Name: reactivation of demembranated cell models in chlamydomonas reinhardtii
Uploaded: 2022-05-06T15:00:00
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本研究は、日本学術振興会(https://www.jsps.go.jp/english/index.html)からN.U.(19K23758, 21K06295)およびK.W.(19H03242, 20K21420, 21H00420)への助成金、財団法人大隅フロンティアサイエンス財団(https://www.ofsf.or.jp/en/)から株式会社への助成金、および http://alliance.tagen.tohoku.ac.jp/english/ からN.U.およびK.W.への人的・環境・材料架け橋活動連携(Dynamic Alliance for Open Innovation Bridge Human and Environment and Materials)からの助成金によって支援されました。篠原みゆきさん(法政大学)がフィギュア作成に協力してくれたことに感謝します。

クラミドモナス・ラインハルティイの野生型株CC-125を本研究に使用した。CC-125はクラミドモナス資源センター(材料表参照)から入手し、トリス酢酸リン酸(TAP)16、1.5%アガロース培地上で20-25°Cで維持した。
1. 細胞培養
<ol><li>クラミドモナス・ラインハルティイ(CC-125)をTAP培地16中で、12時間/12時間?...

<ol>
	<li>Szent-Gyorgyi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-energy+relations+and+contraction+of+actomyosin.">Free-energy relations and contraction of actomyosin.</a> Biological Bulletin. 96 (2), 140-161 (1949).</li><li>Hoffman-Berling, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenosintriphosphat+als+betriebsstoff+von+zellbewegungen.">Adenosintriphosphat als betriebsstoff von zellbewegungen.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 14, 182-194 (1954).</li><li>Naitoh, Y., Kaneko, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivated+Triton-extracted+models+of+Paramecium:+modification+of+ciliary+movement+by+calcium+ions.">Reactivated Triton-extracted models of Paramecium: modification of ciliary movement by calcium ions.</a> Science. 176 (4034), 523-524 (1972).</li><li>Witman, G. B., Plummer, J., Sander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlamydomonas+flagellar+mutants+lacking+radial+spokes+and+central+tubules.+Structure,+composition,+and+function+of+specific+axonemal+components.">Chlamydomonas flagellar mutants lacking radial spokes and central tubules. Structure, composition, and function of specific axonemal components.</a> Journal of Cell Biology. 76 (3), 729-747 (1978).</li><li>R&#252;ffer, U., Nultsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flagellar+coordination+in+Chlamydomonas+cells+held+on+micropipettes.">Flagellar coordination in Chlamydomonas cells held on micropipettes.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 41 (4), 297-307 (1998).</li><li>Sale, W. S., Satir, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direction+of+active+sliding+of+microtubules+in+Tetrahymena+cilia.">Direction of active sliding of microtubules in Tetrahymena cilia.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 74 (5), 2045-2049 (1977).</li><li>Fox, L. A., Sale, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direction+of+force+generated+by+the+inner+row+of+dynein+arms+on+flagellar+microtubules.">Direction of force generated by the inner row of dynein arms on flagellar microtubules.</a> Journal of Cell Biology. 105 (4), 1781-1787 (1987).</li><li>Kamiya, R., Yagi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversity+of+axonemal+dyneins+as+assessed+by+in+vitro+and+in+vivo+motility+assays+of+Chlamydomonas+mutants.">Functional diversity of axonemal dyneins as assessed by in vitro and in vivo motility assays of Chlamydomonas mutants.</a> Zoolog Science. 31 (10), 633-644 (2014).</li><li>Kamiya, R., Witman, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Submicromolar+levels+of+calcium+control+the+balance+of+beating+between+the+two+flagella+in+demembranated+models+of+Chlamydomonas.">Submicromolar levels of calcium control the balance of beating between the two flagella in demembranated models of Chlamydomonas.</a> Journal of Cell Biology. 98 (1), 97-107 (1984).</li><li>Okita, N., Isogai, N., Hirono, M., Kamiya, R., Yoshimura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototactic+activity+in+Chlamydomonas+'non-phototactic'+mutants+deficient+in+Ca2+-dependent+control+of+flagellar+dominance+or+in+inner-arm+dynein.">Phototactic activity in Chlamydomonas 'non-phototactic' mutants deficient in Ca2+-dependent control of flagellar dominance or in inner-arm dynein.</a> Journal of Cell Science. 118, 529-537 (2005).</li><li>Hyams, J. S., Borisy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+flagellar+apparatus+of+Chlamydomonas:+characterization+of+forward+swimming+and+alteration+of+waveform+and+reversal+of+motion+by+calcium+ions+in+vitro.">Isolated flagellar apparatus of Chlamydomonas: characterization of forward swimming and alteration of waveform and reversal of motion by calcium ions in vitro.</a> Journal of Cell Science. 33, 235-253 (1978).</li><li>Fujiu, K., Nakayama, Y., Yanagisawa, A., Sokabe, M., Yoshimura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlamydomonas+CAV2+encodes+a+voltage-+dependent+calcium+channel+required+for+the+flagellar+waveform+conversion.">Chlamydomonas CAV2 encodes a voltage- dependent calcium channel required for the flagellar waveform conversion.</a> Current Biology. 19 (2), 133-139 (2009).</li><li>Bessen, M., Fay, R. B., Witman, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+control+of+waveform+in+isolated+flagellar+axonemes+of+Chlamydomonas.">Calcium control of waveform in isolated flagellar axonemes of Chlamydomonas.</a> Journal of Cell Biology. 86 (2), 446-455 (1980).</li><li>Wakabayashi, K., King, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Chlamydomonas+reinhardtii+flagellar+motility+by+redox+poise.">Modulation of Chlamydomonas reinhardtii flagellar motility by redox poise.</a> Journal of Cell Biology. 173 (5), 743-754 (2006).</li><li>Saegusa, Y., Yoshimura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP+controls+the+balance+of+the+propulsive+forces+generated+by+the+two+flagella+of+Chlamydomonas.">cAMP controls the balance of the propulsive forces generated by the two flagella of Chlamydomonas.</a> Cytoskeleton. 72 (8), 412-421 (2015).</li><li>Gorman, D. S., Levine, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochrome+f+and+plastocyanin:+their+sequence+in+the+photosynthetic+electron+transport+chain+of+Chlamydomonas+reinhardi.">Cytochrome f and plastocyanin: their sequence in the photosynthetic electron transport chain of Chlamydomonas reinhardi.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 54 (6), 1665-1669 (1965).</li><li>Takano, W., Hisabori, T., Wakabayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+estimation+of+cytosolic+ATP+concentration+from+the+ciliary+beating+frequency+in+the+green+alga+Chlamydomonas+reinhardtii.">Rapid estimation of cytosolic ATP concentration from the ciliary beating frequency in the green alga Chlamydomonas reinhardtii.</a> Journal of Biological Chemistry. 296, 100156 (2021).</li><li>Wakabayashi, K., Yagi, T., Kamiya, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2+-dependent+waveform+conversion+in+the+flagellar+axoneme+of+Chlamydomonas+mutants+lacking+the+central-pair/radial+spoke+system.">Ca2+-dependent waveform conversion in the flagellar axoneme of Chlamydomonas mutants lacking the central-pair/radial spoke system.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 38 (1), 22-28 (1997).</li><li>Yueh, Y. G., Crain, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deflagellation+of+Chlamydomonas+reinhardtii+follows+a+rapid+transitory+accumulation+of+inositol+1,4,5-trisphosphate+and+requires+Ca2++entry.">Deflagellation of Chlamydomonas reinhardtii follows a rapid transitory accumulation of inositol 1,4,5-trisphosphate and requires Ca2+ entry.</a> Journal of Cell Biology. 123 (4), 869-875 (1993).</li><li>Wakabayashi, K., Ide, T., Kamiya, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-dependent+flagellar+motility+activation+in+Chlamydomonas+reinhardtii+in+response+to+mechanical+agitation.">Calcium-dependent flagellar motility activation in Chlamydomonas reinhardtii in response to mechanical agitation.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 66 (9), 736-742 (2009).</li><li>Ueki, N., Wakabayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detergent-extracted+Volvox+model+exhibits+an+anterior-posterior+gradient+in+flagellar+Ca2.">Detergent-extracted Volvox model exhibits an anterior-posterior gradient in flagellar Ca2.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (5), 1061-1068 (2018).</li><li>Tanno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+four-celled+Volvocales+green+alga+Tetrabaena+socialis+exhibits+weak+photobehavior+and+high-photoprotection+ability.">The four-celled Volvocales green alga Tetrabaena socialis exhibits weak photobehavior and high-photoprotection ability.</a> PLoS One. 16 (10), 0259138 (2021).</li></ol>

このプロトコルには 2 つの重要な手順があります。1つ目は、デメンブラネーションとして知られるプロセスであり、穏やかに、しかし徹底的に実行する必要があります。脱鼠(すなわち、細胞体からの繊毛の剥離)は、激しいピペッティングまたはボルテックスによって誘導され、ATPの添加後でさえも細胞モデルを不動にする。典型的には、5×107 個の細胞を〜0.5mLのデメンブラン化緩?...

脱膜された運動性細胞のインビトロ再活性化は、細胞運動性の調節機構の分子基盤を研究するための貴重なツールである。Szent-Györgyiは、アデノシン三リン酸(ATP)1を添加することにより、50%グリセロールで抽出したウサギ骨格筋線維のインビトロ収縮を初めて実証した。この実験は、ATPが筋肉の収縮にエネルギーを与えることを証明した最初の実験でした。この方法論は、精子鞭毛2、ゾウリムシ繊毛3、クラミドモナス・ラインハルティイ繊毛(鞭毛とも呼ばれる)4などのATP活性化毛様体/鞭毛運動性の研究にすぐに適用され、非イオン性洗剤を用いてデメンブラネーションに使用されました。
単細胞緑藻 C. reinhardtii は繊毛を研究するためのモデル生物です:それは人間の平泳ぎのようにそれらを打つことによって2つの繊毛で泳ぎます5.毛様体運動は、マイナス末端指向性微小管ベースの運動タンパク質であるダイニン6,7によって駆動される。毛様体ダイニンは、外腕ダイニンと内腕ダイニンに分類することができる。各種類のダイニンを欠く変異体は、運動異常の異なる遅泳変異体として単離されている。これらの変異体の詳細なインビトロ運動性解析は、ダイニン研究を著しく進歩させた8。
この方法およびその誘導体を利用して、脱膜化C.ラインハルティイ細胞のin vitro再活性化実験(細胞モデル)が確立されて以来、多くの重要な知見が達成されてきた。例えば、一連のCa2+緩衝液における細胞モデルの再活性化は、2つの繊毛がサブマイクロモルCa2+によって異なる調節されることを9示し、この非対称繊毛制御は、C. reinhardtii10の光戦術配向を可能にする。さらに、両方の繊毛は、順方向遊泳モード(非対称波形と呼ばれる)から後方遊泳モード(細胞が光またはメカノショックを受けたときに短時間現れる対称波形と呼ばれる)への波形変換を示す11,12。この波形変換は、サブミリモルCa2+によって調節され、これは、いわゆる核鞭毛装置(2つの繊毛、基底体、基底体と核をつなぐ構造、および核の残骸を含む複合体)11または単離繊毛13の膜除去された軸索の再活性化によって示された。Ca2+以外に、酸化還元(還元酸化)ポイズは毛様体拍動頻度を調節するシグナルであり、これは還元型グルタチオン対酸化型グルタチオンの異なる比率を含む酸化還元緩衝液中の細胞モデルの再活性化によって示された14。さらに、環状アデノシン一リン酸(cAMP)は2つの繊毛を非対称に調節し、これは光切断可能なケージcAMP15による軸索の再活性化によって示された。これらのインビトロでの知見は、遺伝的知見と相まって、C. reinhardtiiにおける繊毛調節の分子機構のより深い理解につながった。
ここでは、細胞モデルを再アクティブ化するためのプロトコルについて説明します。この方法は簡単で、様々な改変を可能にし、繊毛とともに移動する複数の生物に適用することができる。しかし、脱膜細胞は壊れやすいため、脱毛を防ぎながら細胞モデルの運動性を良好な効率で再活性化するには、いくつかのヒントが必要です。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mL plastic tube</td>
			<td>QSP</td>
			<td>502-PLN-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tube</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>62.554.502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39;-triphosphate disodium salt hydrate (ATP)</td>
			<td>Sima-Aldrich</td>
			<td>A2383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>KUBOTA</td>
			<td>2800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlamydomonas strain CC-125</td>
			<td>Chlamydomonas Resource Center</td>
			<td></td>
			<td>https://www.chlamycollection.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creatine kinase</td>
			<td>Merck</td>
			<td>CK-RO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creatine phosphate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>CRPHO-RO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>14128-46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GEDTA(EGTA)</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>G002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>GB70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Igepal CA-630</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I8896</td>
			<td>IUPAC name is octylphenoxypolyethoxyethanol: IGEPAL CA-630 is a substitute for Nonidet P-40 (NP-40); NP-40 is no longer available in Sigma-Aldrich.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4-7H2O</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>21002-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX-53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>fisher scientific</td>
			<td>13-678-20C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene glycol, Mr 20,000</td>
			<td>Merck</td>
			<td>8.18897.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pottasium acetate</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>28434-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Nacalai</td>
			<td>31511-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation</td>
			<td>196-00015</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reactivation of demembranated cell models in chlamydomonas reinhardtii

Szent-Györgyiが20世紀半ばに実証したATP添加によるグリセリン化筋肉の収縮に関する歴史的な実験以来、脱膜細胞のインビトロ再活性化は、細胞運動性を調べるための伝統的かつ強力な方法であった。この実験方法の基本的な利点は、再活性化溶液の組成を容易に変更できることである。例えば、生体内の膜励起のために一時的にしか起こらない高Ca2+濃度環境を実験室で再現することができる。真核生物の繊毛(別名鞭毛)は精巧な運動機構であり、その調節機構はまだ明らかにされていない。単細胞緑藻クラミドモナス・ラインハルティイは、繊毛の研究分野における優れたモデル生物である。単離繊毛の脱膜軸索などのC. reinhardtiiおよびその誘導体の膜除去細胞モデルを用いた再活性化実験は、毛様体運動の分子機構の理解に大きく貢献している。これらの実験により、ATPが毛様体運動を活性化し、Ca2+、cAMP、活性酸素種を含む様々な細胞シグナルが毛様体運動を調節することが明らかになりました。C. reinhardtii細胞のデメンブラネーションおよび細胞モデルの再活性化のための正確な方法をここで説明する。

C. reinhardtii野生型株(CC-125)におけるデメンブラン化および再活性化プロセスをここに示す。接種後2日目の培養液は淡緑色となった(工程1.1)(図1)。細胞を回収し(ステップ2.1)、洗浄し(ステップ2.2)、および膜除去した(ステップ2.5)。デメンブラネーション後、すべての細胞モデルは不動になった(ステップ2.7)。脱膜繊毛(軸索と呼ばれる)は細胞体に付着したままであり?...

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Reactivation of Demembranated Cell Models in Chlamydomonas reinhardtii

運動性細胞の インビトロ 再活性化は、細胞運動性のメカニズムを理解する上で重要な実験である。このプロトコルは、繊毛/鞭毛を研究するためのモデル生物である クラミドモナス・ラインハルティイの膜除去細胞モデルの再活性化を記述している。

クラミドモナス・ラインハルティイにおける非膜化細胞モデルの再活性化

Since the historical experiment on the contraction of glycerinated muscle by adding ATP, which Szent-Gy&#246;rgyi demonstrated in the mid-20th century, in ...

この方法は、繊毛運動性に影響を与える要因を理解するのに役立ちます。この技術の主な利点は、インビボで一時的にしか起こらない現象を、繊毛中のカルシウムイオン濃度の逆転など、インビトロで連続的に観察できることである。この方法は、運動性繊毛の研究分野に特に貢献する。初心者がデメンブラネーションステップを実行するのは難しいでしょう。したがって、手順を穏やかに、しかし正確に実行することを強くお勧めします。まず、約10ミリリットルのクラミドモナス・ラインハルティイ培養物を摂氏20度で1,000 RCFで3分間遠心分離することから始めます。上清をデカントし、パスツールピペットで残りを吸引します。沈殿物を約5ミリリットルの洗浄緩衝液に再懸濁する。洗浄バッファー中の細胞を1, 000 RCFで20°Cで3分間遠心分離します。上清をピペットで丁寧に捨てる。約0.5ミリリットルのデメンブラネーション緩衝液を細胞ペレットに加える。チューブを優しく振って細胞をバッファーに大まかに懸濁させ、チューブを氷の上に置きます。残りの細胞ペレットをピペットで静かに懸濁し、チューブを再び氷の上に置きます。細胞モデルを5~10マイクロリットルとり、希釈バッファーで10倍に希釈し、顕微鏡下で観察して、すべての細胞モデルが膜除去され、泳いでいないことを確認します。0.5ミリリットルのチューブに、チューブをタップして、80マイクロリットルの再活性化溶液、10マイクロリットルのATP溶液、および10マイクロリットルの細胞モデルを混合する。約30マイクロリットルの混合溶液をスライドガラスの上に置き、セルモデルへの機械的衝撃を避けるために、スペーサーでカバースリップをそっと置きます。再活性化された細胞モデルを顕微鏡下で観察する。C.reinhardtii培養物の脱膜化後、すべての細胞モデルは不動性になり、脱膜繊毛は細胞体に付着したままであり、細胞モデルの不動性は脱繊毛によって引き起こされたものではないことを確認した。細胞モデルをATPの再活性化バッファーと混合した後、細胞モデルの50%以上が運動性になった。ATP再生システムがなくても、再活性化細胞は、徐々に停止する前に、1ミリモルの最終ATP濃度で約90分間移動し続けた。デメンブラネーションのステップは非常に重要です。すべての細胞は泳ぐのをやめるべきですが、除繊が起こるほど強く混合されるべきではありません。研究者は、カルシウムイオンやサイクリックAMPなどの試薬を含むようにこのプロトコルを変更したり、特定のタンパク質を欠く変異体で実験を行い、生物学的役割を同定することができます。

Research

JoVE Journal

Biology

Reactivation of Demembranated Cell Models in Chlamydomonas reinhardtii

Mating and Tetrad Separation of Chlamydomonas reinhardtii for Genetic Analysis

Mating and Tetrad Separation of Chlamydomonas reinhardtii for Genetic Analysis

交配との四分子の分離クラミドモナス遺伝子解析用

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生物学

Heterotopic and Orthotopic Tracheal Transplantation in Mice used as Models to Study the Development of  Obliterative Airway Disease

閉塞性気道疾患の発生研究のモデルとして使用されるマウスにおける異所性と同所性気管移植

Obliterative airway disease (OAD) is the major complication after lung transplantations that limits long term survival (1-7).
To study the ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

ヒト胚性幹細胞のコロニーの成長のビデオバイオインフォマティクス解析

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon

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マウスとラットの拘束マニュアルと共通の複合投与経路

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Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

マウスモデルにおける乳腺の発達と機能の評価

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Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

診断剖検及びラット及びマウスで選択された組織とサンプル集

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Biochemical Reconstitution of Steroid Receptor&#x2022;Hsp90 Protein  Complexes and Reactivation of Ligand Binding

ステロイド受容体の生化学的再構成には、•Hsp90のタンパク質複合体とリガンド結合の再活性化

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Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

I ·クライオキットを使用してマウスの精子の凍結保存と回復

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Culturing and Applications of Rotating Wall Vessel Bioreactor Derived 3D Epithelial Cell Models

回転壁容器バイオリアクター由来3D上皮細胞モデルの培養とその応用

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