Name: immunolabeling and counting ribbon synapses in young adult and aged gerbil cochleae
Uploaded: 2022-04-21T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunolabeling and Counting Ribbon Synapses in Young Adult and Aged Gerbil Cochleae at JoVE.com

يعترف المؤلفون بليشون تشانغ للمساعدة في إنشاء الطريقة ووحدة خدمة الفحص المجهري الفلوري ، جامعة كارل فون أوسيتسكي في أولدنبورغ ، لاستخدام مرافق التصوير. تم تمويل هذا البحث من قبل مؤسسة الأبحاث الألمانية (DFG، مؤسسة الأبحاث الألمانية) في إطار استراتيجية التميز الألمانية -EXC 2177/1.

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات والإجراءات من قبل السلطات المختصة في ولاية سكسونيا السفلى ، ألمانيا ، مع أرقام التصاريح AZ 33.19-42502-04-15/1828 و 33.19-42502-04-15/1990. هذا البروتوكول مخصص للجربيلات المنغولية (M. unguiculatus) من كلا الجنسين. يشير الشباب البالغين إلى عمر 3-12 شهرا ، في حين يعتبر الجربوع في سن...

<ol>
	<li>Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise-induced+and+age-related+hearing+loss:+new+perspectives+and+potential+therapies+[version+1;+peer+review.">Noise-induced and age-related hearing loss: new perspectives and potential therapies [version 1; peer review.</a> F1000Research. 6 (927), (2017).</li><li>Heeringa, A. N., Koeppl, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+aging+cochlea:+Towards+unraveling+the+functional+contributions+of+strial+dysfunction+and+synaptopathy.">The aging cochlea: Towards unraveling the functional contributions of strial dysfunction and synaptopathy.</a> Hearing. 376, 111-124 (2019).</li><li>Liberman, L. D., Wang, H., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposing+gradients+of+ribbon+size+and+AMPA+receptor+expression+underlie+sensitivity+differences+among+cochlear-nerve/hair-cell+synapses.">Opposing gradients of ribbon size and AMPA receptor expression underlie sensitivity differences among cochlear-nerve/hair-cell synapses.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (3), 801-808 (2011).</li><li>Khimich, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cell+synaptic+ribbons+are+essential+for+synchronous+auditory+signalling.">Hair cell synaptic ribbons are essential for synchronous auditory signalling.</a> Nature. 434 (7035), 889-894 (2005).</li><li>Pangr&#353;i&#269;, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hearing+requires+otoferlin-dependent+efficient+replenishment+of+synaptic+vesicles+in+hair+cells.">Hearing requires otoferlin-dependent efficient replenishment of synaptic vesicles in hair cells.</a> Nature Neuroscience. 13 (7), 869-876 (2010).</li><li>Meyer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+of+synapse+number,+structure+and+function+in+the+cochlea.">Tuning of synapse number, structure and function in the cochlea.</a> Nature Neuroscience. 12 (4), 444-453 (2009).</li><li>Zhang, L., Engler, S., Koepcke, L., Steenken, F., Koeppl, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+gradients+of+ribbon+volume+and+AMPA-receptor+patch+volume+in+cochlear+afferent+synapses+on+gerbil+inner+hair+cells.">Concurrent gradients of ribbon volume and AMPA-receptor patch volume in cochlear afferent synapses on gerbil inner hair cells.</a> Hearing Research. 364, 81-89 (2018).</li><li>Steenken, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+decline+in+cochlear+ribbon+synapses+and+its+relation+to+different+metrics+of+auditory-nerve+activity.">Age-related decline in cochlear ribbon synapses and its relation to different metrics of auditory-nerve activity.</a> Neurobiology of Aging. 108, 133-145 (2021).</li><li>Merchan-Perez, A., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+differences+among+afferent+synapses+on+cochlear+hair+cells:+Correlations+with+spontaneous+discharge+rate.">Ultrastructural differences among afferent synapses on cochlear hair cells: Correlations with spontaneous discharge rate.</a> Journal of Comparative Neurology. 371 (2), 208-221 (1996).</li><li>Furman, A. C., Kujawa, S. G., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise-induced+cochlear+neuropathy+is+selective+for+fibers+with+low+spontaneous+rates.">Noise-induced cochlear neuropathy is selective for fibers with low spontaneous rates.</a> Journal of Neurophysiology. 110 (3), 577-586 (2013).</li><li>Gilels, F., Paquette, S. T., Zhang, J., Rahman, I., White, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutation+of+Foxo3+causes+adult+onset+auditory+neuropathy+and+alters+cochlear+synapse+architecture+in+mice.">Mutation of Foxo3 causes adult onset auditory neuropathy and alters cochlear synapse architecture in mice.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (47), 18409-18424 (2013).</li><li>Yin, Y., Liberman, L. D., Maison, S. F., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olivocochlear+innervation+maintains+the+normal+modiolar-pillar+and+habenular-cuticular+gradients+in+cochlear+synaptic+morphology.">Olivocochlear innervation maintains the normal modiolar-pillar and habenular-cuticular gradients in cochlear synaptic morphology.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 15 (4), 571-583 (2014).</li><li>Paquette, S. T., Gilels, F., White, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise+exposure+modulates+cochlear+inner+hair+cell+ribbon+volumes,+correlating+with+changes+in+auditory+measures+in+the+FVB/nJ+mouse.">Noise exposure modulates cochlear inner hair cell ribbon volumes, correlating with changes in auditory measures in the FVB/nJ mouse.</a> Scientific Reports. 6 (1), 25056 (2016).</li><li>Reijntjes, D. O. J., K&#246;ppl, C., Pyott, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volume+gradients+in+inner+hair+cell-auditory+nerve+fiber+pre-+and+postsynaptic+proteins+differ+across+mouse+strains.">Volume gradients in inner hair cell-auditory nerve fiber pre- and postsynaptic proteins differ across mouse strains.</a> Hearing Research. 390, 107933 (2020).</li><li>Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-neuron+labeling+in+the+cat+auditory+nerve.">Single-neuron labeling in the cat auditory nerve.</a> Science. 216 (4551), 1239-1241 (1982).</li><li>Bourien, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+auditory+nerve+fibers+to+compound+action+potential+of+the+auditory+nerve.">Contribution of auditory nerve fibers to compound action potential of the auditory nerve.</a> Journal of Neurophysiology. 112 (5), 1025-1039 (2014).</li><li>Sergeyenko, Y., Lall, K., Liberman, M. C., Kujawa, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+cochlear+synaptopathy:+An+early-onset+contributor+to+auditory+functional+decline.">Age-related cochlear synaptopathy: An early-onset contributor to auditory functional decline.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (34), 13686-13694 (2013).</li><li>Viana, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+neuropathy+in+human+presbycusis:+Confocal+analysis+of+hidden+hearing+loss+in+post-mortem+tissue.">Cochlear neuropathy in human presbycusis: Confocal analysis of hidden hearing loss in post-mortem tissue.</a> Hearing Research. 327, 78-88 (2015).</li><li>Batrel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+potentials+recorded+at+the+round+window+enable+the+detection+of+low+spontaneous+rate+fibers+in+gerbil+auditory+nerve.">Mass potentials recorded at the round window enable the detection of low spontaneous rate fibers in gerbil auditory nerve.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0169890 (2017).</li><li>Jeffers, P. W. C., Bourien, J., Diuba, A., Puel, J. -. L., Kujawa, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise-induced+hearing+loss+in+gerbil:+Round+window+assays+of+synapse+loss.">Noise-induced hearing loss in gerbil: Round window assays of synapse loss.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 15, 699978 (2021).</li><li>Gleich, O., Semmler, P., Strutz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+auditory+thresholds+and+loss+of+ribbon+synapses+at+inner+hair+cells+in+aged+gerbils.">Behavioral auditory thresholds and loss of ribbon synapses at inner hair cells in aged gerbils.</a> Experimental Gerontology. 84, 61-70 (2016).</li><li>Cheal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gerbil:+A+unique+model+for+research+on+aging.">The gerbil: A unique model for research on aging.</a> Experimental Aging Research. 12 (1), 3-21 (1986).</li><li>Gates, G. A., Mills, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presbycusis.">Presbycusis.</a> The Lancet. 366 (9491), 1111-1120 (2005).</li><li>Ryan, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hearing+sensitivity+of+the+gerbil,+Meriones+unguiculatis.">Hearing sensitivity of the gerbil, Meriones unguiculatis.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 59 (5), 1222-1226 (1976).</li><li>M&#252;ller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cochlear+place-frequency+map+of+the+adult+and+developing+gerbil.">The cochlear place-frequency map of the adult and developing gerbil.</a> Hearing Research. 94 (1-2), 148-156 (1996).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Reijntjes, D. O. J., Breitzler, J. L., Persic, D., Pyott, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+the+intact+rodent+organ+of+Corti+for+RNAscope+and+immunolabeling,+confocal+microscopy,+and+quantitative+analysis.">Preparation of the intact rodent organ of Corti for RNAscope and immunolabeling, confocal microscopy, and quantitative analysis.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100544 (2021).</li><li>Hickman, T. T., Hashimoto, K., Liberman, L. D., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+migration+and+reorganization+after+noise+exposure+suggests+regeneration+in+a+mature+mammalian+cochlea.">Synaptic migration and reorganization after noise exposure suggests regeneration in a mature mammalian cochlea.</a> Scientific Reports. 10 (1), 19945 (2020).</li><li>Gray, D. A., Woulfe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipofuscin+and+aging:+a+matter+of+toxic+waste.">Lipofuscin and aging: a matter of toxic waste.</a> Science of Aging Knowledge Environment: SAGE KE. 2005 (5), 1 (2005).</li><li>Li, H. -. S., Hultcrantz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+degeneration+of+the+organ+of+Corti+in+two+genotypes+of+mice.">Age-related degeneration of the organ of Corti in two genotypes of mice.</a> ORL; Journal for Oto-rhino-laryngology and Its Related Specialties. 56 (2), 61-67 (1994).</li><li>Kobrina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+anatomical+and+physiological+markers+of+auditory+system+degeneration+with+behavioral+hearing+assessments+in+a+mouse+(Mus+musculus)+model+of+age-related+hearing+loss.">Linking anatomical and physiological markers of auditory system degeneration with behavioral hearing assessments in a mouse (Mus musculus) model of age-related hearing loss.</a> Neurobiology of Aging. 96, 87-103 (2020).</li><li>Moreno-Garc&#237;a, A., Kun, A., Calero, O., Medina, M., Calero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+the+role+of+lipofuscin+in+age-related+neurodegeneration.">An overview of the role of lipofuscin in age-related neurodegeneration.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 464 (2018).</li><li>Jensen, T., Holten-Rossing, H., Svendsen, I., Jacobsen, C., Vainer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+myocardial+tissue+with+digital+autofluorescence+microscopy.">Quantitative analysis of myocardial tissue with digital autofluorescence microscopy.</a> Journal of Pathology Informatics. 7, 15 (2016).</li><li>Kalluri, R., Monges-Hernandez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+gradients+in+the+size+of+inner+hair+cell+ribbons+emerge+before+the+onset+of+hearing+in+rats.">Spatial gradients in the size of inner hair cell ribbons emerge before the onset of hearing in rats.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 18 (3), 399-413 (2017).</li><li>Wu, P. Z., Liberman, L. D., Bennett, K., de Gruttola, V., O'Malley, J. T., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+neural+degeneration+in+the+human+cochlea:+Evidence+for+hidden+hearing+loss+in+the+aging+ear.">Primary neural degeneration in the human cochlea: Evidence for hidden hearing loss in the aging ear.</a> Neuroscience. 407, 8-20 (2019).</li></ol>

باستخدام الطريقة الموضحة في هذا البروتوكول ، من الممكن وضع علامة مناعية على IHCs والهياكل المشبكية في القوقعة من الجربلات الشابة والمسنين ، وتحديد نقاط الاشتباك العصبي الوظيفية المفترضة عن طريق التوطين المشترك للعناصر قبل وبعد المشبكي ، وتخصيصها إلى IHCs الفردية ، وتحديد عددها وحجمها وموقع...

فقدان السمع المرتبط بالعمر هو واحد من أكثر الأمراض انتشارا في العالم التي تؤثر على أكثر من ثلث سكان العالم الذين تتراوح أعمارهم بين 65 سنة وما فوق1. لا تزال الأسباب الكامنة وراء ذلك قيد النقاش ويجري التحقيق فيها بنشاط ولكنها قد تشمل فقدان نقاط الاشتباك العصبي المتخصصة التي تربط خلايا الشعر الداخلية (IHCs) بالألياف العصبية السمعيةالقريبة 2. تتكون هذه المشابك الشريطية من بنية ما قبل المشبكي تحتوي على حويصلات مملوءة بغلوتامات الناقل العصبي المربوطة بها ، بالإضافة إلى مستقبلات الغلوتامات α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA)بعد المشبكي 3,4,5. في الجربيل ، ~ 20 من الألياف العصبية السمعية القريبة الاتصال واحد IHC 6,7,8. وتعارض الألياف الموجودة على المدينة العالمية للخدمات الإنسانية التي تواجه الموديولوس الشرائط المشبكية الكبيرة، في حين أن الألياف المتصلة على جانب العمود من المدينة العالمية للخدمات الإنسانية تواجه شرائط متشابكة صغيرة (أي في القطط9، والجربلات7، وخنازير غينيا10، والفئران3،11،12،13،14). علاوة على ذلك ، في الجربيل ، يرتبط حجم الشرائط قبل المشبكي وبقع الغلوتامات ما بعد المشبكي ارتباطا إيجابيا 7,14. الألياف التي تعارض الشرائط الكبيرة على الجانب المعياري من المدينة العالمية للخدمات الإنسانية صغيرة في العيار ولها معدلات عفوية منخفضة وعتبات عالية15. هناك أدلة على أن الألياف ذات المعدل التلقائي المنخفض أكثر عرضة للتعرض للضوضاء10 والأدوية السامة للأذن 16 من الألياف منخفضة العتبة عالية العفوية ، والتي تقع على جانب العمود من IHCs15.
فقدان نقاط الاشتباك العصبي الشريطية هو أقرب حدث تنكسي في فقدان السمع العصبي المرتبط بالعمر القوقعي ، في حين أن فقدان الخلايا العقدية الحلزونية وأليافها العصبية السمعية المرتبطة بها يتخلف عن17,18. تشمل الارتباطات الكهروفسيولوجية تسجيلات استجابات جذع الدماغ السمعية17 وإمكانات العمل المركب8 ؛ ومع ذلك ، فإن هذه لا تعكس التفاصيل الدقيقة لفقدان المشبك العصبي ، لأن الألياف ذات المعدل التلقائي المنخفض لا تساهم في هذه التدابير16. المقاييس الكهروفسيولوجية الكهربية الواعدة هي المؤشر العصبي المشتق من جهد الكتلة19 والاستجابة الزمنية المحيطة بالتحفيز20. ومع ذلك ، لا يمكن الاعتماد عليها إلا إذا لم يكن لدى الحيوان أمراض قوقعة الأذن الأخرى ، بخلاف فقدان الألياف العصبية السمعية ، والتي تؤثر على نشاط الألياف العصبية السمعية المتبقية8. علاوة على ذلك ، لم تكن العتبات التي تم تقييمها سلوكيا في الجربيل مرتبطة بأرقام المشبك21. لذلك ، لا يمكن الاعتماد على القياس الكمي لنقاط الاشتباك العصبي الشريطية الباقية على قيد الحياة ، وبالتالي ، فإن عدد الألياف العصبية السمعية الوظيفية لا يمكن تحقيقه إلا من خلال الفحص المباشر لأنسجة القوقعة الصناعية.
الجربيل المنغولي (Meriones unguiculatus) هو نموذج حيواني مناسب لدراسة فقدان السمع المرتبط بالعمر. له عمر افتراضي قصير ، ولديه سمع منخفض التردد مشابه للبشر ، وسهل الصيانة ، ويظهر أوجه تشابه مع الأمراض البشرية المتعلقة بفقدان السمع المرتبط بالعمر2،22،23،24. تعتبر الجربلات مسنة عندما تصل إلى 36 شهرا من العمر ، وهو ما يقرب من نهاية متوسط عمرهاالافتراضي 22. الأهم من ذلك ، تم إثبات فقدان مرتبط بالعمر من نقاط الاشتباك العصبي الشريطية في الجربلات التي تم تربيتها وعمرها في بيئات هادئة 8,21.
هنا ، يتم تقديم بروتوكول للتسمية المناعية ، وتشريح ، وتحليل القوقعة من الجربلات من مختلف الأعمار ، من الشباب إلى كبار السن. يتم استخدام الأجسام المضادة الموجهة ضد مكونات ما قبل المشبك (CtBP2) ، وبقع مستقبلات الغلوتامات بعد المشبكية (GluA2) ، و IHCs (myoVIIa). يتم تطبيق مبرد التألق الذاتي الذي يقلل من الخلفية في القوقعة القديمة ويترك إشارة التألق سليمة. علاوة على ذلك ، يتم إعطاء وصف لكيفية تشريح القوقعة لفحص كل من الظهارة الحسية والأوعية الدموية stria. يتم قياس طول القوقعة الصناعية لتمكين اختيار مواقع القوقعة الصناعية المتميزة التي تتوافق مع أفضل الترددات المحددة25. يتم إجراء القياس الكمي لأرقام المشبك باستخدام البرنامج المتاح مجانا ImageJ26. يتم إجراء تقدير كمي إضافي لأحجام ومواقع المشبك داخل HC الفردي باستخدام برنامج مخصص مكتوب في Matlab. لا يتم توفير هذا البرنامج للجمهور ، حيث يفتقر المؤلفون إلى الموارد اللازمة لتوفير الوثائق المهنية والدعم.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Albumin Fraction V biotin-free</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>0163.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CtBP2 (IgG1 monoclonal mouse)</td>
			<td>BD Biosciences, Eysins</td>
			<td>612044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-GluA2 (IgG2a monoclonal mouse)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB39</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse (IgG1)-AF 488</td>
			<td>Molecular Probes Inc.</td>
			<td>A21121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-MyosinVIIa (IgG polyclonal rabbit)</td>
			<td>Proteus Biosciences</td>
			<td>25e6790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade Holder &#38; Breaker - Flat Jaws</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10052-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Artery Scissors - Ball Tip</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14086-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip thickness 1.5H, 24 x 60 mm</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>LH26.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Surgical Blade</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>0473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>donkey anti-rabbit (IgG)-AF647</td>
			<td>Life Technologies-Molecular Probes</td>
			<td>A-31573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5SF Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, absolute 99.8%</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12468750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>8040.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather Double Edge Blade</td>
			<td>PLANO</td>
			<td>112-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>G19 Cannula</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>9003633</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat anti-mouse (IgG2a)-AF568</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>N68542.04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Huygens Essentials</td>
			<td>Scientific Volume Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersol, Immersion oil 518F</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>10539438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intrafix Primeline Classic, 150 cm (mit Datamatrix Code auf der Sterilverpackung)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4062957E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ISM596D</td>
			<td>Ismatec</td>
			<td></td>
			<td>peristaltic pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KL 1600 LED</td>
			<td>Schott</td>
			<td>150.600</td>
			<td>light source for stereomicroscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Application suite X</td>
			<td>Leica Microsystem CMS GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica TCS SP8 system</td>
			<td>Leica Microsystem CMS GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matlab</td>
			<td>The Mathworks Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Scissors Tungston Carbide ToghCut</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14512-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-100 Orbital-Genie</td>
			<td>Scientific Industries</td>
			<td>SI-M100</td>
			<td>for use in cold environment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narcoren (pentobarbital)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Ni-Ei</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements</td>
			<td>Nikon Europe B.V.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>0335.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish without vents</td>
			<td>Avantor VWR</td>
			<td>390-1375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium phosphate</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A1046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monopotassium phosphate</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>3904.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>6781.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>31434-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw Cap Containers</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>75.562.300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>K305.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Adson Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Halsted-Mosquito Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91308-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Adhesion Microscope Slides</td>
			<td>Epredia</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton&#160; X</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>3051.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quencher</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>23007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors, 3mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibrax VXR basic</td>
			<td>IKA</td>
			<td>0002819000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VX 7 Dish attachment for Vibrax VXR basic</td>
			<td>IKA</td>
			<td>953300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild TYP 355110 (Stereomicroscope)</td>
			<td>Wild Heerbrugg</td>
			<td></td>
			<td>not available anymore</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunolabeling and counting ribbon synapses in young adult and aged gerbil cochleae

يفترض أن فقدان نقاط الاشتباك العصبي الشريطية التي تربط خلايا الشعر الداخلية والألياف العصبية السمعية القريبة هو أحد أسباب فقدان السمع المرتبط بالعمر. الطريقة الأكثر شيوعا للكشف عن فقدان نقاط الاشتباك العصبي الشريطية هي وضع العلامات المناعية لأنها تسمح بأخذ العينات الكمية من عدة مواقع تونوتوبية في قوقعة واحدة. ومع ذلك ، يتم دفن الهياكل ذات الأهمية في عمق القوقعة العظمية. تستخدم الجربلات كنموذج حيواني لفقدان السمع المرتبط بالعمر. هنا ، يتم وصف البروتوكولات الروتينية للتثبيت ، ووضع العلامات المناعية على حوامل القوقعة الصناعية الجربيل ، والتصوير البؤري ، وتحديد أعداد وأحجام المشبك الشريطي كميا. علاوة على ذلك ، يتم تسليط الضوء على التحديات الخاصة المرتبطة بالحصول على مواد جيدة من الأفراد المسنين القيمين. 
يتم قتل الجربلات بالقتل الرحيم وإما أن يتم تأديلها عن طريق القلب والأوعية الدموية ، أو يتم تشريح الفقاعات الطبلية بعناية من الجمجمة. يتم فتح القوقعة في القمة والقاعدة ونقلها مباشرة إلى المثبت. بغض النظر عن الطريقة الأولية ، يتم تثبيت القوقعة بعد ذلك ثم إزالة الكلس. ثم يتم تصنيف الأنسجة بأجسام مضادة أولية ضد الهياكل والخلايا الشعرية قبل وبعد المشبكي. بعد ذلك ، يتم احتضان القوقعة بأجسام مضادة ثانوية موسومة بالتألق تكون محددة ضد الأجسام المضادة الأولية الخاصة بكل منها. ثم يتم التعامل مع قوقعة الأذن من الجربلات المسنة باستخدام مبرد التألق الذاتي لتقليل التألق الخلفي الكبير عادة لأنسجة الحيوانات الأكبر سنا. 
أخيرا ، يتم تشريح القوقعة إلى 6-11 جزءا. يتم إعادة بناء طول القوقعة الصناعية بالكامل بحيث يمكن تحديد مواقع قوقعة صناعية محددة بشكل موثوق بين الأفراد. تساعد مكدسات الصور البؤرية ، التي يتم الحصول عليها بالتتابع ، على تصور خلايا الشعر ونقاط الاشتباك العصبي في المواقع المختارة. يتم فك المكدسات متحدة البؤرة ، ويتم حساب نقاط الاشتباك العصبي إما يدويا باستخدام ImageJ ، أو يتم إجراء تحديد كمي أكثر شمولا للهياكل المشبكية باستخدام إجراءات تحليل الصور المكتوبة خصيصا في Matlab.

تم حصاد القوقعة إما بعد تروية القلب والأوعية الدموية مع تثبيت الحيوان بأكمله أو تشريحها بسرعة بعد القتل الرحيم للحيوان وإصلاح الغمر. وباستخدام الطريقة الأخيرة، ظلت ال IHCs في مكانها أثناء التشريح، في حين أنه في حالات التروية غير الناجحة وبالتالي الأنسجة غير الثابتة بما فيه الكفاية، غالبا ?...

Watch this Scientific Journal Video about Immunolabeling and Counting Ribbon Synapses in Young Adult and Aged Gerbil Cochleae at JoVE.com

Immunolabeling and Counting Ribbon Synapses in Young Adult and Aged Gerbil Cochleae

يتم تقديم بروتوكول لمعالجة قوقعة الجربيل لدى البالغين والمسنين عن طريق وضع العلامات المناعية على الهياكل المشبكية وخلايا الشعر ، وإخماد التألق الذاتي في الأنسجة القديمة ، وتشريح وتقدير طول القوقعة ، وتحديد نقاط الاشتباك العصبي في أكوام الصور التي تم الحصول عليها باستخدام التصوير البؤري.

الوسم المناعي والعد المشبك الشريطي في قوقعة الجربيل لدى الشباب والمسنين

The loss of ribbon synapses connecting inner hair cells and afferent auditory nerve fibers is assumed to be one cause of age-related hearing loss. The ...

يتيح هذا البروتوكول تقييم السلامة المشبكية في قوقعة الجربيل من جميع الأعمار. هذا مهم للبحث الأساسي في مشاكل السمع ، على وجه الخصوص ، بسبب الشيخوخة. البروتوكول سريع نسبيا وينتج بيانات كمية من عدة مواقع على طول القوقعة.علاوة على ذلك ، فإنه يعالج مشكلة محددة تتمثل في شيخوخة الأنسجة باستخدام كوينشر التألق الذاتي. انحطاط نقاط الاشتباك العصبي هو أقرب علامة على فقدان الوظيفة في القوقعة. يعد قياسه كميا أداة مهمة في البحث نحو تطوير أدوات تشخيصية غير جراحية لاعتلال المشابك العصبي.تشريح القوقعة الصناعية هو الجزء الأكثر أهمية الذي يحتاج إلى ممارسة ، لذلك من الأفضل البدء بالقوقعة غير التجريبية. ابدأ بإزالة الفطائر. قطع العظم بالمقص أو تكسير العظم بالملقط وإزالته بالملقط للوصول إلى القوقعة.قم بإزالة القنوات العمودية والقنوات نصف الدائرية والقنوات نصف الدائرية. قم بإزالة العظم الذي يغطي قمة القوقعة بعناية وخدش عظم القوقعة الصناعية بالملقط لعمل ثقوب صغيرة في القمة وفي المنعطف القاعدي أو قم بكز الثقوب بعناية في كلا الموقعين. انقل الفقاعات على الفور إلى ما لا يقل عن 50 ملليلتر من المثبت البارد.لقطع القوقعة إلى نصفين، ضع قطعة من شفرة الحلاقة لفترة أطول من الطول الملفوف للقوقعة في حامل شفرة. ثم ضع القوقعة في طبق بتري تحت مجهر ستيريو. قطع الأنسجة الزائدة باستخدام شفرة حلاقة أو بمقص دقيق.امسك القوقعة في مكانها باستخدام ملقط ناعم وقطعها إلى نصفين على طول الموديولوس. تحضير محلول 5 ٪ من التبريد autofluororescence عن طريق مزجه مع 70 ٪ من الإيثانول. ضع الكوتشلي في هذا المحلول واحتضنه لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة على شاكر متبوعا بغسل ثلاث مرات بملليلتر واحد من PBS لمدة خمس دقائق.لتشريح القوقعة ، اجمع ملقطين دقيقين ، ملقطين فائقي الدقة ، فانا ، مقص زنبركي ، حامل شفرة ، شفرة حلاقة ، واملأ طبق بوليستيرول بتري وغطائه ب PBS. كسر القطع من شفرة الحلاقة للحصول على سطح قطع من اثنين إلى أربعة ملليمترات. قطع القوقعة إلى نصفين كما هو موضح في القسم لإعداد الأنسجة.قم بإصلاح نصف القوقعة الصناعية بعناية باستخدام الملقط بحيث تكون الحافة المقطوعة متجهة لأعلى. استخدم مقص زنبركي ناعم لقطع عظم القوقعة فوق مهبط طائرات الهليكوبتر الذي يغطي القمة. ثم ، استخدم المقص لعزل المنعطف القمي عن طريق قطع modiolus والعصب السمعي ودهليز scala.قم بإجراء قطعتين على كل جانب من عظم القوقعة الصناعية أعلاه ، أو إذا لم تكن هناك حاجة إلى الأوعية الدموية المخططة لمزيد من التقييم ، مباشرة من خلال الأوعية الدموية المخططة للمنعطف الأوسط. استخدم شفرة الحلاقة لفصل قطع القوقعة الصناعية. بدلا من ذلك ، قطع بين جهاز كورتي والأوعية الدموية ستريا.اترك المخطط الوعائي متصلا بالرباط الحلزوني وقم بإزالة العظم المنزوع الكلس باستخدام الملقط. بعد ذلك ، انقل قطع القوقعة الصناعية إلى غطاء طبق بتري مملوء ب PBS. قم بإزالة الأنسجة الزائدة على جانبي العمود و modiolar بحيث تستلقي الحوامل بأكملها لاحقا على الشريحة بشكل مسطح قدر الإمكان.يجب قطع قطع القوقعة الصناعية الكبيرة ، على وجه الخصوص ، تلك التي تنشأ من المنعطف القاعدي ، إلى قطعتين. قم بإزالة الغشاء التكتوري بعناية باستخدام ملقط فائق الدقة. ضع قطع القوقعة الصناعية على شريحة في قطرة من وسط التركيب ، مما يضمن أن جهاز كورتي مواجه لأعلى.قم بتحويل قطعة القوقعة الصناعية إلى المستوى السهمي وابحث عن غزو الطرف الحلزوني على مقربة من خلايا الشعر الداخلية. يمكن رؤية هذا الغزو للطرف الحلزوني بشكل أكثر وضوحا في قطع القوقعة الصناعية الوسطى والقاعدية. انقل القوقعة بأكملها والأوعية الدموية المخططة بأكملها إلى شريحة المجهر عن طريق تكرار هذه الخطوات.قم بتغطية الشريحة وأضف طلاء أظافر أسود حول الحواف لإغلاقها. تجف في الظلام وتخزنها عند أربع درجات مئوية. افتح نسخة من المكدسات غير المعقدة في برنامج ImageJ المحمل بالمكون الإضافي BioVoxxel.قم بتقسيم القنوات بالنقر فوق صورة، ثم لون، ثم تقسيم القنوات. قم بدمجها بالنقر فوق صورة ، ثم لون ، ثم دمج القنوات لتعيين ألوان مختلفة. قم بتحويل الصورة إلى مكدس RGB بالنقر فوق صورة، ثم انتقل إلى اللون وانقر فوق Stack to RGB.اضبط السطوع والتباين بالنقر فوق صورة وضبط ثم سطوع / تباين. استخدم إما شريط التمرير التلقائي أو شريط التمرير للتأكد من أن الهياكل قبل وبعد المشبكي وملصقات خلايا الشعر الداخلية متميزة عن الخلفية. قم بتسمية خمس خلايا شعرية داخلية باستخدام أداة النص بالنقر فوق الموقع المطلوب داخل المكدس.بعد ذلك، انتقل إلى تحليل، ثم أدوات، وحدد مدير عائد الاستثمار. حدد تسميات خانة الاختيار لتسمية النقاط برقم. قم بتكبير خلية الشعر الداخلية المثيرة للاهتمام.انقر بزر الماوس الأيمن على أداة النقطة لاختيار وضع النقاط المتعددة. قم بالتمرير عبر البعد Z وحساب نقاط الاشتباك العصبي الوظيفية للشريط، والتي يتم تحديدها بواسطة شريط ما قبل المشبكي في تجاور مع رقعة الغلوتامات بعد المشبكي. بعد تحديد جميع هياكل الاهتمام ، انقر فوق إضافة مدير عائد الاستثمار ، ثم انقر فوق الاسم التعسفي واختر إعادة تسمية.باستخدام أداة اليد ، اضبط الصورة لعرض خلية الشعر الداخلية التالية بالكامل. قم بالتغيير من أداة النقاط المتعددة إلى أداة النقطة لتجنب إضافة المزيد من النقاط إلى البيانات المخزنة مسبقا. انقر على بنية ذات أهمية داخل خلية الشعر الداخلية التالية وقم بالتغيير إلى أداة متعددة النقاط.استمر في إضافة المشبك الشريطي الوظيفي في مدير عائد الاستثمار حتى يتم تقييم جميع خلايا الشعر الداخلية. انقر فوق مجموعة بيانات في مدير عائد الاستثمار ثم فوق قياس. انتظر حتى تظهر نافذة جديدة تسرد نقاط البيانات المقاسة وانقر فوق ملف وحفظ باسم لحفظ هذه القائمة كجدول بيانات.احفظ الصورة عن طريق تنشيط إظهار الكل في مدير عائد الاستثمار. انقر فوق Flatten لإضافة تسميات النقاط بشكل دائم إلى المكدس وانقر فوق الموافقة على الإغلاق عن طريق حفظ التغييرات. تظهر إسقاطات مكدس Z من قوقعة جربيل شاب يبلغ من العمر 10 أشهر أن خلايا الشعر الداخلية التي تحمل علامة الميوسين 7A الموضحة هنا بخطوط متقطعة بيضاء كانت في تناقض حاد مع الخلفية.تم وضع علامة على الشرائط قبل المشبكي مع اثنين مضادين ل CtBP2 معروضين باللون الأخضر ، في حين تم وضع علامة على بقع الغلوتامات بعد المشبكي مع مضاد GluA2 موضح باللون الأحمر. تم علاج القوقعة من جربيل قديم يبلغ من العمر 38 شهرا باستخدام مبرد التألق الذاتي وأظهرت خلايا شعر داخلية متميزة ذات هياكل واضحة قبل وبعد المشبكية المرئية. لاختبار استقرار الوسم المناعي ، تم تصوير نفس القطعة من القوقعة من الجربيل الصغير بعد ثلاثة أشهر و 29 شهرا ونصف الشهر.وعلى الرغم من انخفاض نسبة الإشارة إلى الضوضاء، كانت نقاط الاشتباك العصبي الوظيفية متميزة وقابلة للقياس الكمي. حتى في حالة فشل القطع، قم بتركيب القطعة المتبقية من الأنسجة لتقدير طول القوقعة الصناعية بالكامل بدقة أكبر. البيانات من هذا البروتوكول ذات قيمة خاصة إذا سبقتها اختبارات السمع الكهروفسيولوجية أو النفسية الفيزيائية ، ثم ارتبطت بها بشكل فردي.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Kinematics and Ground Reaction Force Determination: A Demonstration Quantifying Locomotor Abilities of Young Adult, Middle-aged, and Geriatric Rats

الكينماتيكا وتحديد أرضية قوة الرد : A القدرات مظاهرات الحركي تحديد مقدار من الشباب البالغين ، في منتصف العمر والشيخوخة الفئران

Behavior, in its broadest definition, can be defined as the motor manifestation of physiologic processes.  As such, all behaviors manifest through the ...

Targeted Training of Ultrasonic Vocalizations in Aged and Parkinsonian Rats

استهدف التدريب من الالفاظ بالموجات فوق الصوتية في الجرذان المسنين وباركنسونية

Voice deficits are a common complication of both Parkinson disease (PD) and aging; they can significantly diminish quality of life by impacting ...

Cerebrovascular Casting of the Adult Mouse for 3D Imaging and Morphological Analysis

صب الدماغية للماوس الكبار عن التصوير والتحليل الصرفي 3D

Vascular imaging is crucial in the clinical diagnosis and management of cerebrovascular diseases, such as brain arteriovenous malformations (BAVMs). ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

كله من جبل Immunolabeling الشم مستقبلات الخلايا العصبية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الهوائي

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

مضان وتلألؤ بيولوجي التصوير من التحت خلوية كا<sup&gt; 2+</sup&gt; في المسنين الحصين الخلايا العصبية

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...

High-Resolution Quantitative Immunogold Analysis of Membrane Receptors at Retinal Ribbon Synapses

عالية الدقة التحليل الكمي Immunogold من غشاء المستقبلات في الشبكية نقاط الاشتباك العصبي الشريط

Retinal ganglion cells (RGCs) receive excitatory glutamatergic input from bipolar cells. Synaptic excitation of RGCs is mediated postsynaptically by NMDA ...

Combined Optogenetic and Freeze-fracture Replica Immunolabeling to Examine Input-specific Arrangement of Glutamate Receptors in the Mouse Amygdala

جنبا إلى جنب علم البصريات الوراثي وتجميد كسر طبق الاصل Immunolabeling لدراسة ترتيب المدخلات معين من الغلوتامات المستقبلات في اللوزة ماوس

Freeze-fracture electron microscopy has been a major technique in ultrastructural research for over 40 years. However, the lack of effective means to ...

Morphological and Functional Evaluation of Ribbon Synapses at Specific Frequency Regions of the Mouse Cochlea

التقييم المورفولوجي والوظيفي لمناصات الشريط في مناطق تردد محددة من القوقعة الماوس

Cochlear inner hair cells (IHCs) transmit acoustic signals to spiral ganglion neurons (SGNs) through ribbon synapses. Several experimental studies have ...

Morphological and Functional Evaluation of Axons and their Synapses during Axon Death in Drosophila melanogaster

Morphological and Functional Evaluation of Axons and their Synapses during Axon Death in Drosophila melanogaster

تقييم مورفولوجية ووظيفية من أكسونس ونقاط الاشتباك العصبي خلال وفاة أكسون في دروسوفيلا melanogaster

Axon degeneration is a shared feature in neurodegenerative disease and when nervous systems are challenged by mechanical or chemical forces. However, our ...

Culture of Neurospheres Derived from the Neurogenic Niches in Adult Prairie Voles

ثقافة الخلايا العصبية المشتقة من المنافذ العصبية في الكبار فولز

Neurospheres are primary cell aggregates that comprise neural stem cells and progenitor cells. These 3D structures are an excellent tool to determine the ...