Name: a mice model of chlorhexidine gluconate-induced peritoneal damage
Uploaded: 2022-04-28T14:45:00
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Agradecemos sinceramente a Shin-Han Tseng por la discusión crítica y la ejecución parcial del estudio. Este estudio fue apoyado por EDAHP110003 y NCKUEDA110002 de la Fundación de Investigación del Hospital E-DA y la Universidad Nacional Cheng Kung, Taiwán.

Todos los experimentos con ratones fueron aprobados por el Centro de Animales de Laboratorio del Hospital E-DA / Universidad I-Shou y se manejaron de acuerdo con la "Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio" (NRC, EE. UU. 2011). Para el presente estudio se utilizaron ratones machos C57BL/6, de 7-8 semanas de edad.
1. Preparación química
<ol><li>Prepare el irritante químico diluyendo el gluconato de clorhexidina al 0,1% (CG, consulte la Tabla de mater...

<ol>
	<li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+outcome+of+CAPD:+twenty-five+years'+experience+in+a+single+Korean+center.">Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center.</a> Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).</li><li>Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+affecting+the+longevity+of+the+continuous+peritoneal+dialysis+therapy.">Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy.</a> Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).</li><li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+D+can+ameliorate+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+and+functional+deterioration+through+the+inhibition+of+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+mesothelial+cells.">Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells.</a> BioMed Research International. 2015, 595030 (2015).</li><li>Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+technique+survival+on+peritoneal+dialysis+better+in+Japan.">Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).</li><li>Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+practice+of+peritoneal+dialysis+in+children:+results+of+a+longitudinal+survey.+Mid+European+Pediatric+Peritoneal+Dialysis+Study+Group+(MEPPS).">Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS).</a> Peritoneal Dialysis International. 19, 445-449 (1999).</li><li>Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+failure+in+peritoneal+dialysis+and+its+impact+on+patient+survival.">Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival.</a> Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).</li><li>Schmidt, D. W., Flessner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+treatment+of+encapsulating+peritoneal+sclerosis:+basic+and+translational+research.">Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, 10-15 (2008).</li><li>Augustine, T., Brown, P. W., Davies, S. D., Summers, A. M., Wilkie, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encapsulating+peritoneal+sclerosis:+clinical+significance+and+implications.">Encapsulating peritoneal sclerosis: clinical significance and implications.</a> Nephron Clinical Practice. 111 (2), 149-154 (2009).</li><li>Di Paolo, N., Nicolai, G. A., Garosi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+peritoneum:+from+histological+studies+to+mesothelial+transplant+through+animal+experimentation.">The peritoneum: from histological studies to mesothelial transplant through animal experimentation.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, 5-9 (2008).</li><li>Fusshoeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histomorphological+and+functional+changes+of+the+peritoneal+membrane+during+long-term+peritoneal+dialysis.">Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis.</a> Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).</li><li>Goffin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+membrane+structural+and+functional+changes+during+peritoneal+dialysis.">Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis.</a> Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).</li><li>Ito, T., Yorioka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+damage+by+peritoneal+dialysis+solutions.">Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions.</a> Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).</li><li>Io, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SAHA+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice.">SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).</li><li>Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2-biased+GATA-3+transgenic+mice+developed+severe+experimental+peritoneal+fibrosis+compared+with+Th1-biased+T-bet+and+Th17-biased+RORgammat+transgenic+mice.">Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice.</a> Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).</li><li>Karl, Z. J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+Equilibration+Test.">Peritoneal Equilibration Test.</a> Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).</li><li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+implication+of+vitamin+D+nanomedicine+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage.">The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).</li><li>Goldner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+the+masson+trichrome+technique+for+routine+laboratory+purposes.">Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes.</a> The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).</li><li>Cheng, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+application+of+magnetite+nanoparticle-mediated+vitamin+D3+delivery+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage.">Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).</li><li>Ross, A., Willson, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures. , 13-16 (2017).</li><li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventive+effect+of+pirfenidone+against+experimental+sclerosing+peritonitis+in+rats.">Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats.</a> Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).</li><li>Ishii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+sclerosing+encapsulating+peritonitis+model+in+mice.">An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).</li><li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligonucleotides+against+collagen-binding+stress+protein+HSP47+suppress+peritoneal+fibrosis+in+rats.">Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats.</a> Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).</li><li>Mishima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+expression+of+heat+shock+protein+47+in+rat+model+of+peritoneal+fibrosis.">Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).</li><li>Kushiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+liposome-encapsulated+clodronate+on+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+in+rats.">Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).</li><li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+lymphocyte+infiltration+in+the+progression+of+mouse+peritoneal+fibrosis+model.">Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model.</a> Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).</li><li>Lua, I., Li, Y., Pappoe, L. S., Asahina, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblastic+conversion+and+regeneration+of+mesothelial+cells+in+peritoneal+and+liver+fibrosis.">Myofibroblastic conversion and regeneration of mesothelial cells in peritoneal and liver fibrosis.</a> The American Journal of Pathology. 185 (12), 3258-3273 (2015).</li><li>Kitamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigallocatechin+gallate+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice.">Epigallocatechin gallate suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Chemico-Biological Interactions. 195 (1), 95-104 (2012).</li></ol>

En este estudio, un modelo de DP de ratón se presenta por inyección i.p. de GC, y los resultados mostraron fibrosis peritoneal y deterioro funcional en este modelo, que imitó la condición del paciente con EP.
Hay varios pasos críticos en el protocolo. Primero, para realizar una inyección i.p. de CG o NS, la piel de la pared abdominal del ratón debe recogerse con fórceps para evitar el daño intraperitoneal inducido por punción. En segundo lugar, al recoger el peritoneo de la pared abd...

La diálisis peritoneal (DP) es un tipo de terapia de reemplazo renal. Sin embargo, la EP tiene problemas que no se pueden resolver. Por ejemplo, el tratamiento a largo plazo de la EP puede causar daño peritoneal, lo que eventualmente conduce al fracaso de la ultrafiltración y al retiro del tratamiento 1,2,3,4,5,6. La fibrosis peritoneal es una de las complicaciones más graves 7,8. La fibrosis peritoneal se caracteriza por la deposición y acumulación de matriz extracelular dentro del intersticio, y neoangiogénesis y vasculopatía del peritoneo 9,10.
Las principales causas de estos cambios peritoneales son la peritonitis recurrente y la no biocompatibilidad del dializado, que son hiperosmóticas, alta glucosa, bajo pH y degradación de la glucosa11,12. Por lo tanto, los modelos experimentales animales adecuados pueden ayudar a los investigadores a estudiar mejor los cambios fisiológicos y patológicos del peritoneo durante la terapia de EP. Por lo tanto, el establecimiento de un modelo de EP animal es importante para mejorar la tecnología de EP y la eficacia de la diálisis y prolongar la supervivencia del paciente. Este estudio tuvo como objetivo generar un modelo de ratón con EP mediante inyección intraperitoneal (i.p.) de gluconato de clorhexidina (GC), como se describió anteriormente13,14. Este modelo de ratón PD es simple, fácil de usar y factible en comparación con otros modelos animales de PD.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Normal Saline</td>
			<td>Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan</td>
			<td>00002A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic biochemical analyzer</td>
			<td>Hitachi Ltd., Tokyo, Japan</td>
			<td>Labospect Series 008</td>
			<td>for determining glucose concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine digluconate solution, 20% in H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td>
			<td>C9394</td>
			<td>diluted to 0.1% with 15% ethanol for injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA</td>
			<td>BAKR8006-05</td>
			<td>diluted to 15% with normal saline for working concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (Dianeal)</td>
			<td>Baxter International, Inc., IL, USA</td>
			<td>FNB9896</td>
			<td>Commercial dialysis solution (4.25%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 8.0</td>
			<td>GraphPad Software, Inc., CA, US</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-type Glu 2 assay</td>
			<td>FUJIFILM Wako, Japan</td>
			<td>461-32403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine 20</td>
			<td>Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil 50</td>
			<td>Virbac Laboratories, Carros, France</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mice model of chlorhexidine gluconate-induced peritoneal damage

La fibrosis peritoneal es una complicación importante de la diálisis peritoneal (DP). Para investigar y abordar este problema, se requiere un modelo animal apropiado de EP. El presente protocolo establece un modelo de fibrosis peritoneal inducida por gluconato de clorhexidina (CG) que imita la condición de un paciente con EP. La fibrosis peritoneal se indujo mediante inyección intraperitoneal de 0,1% de CG en etanol al 15% durante 3 semanas (administrada cada dos días), para un total de nueve veces en ratones machos C57BL/6. Las pruebas funcionales peritoneales se realizaron el día 22. Después de sacrificar los ratones, se recolectaron el peritoneo parietal de la pared abdominal y el peritoneo visceral del hígado. Eran más gruesos y fibróticos cuando se analizaron microscópicamente después de la tinción tricrómica de Masson. La tasa de ultrafiltración disminuyó, y el transporte de masa de glucosa indicó un aumento inducido por CG en la permeabilidad peritoneal. El modelo de DP así establecido puede tener aplicaciones para mejorar la tecnología de DP, la eficacia de la diálisis y prolongar la supervivencia del paciente.

En la Figura 1A,B, el peritoneo parietal de la pared abdominal era marcadamente más grueso y fibrótico bajo la tinción tricrómica de Masson17, indicando que en el grupo expuesto a CG, la fibrosis peritoneal es más grave que en el grupo control salino (SN). En la Figura 2A,B, el peritoneo visceral de las superficies hepáticas también era marcadamente más grueso y fibrótico, lo que demuestra que en el grupo expuest...

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A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage

El presente protocolo establece un modelo de ratón de diálisis peritoneal (DP) de fibrosis peritoneal inducida por gluconato de clorhexidina (CG). El modelo actual es simple y fácil de usar en comparación con otros modelos animales de EP.

Un modelo de ratón de daño peritoneal inducido por gluconato de clorhexidina

Peritoneal fibrosis is an important complication of peritoneal dialysis (PD). To investigate and address this problem, an appropriate animal model of PD ...

El establecimiento de un modelo animal para la diálisis peritoneal, DP, es muy importante. Esperamos que pueda mejorar la tecnología y la eficacia de la terapia de EP y, finalmente, mejorar la supervivencia del paciente. Este modelo de ratón de diálisis peritoneal es simple, fácil de usar y visible en comparación con otros modelos animales de diálisis peritoneal.Un modelo animal de diálisis peritoneal adecuado puede ayudar a los investigadores a estudiar el cambio peritoneal, fisiológico y patológico durante la terapia de EP. La demostración del procedimiento será Fang-Ling Liao, un asistente de investigación de mi laboratorio. Para comenzar, prepare el irritante químico diluyendo el gluconato de clorhexidina al 0,1% en etanol al 15%.A continuación, asigne tres ratones como grupo de control e inyecte un mililitro por kilogramo de solución salina normal al 0,9% por vía intraperitoneal cada dos días durante tres semanas para un total de nueve veces. Luego asigne tres ratones al grupo de fibrosis peritoneal e induzca fibrosis peritoneal administrando una inyección intraperitoneal de solución de gluconato de clorhexidina al 0,1% preparada anteriormente a una dosis de 12,5 microlitros por kilogramo del peso corporal. Para las pruebas de función peritoneal, prepare una solución de diálisis que contenga 4,25% de glucosa.Luego use una jeringa para extraer 0.5 mililitros de muestra de dializado. Preparar una inyección de zoletil y xilazina y anestesiar a los ratones mediante la administración de una inyección intramuscular. Realice la instalación intraperitoneal de la solución de diálisis a una dosis de dos mililitros por cada 20 gramos de peso corporal.Haga una pequeña incisión en la línea media del abdomen y recoja el líquido intraperitoneal principal con una jeringa. Después de 30 minutos, realice una incisión vertical en la línea media del abdomen debajo del proceso xifoide y abra el abdomen del ratón para recoger el líquido intraperitoneal residual con una jeringa. A continuación, mida el peso de un hisopo de algodón limpio y seco.Coloque el algodón en la cavidad abdominal del ratón para absorber el líquido intraperitoneal residual y luego retírelo. Mide el peso del algodón de nuevo. La tinción tricrómica de Masson mostró que el peritoneo parietal de la pared abdominal en el grupo expuesto al gluconato de clorhexidina era marcadamente más grueso y fibrótico que el grupo control.El peritoneo visceral de las superficies hepáticas también fue significativamente más grueso y fibrótico en el grupo expuesto al gluconato de clorhexidina que en el grupo de control con solución salina, lo que indica que la fibrosis peritoneal es más grave en el grupo expuesto al gluconato de clorhexidina. El grupo expuesto al gluconato de clorhexidina mostró una disminución de la tasa de ultrafiltración y un aumento del transporte de masa de glucosa, lo que indica que la permeabilidad peritoneal aumenta en los ratones expuestos al gluconato de clorhexidina. Mientras realiza un procedimiento de inyección intraperitoneal, use los fórceps y elija la piel abdominal del ratón para prevenir el daño del órgano intraperitoneal inducido por punción.

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