खाद्य पदार्थों में लोहे की पोषण गुणवत्ता के आकलन के लिए लोहे की जैव उपलब्धता का ज्ञान आवश्यक है। इस महत्वपूर्ण अनुसंधान आवश्यकता को पूरा करने के लिए कैको -2 सेल बायोसे विकसित किया गया था। यह बायोएसे विभिन्न आहारों से लोहे की जैव उपलब्धता का निर्धारण करने के लिए एक लागत प्रभावी और उच्च थ्रूपुट दृष्टिकोण है।
इसका उपयोग लोहे की जैव उपलब्धता को प्रभावित करने वाले कारकों को चिह्नित करने और विवो अध्ययन उद्देश्यों में परिष्कृत करने के लिए किया जा सकता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन योंगपेई चांग, मेरी प्रयोगशाला के एक शोध तकनीशियन होगा। शुरू करने के लिए, 7 से 10 दिनों के लिए कैको -2 कोशिकाओं को संस्कृति दें, और एक बार पर्याप्त कोशिकाएं उपलब्ध होने के बाद कोशिकाओं को एक गैर कोलेजन लेपित फ्लास्क में बीज दें।
फिर सात दिनों के लिए फ्लास्क में कोशिकाओं को विकसित करें और एक वैकल्पिक दिन पर माध्यम बदलें। सातवें दिन बहु-अच्छी तरह से प्लेटों को बोने के लिए कोशिकाओं का उपयोग करें। छह अच्छी तरह से कोलेजन लेपित प्लेटों में प्रति सेंटीमीटर वर्ग 50, 000 कोशिकाओं के घनत्व पर कैको -2 कोशिकाओं को बीज दें।
प्लेटों में एचईपीईएस, एफबीएस और 1% एंटीबायोटिक एंटीमाइकोटिक समाधान के साथ पूरक डीएमईएम जोड़ें। फिर 5% कार्बन डाइऑक्साइड के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर 12 दिनों के लिए सेते हैं। एक सुसंगत दैनिक कार्यक्रम पर कम से कम हर दो दिनों में माध्यम बदलते रहें।
फिर पाइप, एंटीबायोटिक एंटीमाइकोटिक समाधान, हाइड्रोकार्टिसोन, इंसुलिन, सेलेनियम, ट्राइआयोडोथायरोनिन और एपिडर्मल विकास कारक के साथ पूरक न्यूनतम आवश्यक माध्यम तैयार करें। इस तैयार माध्यम के दो मिलीलीटर के साथ संस्कृति माध्यम को बदलें। अगले दिन, इसे पीएच 7 पर न्यूनतम आवश्यक माध्यम के एक मिलीलीटर के साथ बदलें।
अब एसिड धोया डायलिसिस झिल्ली के साथ फिट एक सिलिकॉन ओ-रिंग का उपयोग करके एक निष्फल डालने की अंगूठी बनाएं। 13 वें दिन, रेफ्रिजरेटर से आवेषण को हटा दें, नाली और 0.5 दाढ़ हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ पानी को प्रतिस्थापित करें। उपयोग करने से पहले इसे कम से कम एक घंटे के लिए लामिना प्रवाह हुड में छोड़ दें।
फिर 0.5 दाढ़ हाइड्रोक्लोरिक एसिड निकालें और बाँझ 18 मेगाहेम पानी से कुल्ला करें। उपयोग करने के लिए तैयार होने तक एक लामिना प्रवाह हुड में बाँझ 18 मेगाओहम पानी में स्टोर करें। छह अच्छी तरह से प्लेट की कोशिकाओं युक्त कुओं में एक अंगूठी डालने के द्वारा एक दो कक्ष प्रणाली बनाएँ और फिर इनक्यूबेटर को आवेषण के साथ प्लेट वापस।
अग्नाशय-पित्त समाधान तैयार करने के लिए, घुलनशील अग्नाशय और पित्त निकालने के लिए 87.5 ग्राम कमजोर धनायन विनिमय राल जोड़ें और घटकों को मिलाने के लिए कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए एक प्रकार के बरतन का उपयोग करें। घोल को एक बड़े कॉलम में डालें और कॉलम को सूखा दें। फिर स्तंभ को अपकेंद्रित्र करें।
एक बाँझ 50 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में नमूना वजन। हाइड्रोक्लोरिक एसिड का उपयोग करके पीएच को समायोजित करें और 140 मिलीमोलर सोडियम क्लोराइड और पांच मिलीमोलर पोटेशियम क्लोराइड युक्त 10 मिलीलीटर शारीरिक खारा जोड़ें। फिर नमूने में तैयार पोर्सिन पेप्सिन समाधान के 0.5 मिलीलीटर जोड़कर गैस्ट्रिक पाचन प्रक्रिया सेट करें।
अगला 37 डिग्री सेल्सियस पर एक घंटे के लिए एक कोमल सेटिंग पर एक रॉकिंग शेकर पर सेते हैं और 1.0 दाढ़ सोडियम बाइकार्बोनेट के साथ पीएच को 5.5 से 6.0 में समायोजित करके प्रत्येक नमूने की आंतों की पाचन प्रक्रिया शुरू करते हैं। प्रत्येक नमूना ट्यूब में अग्नाशय पित्त समाधान के 2.5 मिलीलीटर जोड़ें और पीएच को 1.0 दाढ़ सोडियम बाइकार्बोनेट के साथ 6.9 से 7.0 में समायोजित करें। 140 मिलीमोलर सोडियम क्लोराइड और पांच मिलीमोलर पोटेशियम क्लोराइड युक्त समाधान का उपयोग करके, तरल पदार्थ जोड़ें ताकि प्रत्येक ट्यूब में कुल सामग्री का ठीक 15 ग्राम हो।
अब छह अच्छी तरह से संस्कृति प्लेट के कैको -2 कोशिकाओं युक्त कुएं के ऊपरी कक्ष में प्रत्येक आंतों के पाचन के 1.5 मिलीलीटर हस्तांतरण। प्लेट कवर को बदलें और दो घंटे के लिए प्रति मिनट छह दोलनों पर एक रॉकिंग शेकर पर 5% कार्बन डाइऑक्साइड में 37 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं। डाइजेस्ट के साथ सम्मिलित अंगूठी निकालें।
फिर प्रत्येक कुएं में पीएच 7 पर न्यूनतम आवश्यक माध्यम का एक मिलीलीटर जोड़ें और प्लेट को 22 घंटे के लिए इनक्यूबेटर में वापस रखें। अब सेल कल्चर माध्यम को हटा दें और सेल मोनो परत में 18 मेगाओहम पानी के दो मिलीलीटर जोड़ें। इसे एक सोनिकेटर में स्थानांतरित करें और सेल प्रोटीन और सेल फेरिटिन विश्लेषण के लिए पूरे सेल लाइसेट को माइक्रो अपकेंद्रित्र ट्यूबों में काट लें।
मंटेका किस्मों ने लगातार दो फसल वर्षों के लिए सफेद और लाल मॉडलिंग रंग वर्गों के संदर्भ नियंत्रण के सापेक्ष उच्च लोहे की उपलब्धता दिखाई। सफेद और पीले बीन किस्मों से लोहे की जैव उपलब्धता ने उन्हें आटे में संसाधित करने के बाद वृद्धि दिखाई। हालांकि, लोहे की जैव उपलब्धता ने क्रैनबेरी, लाल गुर्दे और काली किस्मों में कमी देखी।
इस बायोएसे के सफल उपयोग के लिए उचित कैको -2 सेल मोनोलेयर संवर्धन आवश्यक है। विकास और रखरखाव के विवरण पर सटीक ध्यान बायोएसे की लगातार प्रतिक्रिया के लिए महत्वपूर्ण है। यह मॉडल अन्य दृष्टिकोणों के नुकसान और उच्च लागत को नकारता है और शोधकर्ताओं को तंत्र की पहचान करने और लोहे की जैव उपलब्धता को बाधित करने और बढ़ावा देने वाले कारकों का पूरी तरह से मूल्यांकन करने में सक्षम बनाता है।