Name: a mice model of chlorhexidine gluconate-induced peritoneal damage
Uploaded: 2022-04-28T14:45:00
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Nous remercions sincèrement Shin-Han Tseng pour la discussion critique et l’exécution partielle de l’étude. Cette étude a été soutenue par EDAHP110003 et NCKUEDA110002 de la Fondation de recherche de l’hôpital E-DA et de l’Université nationale Cheng Kung, Taiwan.

Toutes les expériences sur les souris ont été approuvées par le Centre des animaux de laboratoire de l’hôpital E-DA / Université I-Shou et ont été traitées conformément au « Guide for the Care and Use of Laboratory Animals » (NRC, États-Unis 2011). Des souris mâles C57BL/6, âgées de 7 à 8 semaines, ont été utilisées pour la présente étude.
1. Préparation chimique
<ol><li>Préparer l’irritant chimique en diluant le gluconate de chlorhexidine à 0,1 ...

<ol>
	<li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+outcome+of+CAPD:+twenty-five+years'+experience+in+a+single+Korean+center.">Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center.</a> Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).</li><li>Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+affecting+the+longevity+of+the+continuous+peritoneal+dialysis+therapy.">Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy.</a> Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).</li><li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+D+can+ameliorate+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+and+functional+deterioration+through+the+inhibition+of+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+mesothelial+cells.">Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells.</a> BioMed Research International. 2015, 595030 (2015).</li><li>Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+technique+survival+on+peritoneal+dialysis+better+in+Japan.">Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).</li><li>Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+practice+of+peritoneal+dialysis+in+children:+results+of+a+longitudinal+survey.+Mid+European+Pediatric+Peritoneal+Dialysis+Study+Group+(MEPPS).">Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS).</a> Peritoneal Dialysis International. 19, 445-449 (1999).</li><li>Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+failure+in+peritoneal+dialysis+and+its+impact+on+patient+survival.">Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival.</a> Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).</li><li>Schmidt, D. W., Flessner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+treatment+of+encapsulating+peritoneal+sclerosis:+basic+and+translational+research.">Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, 10-15 (2008).</li><li>Augustine, T., Brown, P. W., Davies, S. D., Summers, A. M., Wilkie, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encapsulating+peritoneal+sclerosis:+clinical+significance+and+implications.">Encapsulating peritoneal sclerosis: clinical significance and implications.</a> Nephron Clinical Practice. 111 (2), 149-154 (2009).</li><li>Di Paolo, N., Nicolai, G. A., Garosi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+peritoneum:+from+histological+studies+to+mesothelial+transplant+through+animal+experimentation.">The peritoneum: from histological studies to mesothelial transplant through animal experimentation.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, 5-9 (2008).</li><li>Fusshoeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histomorphological+and+functional+changes+of+the+peritoneal+membrane+during+long-term+peritoneal+dialysis.">Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis.</a> Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).</li><li>Goffin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+membrane+structural+and+functional+changes+during+peritoneal+dialysis.">Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis.</a> Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).</li><li>Ito, T., Yorioka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+damage+by+peritoneal+dialysis+solutions.">Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions.</a> Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).</li><li>Io, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SAHA+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice.">SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).</li><li>Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2-biased+GATA-3+transgenic+mice+developed+severe+experimental+peritoneal+fibrosis+compared+with+Th1-biased+T-bet+and+Th17-biased+RORgammat+transgenic+mice.">Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice.</a> Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).</li><li>Karl, Z. J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+Equilibration+Test.">Peritoneal Equilibration Test.</a> Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).</li><li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+implication+of+vitamin+D+nanomedicine+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage.">The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).</li><li>Goldner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+the+masson+trichrome+technique+for+routine+laboratory+purposes.">Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes.</a> The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).</li><li>Cheng, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+application+of+magnetite+nanoparticle-mediated+vitamin+D3+delivery+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage.">Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).</li><li>Ross, A., Willson, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures. , 13-16 (2017).</li><li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventive+effect+of+pirfenidone+against+experimental+sclerosing+peritonitis+in+rats.">Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats.</a> Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).</li><li>Ishii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+sclerosing+encapsulating+peritonitis+model+in+mice.">An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).</li><li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligonucleotides+against+collagen-binding+stress+protein+HSP47+suppress+peritoneal+fibrosis+in+rats.">Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats.</a> Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).</li><li>Mishima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+expression+of+heat+shock+protein+47+in+rat+model+of+peritoneal+fibrosis.">Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).</li><li>Kushiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+liposome-encapsulated+clodronate+on+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+in+rats.">Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).</li><li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+lymphocyte+infiltration+in+the+progression+of+mouse+peritoneal+fibrosis+model.">Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model.</a> Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).</li><li>Lua, I., Li, Y., Pappoe, L. S., Asahina, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblastic+conversion+and+regeneration+of+mesothelial+cells+in+peritoneal+and+liver+fibrosis.">Myofibroblastic conversion and regeneration of mesothelial cells in peritoneal and liver fibrosis.</a> The American Journal of Pathology. 185 (12), 3258-3273 (2015).</li><li>Kitamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigallocatechin+gallate+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice.">Epigallocatechin gallate suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Chemico-Biological Interactions. 195 (1), 95-104 (2012).</li></ol>

Dans cette étude, un modèle de MP murine est présenté par injection i.p. de CG, et les résultats ont montré une fibrose péritonéale et une détérioration fonctionnelle dans ce modèle, qui imitait l’état du patient MP.
Le protocole comporte plusieurs étapes critiques. Tout d’abord, pour effectuer une injection intra-électrique de CG ou NS, la peau de la paroi abdominale de la souris doit être ramassée à l’aide d’une pince pour prévenir les dommages aux organes intrapér...

La dialyse péritonéale (DP) est un type de thérapie de remplacement rénal. Cependant, la MP a des problèmes qui ne peuvent pas être résolus. Par exemple, le traitement à long terme de la MP peut causer des dommages péritonéaux, entraînant éventuellement un échec de l’ultrafiltration et l’arrêt du traitement 1,2,3,4,5,6. La fibrose péritonéale est l’une des complications les plus graves 7,8. La fibrose péritonéale est caractérisée par le dépôt et l’accumulation de matrice extracellulaire dans l’interstitium, ainsi que par la néo-angiogenèse et la vasculopathie du péritoine 9,10.
Les principales causes de ces changements péritonéaux sont la péritonite récurrente et la non-biocompatibilité du dialysat, qui sont hyperosmotiques, hyperglycémiques, faible pH et accumulation de produits de dégradation du glucose11,12. Par conséquent, des modèles expérimentaux animaux appropriés peuvent aider les chercheurs à mieux étudier les changements physiologiques et pathologiques du péritoine pendant le traitement par MP. Par conséquent, l’établissement d’un modèle animal de MP est important pour améliorer la technologie de la MP et l’efficacité de la dialyse et prolonger la survie des patients. Cette étude visait à générer un modèle murin par injection intrapéritonéale (i.p.) de gluconate de chlorhexidine (CG), comme décrit précédemment13,14. Ce modèle de souris est simple, facile à utiliser et réalisable par rapport aux autres modèles animaux.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Normal Saline</td>
			<td>Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan</td>
			<td>00002A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic biochemical analyzer</td>
			<td>Hitachi Ltd., Tokyo, Japan</td>
			<td>Labospect Series 008</td>
			<td>for determining glucose concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine digluconate solution, 20% in H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td>
			<td>C9394</td>
			<td>diluted to 0.1% with 15% ethanol for injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA</td>
			<td>BAKR8006-05</td>
			<td>diluted to 15% with normal saline for working concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (Dianeal)</td>
			<td>Baxter International, Inc., IL, USA</td>
			<td>FNB9896</td>
			<td>Commercial dialysis solution (4.25%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 8.0</td>
			<td>GraphPad Software, Inc., CA, US</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-type Glu 2 assay</td>
			<td>FUJIFILM Wako, Japan</td>
			<td>461-32403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine 20</td>
			<td>Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil 50</td>
			<td>Virbac Laboratories, Carros, France</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mice model of chlorhexidine gluconate-induced peritoneal damage

La fibrose péritonéale est une complication importante de la dialyse péritonéale (MP). Pour étudier et résoudre ce problème, un modèle animal approprié de MP est nécessaire. Le présent protocole établit un modèle de fibrose péritonéale induite par le gluconate de chlorhexidine (CG) qui imite l’état d’un patient atteint de la MP. La fibrose péritonéale a été induite par injection intrapéritonéale de 0,1% de CG dans de l’éthanol à 15% pendant 3 semaines (administrée tous les deux jours), pour un total de neuf fois chez des souris mâles C57BL/6. Des tests fonctionnels péritonéaux ont ensuite été effectués le jour 22. Après le sacrifice des souris, le péritoine pariétal de la paroi abdominale et le péritoine viscéral du foie ont été récoltés. Ils étaient plus épais et plus fibrotiques lorsqu’ils étaient analysés au microscope après la coloration trichrome de Masson. Le taux d’ultrafiltration a diminué et le transport de masse de glucose a indiqué une augmentation de la perméabilité péritonéale induite par CG. Le modèle de MP ainsi établi peut avoir des applications dans l’amélioration de la technologie de la MP, l’efficacité de la dialyse et la prolongation de la survie des patients.

Dans la figure 1A,B, le péritoine pariétal de la paroi abdominale était nettement plus épais et plus fibrotique sous la coloration trichrome de Masson17, ce qui indique que dans le groupe exposé à CG, la fibrose péritonéale est plus grave que dans le groupe témoin saline (NS). Dans la figure 2A,B, le péritoine viscéral des surfaces hépatiques était également nettement plus épais et plus fibrotique, prouvant...

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A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage

Le présent protocole établit un modèle murin de dialyse péritonéale () de fibrose péritonéale induite par le gluconate de chlorhexidine (CG). Le modèle actuel est simple et facile à utiliser par rapport aux autres modèles animaux de DP.

Un modèle de souris de dommages péritonéaux induits par le gluconate de chlorhexidine

Peritoneal fibrosis is an important complication of peritoneal dialysis (PD). To investigate and address this problem, an appropriate animal model of PD ...

L’établissement d’un modèle animal pour la dialyse péritonéale, MP, est très important. Nous espérons qu’il pourra améliorer la technologie et l’efficacité de la thérapie MP et éventuellement améliorer la survie du patient. Ce modèle murin de dialyse péritonéale est simple, facile à utiliser et visible par rapport aux autres modèles animaux de dialyse péritonéale.Un modèle animal de dialyse péritonéale approprié peut aider les chercheurs à étudier le changement péritonéal, physiologique et pathologique au cours de la thérapie MP. La démonstration de la procédure sera assurée par Fang-Ling Liao, un assistant de recherche de mon laboratoire. Pour commencer, préparez l’irritant chimique en diluant 0,1% de gluconate de chlorhexidine dans de l’éthanol à 15%.Ensuite, assignez trois souris comme groupe témoin et injectez un millilitre par kilogramme de solution saline normale à 0,9% par voie intrapéritonéale tous les deux jours pendant trois semaines pour un total de neuf fois. Ensuite, assignez trois souris au groupe de fibrose péritonéale et induisez une fibrose péritonéale en administrant une injection intrapéritonéale de solution de gluconate de chlorhexidine à 0,1% préparée plus tôt à une dose de 12,5 microlitres par kilogramme de poids corporel. Pour les tests de la fonction péritonéale, préparer une solution de dialyse contenant 4,25% de glucose.Ensuite, utilisez une seringue pour prélever 0,5 millilitre d’échantillon de dialysat. Préparez une injection de zletil et de xylazine et anesthésiez les souris en administrant une injection intramusculaire. Effectuer l’installation intrapéritonéale de la solution de dialyse à une dose de deux millilitres par 20 grammes de poids corporel.Faites une petite incision dans la ligne médiane de l’abdomen et recueillez le principal liquide intrapéritonéal avec une seringue. Après 30 minutes, effectuez une incision verticale dans la ligne médiane de l’abdomen sous le processus xiphoïde et ouvrez l’abdomen de la souris pour recueillir le liquide intrapéritonéal résiduel avec une seringue. Ensuite, mesurez le poids d’un coton-tige propre et sec.Mettez le coton dans la cavité abdominale de la souris pour absorber le liquide intrapéritonéal résiduel, puis retirez-le. Mesurez à nouveau le poids du coton. La coloration trichrome de Masson a montré que le péritoine pariétal de la paroi abdominale dans le groupe exposé au gluconate de chlorhexidine était nettement plus épais et fibrotique que le groupe témoin.Le péritoine viscéral des surfaces hépatiques était également significativement plus épais et fibrotique dans le groupe exposé au gluconate de chlorhexidine que dans le groupe témoin salin, ce qui indique que la fibrose péritonéale est plus grave dans le groupe exposé au gluconate de chlorhexidine. Le groupe exposé au gluconate de chlorhexidine a montré une diminution du taux d’ultrafiltration et une augmentation du transport de masse de glucose, indiquant que la perméabilité péritonéale augmente chez les souris exposées au gluconate de chlorhexidine. Lors d’une procédure d’injection intrapéritonéale, utilisez les pinces et prélevez la peau abdominale de la souris pour prévenir les dommages aux organes intrapéritonéaux induits par la ponction.

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