Name: urokinase-type plasminogen activator-induced mouse back pain model
Uploaded: 2023-09-01T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Urokinase-type Plasminogen Activator-induced Mouse Back Pain Model at JoVE.com

Hibe finansmanı NIH HEAL UG3 NS123958 tarafından sağlandı. Barınma tesisleri AAALAC tarafından denetlendi ve akredite edildi. Hayvanlar, laboratuvar personeli ve Laboratuvar ve Hayvan Kaynakları Bölümü (DLAR) personeli tarafından sürdürülen Hayvan Kaynakları Merkezi (ARC) barınma tesisinde barındırıldı. Davranışsal test prosedürleri, Amerikan Ağrı Derneği ve Uluslararası Ağrı Araştırmaları Derneği tarafından onaylanan standart yöntemlerdir. Ötenazi yöntemi, Amerikan Veteriner Hekimler Birliği Ötenazi Paneli'nin tavsiyeleri ile tutarlıdır.

Açıklanan tüm hayvan prosedürleri, NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu ile uyumludur. Çalışmalar, New Mexico Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi'nin yerel Kurumsal Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC #23-201364-HSC) tarafından onaylandı. Tüm çalışmalar, Bölüm III'te açıklandığı gibi, araştırmada hayvanların kullanımına ilişkin bir OLAW Uygunluk Güvencesi (A3002-01) himayesindeki politikalara uygundur. II. Güvenceler ve Sertifikalar. Hayvanlar, laboratuvar per...

<ol>
	<li>O'Sullivan, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Back+to+basics:+10+facts+every+person+should+know+about+back+pain.">Back to basics: 10 facts every person should know about back pain.</a> British Journal of Sports Medicine. 54 (12), 698-699 (2020).</li><li>Nauta, H. J., McIlwrath, S. L., Westlund, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Punctate+midline+myelotomy+reduces+pain+responses+in+a+rat+model+of+lumbar+spine+pain:+evidence+that+the+postsynaptic+dorsal+column+pathway+conveys+pain+from+the+axial+spine.">Punctate midline myelotomy reduces pain responses in a rat model of lumbar spine pain: evidence that the postsynaptic dorsal column pathway conveys pain from the axial spine.</a> Cureus. 10 (3), 2371 (2018).</li><li>Shuang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+rat+model+of+lumbar+facet+joint+osteoarthritis+using+intraarticular+injection+of+urinary+plasminogen+activator.">Establishment of a rat model of lumbar facet joint osteoarthritis using intraarticular injection of urinary plasminogen activator.</a> Scientific Reports. 5 (1), 9828 (2015).</li><li>Reed, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatosensory+behavioral+alterations+in+a+NGF-induced+persistent+low+back+pain+model.">Somatosensory behavioral alterations in a NGF-induced persistent low back pain model.</a> Behavioural Brain Research. 418, 113617 (2022).</li><li>Suh, H. R., Cho, H. -. Y., Han, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+model+of+intervertebral+disc+degeneration+by+the+intradiscal+application+of+monosodium+iodoacetate+(MIA)+in+rat.">Development of a novel model of intervertebral disc degeneration by the intradiscal application of monosodium iodoacetate (MIA) in rat.</a> The Spine Journal. 22 (1), 183-192 (2022).</li><li>Kim, H., Hong, J. Y., Lee, J., Jeon, W. -. J., Ha, I. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1&#946;+promotes+disc+degeneration+and+inflammation+through+direct+injection+of+intervertebral+disc+in+a+rat+lumbar+disc+herniation+model.">IL-1&#946; promotes disc degeneration and inflammation through direct injection of intervertebral disc in a rat lumbar disc herniation model.</a> The Spine Journal. 21 (6), 1031-1041 (2021).</li><li>Millecamps, M., Tajerian, M., Sage, E. H., Stone, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+signs+of+chronic+back+pain+in+the+SPARC-null+mouse.">Behavioral signs of chronic back pain in the SPARC-null mouse.</a> Spine. 36 (2), 95-102 (2011).</li><li>La Porta, C., Tappe-Theodor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+impact+of+psychological+and+psychophysical+stress+on+low+back+pain+in+mice.">Differential impact of psychological and psychophysical stress on low back pain in mice.</a> Pain. 161 (7), 1442-1458 (2020).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light/dark+transition+test+for+mice.">Light/dark transition test for mice.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (1), e104 (2006).</li><li>Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+used+to+evaluate+pain+behaviors+in+rodents.">Methods used to evaluate pain behaviors in rodents.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 284 (2017).</li><li>David, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis-dependent+and+-independent+effects+of+fluoxetine+in+an+animal+model+of+anxiety/depression.">Neurogenesis-dependent and -independent effects of fluoxetine in an animal model of anxiety/depression.</a> Neuron. 62 (4), 479-493 (2009).</li><li>Yalcin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+time-dependent+history+of+mood+disorders+in+a+murine+model+of+neuropathic+pain.">A time-dependent history of mood disorders in a murine model of neuropathic pain.</a> Biological Psychiatry. 70 (10), 946-953 (2011).</li><li>Madathil, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-specific+overexpression+of+insulin-like+growth+factor-1+protects+hippocampal+neurons+and+reduces+behavioral+deficits+following+traumatic+brain+injury+in+mice.">Astrocyte-specific overexpression of insulin-like growth factor-1 protects hippocampal neurons and reduces behavioral deficits following traumatic brain injury in mice.</a> PloS One. 8 (6), e67204 (2013).</li><li>Sugimoto, H., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-cost+protocol+of+footprint+analysis+and+hanging+box+test+for+mice+applied+the+chronic+restraint+stress.">Low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (143), e59027 (2019).</li><li>Hassan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+chronic+low+back+pain+phenotypic+domains+and+characteristics+accounting+for+individual+variation:+a+systematic+review.">Identifying chronic low back pain phenotypic domains and characteristics accounting for individual variation: a systematic review.</a> Pain. , (2023).</li></ol>

Bu kronik sırt ağrısı modelinin indüklenmesi kolaydır ve 1 hafta içinde kurulan aşırı duyarlılık 8 haftaya kadar (ve muhtemelen daha fazla) sürebilir. Bu, sadece bir veya iki hafta süren diğer akut modellerin aksine, kronik ağrı durumunun doğru bir şekilde incelenmesini sağlar. Modeli farelerde gösterirken, uPA kaynaklı CBP modeli sıçanlarda da kurulabilir2. Modelin bir avantajı, uzun süreli seyrin, kronik bel ağrısı olan hastalarda gözlenen anksiyete ve depresyon ben...

Bel ağrısı, dünya çapında her 5 kişiden 1'inin acı çektiği en yaygın sakatlık nedenlerinden biridir1. Bu çabalara rağmen, sırt ağrısının az sayıda güvenilir hayvan modeli, ağrı alanındaki hayvan araştırmalarında, özellikle farelerde yaygın olarak kullanılmaktadır. Önceki modeller, lomber faset eklemine (uPA) idrar plazminojen aktivatörü (uPA) enjeksiyonu, sinir büyüme faktörünün (NGF) gövde kas sistemine enjeksiyonu (NGF) veya monosodyum iyodoasetat (MIA)5 veya interlökin-1beta6 intravertebral diske enjeksiyon. Tabii ki, sıçanlar bu modeller için esas olarak daha büyük boyutları ve enflamatuar ajanların enjeksiyonu için erişim kolaylığı nedeniyle tercih edilir.
Açık olmak gerekirse, uzun yıllar boyunca kullanılan SPARC-null fare intervertebral disk dejenerasyonu modeli gibi sırt ağrısının fare modelleri mevcuttur7, ancak bunların oluşturulması enjeksiyon tabanlı modellerden daha maliyetli ve zaman alıcıdır. Yakın zamanda yapılan bir fare çalışması, bel kaslarına NGF enjeksiyonunu dikey kronik kısıtlama stresi ile birleştirerek bir bel ağrısı modeli oluşturdu8. Aşağıdaki protokolde, uPA kaynaklı CBP modelini fareler2 için sıçanlardan uyarladık. Aşırı duyarlılık 1 hafta içinde kurulur ve 6-8 haftaya kadar devam eder. Ek olarak, farelerin anksiyete ve depresyon benzeri davranışlar geliştirdiğini tespit ettik. Sırt ağrısının prevalansı ve moleküler ağrı araştırmalarında farelerin daha yaygın kullanımı göz önüne alındığında, bu dayanıklı model, sırt ağrısının giderilmesi için yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesinde kullanılmak üzere kolayca oluşturulmuştur.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animals and Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Local Source</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c mice</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td>20-25 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton balls</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19-090-702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicators</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19-062-616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane inhalant anesthetic</td>
			<td>MedVet</td>
			<td>RXISO-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labeling tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NGFP7002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile exam gloves</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen tank</td>
			<td>Local Source</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape, Steri-Drape Utility Sheet, Absorbent Prevention</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76246-788</td>
			<td>cut into 15 x 15 cm pieces</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon tubing with 3 mm inner diameter</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>22XH87</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#11 carbon steel scalpel blades</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21909-612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia induction chamber&#160;</td>
			<td>Summit Medical Equipment Company</td>
			<td>AS-01-0530-LG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave</td>
			<td>Local Unit</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biology Dumont #5 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bead sterilizer Germinator 500</td>
			<td>VWR</td>
			<td>102095-946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IITC Life Sciences Series 8 Model PE34 Hot/Cold Plate Analgesia Meter</td>
			<td>IITC</td>
			<td>PE34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integra Miltex cotton &#38; dressing pliers&#160;</td>
			<td>Safco Dental Supply</td>
			<td>66-317</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPTIKA CL31 double arm LED illuminator&#160;</td>
			<td>New York Microscope Company</td>
			<td>OPCL-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plantar Test System with InfraRed Emitter, i. e. Hargreaves Apparatus</td>
			<td>Ugo Basile</td>
			<td>37370-001 and 37370-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle No. 3</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25607-947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal heating pad&#160;</td>
			<td>Valley Vet Supply</td>
			<td>47375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Vannas spring scissors, straight blade&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91500-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top animal research portable anesthesia workstation &#8220;PAM&#8221;</td>
			<td>Patterson Scientific</td>
			<td>AS-01-0007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Von Frey Filaments</td>
			<td>Ugo Basile</td>
			<td>37450-275</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

urokinase-type plasminogen activator-induced mouse back pain model

Burada açıklanan basit metodoloji ile farelerde kalıcı bel ağrısı modeli indüklenebilir. Farelerde kalıcı bir sırt ağrısı modelinin basit, hızlı bir şekilde indüksiyonu için adım adım yöntemler, burada insanlarda ve diğer hayvanlarda bulunan bir serin proteaz olan ürokinaz tipi plazminojen aktivatörü (ürokinaz) enjeksiyonu kullanılarak sağlanmaktadır. Farelerde devam eden bel ağrısının indüksiyonu için metodoloji, lomber omurganın ligamentöz yerleştirme bölgesi boyunca basit bir ürokinaz enjeksiyonunu içerir. Ürokinaz inflamatuar ajanı, plazminojeni plazminle aktive eder. Tipik olarak, model 10 dakika içinde indüklenebilir ve aşırı duyarlılık en az 8 hafta devam eder.
Aşırı duyarlılık, yürüme bozukluğu ve diğer standart anksiyete ve depresyon benzeri önlemler kalıcı modelde test edilebilir. Sırt ağrısı en sık görülen ağrı türüdür. Sırt ağrısı farkındalığını artırmak için Uluslararası Ağrı Araştırmaları Derneği (IASP), 2021'i "Sırt Ağrısı Hakkında Küresel Yıl" ve 2022'yi "Ağrı Bilgisini Pratiğe Dönüştürmek için Küresel Yıl" olarak adlandırdı. Ağrı terapötiklerinin terapötik ilerlemesinin bir sınırlaması, kalıcı ve kronik ağrıyı test etmek için uygun modellerin olmamasıdır. Bu modelin özellikleri, sırt ağrısının ve yardımcı özelliklerinin azaltılmasını amaçlayan potansiyel terapötikleri test etmek için uygundur ve IASP'nin 2022'yi Ağrı Bilgisini Uygulamaya Dönüştürmek için Küresel Yıl olarak adlandırmasına katkıda bulunur.

Nosiseptif ile ilgili davranış testleri ve veri analizi Uyarılmış önlemler Ayak tabanında aşırı duyarlılık, ürokinaz enjeksiyonundan sonraki bir gün içinde gelişir. 1 hafta içinde, geri çekilme eşiği önemli ölçüde azalır ve ötenaziye kadar devam eder; bu, ameliyat sonrası 4. haftada gösterilir (Şekil 4A). Pençe çekme gecikmesi, von Frey yukarı-aşağı yöntemi9 ve Hargreaves testi kullanılarak a...

Watch this Scientific Journal Video about Urokinase-type Plasminogen Activator-induced Mouse Back Pain Model at JoVE.com

Urokinase-type Plasminogen Activator-induced Mouse Back Pain Model

Farelerde sırt ağrısı modelinin basit, hızlı indüksiyonu için yöntemler burada idrar plazminojen aktivatörünün intraligament enjeksiyonu kullanılarak sağlanmaktadır.

Ürokinaz tipi Plazminojen Aktivatörü ile İndüklenen Fare Sırt Ağrısı Modeli

A model of persisting lower back pain can be induced in mice with the simple methodology described herein. Step-by-step methods for simple, rapid ...

Bu protokol, farelerde 10 haftaya kadar kronik sırt ağrısını indüklemek için invaziv olmayan bir yöntemi ana hatlarıyla belirtir ve bu, minimum eğitimle hızlı ve güvenilir bir şekilde gerçekleştirilebilir. Bu tekniğin en zor yönü, enjekte edilen bağın enjekte edilen kaslara karşı nasıl hissettiğini anlamaktır. Temas halinde direnç hissetmek bağ enjeksiyonunu gösterir.Direnç olmaması, iğnenin kas veya karın boşluğunda olabileceği anlamına gelir. Başlamak için, fareyi yerleştirmek için steril düz bir yüzey alın. Ardından, enjeksiyondan hemen sonra fareleri transfer etmek için ameliyat kurulumunun yanına bir ısıtma yastığı kurtarma istasyonu yerleştirin.Sonra, ürokinaz ve bir Hamilton şırıngası hazırlayın. Farenin anestezi altında geçirdiği süreyi en aza indirmek için çözeltiyi önceden çizin. Fareyi uyuşturduktan sonra, göğüs kafesinin altındaki L2 ve L3'teki lomber omurilik segmentlerini bulmak ve enjeksiyon bölgesini doğrulamak için iki parmağınızı kullanın.Hamilton şırıngasının ucunu omurganın yanına yerleştirin. Şırıngayı yaklaşık 45 derecelik açıyla kemiğin hemen bitişiğindeki bağa yerleştirin. İğne ucunu nazikçe, ancak sıkıca bağa sokun ve beş mikrolitrenin tümü enjekte edilene kadar yavaşça enjekte edin.İğneyi nazikçe ve yavaşça çıkarın. Ardından, fareyi uyanana ve mobil hale gelene kadar ısı geri kazanım istasyonuna yerleştirin. Tüm normal motor fonksiyonlarının devam ettiğinden emin olmak için ameliyattan sonra fareleri bir saat kontrol edin.Ameliyattan sonra, herhangi bir enfeksiyon veya komplikasyonu önlemek için farelerin kilosunu ve enjeksiyon bölgesini bir hafta boyunca günlük olarak kontrol edin. Testten önce, her hayvanı test masasında bir ekran üstü olan ayrı bir şeffaf kabine taşıyın. Ardından, dört gram kuvvet ortaya çıkaran 3.61 Von Frey filamenti ile ayak pedini uyarın.Üç ila beş uyaranın ayak çekilmesi olumlu bir yanıt olarak kabul edilir. Şimdi, hayvan mekanik stimülasyona yanıt vermeyi bırakana kadar serideki bir sonraki zayıf filamenti uygulayın. Bir yanıt ortaya çıkana kadar daha yüksek filamenti kullanın, ardından alt filamente geri dönün.Bir eğri uydurma algoritması kullanarak, zamanın %50'sinde bir yanıt ortaya çıkarmak için gereken minimum kuvvet miktarı olan mekanik geri çekilme eşiğini hesaplayın. Hargreaves Testini gerçekleştirmek için, fareleri aşağıdan bir kızılötesi yayıcı tarafından ısıtılan bir cam yüzey üzerindeki kabinlere yerleştirin. Farenin arka pençesine kızılötesi ışık uyarıcısı uygulanmasından ayak gecikmesi olarak geri çekilmeye kadar geçen süreyi ölçün.Soğuk Plaka Testi için fareleri eksi dokuz santigrat dereceye kadar soğutulmuş soğuk plaka aparatına yerleştirin. Farenin aparata yerleştirildikten sonra ayağını kaldırması için geçen süreyi, ayağı geri çekme gecikmesi olarak kaydedin. Anksiyete Testini gerçekleştirmek için, her hayvanı iki oda arasında bir geçiş yolu olan yer tercihi test kutusuna yerleştirin.Bir aparat odası parlak bir şekilde aydınlatılmalı, karşı taraf ise karanlık kalmalıdır. Bir bilgisayar kullanarak, 10 dakikalık bir test sırasında hayvanın aydınlık ve karanlık doluluk sürelerini ve geçişlerini izleyin. Ardından, model kemirgenleri veya saf hayvanları sıfır labirentine yerleştirin veya iki odacıklı açık veya koyu yer tercih testini kullanın.Bir kronometre kullanarak labirentin kapalı ve açık alanlarında geçirilen zamanı değerlendirin. Sükroz Sıçrama Depresyon Testi için, sırt koduna %10 ila %30'luk bir sükroz solüsyonu püskürtün ve 10 dakika boyunca tımarlamanın sıklığını, süresini ve gecikmesini puanlayın. Yeni nesne testleri yapmak için, fareleri ayrı ayrı bir saat boyunca üstü açık şeffaf plastik bir kafese alıştırın.Beş dakika boyunca kafesin zıt köşelerine birbirinin aynısı iki oyuncak mini figür ekleyin. Test gününde hayvanları bir saat boyunca iklimlendirin ve iki özdeş mini figürü ev kafesine geri göndermeden önce beş dakika boyunca kafesin aynı konumlarına yerleştirin. Ardından, orijinal figürlerden birini belirgin şekilde farklı bir yeni nesneyle değiştirin.Dört saat sonra, fareleri test kafesine geri koyun ve nesneleri keşfetmek için harcanan zamanı kaydedin. Motor fonksiyon değerlendirmesi için, bir kenarı uzunlamasına kesilmiş bir kağıt havlu tüpünden bir tünel oluşturun. Tüneli temiz bir yazıcı kağıdına yayın.Fareleri sakinleşene kadar nazikçe tutun. Bir farenin pençelerine toksik olmayan Hindistan mürekkebini bir mürekkep kuyusuna, damga pedine yerleştirerek veya pamuklu çubuk kullanarak uygulayın. Tünel girişindeki fareleri serbest bırakın.Tünelden geçmelerine ve sonunda onları yakalamalarına izin verin. Pati izlerini adım uzunluğuna, adım genişliğine ve parmak açıklığına göre puanlayın. Mekanik ve termal aşırı duyarlılık deneyleri, kronik sırt ağrısı farelerinin, naif kontrollere kıyasla mekanik, sıcak ve soğuk duyarlılığını önemli ölçüde artırdığını göstermiştir.Anksiyete analizi, aydınlık ve karanlık kutunun ışık odasında geçirilen toplam sürenin ve yetiştirme olaylarının sayısının, kronik sırt ağrısı olan farelerde önemli ölçüde daha düşük olduğunu ve anksiyeteyi gösterdiğini gösterdi. Sükroz Sıçrama Testi sırasında, kronik sırt ağrısı olan fareler, daha düşük tımar süresi ve tımar sayısı sergiledi. Bununla birlikte, tımar başlamadan önceki süre önemli ölçüde artmıştır.Kronik sırt ağrısı olan fareler ile naif fareler arasındaki adım uzunluğu önemli ölçüde farklıydı. Bu prosedürü denerken hatırlanması gereken en önemli şey, kası değil, omurga çevresindeki bağları hedeflediğinizdir. Kronik sırt ağrısı modeli, çeşitli yeni araştırmaları, farmakolojik ve diğer potansiyel terapötikleri değerlendirmek için güvenilir bir araç sağlar.

urokinase-type-plasminogen-activator-induced-mouse-back-pain-model

Research

JoVE Journal

Behavior

Assessing Functional Performance in the Mdx Mouse Model

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe and progressive muscle wasting disorder for which no cure is available. Nevertheless, several potential pharmaceutical compounds and gene therapy approaches have progressed into clinical trials. With improvement in muscle function being the most important end point in these trials, a lot of emphasis has been placed on setting up reliable, reproducible, and easy to perform functional tests to pre clinically assess muscle function, strength, condition, and coordination in the mdx mouse model for DMD. Both invasive and noninvasive tests are available. Tests that do not exacerbate the disease can be used to determine the natural history of the disease and the effects of therapeutic interventions (e.g. forelimb grip strength test, two different hanging tests using either a wire or a grid and rotarod running). Alternatively, forced treadmill running can be used to enhance disease progression and/or assess protective effects of therapeutic interventions on disease pathology. We here describe how to perform these most commonly used functional tests in a reliable and reproducible manner. Using these protocols based on standard operating procedures enables comparison of data between different laboratories.

Assessing Functional Performance in the Mdx Mouse Model

The primary outcome measure in clinical trials for neuromuscular disorders is generally improved muscle function. Therefore, assessing the effect of potential therapeutic compounds on muscle performance pre clinically in mouse models is of great importance. We here describe several functional tests to address this.

Fonksiyonel Performans değerlendirilmesi<em&gt; Mdx</em&gt; Fare Modeli

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe and progressive muscle wasting disorder for which no cure is available. Nevertheless, several potential ...

Davranış

Determining Pain Detection and Tolerance Thresholds Using an Integrated, Multi-Modal Pain Task Battery

Human pain models are useful in the assessing the analgesic effect of drugs, providing information about a drug&#39;s pharmacology and identify potentially suitable therapeutic populations. The need to use a comprehensive battery of pain models is highlighted by studies whereby only a single pain model, thought to relate to the clinical situation, demonstrates lack of efficacy. No single experimental model can mimic the complex nature of clinical pain. The integrated, multi-modal pain task&#160;battery presented here encompasses the electrical stimulation task, pressure stimulation task, cold pressor task, the UVB inflammatory model which includes a thermal task and a paradigm for inhibitory conditioned pain modulation. These human pain models have been tested for predicative validity and reliability both in their own right and in combination, and can be used repeatedly, quickly, in short succession, with minimum burden for the subject and with a modest quantity of equipment. This allows a drug to be fully characterized and profiled for analgesic effect which is especially useful for drugs with a novel or untested mechanism of action.

Human pain models are valuable tools used to assess the analgesic potential of novel compounds and predict their clinical efficacy, especially when used in an integrated manner. Although implementation of these models is complex, with proper execution, the pain models described in this protocol can provide predictive and reliable results.

Bir Entegre, Multi-Modal Ağrı Görev Kullanma Pil Ağrı Algılama ve Tolerans eşikleri Belirlenmesi

Human pain models are useful in the assessing the analgesic effect of drugs, providing information about a drug&#39;s pharmacology and identify ...

Treating Low Back Pain in Failed Back Surgery Patients with Multicolumn-lead Spinal Cord Stimulation

Failed back surgery syndrome (FBSS) refers to persistent, chronic pain following spinal surgery. Spinal cord stimulation with dorsal epidural leads can be used to treat back and leg pain in FBSS patients. This paper presents a detailed protocol for using spinal cord stimulation with surgical leads in FBSS patients. In our department, with the patient under general anesthesia, we place the lead in the epidural space by means of a small laminectomy at the 10th thoracic level. Placement of the lead is followed by a 1 month trial period with an externalized lead. If pain relief is greater than 50% at the end of this 1 month stimulation trial (required by Belgian reimbursement criteria), an internal pulse generator is then placed under the skin and connected to the lead in a second surgical procedure. We have demonstrated that using this technique in rigorously selected FBSS patients can significantly improve back pain, leg pain, patient activity, and quality of life for a sustained period of time.

This paper presents a method that uses spinal cord stimulation with a multicolumn lead to treat neuropathic low back pain in failed back surgery patients.

Multicolumn-kurşun omurilik stimülasyon başarısız bel cerrahisi hastalarda bel ağrısı tedavisi

Failed back surgery syndrome (FBSS) refers to persistent, chronic pain following spinal surgery. Spinal cord stimulation with dorsal epidural leads can be ...

Measuring Active and Passive Tameness Separately in Mice

Domesticated animals such as dogs and laboratory mice show a high level of tameness, which is important for humans to handle them easily. Tameness has two behavioral components: a reluctance to avoid humans (passive tameness) and a motivation to approach humans (active tameness). To quantify these components in mice, we previously developed behavioral tests for active tameness, passive tameness, and the willingness to stay on a human hand, each designed to be completed within 3 min. The data obtained were used for selective breeding, with a large number of mice analyzed per generation. The active tameness test measures the movement of the mouse toward a human hand and the contact it engages in. The passive tameness test measures the duration of time that a mouse tolerates human touch. In the stay-on-hand test, a mouse is placed on a human hand and touched slowly using the thumb of that hand; the duration of time that the animal remains on the hand is measured. Here, we describe the test set-up and apparatus, explain the procedures, and discuss the appropriate data analysis. Finally, we explain how to interpret the results.

Tameness in animals includes a reduction of avoidance responses to humans (passive tameness) and an increase in active approaches to humans (active tameness). Here, we describe detailed protocols for three behavioral tests (active tameness, passive tameness, and stay-on-hand tests) to separately measure the active and passive tameness of mice.

Aktif ve pasif Tameness ayrı olarak farelerde ölçme

Domesticated animals such as dogs and laboratory mice show a high level of tameness, which is important for humans to handle them easily. Tameness has two ...

Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical condition. However, the underlying mechanisms of CRPS-I have yet to be revealed. It is known that ischemia/reperfusion is one of the leading factors that causes CRPS-I. By means of prolonged ischemia and reperfusion of the hind limb, the rat chronic post-ischemia pain (CPIP) model has been established to mimic CRPS-I. The CPIP model has become a well-recognized animal model for studying the mechanisms of CRPS-I. This protocol describes the detailed procedures involved in the establishment of the rat model of CPIP, including anesthesia, followed by ischemia/reperfusion of the hind limb. Characteristics of the rat CPIP model are further evaluated by measuring the mechanical and thermal hypersensitivities of the hind limb as well as the nocifensive responses to acute capsaicin injection. The rat CPIP model exhibits several CRPS-I-like manifestations, including hind limb edema and hyperemia in the early stage after establishment, persistent thermal and mechanical hypersensitivities, and increased nocifensive responses to acute capsaicin injection. These characteristics render it a suitable animal model for further investigation of the mechanisms involved in CRPS-I.

Provided here is a protocol that details steps to establish an animal model of chronic post-ischemia pain (CPIP). This is a well-recognized model mimicking human complex regional pain syndrome type-I. Mechanical and thermal hypersensitivities are further evaluated, as well as capsaicin-induced nocifensive behaviors observed in the CPIP rat model.

Sıçanlarda Kompleks Bölgesel Ağrı Sendromu Tip-I kronik Post-Iskemi Ağrı Modeli

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical ...

Investigating Pain-Related Avoidance Behavior using a Robotic Arm-Reaching Paradigm

Avoidance behavior is a key contributor to the transition from acute pain to chronic pain disability. Yet, there has been a lack of ecologically valid paradigms to experimentally investigate pain-related avoidance. To fill this gap, we developed a paradigm (the robotic arm-reaching paradigm) to investigate the mechanisms underlying the development of pain-related avoidance behavior. Existing avoidance paradigms (mostly in the context of anxiety research) have often operationalized avoidance as an experimenter-instructed, low-cost response, superimposed on stimuli associated with threat during a Pavlovian fear conditioning procedure. In contrast, the current method offers increased ecological validity in terms of instrumental learning (acquisition) of avoidance, and by adding a cost to the avoidance response. In the paradigm, participants perform arm-reaching movements from a starting point to a target using a robotic arm, and freely choose between three different movement trajectories to do so. The movement trajectories differ in probability of being paired with a painful electrocutaneous stimulus, and in required effort in terms of deviation and resistance. Specifically, the painful stimulus can be (partly) avoided at the cost of performing movements requiring increased effort. Avoidance behavior is operationalized as the maximal deviation from the shortest trajectory on each trial. In addition to explaining how the new paradigm can help understand the acquisition of avoidance, we describe adaptations of the robotic arm-reaching paradigm for (1) examining the spread of avoidance to other stimuli (generalization), (2) modeling clinical treatment in the lab (extinction of avoidance using response prevention), as well as (3) modeling relapse, and return of avoidance following extinction (spontaneous recovery). Given the increased ecological validity, and numerous possibilities for extensions and/or adaptations, the robotic arm-reaching paradigm offers a promising tool to facilitate the investigation of avoidance behavior and to further our understanding of its underlying processes.

Avoidance is central to chronic pain disability, yet adequate paradigms for examining pain-related avoidance are lacking. Therefore, we developed a paradigm that allows investigating how pain-related avoidance behavior is learned (acquisition), spreads to other stimuli (generalization), can be mitigated (extinction), and how it may subsequently re-emerge (spontaneous recovery).

Robotik Kola Ulaşan Paradigma Kullanarak Ağrıya Bağlı Kaçınma Davranışının Araştırılması

Avoidance behavior is a key contributor to the transition from acute pain to chronic pain disability. Yet, there has been a lack of ecologically valid ...

Back Mechanical Sensitivity Assessment in the Rat for Mechanistic Investigation of Chronic Back Pain

Low back pain is the leading cause of disability worldwide, with dramatic personal, economic, and social consequences. To develop novel therapeutics, animal models are needed to examine the mechanisms and effectiveness of novel therapies from a translational perspective. Several rodent models of back pain are used in current investigations. Surprisingly, however, no standardized behavioral test was validated to assess mechanical sensitivity in back pain models. This is critical to confirm that animals with presumed back pain present local hypersensitivity to nociceptive stimuli, and to monitor sensitivity during interventions designed to relieve back pain. The objective of this study is to lay down a simple and accessible test to assess mechanical sensitivity in the back of rats. A test cage was fabricated specifically for this method; length x width x height: 50 x 20 x 7 cm, having a stainless-steel mesh on the top. This test cage allows the application of mechanical stimuli to the back. To perform the test, the back of the animal is shaved in the region of interest, and the test area is marked to repeat the test on different days, as needed. The mechanical threshold is determined with Von Frey filaments applied to the paraspinal muscles, utilizing the up-down method described previously. The positive responses include (1) muscle twitching, (2) arching (back extension), (3) rotation of the neck (4) scratching or licking the back, and (5) escaping. This behavioral test (Back Mechanical Sensitivity (BMS) test) is useful for mechanistic research with rodent models of back pain for the development of therapeutic interventions for the prevention and management of back pain.

To develop novel therapeutic interventions for the prevention and management of back pain, animal models are required to examine the mechanisms and effectiveness of these therapies from a translational perspective. The present protocol describes the BMS test, a standardized method to assess back mechanical sensitivity in the rat.

Kronik Sırt Ağrısının Mekanik Araştırılması için Sıçanda Geri Mekanik Duyarlılık Değerlendirmesi

Low back pain is the leading cause of disability worldwide, with dramatic personal, economic, and social consequences. To develop novel therapeutics, ...

Elevated Plus Maze Test in an Angelman Syndrome Mouse Model

To begin, place the plus shaped maze on the testing platform just below the camera. Using the potentiometer on the wall, adjust the light intensity to 70 luxe at its center with the help of a luxometer with its sensor placed at the center of the maze during the adjustment. Open the software by double clicking on the viewer software icon and load the configuration for Elevated Plus Maze or EPM testing by clicking on the icon on the upper left side of the configuration tab.Enter the animal information into the corresponding fields of the experiment tab including animal id, genotype, gender, and experiment information. Verify that the zone's position, open arms, and closed arms are correctly configured. Using a visual control and computer mouse, ensure that the virtual outline zones match the corresponding EPM zones.Place the mouse cursor on the arrow icon on the upper left side of the acquisition tab. Remove the animal from the home cage and place it gently in the center of the EPM. Start the experiment by left clicking on the computer mouse.After five minutes, save the recorded data by clicking okay. Name the file and click save. Export the results to a csv file for offline analysis by clicking on the icon on the left vertical panel of the data analysis tab.In the EPM test, none of the parameters related to anxiety-like behavior were altered in maternal heterozygous Ube3A mutants.

Angelman Sendromlu Fare Modelinde Yükseltilmiş Artı Labirent Testi

Open Field Test in an Angelman Syndrome Mouse Model

Place the four open field, or OF, test boxes on the testing platform below the camera. Using the potentiometer on the wall, adjust the light intensity to 200 lux at the center of each OF test with the help of a luxometer with its sensor placed at the center of each box during the adjustment. Open the software by double clicking on the viewer software icon and load the configuration for EF testing by clicking on the icon on the upper left side of the configuration tab.Enter the animal information into the corresponding fields of the experiment tab. Verify that the zone's position matches the OF test boxes and adjust them if needed. Using a visual control and computer mouse, ensure that the virtual outline center and periphery zones match the corresponding OF test zones.Place the mouse cursor on the arrow icon on the upper left side of the acquisition tab. Remove four animals from the home cage and place them in the corner of each test box. Stop the experiment by left clicking on the computer mouse.In the OF test, the maternal heterozygous Ube3a mutant animals were significantly hypoactive as reflected by a shorter traversed distance, lower average speed, and longer resting time. However, none of the parameters related to anxiety-like behavior were altered in Ube3a mutants.

Angelman Sendromlu Fare Modelinde Açık Alan Testi

Tail Suspension Test in an Angelman Syndrome Mouse Model

Connect the tail suspension cage to the computer using a USB cable. Insert the USB dongle into the computer and start the software by double clicking on the BioTSD software icon. In the settings tab on the global, ensure the acquisition duration is set to 360 seconds.In the experiment tab, select the new list of subjects and create a new experiment file and a new list of tested subjects by following the instructions in the opened tab. Prepare the animals for the test by wrapping single-sided adhesive tape around three-fourths of the animal's tail starting from the base. Start the run by clicking start run then continue in the acquisition tab.Immediately after hanging the animal on the hook, click the start icon under the visualized position to acquire data. After testing all the animals, in the analysis tab, select the last four minutes of the acquisition for analysis. Select all valid runs in the analysis period and click analyze selected subjects.Choose the desired data format and click export selected data to export the collected data. In the tail suspension test, Ube3a mutant animals were immobile for significantly longer than their control littermates, indicating their depression-like behavior.