Caco-2 הראו שונות בתגובתיות, אך שמרו על הבדלים יחסיים עקביים בספיגת Fe בין מזונות. טכניקה נכונה ותשומת לב קפדנית לפרטים יכולים לשפר את התגובה העקבית של היווצרות פריטין תאי בתאי Caco-2.
מודל תאי העיכול/Caco-2 במבחנה ידוע גם בשם ביו-אסאי של תאי Caco-2. בדיקה זו אומתה ביסודיות באמצעות השוואה ישירה למחקרים בבני אדם ובבעלי חיים22. בנוסף להשוואה המקבילה הישירה של הבדיקה הביולוגית לניסויים ביעילות אנושית, מודל זה הוכח כבעל תגובה דומה מבחינה איכותית בספיגת Fe לזו שלבני אדם 18,19,23. לכן, כגישה חוץ-גופית, הבדיקה הביולוגית של תאי Caco-2 מצדיקה אמינות גבוהה ככלי סינון להערכת תזונת Fe ממזונות. זה כבר מיושם באופן נרחב על מזונות רבים ומוצרי מזון 21,24,25,26,27,28.
מאז הקמתה בשנת 1998, הביו-אסאי של תאי Caco-2 קידם את תחום תזונת Fe מכיוון שהוא סייע לזהות גורמים המשפיעים על ספיגת Fe במעיים. בכך, מודל זה פיתח ושכלל מטרות מחקר למחקרים אנושיים סופיים יותר ויקרים פחות. אפשר גם לטעון שהשימוש במודל שולל את הצורך בכמה ניסויים בבני אדם.
לסיכום, ניתן למדוד את המסירה היחסית של Fe ממזון או מארוחה באמצעות הביו-אסאי של תאי Caco-2. ללא קשר לכמות Fe בארוחת הבדיקה, הבדיקה הביולוגית מגדירה את הכמות היחסית של Fe שנלקחה לתוך האנטרוציט - השלב הראשון בתהליך הספיגה. זהו הצעד החשוב ביותר בהגדרת הזמינות הביולוגית של Fe, שכן לרוב המטרה היא למדוד מתוך כוונה לשפר או, לכל הפחות, לפקח על האיכות התזונתית של Fe במזון. בהתחשב בכך שמצב הברזל מווסת על ידי ספיגה, ולכן ספיגת Fe מווסתת אצל אנשים עם מחסור ב-Fe כדי לענות על הצרכים התזונתיים, התנאים הסטנדרטיים של המודל מתוכננים כך שספיגת Fe על ידי התאים תהיה מקסימלית. בדרך זו, הבדיקה הביולוגית מספקת מדידה אמיתית של הפוטנציאל של המזון לספק Fe.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 M HCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A508-4 Hydrochloric Acid TraceMetal Grade</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 megaohm water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Also known as distilled, deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3&#8242;,5-Triiodo-L-thyronine sodium salt</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>T6397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3506</td>
			<td>Use for bioassay experiments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ascorbic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>A0278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bile extract</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>B8631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caco-2 cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>HTB-37</td>
			<td>HTB-37 is a common variety.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flasks T225</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>&#160;353138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flasks T25</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flasks T75</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chelex-100</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Inc</td>
			<td>142832</td>
			<td>Known as the weak cation exchange resin in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis membrane</td>
			<td>Spectrum Laboratories</td>
			<td>Spectra/Por 7 Pretreated RC Dialysis Tubing 15,000 MWCO</td>
			<td>Spectra/Por 7 Pretreated RC Dialysis Tubing 15,000 MWCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12100046</td>
			<td>DMEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epidermal growth factor</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>E4127-5X.1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferritin ELISA Assay Kit</td>
			<td>Eagle Biosciences</td>
			<td>FRR31-K01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>S12450</td>
			<td>Optima</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone-Water Soluble</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>H0396</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insert ring</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>not sold</td>
			<td>Transwell, for 6 well plate, without membrane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insulin</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>I2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>large column</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>KT420400-1530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum Essential Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>41500034</td>
			<td>MEM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pancreatin</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>P1750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PIPES disodium salt</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid) disodium salt P3768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>porcine pepsin</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>P6887 or (P7012-25G Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein assay kit</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Inc</td>
			<td>Bio-Rad DC protein assay kit 500-0116</td>
			<td>Measurement of Caco-2 cell protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicone o rings</td>
			<td>Web Seal, Inc Rochester NY</td>
			<td>2-215S500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium bicarbonate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium selenite</td>
			<td>Sigma Aldrich Co</td>
			<td>S5261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZellShield</td>
			<td>Minerva Biolabs</td>
			<td>13-0050</td>
			<td>Use at 1% as antibiotic/antimycotic ordered through Thomas Scientific</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the caco-2 cell bioassay for measurement of food iron bioavailability

הידע על הזמינות הביולוגית של Fe הוא קריטי להערכת האיכות התזונתית של Fe במזונות. מדידת הזמינות הביולוגית של Fe מוגבלת על ידי עלות, תפוקה והאזהרות הטמונות בסימון איזוטופי של המזון Fe. לפיכך, קיים צורך קריטי בגישה שהיא בעלת תפוקה גבוהה וחסכונית. הביו-אסאי של תאי Caco-2 פותח כדי לספק את הצורך הזה. הבדיקה הביולוגית של תאי Caco-2 לזמינות ביולוגית של Fe משתמשת בעיכול מדומה של קיבה ומעיים בשילוב עם תרבית של קו תאי אפיתל במעיים אנושיים המכונה Caco-2. בתאי Caco-2, ספיגת Fe מגרה את ההיווצרות התוך-תאית של פריטין, חלבון אחסון Fe שנמדד בקלות על ידי בדיקה חיסונית הקשורה לאנזים (ELISA). פריטין נוצר ביחס לספיגת Fe; לפיכך, על ידי מדידת ייצור פריטין תאי Caco-2, ניתן להעריך את ספיגת Fe במעיים מעיכול מזון מדומה לתוך האנטרוציט. 
באמצעות גישה זו, המודל משכפל את השלב הראשוני העיקרי שקובע את הזמינות הביולוגית של מזון Fe. מאז הקמתה בשנת 1998, גישת מודל זו הושוותה בקפדנות לגורמים הידועים כמשפיעים על הזמינות הביולוגית של Fe האנושית. יתר על כן, הוא יושם במחקרים מקבילים, עם שלושה מחקרי יעילות אנושית המעריכים גידולים ביולוגיים של Fe. בכל המקרים, הבדיקה הביולוגית ניבאה נכונה את הכמויות היחסיות של הזמינות הביולוגית של Fe מהגורמים, היבולים והתזונה הכללית. מאמר זה מספק שיטות מפורטות על תרבית תאי Caco-2 בשילוב עם תהליך העיכול במבחנה ופריטין התאים ELISA הדרושים לביצוע הבדיקה הביולוגית של תאי Caco-2 לזמינות ביולוגית של Fe.

זיהוי ומדידה של זמינות ביולוגית של Fe בגידולי מזון בסיסיים אחת הסיבות העיקריות לפיתוח מודל זה הייתה לזהות גורמים המשפיעים על הזמינות הביולוגית של Fe בגידולי מזון בסיסיים ולספק כלי למגדלי צמחים שיאפשר להם לזהות ולפתח זנים עם זמינות ביולוגית משופרת של Fe. השעועית המצויה (Phaseolus vulga...

Watch this Scientific Journal Video about The Caco-2 Cell Bioassay for Measurement of Food Iron Bioavailability at JoVE.com

The Caco-2 Cell Bioassay for Measurement of Food Iron Bioavailability

הבדיקה הביולוגית של תאי Caco-2 לזמינות ביולוגית של ברזל (Fe) מייצגת גישה חסכונית ורב-תכליתית להערכת הזמינות הביולוגית של Fe ממזונות, מוצרי מזון, תוספי מזון, ארוחות ואפילו משטרי תזונה. הוא מאומת ביסודיות למחקרים בבני אדם, ומייצג את מצב האמנות למחקרים על זמינות ביולוגית של Fe.

הבדיקה הביולוגית של תאי Caco-2 למדידת זמינות ביולוגית של ברזל במזון

Knowledge of Fe bioavailability is critical to the assessment of the nutritional quality of Fe in foods. In vivo measurement of Fe bioavailability is ...

ידע על זמינות ביולוגית של ברזל חיוני להערכת האיכות התזונתית של ברזל במזונות. הבדיקה הביולוגית של תאי Caco-2 פותחה כדי לענות על הצורך המחקרי הקריטי הזה. בדיקה ביולוגית זו היא גישה חסכונית ותפוקה גבוהה לקביעת זמינות ביולוגית של ברזל מדיאטות שונות.ניתן להשתמש בו כדי לאפיין גורמים המשפיעים על הזמינות הביולוגית של ברזל, ולשכלל את מטרות המחקר in vivo. מי שידגים את ההליך יהיה יונגפיי צ'אנג, טכנאי מחקר מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, תרבית את תאי Caco-2 במשך 7 עד 10 ימים, ולאחר מספיק תאים זמינים זרע את התאים בקבוקון שאינו מצופה קולגן.לאחר מכן לגדל את התאים צלוחיות במשך שבעה ימים ולשנות את המדיום ביום חלופי. ביום השביעי השתמשו בתאים לזריעת הצלחות הרב-באריות. זרע את תאי Caco-2 בצפיפות של 50, 000 תאים לסנטימטר מרובע בשש צלחות מצופות קולגן היטב.הוסיפו לצלחות תוסף DMEM עם HEPES, FBS ו-1% תמיסה אנטיביוטית אנטי-מיקוטית. לאחר מכן לדגור במשך 12 ימים ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני. המשך לשנות את המדיום לפחות כל יומיים בלוח זמנים יומי קבוע.לאחר מכן הכינו מדיום חיוני מינימלי בתוספת צינורות, תמיסה אנטיביוטית אנטי-מיקוטית, הידרוקורטיזון, אינסולין, סלניום, טריודותירונין וגורם גדילה אפידרמלי. החלף את מדיום התרבות בשני מיליליטר של מדיום מוכן זה. למחרת, להחליף אותו עם מיליליטר אחד של המדיום החיוני המינימלי ב- pH 7.כעת צרו טבעת החדרה מעוקרת באמצעות טבעת O מסיליקון המצוידת בקרום דיאליזה שטוף חומצה. ביום ה -13, להסיר את התוספות מהמקרר, לנקז ולהחליף את המים עם 0.5 חומצה הידרוכלורית טוחנת. השאירו אותו במכסה מנוע למינרי למשך שעה לפחות לפני השימוש.לאחר מכן לנקז 0.5 חומצה הידרוכלורית טוחנת ולשטוף עם מים סטריליים 18 מגה אוהם. יש לאחסן במים סטריליים של 18 מגה-אוהם במכסה מנוע למינרי עד שיהיה מוכן לשימוש. צור מערכת דו-קאמרית על ידי הכנסת טבעת לתוך הבארות המכילות את התאים של צלחת שש הבארות ולאחר מכן החזרת הצלחת עם התוספות לאינקובטור.להכנת תמיסת pancreatin-מרה, להוסיף 87.5 גרם של שרף חילופי קטיון חלש ללבלב solubilized ותמצית מרה ולהשתמש שייקר במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר כדי לערבב את הרכיבים. יוצקים את הבוץ לתוך עמוד גדול ומנקזים את העמוד. לאחר מכן צנטריפוגה העמודה eluent.שקול את הדגימה בצינור צנטריפוגה סטרילי של 50 מיליליטר. התאם את ה- pH באמצעות חומצה הידרוכלורית והוסף 10 מיליליטר של מלח פיזיולוגי המכיל 140 מילימולאר נתרן כלורי וחמישה מילימולאר אשלגן כלורי. לאחר מכן להגדיר את תהליך העיכול קיבה על ידי הוספת 0.5 מיליליטר של פתרון פפסין חזיר מוכן לדגימה.לאחר מכן דגירה על שייקר נדנדה בסביבה עדינה במשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס ולהתחיל את תהליך העיכול במעיים של כל דגימה על ידי התאמת ה- pH ל 5.5 עד 6.0 עם 1.0 סודיום ביקרבונט טוחן. הוסף 2.5 מיליליטר של תמיסת מרה pancreatin לכל צינור דגימה ולהתאים את ה- pH ל 6.9 עד 7.0 עם 1.0 סודיום ביקרבונט טוחן. באמצעות תמיסה המכילה 140 מילימולאר נתרן כלורי וחמישה מילימולאר אשלגן כלורי, מוסיפים נוזלים כך שכל צינור מכיל בדיוק 15 גרם של חומר כולל.עכשיו להעביר 1.5 מיליליטר של כל עיכול מעיים לתוך החדר העליון של הבאר המכיל את התאים Caco-2 של צלחת תרבית שש באר. יש להחליף את מכסה הצלחת ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ב-5% פחמן דו-חמצני על שייקר מתנדנד בשש תנודות לדקה למשך שעתיים. הסר את טבעת ההוספה עם העיכול.לאחר מכן מוסיפים מיליליטר אחד של מדיום חיוני מינימלי ב- pH 7 לכל באר ושומרים את הצלחת בחזרה באינקובטור למשך 22 שעות. עכשיו להסיר את המדיום תרבית התא ולהוסיף שני מיליליטר של 18 מגה אוהם מים לשכבת מונו התא. מעבירים אותו לסוניקטור וקוצרים את כל התא ליזאט לצינורות מיקרו-צנטריפוגה לניתוח חלבון התא ופריטין תא.זני המנטקה הראו זמינות ברזל גבוהה יותר ביחס לבקרות ייחוס של מחלקות הצבעים במודלים של לבן ואדום במשך שתי שנות קציר רצופות. הזמינות הביולוגית של הברזל מזני שעועית לבנה וצהובה הראתה עלייה לאחר עיבודם לקמח. עם זאת, הזמינות הביולוגית של הברזל הראתה ירידה בזנים חמוציות, כליות אדומות ושחורות.גידול חד-שכבתי תקין של תאי Caco-2 חיוני לשימוש מוצלח בביו-אסאי זה. תשומת לב מדויקת לפרטי הגידול והתחזוקה היא המפתח לתגובה עקבית של הבדיקה הביולוגית. מודל זה שולל את החסרונות והעלות הגבוהה של גישות אחרות ומאפשר לחוקרים לזהות מנגנונים ולהעריך באופן מלא יותר גורמים המעכבים ומקדמים זמינות ביולוגית של ברזל.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Biology

Unit 1

Pharmacokinetics

SCIENTISTS IN ACTION

Human In-Vivo Bioassay for the Tissue-Specific Measurement of Nociceptive and Inflammatory Mediators

המבדק האדם In-Vivo למדידה רקמות ספציפיות של מגשרים nociceptive ו דלקתיות

This in-vivo human bioassay can be used to study human volunteers and patients. Samples are collected from pertinent tissue sites such as the skin via ...

Modified Annexin V/Propidium Iodide Apoptosis Assay For Accurate Assessment of Cell Death

השתנה Annexin V / Propidium אפופטוזיס יודיד Assay לקבלת הערכה מדויקת של מוות של תאים

Studies of cellular apoptosis have been significantly impacted since the introduction of flow cytometry-based methods. Propidium iodide (PI) is widely ...

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

איתור של שידור חי<em&gt; חיידקי Escherichia</em&gt; O157: H7 תאים על ידי PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

מדידה של רמות הרן סינתזה בתאי יונקים

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

בזמן אמת המבוסס על הבדיקה PCR גישות למדידת כמותית של מיקרו-רנ&quot;א

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

בינוני אוויר עצם: הכנה ומבדק

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Using Caco-2 Cells to Study Lipid Transport by the Intestine

באמצעות קאקו-2 תאים לחקר ליפידים תחבורה במעי

Studies of dietary fat absorption are generally conducted by using an animal model equipped with a lymph cannula. Although this animal model is widely ...

A Simple Bioassay for the Evaluation of Vascular Endothelial Growth Factors

מבדק פשוט עבור הערכת גורמי הגדילה של אנדותל כלי דם

The analysis of receptor tyrosine kinases and their interacting ligands involved in vascular biology is often challenging due to the constitutive ...

Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

שיטות לחקר תפקוד החלבון התחבורה אפיתל וביטוייה המעי Native ו קאקו-2 תאים שגודלו ב -3 D

The intestinal epithelium has important transport and barrier functions that play key roles in normal physiological functions of the body while providing ...

Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila

Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila

מדידת תנועתיות היבול ומזון הפסבדרוזופילה

Most animals use the gastrointestinal (GI) tract to digest food. The movement of the ingested food in the GI tract is essential for nutrient absorption. ...