Bottom-up In vitro Methoden zur Untersuchung der ultrastrukturellen Organisation, der Membranumformung und des Krümmungsempfindlichkeitsverhaltens von Septinen
Generation of a Supported Lipid Bilayer and Protein Incubation
3:22
Sample Fixation, Sample Dehydration, Critical Point Drying
4:43
Sample Mounting and Coating
5:54
Acquire the Images Using a Field-Emission SEM (FE-SEM) Microscope
6:56
Results: Analysis of the Self-Assembly of Septins at the Lipid Membrane
8:27
Conclusion
Transcript
Mit diesem Protokoll visualisierten wir die Organisation von filamentösen Proteinen des Zytoskeletts auf Mustersubstraten mit verschiedenen Krümmungen. Wir können die Krümmungsempfindlichkeit testen. Die Auflösung von rasterelektronenmikroskopisch
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Septine sind Zytoskelettproteine. Sie interagieren mit Lipidmembranen und können Membrankrümmungen im Mikrometerbereich wahrnehmen, aber auch erzeugen. Wir beschreiben in diesem Protokoll Bottom-up-In-vitro-Methoden zur Analyse von Membranverformungen, krümmungsempfindlicher Septinbindung und Septinfilament-Ultrastruktur.