Name: reactivation of demembranated cell models in chlamydomonas reinhardtii
Uploaded: 2022-05-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Reactivation of Demembranated Cell Models in Chlamydomonas reinhardtii at JoVE.com

Questo studio è stato supportato da sovvenzioni della Japan Society for the Promotion of Science KAKENHI (https://www.jsps.go.jp/english/index.html) a N.U. (19K23758, 21K06295) e K.W. (19H03242, 20K21420, 21H00420), dalla Ohsumi Frontier Science Foundation (https://www.ofsf.or.jp/en/) a K.W., e dalla Dynamic Alliance for Open Innovation Bridging Human, Environment and Materials (http://alliance.tagen.tohoku.ac.jp/english/) a N.U. e K.W. Ringraziamo la signora Miyuki Shinohara (Hosei Univ.) per il suo aiuto nella preparazione delle figure.

Un ceppo wild-type di Chlamydomonas reinhardtii, CC-125, è stato utilizzato per il presente studio. CC-125 è stato ottenuto dal Chlamydomonas Resource Center (vedi Tabella dei materiali) e mantenuto su un mezzo tris-acetato-fosfato (TAP)16, 1,5% di agarosio a 20-25 °C.
1. Coltura cellulare
<ol><li>Coltura Chlamydomonas reinhardtii (CC-125) in tap medio16 in un periodo luce-buio di 12 h/12 h...

<ol>
	<li>Szent-Gyorgyi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-energy+relations+and+contraction+of+actomyosin.">Free-energy relations and contraction of actomyosin.</a> Biological Bulletin. 96 (2), 140-161 (1949).</li><li>Hoffman-Berling, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenosintriphosphat+als+betriebsstoff+von+zellbewegungen.">Adenosintriphosphat als betriebsstoff von zellbewegungen.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 14, 182-194 (1954).</li><li>Naitoh, Y., Kaneko, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivated+Triton-extracted+models+of+Paramecium:+modification+of+ciliary+movement+by+calcium+ions.">Reactivated Triton-extracted models of Paramecium: modification of ciliary movement by calcium ions.</a> Science. 176 (4034), 523-524 (1972).</li><li>Witman, G. B., Plummer, J., Sander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlamydomonas+flagellar+mutants+lacking+radial+spokes+and+central+tubules.+Structure,+composition,+and+function+of+specific+axonemal+components.">Chlamydomonas flagellar mutants lacking radial spokes and central tubules. Structure, composition, and function of specific axonemal components.</a> Journal of Cell Biology. 76 (3), 729-747 (1978).</li><li>R&#252;ffer, U., Nultsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flagellar+coordination+in+Chlamydomonas+cells+held+on+micropipettes.">Flagellar coordination in Chlamydomonas cells held on micropipettes.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 41 (4), 297-307 (1998).</li><li>Sale, W. S., Satir, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direction+of+active+sliding+of+microtubules+in+Tetrahymena+cilia.">Direction of active sliding of microtubules in Tetrahymena cilia.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 74 (5), 2045-2049 (1977).</li><li>Fox, L. A., Sale, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direction+of+force+generated+by+the+inner+row+of+dynein+arms+on+flagellar+microtubules.">Direction of force generated by the inner row of dynein arms on flagellar microtubules.</a> Journal of Cell Biology. 105 (4), 1781-1787 (1987).</li><li>Kamiya, R., Yagi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversity+of+axonemal+dyneins+as+assessed+by+in+vitro+and+in+vivo+motility+assays+of+Chlamydomonas+mutants.">Functional diversity of axonemal dyneins as assessed by in vitro and in vivo motility assays of Chlamydomonas mutants.</a> Zoolog Science. 31 (10), 633-644 (2014).</li><li>Kamiya, R., Witman, G. 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S., Borisy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+flagellar+apparatus+of+Chlamydomonas:+characterization+of+forward+swimming+and+alteration+of+waveform+and+reversal+of+motion+by+calcium+ions+in+vitro.">Isolated flagellar apparatus of Chlamydomonas: characterization of forward swimming and alteration of waveform and reversal of motion by calcium ions in vitro.</a> Journal of Cell Science. 33, 235-253 (1978).</li><li>Fujiu, K., Nakayama, Y., Yanagisawa, A., Sokabe, M., Yoshimura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlamydomonas+CAV2+encodes+a+voltage-+dependent+calcium+channel+required+for+the+flagellar+waveform+conversion.">Chlamydomonas CAV2 encodes a voltage- dependent calcium channel required for the flagellar waveform conversion.</a> Current Biology. 19 (2), 133-139 (2009).</li><li>Bessen, M., Fay, R. B., Witman, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+control+of+waveform+in+isolated+flagellar+axonemes+of+Chlamydomonas.">Calcium control of waveform in isolated flagellar axonemes of Chlamydomonas.</a> Journal of Cell Biology. 86 (2), 446-455 (1980).</li><li>Wakabayashi, K., King, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Chlamydomonas+reinhardtii+flagellar+motility+by+redox+poise.">Modulation of Chlamydomonas reinhardtii flagellar motility by redox poise.</a> Journal of Cell Biology. 173 (5), 743-754 (2006).</li><li>Saegusa, Y., Yoshimura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP+controls+the+balance+of+the+propulsive+forces+generated+by+the+two+flagella+of+Chlamydomonas.">cAMP controls the balance of the propulsive forces generated by the two flagella of Chlamydomonas.</a> Cytoskeleton. 72 (8), 412-421 (2015).</li><li>Gorman, D. S., Levine, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochrome+f+and+plastocyanin:+their+sequence+in+the+photosynthetic+electron+transport+chain+of+Chlamydomonas+reinhardi.">Cytochrome f and plastocyanin: their sequence in the photosynthetic electron transport chain of Chlamydomonas reinhardi.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 54 (6), 1665-1669 (1965).</li><li>Takano, W., Hisabori, T., Wakabayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+estimation+of+cytosolic+ATP+concentration+from+the+ciliary+beating+frequency+in+the+green+alga+Chlamydomonas+reinhardtii.">Rapid estimation of cytosolic ATP concentration from the ciliary beating frequency in the green alga Chlamydomonas reinhardtii.</a> Journal of Biological Chemistry. 296, 100156 (2021).</li><li>Wakabayashi, K., Yagi, T., Kamiya, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2+-dependent+waveform+conversion+in+the+flagellar+axoneme+of+Chlamydomonas+mutants+lacking+the+central-pair/radial+spoke+system.">Ca2+-dependent waveform conversion in the flagellar axoneme of Chlamydomonas mutants lacking the central-pair/radial spoke system.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 38 (1), 22-28 (1997).</li><li>Yueh, Y. G., Crain, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deflagellation+of+Chlamydomonas+reinhardtii+follows+a+rapid+transitory+accumulation+of+inositol+1,4,5-trisphosphate+and+requires+Ca2++entry.">Deflagellation of Chlamydomonas reinhardtii follows a rapid transitory accumulation of inositol 1,4,5-trisphosphate and requires Ca2+ entry.</a> Journal of Cell Biology. 123 (4), 869-875 (1993).</li><li>Wakabayashi, K., Ide, T., Kamiya, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-dependent+flagellar+motility+activation+in+Chlamydomonas+reinhardtii+in+response+to+mechanical+agitation.">Calcium-dependent flagellar motility activation in Chlamydomonas reinhardtii in response to mechanical agitation.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 66 (9), 736-742 (2009).</li><li>Ueki, N., Wakabayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detergent-extracted+Volvox+model+exhibits+an+anterior-posterior+gradient+in+flagellar+Ca2.">Detergent-extracted Volvox model exhibits an anterior-posterior gradient in flagellar Ca2.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (5), 1061-1068 (2018).</li><li>Tanno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+four-celled+Volvocales+green+alga+Tetrabaena+socialis+exhibits+weak+photobehavior+and+high-photoprotection+ability.">The four-celled Volvocales green alga Tetrabaena socialis exhibits weak photobehavior and high-photoprotection ability.</a> PLoS One. 16 (10), 0259138 (2021).</li></ol>

Ci sono due passaggi critici in questo protocollo. Il primo è un processo noto come demembranazione, che deve essere eseguito delicatamente ma accuratamente. La deciliazione (cioè il distacco delle ciglia dal corpo cellulare) è indotta da un vigoroso pipettaggio o vortice, rendendo i modelli cellulari immobili anche dopo l'aggiunta di ATP. Tipicamente, 5 × 107 cellule sono sospese in ~ 0,5 mL di tampone di demembranazione (densità cellulare finale: 1 × 108 celle / mL). Il tasso di riattivazion...

La riattivazione in vitro di cellule mobili demembranate è un valido strumento per lo studio delle basi molecolari del meccanismo regolatore della motilità cellulare. Szent-Györgyi ha dimostrato per la prima volta la contrazione in vitro delle fibre muscolari scheletriche di coniglio estratte con il 50% di glicerolo aggiungendo adenosina trifosfato (ATP)1. Questo esperimento è stato il primo a dimostrare che l'ATP energizza la contrazione muscolare. La metodologia è stata presto applicata allo studio della motilità ciliare/flagellare energizzata dall'ATP, come i flagelli2 degli spermatozoi, le ciglia paramecium 3 e le ciglia di Chlamydomonas reinhardtii (chiamate anche flagelli)4 utilizzando detergenti non ionici per la demembranazione.
L'alga verde unicellulare C. reinhardtii è un organismo modello per lo studio delle ciglia: nuota con due ciglia battendole come la rana di un essere umano5. Il movimento ciliare è guidato dalla dineina, una proteina motoriaa base di microtubuli diretti all'estremità inferiore 6,7. Le dineine ciliari possono essere classificate in dineine del braccio esterno e dineine del braccio interno. I mutanti privi di ogni tipo di dineina sono stati isolati come mutanti a nuoto lento con diverse anomalie della motilità. L'analisi dettagliata della motilità in vitro di questi mutanti ha fatto progredire significativamente la ricerca sulla dineina8.
Molti risultati importanti sono stati raggiunti utilizzando questo metodo e i suoi derivati da quando è stato stabilito l'esperimento di riattivazione in vitro di cellule demembranate di C. reinhardtii (modelli cellulari). La riattivazione di modelli cellulari in una serie di tamponi Ca2+, ad esempio, ha mostrato9 che due ciglia sono regolate in modo diverso da Ca2+ submicromolare, e questo controllo asimmetrico delle ciglia consente l'orientamento fototattico di C. reinhardtii10. Inoltre, entrambe le ciglia mostrano la conversione della forma d'onda dalla modalità di nuoto in avanti (chiamata forma d'onda asimmetrica) alla modalità di nuoto all'indietro (chiamata forma d'onda simmetrica che appare per un breve periodo quando le cellule sono foto- o meccano-shockate)11,12. Questa conversione della forma d'onda è regolata dal Ca2+ submillimolare, che è stato dimostrato dalla riattivazione del cosiddetto apparato nucleoflagellare (un complesso contenente due ciglia, i corpi basali, le strutture che collegano i corpi basali con il nucleo e il residuo del nucleo)11 o assonomi demembranati di ciglia isolate13. Oltre a Ca2+, l'equilibrio redox (riduzione-ossidazione) è un segnale che regola la frequenza di battito ciliare, che è stata dimostrata dalla riattivazione di modelli cellulari in tamponi redox contenenti diversi rapporti di glutatione ridotto vs glutatione ossidato14. Inoltre, l'adenosina monofosfato ciclico (cAMP) regola asimmetricamente due ciglia, come dimostrato dalla riattivazione degli assonemi con cAMP15 in gabbia fotoccolarivibile. Questi risultati in vitro, combinati con i risultati genetici, hanno portato a una comprensione più profonda dei meccanismi molecolari della regolazione delle ciglia in C. reinhardtii.
Un protocollo per riattivare i modelli cellulari è descritto qui. Il metodo è semplice, consente varie modifiche e può essere applicato a più organismi che si muovono con le ciglia. Tuttavia, poiché le cellule demembranate sono fragili, sono necessari alcuni suggerimenti per riattivare la motilità dei modelli cellulari con una buona efficienza prevenendo la deciliazione.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mL plastic tube</td>
			<td>QSP</td>
			<td>502-PLN-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tube</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>62.554.502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39;-triphosphate disodium salt hydrate (ATP)</td>
			<td>Sima-Aldrich</td>
			<td>A2383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>KUBOTA</td>
			<td>2800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlamydomonas strain CC-125</td>
			<td>Chlamydomonas Resource Center</td>
			<td></td>
			<td>https://www.chlamycollection.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creatine kinase</td>
			<td>Merck</td>
			<td>CK-RO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creatine phosphate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>CRPHO-RO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>14128-46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GEDTA(EGTA)</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>G002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>GB70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Igepal CA-630</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I8896</td>
			<td>IUPAC name is octylphenoxypolyethoxyethanol: IGEPAL CA-630 is a substitute for Nonidet P-40 (NP-40); NP-40 is no longer available in Sigma-Aldrich.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4-7H2O</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>21002-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>13-678-20C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene glycol, Mr 20,000</td>
			<td>Merck</td>
			<td>8.18897.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pottasium acetate</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>28434-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Nacalai</td>
			<td>31511-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation</td>
			<td>196-00015</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reactivation of demembranated cell models in chlamydomonas reinhardtii

Dall'esperimento storico sulla contrazione del muscolo glicerinato con l'aggiunta di ATP, che Szent-Györgyi ha dimostrato a metà del 20 ° secolo, la riattivazione in vitro delle cellule demembranate è stata un modo tradizionale e potente per esaminare la motilità cellulare. Il vantaggio fondamentale di questo metodo sperimentale è che la composizione della soluzione di riattivazione può essere facilmente modificata. Ad esempio, un ambiente ad alta concentrazione di Ca2+ che si verifica solo temporaneamente a causa dell'eccitazione della membrana in vivo può essere replicato in laboratorio. Le ciglia eucariotiche (note anche come flagelli) sono elaborati meccanismi di motilità i cui meccanismi di regolazione devono ancora essere chiariti. L'alga verde unicellulare Chlamydomonas reinhardtii è un eccellente organismo modello nel campo della ricerca delle ciglia. Gli esperimenti di riattivazione utilizzando modelli cellulari demembranati di C. reinhardtii e loro derivati, come gli assonemi demembranati di ciglia isolate, hanno contribuito in modo significativo alla comprensione dei meccanismi molecolari della motilità ciliare. Questi esperimenti hanno chiarito che l'ATP energizza la motilità ciliare e che vari segnali cellulari, tra cui Ca2 +, cAMP e specie reattive dell'ossigeno, modulano i movimenti ciliari. Il metodo preciso per la demembranazione delle cellule di C. reinhardtii e la riattivazione dei modelli cellulari è descritto qui.

Il processo di demembranazione e riattivazione nel ceppo wild type C. reinhardtii (CC-125) è mostrato qui. La coltura 2 giorni dopo l'inoculazione è diventata di un colore verde chiaro (passo 1.1) (Figura 1). Le cellule sono state raccolte (fase 2.1), lavate (fase 2.2) e demembranate (fase 2.5). Dopo la demembranazione, tutti i modelli cellulari sono diventati immotili (passo 2.7). Le ciglia demembranate (chiamate assonemi) rimangono attaccate al corpo cellulare, il che dimostra ...

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Reactivation of Demembranated Cell Models in Chlamydomonas reinhardtii

La riattivazione in vitro delle cellule mobili è un esperimento cruciale per comprendere i meccanismi della motilità cellulare. Il protocollo descrive la riattivazione dei modelli cellulari demembranati di Chlamydomonas reinhardtii, un organismo modello per lo studio delle ciglia/flagelli.

Riattivazione di modelli cellulari demembranati in Chlamydomonas reinhardtii

Since the historical experiment on the contraction of glycerinated muscle by adding ATP, which Szent-Gy&#246;rgyi demonstrated in the mid-20th century, in ...

Questo metodo può aiutare a capire quali fattori influenzano la motilità delle ciglia. Il vantaggio principale di questa tecnica è che i fenomeni che si verificano solo temporaneamente in vivo, tale inversione delle concentrazioni di ioni calcio nelle ciglia possono essere continuamente osservate in vitro. Questo metodo contribuisce specificamente al campo di ricerca delle ciglia mobili.Sarebbe difficile per i principianti eseguire la fase di demembranazione. Quindi, si consiglia vivamente di eseguire i passaggi in modo delicato ma preciso. Iniziare centrifugando circa 10 millilitri di coltura Chlamydomonas reinhardtii a 1.000 RCF a 20 gradi Celsius per tre minuti.Decantare il surnatante e aspirare il resto con una pipetta Pasteur. Risospese i precipitati in circa cinque millilitri di tampone di lavaggio. Centrifugare le celle nel tampone di lavaggio a 1.000 RCF per tre minuti a 20 gradi Celsius.Scartare il surnatante con attenzione con una pipetta. Aggiungere circa 0,5 millilitri di tampone di demembranazione al pellet cellulare. Agitare delicatamente il tubo per sospendere approssimativamente le cellule nel tampone, quindi mettere il tubo sul ghiaccio.Sospendere delicatamente il pellet cellulare rimanente con una pipetta e posizionare nuovamente il tubo sul ghiaccio. Prendi da 5 a 10 microlitri del modello cellulare, diluisci dieci volte con il tampone di diluizione e osserva al microscopio per confermare che tutti i modelli cellulari sono demembranati e non nuotano. In un tubo da 0,5 millilitri, mescolare 80 microlitri di soluzione di riattivazione, 10 microlitri di soluzione di ATP e 10 microlitri di modelli di celle toccando il tubo.Mettere circa 30 microlitri della soluzione mista su una diapositiva di vetro e posizionare delicatamente un coperchio scivolare su di esso con distanziali per evitare uno shock meccanico al modello di cella. Osservare i modelli cellulari riattivati al microscopio. Dopo la demembranazione della coltura di C.reinhardtii, tutti i modelli cellulari sono diventati immotili e le ciglia demembranate sono rimaste attaccate al corpo cellulare, confermando che l'immotilità dei modelli cellulari non era causata dalla de-ciliazione.Dopo aver mescolato i modelli cellulari con il tampone di riattivazione in ATP, oltre il 50% dei modelli cellulari è diventato mobile. Anche senza il sistema di rigenerazione dell'ATP, le cellule riattivate hanno continuato a muoversi per circa 90 minuti con una concentrazione finale di ATP di un millimolare prima di fermarsi gradualmente. La fase di demembranazione è fondamentale.Tutte le cellule dovrebbero smettere di nuotare, ma non dovrebbero essere mescolate così fortemente da verificarsi la de-ciliazione. I ricercatori possono modificare questo protocollo per includere reagenti come ioni calcio o AMP ciclico, o eseguire esperimenti con un mutante privo di una particolare proteina per identificare il loro ruolo biologico.

Research

JoVE Journal

Biology

Reactivation of Demembranated Cell Models in Chlamydomonas reinhardtii

Mating and Tetrad Separation of Chlamydomonas reinhardtii for Genetic Analysis

Mating and Tetrad Separation of Chlamydomonas reinhardtii for Genetic Analysis

Accoppiamento e di separazione Tetrade Chlamydomonas reinhardtii Per l&#39;analisi genetica

The unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii (Chlamydomonas) has become a popular organism for research in diverse areas of cell biology and ...

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