Name: assay for adhesion and agar invasion in s. cerevisiae
Uploaded: 2006-11-08T00:00:00
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Nos gustaría agradecer a Lisa Schneper y Duevel Katrin por sus ideas en el desarrollo de este ensayo.

<ol><li> Ponga 200ul de las culturas de creciente interés en las placas de los medios de comunicación sintética con las condiciones requeridas hambre (SC con glucosa al 2% frente al SC con 0,2% de glucosa, por ejemplo) Si la densidad de las culturas son muy diferentes el uno del otro, ajustar el recuento de células por cultivo 200ul por lo que cada gota tiene aproximadamente la misma cantidad de células. </li><li> Asegúrese de mantener registros de las que caen en las placas es que la cultura. </li><li> Mantenga la tapa entreabierta placa...

<ol>
	<li>Costerton, J. W., Lewandowski, Z., Caldwell, D. E., Korber, D. R., Lappin-Scott, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+biofilms.">Microbial biofilms.</a> Annu Rev Microbiol. 49, 711-745 (1995).</li><li>Elortondo, F. J. P., Salmeron, J., Albisu, M., Casas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms+in+the+food+industry.">Biofilms in the food industry.</a> Food Science and Technology International. 5, 25-30 (1999).</li><li>Keinanen, M. M., Martikainen, P. J., Kontro, M. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mat+formation+in+Saccharomyces+cerevisiae+requires+nutrient+and+pH+gradients.">Mat formation in Saccharomyces cerevisiae requires nutrient and pH gradients.</a> Eukaryot Cell. , (2007).</li></ol>

Las células de levadura mostrar los diversos modos de diferenciación de acuerdo a la disponibilidad de nutrientes y las condiciones ambientales, incluyendo la formación de esporas bajo condiciones de hambre y el estrés, filamentación en diversas tensiones de nutrientes, y la floculación. Levaduras diferentes, incluyendo S. cerevisiae y C. albicans, también se puede encontrar en los biofilms formados por un conjunto diverso de microorganismos. Aunque hay una cierta correlación con filamentación y comportamiento invasivo, no está cl...

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<td>Moticam 350</td>
<td>Camera</td>
<td>Motic</td>
<td>discontinued (new model: Moticam 352)</td>
<td>A relatively cheap camera that attaches to eye pieces of microscopes and captures digital images for PC or Mac.</td>
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assay for adhesion and agar invasion in s. cerevisiae

Las levaduras se encuentran en las biopelículas naturales, donde muchos microorganismos colonizan las superficies. En ambientes artificiales, como las superficies de los objetos artificiales, los biofilms pueden reducir la productividad industrial, destruir las estructuras, y poner en peligro la vida humana. 1.3 Por otra parte, aprovechando el poder de biofilms pueden ayudar a limpiar el medio ambiente y la generación de energía sostenible. 8.4 La capacidad de S. cerevisiae para colonizar las superficies y participar en las biopelículas complejo fue ignorada hasta que el redescubrimiento de los programas de diferenciación provocada por diferentes vías de señalización y las señales ambientales en este organismo. 9, 10 El continuo interés en el uso de S. cerevisiae como organismo modelo para comprender la interacción y convergencia de las vías de señalización, como el Ras-PKA, MAPK Kss1 y Hog1 vías osmolaridad, pone rápidamente de S. cerevisiae en el cruce de la biopelícula la biología y la investigación de la transducción de señales. 20.11 En este sentido, la diferenciación de células de levadura en un largo, filamentos de adhesivo, se convirtió en pseudohyphal una lectura conveniente para la activación de vías de transducción de señales a los diversos cambios ambientales. Sin embargo, filamentación es un conjunto complejo de fenotipos, lo que hace analizando para ello, como si se tratara de un fenotipo engañoso simple. En la última década, varios ensayos se adoptaron con éxito de los estudios de biofilm de bacterias a la investigación de levadura, tales como los ensayos de la formación de MAT para medir la expansión de colonias en agar blando y cristal violeta para medir cuantitativamente la adherencia de la superficie celular. 12, 21 Sin embargo, ha habido cierta confusión en los ensayos desarrollados para evaluar cualitativamente los fenotipos adhesivo e invasiva de la levadura en agar. A continuación, presentamos un método sencillo y fiable para evaluar la calidad del adhesivo e invasiva de las cepas de levadura con fácil de entender, las medidas necesarias para aislar la evaluación de la adherencia de la evaluación de la invasión. Nuestro método, adoptado a partir de estudios anteriores, 10, 16 y afecta las células que crecen en medios líquidos y placas en las condiciones diferenciales de nutrientes para el crecimiento de grandes manchas, que luego lave con agua para evaluar la adhesión y frote las células completamente fuera de la superficie del agar para evaluar la invasión en el agar. Se elimina la necesidad de rayar las células en agar, que afecta a la invasión de las células en el agar. En general, hemos observado que las cepas haploides que invaden agar siempre adhesiva, sin embargo, no todas las cepas adhesivo puede invadir un medio de agar. Nuestro enfoque se puede utilizar en combinación con otros ensayos para analizar cuidadosamente los pasos y los requisitos de diferenciación de la transducción de señal de la levadura, la diferenciación, la detección de quórum, y la formación de biofilm.

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Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

Se describe un ensayo cualitativo para la adhesión de la levadura y la invasión de agar como una medida de la diferenciación y la invasión pseudohyphal. Este ensayo simple se puede utilizar para evaluar el fenotipo invasivo de distintos mutantes, así como las señales de los efectos ambientales y las vías de señalización en la diferenciación de la levadura.

Ensayo de adhesión y la invasión de agar en S. cerevisiae

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Research

JoVE Journal

Biology

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

Un método de alto rendimiento a nivel mundial para estudiar la morfología orgánulo en S. cerevisiae

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Investigación

Biología

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

Identificación de los complejos de proteínas con la proteómica cuantitativa en S. cerevisiae

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

Un In vitro Tumor FluoroBlok invasión de ensayo

The hallmark of metastatic cells is their ability to invade through the basement membrane and migrate to other parts of the body. Cells must be able to ...

Agar-Block Microcosms for Controlled Plant Tissue Decomposition by Aerobic Fungi

Bloque de agar-microcosmos de descomposición controlada de Tejidos Vegetales de hongos aerobios

The two principal methods for studying fungal biodegradation of lignocellulosic plant tissues were developed for wood preservative testing (soil-block; ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

Un ensayo de microscopía de fluorescencia para Mitophagy Vigilancia de la levadura Saccharomyces cerevisiae

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

El estudio de dependientes de la edad de Inestabilidad Genómica con el S. cerevisiae Cronológica Modelo Longevidad

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

El aislamiento de células primarias de ratón trofoblasto y ensayo de invasión trofoblasto

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Citometría de flujo basado Purificación de<em&gt; S. cerevisiae</em&gt; Los cigotos

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualización y Análisis de las moléculas de ARNm mediante fluorescencia<em&gt; In Situ</em&gt; La hibridación en<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Los ensayos acoplados para Monitoreo replegamiento de proteínas en<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...