Name: in vitro apical-out enteroid model of necrotizing enterocolitis
Uploaded: 2022-06-08T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis at JoVE.com

Dette innholdet er utelukkende forfatternes ansvar og representerer ikke nødvendigvis de offisielle synspunktene til National Institutes of Health. HC støttes av tilskudd P20GM134973 fra National Institutes of Health. KB støttes av et Children's Hospital Foundation (CHF) og Presbyterian Health Foundation (PHF) stipend. Vi takker laboratoriet for molekylærbiologi og cytometriforskning ved OUHSC for bruken av kjernefasiliteten, som ga konfokal avbildning.

Alle dyreprosedyrer i denne studien ble godkjent av University of Oklahoma Health Sciences Center Institutional Animal Care and Use Committee. Tynntarmsprøver fra en for tidlig ikke-menneskelig primat (NHP, 90% svangerskap, olivenbavian, Papio anubis) ble oppnådd etter eutanasi for en egen studie (protokoll # 101523-16-039-I).
1. Etablering av apikal-ut enteroid NEC-in-a-dish modell
<ol><li>Forberedelse av media og enteroid behandlinger MERK: Når mediet er til...

Den nylige utviklingen av enteroidmodeller avledet fra tarmepitelkrypter muliggjør et mer fysiologisk relevant in vitro-vev for å studere nekrotiserende enterokolittpatogenese. Til tross for å inkludere alle store differensierte celletyper i tarmepitelet, er 3D-enteroider fortsatt underlagt flere signifikante begrensninger. De konvensjonelle, basolaterale ut-enteroidene suspenderes i 3D ECM-hydrogelkupler, hvis sammensetning og tetthet kan begrense normal diffusjon i vevskulturmiljøet39</su...

Nekrotiserende enterokolitt (NEC), en alvorlig inflammatorisk sykdom i tynntarmen som forekommer hos opptil 10% av premature spedbarn, er ofte forbundet med høy sykelighet og dødelighet 1,2. Dødelighet som nærmer seg 50% hos svært lav fødselsvekt (<1500 g) spedbarn, som krever kirurgisk inngrep, er ikke uvanlig3. Mens den eksakte etiologien til NEC for øyeblikket ikke forstås, antas risikofaktorer, som formelfôring, å sammensettes med fysiologiske anomalier, som dysbiose, et umodent tarmepitel og en dysfunksjonell tarmbarriere, i utviklingen av sykdommen 2,4. Til tross for betydelig innsats har det skjedd liten fremgang i forebygging eller behandling av NEC i løpet av det siste tiåret5. En ny in vitro-metode for å studere NEC og tilhørende tarmepitelbarrieredysfunksjon er nødvendig for å fremme forståelsen av patogenesen av sykdommen, da funn fra dyremodeller hittil har oversatt dårlig til sengen6.
En rekke in vitro-modeller har blitt brukt for å undersøke mekanismene som er i spill under NEC. Den humane tarmepitelcellelinjen, Caco-2, er blant de mest brukte in vitro-modellene av NEC 7,8. Caco-2-celler emulerer børstegrensens morfologiske egenskaper i tynntarmen, men som en cellelinje skiller de seg ikke ut i det store utvalget av in vivo-celletyper, inkludert slimproduserende begerceller, som kreves for en svært oversettbar modell. HT-29-MTX, humane adenokarsinomceller i tykktarmen, inkluderer en blandet enterocytt og begercellefenotype, men mangler fortsatt kryptbaserte celletyper i tarmepitelet9. IEC-6 og IEC-18 er ikke-transformerte cellelinjer med en umoden ileal kryptlignende morfologi, men er ikke avledet fra menneskelig vev, noe som begrenser deres translasjonskapasitet. FHs 74-Int og H4 tarmcellelinjer er avledet fra humant fostervev og danner ikke tette veikryss eller polariserte monolag10,11, og er dermed umodne sammenlignet med selv de mest premature spedbarnene som er utsatt for NEC. Vanligvis bruker NEC in vitro-modeller lipopolysakkarid (LPS) behandlinger for å indusere tolllignende reseptor 4 (TLR4), en viktig reseptor som initierer tarmbetennelse i NEC12. Skader mediert gjennom reaktive oksygenarter (ROS) behandling, vanligvis via hydrogenperoksid, brukes ofte til å indusere NEC-lignende oksidativ skade og apoptose13,14. Som hoveddriver for tarmbetennelse, er tumornekrosefaktor-alfa (TNF-α), en nedstrømskomponent i inflammatorisk TLR4-signalering, også ofte brukt i disse in vitro-modellene for å etterligne in vivo patogenese15.
Organoider, generert fra induserbare pluripotente stamceller (iPSCs), har vokst i popularitet som en in vitro-modell av tarmen på grunn av deres evne til å rekapitulere komplekset in vivo-arkitektur og celletypesammensetning av vevet de er avledet fra16,17. Et relatert in vitro-system, enteroider, er organoider avledet fra resekterte tarmkrypter som er lettere etablert og vedlikeholdt enn iPSC-avledede organoider. Enteroider dyrkes vanligvis i en tredimensjonal (3D) ekstracellulær matrise (ECM) med eksperimentell tilgang begrenset til den basolaterale celleoverflaten. Metoder, som mikroinjeksjon18,19, er utviklet for å overvinne denne barrieren mot den apikale overflaten, men oppbyggingen av sloughed cellulært rusk og slim i lumen gjør mikroinjeksjon både teknisk vanskelig og inkonsekvent. Siden tilpassede robotmikroinjeksjonsplattformer ikke er allment tilgjengelige20, blir lab-til-lab-variabilitet i teknisk evne og generell teknikk betydelige variabler å overvinne med mikroinjeksjonsprotokoller. Todimensjonale (2D) monolag avledet fra dissosierte 3D-enteroider, som fortsatt omfatter alle hovedcelletyper i tarmepitelet, gir tilgang til den apikale overflaten, men har tradisjonelt vært vanskelig å opprettholde uten et materlag av mesenkymale myofibroblaster21. Mens cellekulturpermeable støtter kan brukes til å få tilgang til både apikale og basolaterale sider av enteroid monolag uten bruk av underliggende myofibroblaster, krever disse innsatsene eksisjon og montering av membranen før bruk med modaliteter som konfokalmikroskopi, noe som resulterer i en mer teknisk krevende og vanskelig prosess ved bruk av tradisjonelle mikroskopimetoder22. NEC har blitt modellert in vitro ved hjelp av tradisjonelle 3D-enteroider 23,24,25 og permeable støtter 26,27, og tarmbetennelse har nylig blitt replikert med gut-on-a-chip-modeller 28,29. Mens gut-on-a-chip-modeller som inneholder mikrofluidikk er de desidert mest avanserte og oversettbare modellene, er denne teknologien dyr, kompleks og utilgjengelig for de fleste etterforskere30.
Nylige fremskritt innen apikale enteroidteknikker har gitt lettere tilgang til den apikale overflaten av 3D-enteroider uten å risikere skade på den strukturelle integriteten til in vitro-epitelet 31,32,33. Apical-out enteroider deler celletypesammensetningen og barrierefunksjonen til in vivo tarmepitel, men i motsetning til typiske 3D-enteroider vender de apikale overflatene til disse cellene mot kulturmediet, noe som muliggjør mer fysiologisk relevante studier på næringsabsorpsjon, mikrobiell infeksjon og luminal sekresjon31. En ekstra fordel med apikale enteroider er evnen til homogent å distribuere eksperimentelle midler til enteroider. Varierende behandlingsvolum basert på enteroidstørrelse er ikke nødvendig, som det er med mikroinjeksjon, og evnen til å opprettholde disse enteroidene i suspensjonskultur negerer enhver ECM-interferens på eksperimentell agentdiffusjon32.
Nekrotiserende enterokolitt er en multifaktoriell sykdom som involverer flere tarmepitelcelletyper og en rekke miljømessige og patofysiologiske faktorer34. Den varierte cellesammensetningen av intestinale enteroider er en klar forbedring i forhold til monokulturer i modellering av en kompleks sykdom som NEC. Interessant nok, mens en enkelt inflammatorisk eksponering ofte er tilstrekkelig til å indusere skade i in vitro monokulturer, synes enteroider, som med musemodeller23, å kreve minst to inflammatoriske komponenter for å indusere NEC-lignende skade6. Her presenterer vi en apikal-ut NEC-in-a-dish-modell, ved bruk av apikale enteroider i kombinasjon med hypoksi (et viktig klinisk trekk ved NEC6) og enten LPS eller TNF-α, som en forbedret og mer fysiologisk relevant in vitro-modell for å studere epitelresponser på NEC-lignende betennelse og potensielt identifisere terapeutiske mål. Vi beskriver en protokoll for reversering av polariteten til tynntarms 3D-enteroider, samt en immunfluorescerende fargeprotokoll for å identifisere epitelbarriereforstyrrelser og kryssende proteinuttrykksendringer. Til slutt demonstrerer vi videre en enkel enteroid levedyktighetsanalyse for å bestemme virkningen av vår dual-hit, apikal-ut NEC-in-a-dish-modell.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15575-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Conical tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar Ultra-Low Attachment 24-Well Microplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glass 24 mm x 60 mm</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>102460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Anti-Rabbit IgG Antibody, Cy3 conjugate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>AP182C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium/Nutrient Ham&#39;s Mixture F-12 (DMEM-F12) with 15 mM HEPES buffer</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>36254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E-cadherin antibody (7H12)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-19051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution 4%, buffered, pH 6.9</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>1004960700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Fiji</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IntestiCult Organoid Growth Medium (Human)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>06010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 Confocal Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharides from Escherichia coli O111:B4, purified by gel filtration chromatography</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>L3012-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>566460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Delta-Treated, Flat-Bottom Microplate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>136101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate Buffered Saline), 1x [-] calcium, magnesium, pH 7.4</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Glass Antifade Mountant with NucBlue</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P36983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Anti-Villin antibody [SP145]</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab130751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human TNF-&#945; protein 100 &#181;g</td>
			<td>Bio-Techne</td>
			<td>210-TA-100/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax iD3 Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Forma Series II Water-Jacketed Tri-Gas Incubator, 184L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TO-PRO-3 Iodide (642/661)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubes, 0.5 mL, flat cap</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AB0350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro apical-out enteroid model of necrotizing enterocolitis

Nekrotiserende enterokolitt (NEC) er en ødeleggende sykdom som påvirker premature spedbarn, preget av tarmbetennelse og nekrose. Enteroider har nylig dukket opp som et lovende system for å modellere gastrointestinale patologier. Imidlertid mangler nåværende metoder for enteroid manipulasjon enten tilgang til epitelets apikale overflate (tredimensjonal [3D]) eller er tidkrevende og ressurskrevende (todimensjonale [2D] monolag). Disse metodene krever ofte flere trinn, for eksempel mikroinjeksjon, for at modellen skal bli fysiologisk oversettbar. Her beskriver vi en fysiologisk relevant og billig protokoll for å studere NEC in vitro ved å reversere enteroid polaritet, noe som resulterer i at den apikale overflaten vender utover (apikal-ut). En immunfluorescerende fargeprotokoll for å undersøke enteroid barriereintegritet og junctional proteinuttrykk etter eksponering for tumornekrosefaktor-alfa (TNF-α) eller lipopolysakkarid (LPS) under normoksiske eller hypoksiske forhold er også gitt. Levedyktigheten til 3D apikale ut enteroider utsatt for normoksisk eller hypoksisk LPS eller TNF-α i 24 timer blir også evaluert. Enteroider eksponert for enten LPS eller TNF-α, i kombinasjon med hypoksi, viste forstyrrelse av epitelarkitektur, tap av adherens junction proteinuttrykk og en reduksjon i cellens levedyktighet. Denne protokollen beskriver en ny apikal-ut NEC-in-a-dish-modell som presenterer en fysiologisk relevant og kostnadseffektiv plattform for å identifisere potensielle epitelmål for NEC-terapier og studere for tidlig intestinal respons på terapi.

Bruken av enteroider for å modellere tarmbetennelse, selv innenfor rammen av nekrotiserende enterokulitt, er nå vanlig. Imidlertid mangler de fleste metoder som for tiden brukes, enten tilgang til den apikale overflaten av enteroider, og negerer den fysiologiske relevansen av forbindelser beregnet for eventuell bruk som oral terapi, eller er teknisk vanskelige og tidkrevende, som med enteroid-avledede monolag. For å øke nytten av nåværende in vitro enteroidmodeller av NEC, reverserte vi polariteten til ent...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis at JoVE.com

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Denne protokollen beskriver en apikal-ut nekrotiserende enterokolitt (NEC) -i-en-parabol-modell som bruker små intestinale enteroider med reversert polaritet, noe som gir tilgang til den apikale overflaten. Vi tilbyr en immunfluorescerende fargeprotokoll for å oppdage NEC-relatert epitelforstyrrelse og en metode for å bestemme levedyktigheten til apikale enteroider utsatt for NEC-in-a-dish-protokollen.

In vitro Apical-Out Enteroid Modell av nekrotiserende enterokolitt

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease affecting preterm infants, characterized by intestinal inflammation and necrosis. Enteroids have ...

Denne protokollen beskriver den første apikale ut-in-a-dish-modellen og er en kritisk forbedring i forhold til basale laterale ut enteroide in-a-dish-modeller ved etablering av in vitro-modellering av potensielle terapier beregnet for oral administrering. Denne metoden gir tilgang til den apikale overflaten av enteroider. Forbindelser kan legges til cellemedier og forbindelsene tas opp apikalt som de ville være in vivo.Forskere som er interessert i å etablere et in vitro-system av tarmbetennelse for å teste potensielle orale terapier, kan finne denne teknikken spesielt nyttig. Vev hentet fra ulike aldre og arter kan kreve ytterligere standardisering. Så pasienter mens de etablerer polaritetsreverseringstider kan være nødvendige.For å reversere polariteten til 3D-enteroider, aspirerer media fra hver brønn av en 24-brønnplate av etablerte 3D basolaterale ut enteroider. Tilsett 500 mikroliter fem millimolar iskald, EDTA eller PBS til hver brønn på en 24-brønnplate og forstyrr forsiktig kjellermembranekstraktet eller ekstracellulær matrikskuppel ved å pipettere opp og ned fem til seks ganger med en P 200-pipette. Overfør innholdet i fire brønner til et 15 milliliter kronisert rør.Tilsett deretter åtte milliliter iskald EDTA-slash PBS til røret. Overfør de resterende 20 brønnene på samme måte. Inkuber rørene ved fire grader Celsius i en time på en roterende plattform eller shaker ved 330 RPM.Etter inkubasjon sentrifuger rørene og kaster supernatanten fra hvert rør. Kombiner og vask pellets med fem ml DMEM F12. Sentrifuger deretter cellesuspensjonen og fjerner supernatanten før du tilsetter 12 ml antibiotikafritt medium til røret, slik at cellepellets blir resuspendert.Pippet 500 mikroliter av enteroidsuspensjonen i hver brønn i en 24-brønns ultralav festeplate. Inkuber platen ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i to til fem dager eller til enteroidene har reversert polariteten. På dag én avholdende, overfør innholdet i fire brønner i en 24-brønnplate til et 1,5 milliliter mikrosentrifugerør.Gjenta for alle ønskede brønner med hver behandling i et eget rør. Sentrifuge rørene og resuspendere pelleten i 300 mikroliter 4% fra aldehydfiksativ ved romtemperatur. Etter 30 minutter vaskes pellets med 500 mikroliter PBS.Tilsett 500 mikroliter 0,1% Triton X 100 til rørene. Inkuber rørene i en time ved romtemperatur. Deretter plasserer du rørene på en rotator eller shaker ved 200 o / min i 15 minutter ved to til åtte grader Celsius.Etter siste inkubasjon, tilsett 500 mikroliter 10% NDS i PBS T og inkuber ved romtemperatur i 45 minutter. Under inkubasjon, lag primær antistoffløsning. Neste dag legger du til 250 til 500 mikroliter PBS T til rørene, avhengig av størrelsen på pelleten, og legg dem på rotatoren eller shakeren ved 200 o / min i en time ved to til åtte grader Celsius.Tilsett 200 mikroliter av den sekundære antistoffoppløsningen og inkluder rørene ved to til åtte grader Celsius i mørket. Neste dag, fortsett for montering av fargede apikale ut enteroider ved å snurre rørene og fjerne 100 mikroliter supernatant. Resuspend cellene i de resterende 100 mikroliter supernatant og overfør cellesuspensjonen til 500 mikroliter rør.Sentrifuge rørene i en mini sentrifuge i 20 sekunder. Fjern supernatanten og resuspender pellets i 100 mikroliter romtemperatur langt rød nukleinsyreflekk. Etter 20 minutters inkubasjon, sentrifuger cellene og resuspenderer pellets i 100 mikroliter PBS.Etter den andre vask og sentrifugering fjern 70 mikroliter av supernatanten og resuspender pellets i gjenværende volum PBS. Overfør deretter cellesuspensjonen til en merket 24 x 60 millimeter dekselslipp. Påfør 75 mikroliter monteringsmiddel direkte på prøven og fjern eventuelle bobler med en pipettespiss.Etter herding i mørket over natten, påfør et tynt lag glyserol på dekselslippene, monter deretter dekselslippene på glassglasset og trykk det forsiktig på plass. Trykk for å fjerne eventuelle bobler mellom dekselet og lysbildet. La dekselet gli stille i romtemperatur i mørket i to timer før du avbilder enteroidene ved 20 ganger forstørrelse med et konfokalt mikroskop.For enteroidbehandlinger, etablere en apikal ut nekrotiserende enterokolitt i en parabolmodell i 24 timer som beskrevet i tekstmanuskriptet. Før du utfører analysen, fjern 100 mikroliter media fra hver brønn og la de resterende 400 mikroliter. Tilsett 400 mikroliter celle levedyktighet analyse reagens til hver brønn.Bland innholdet kraftig på en plateshaker i fem minutter ved 200 RPM for å indusere cellelyse. Deretter overfører du 200 mikroliter til en enkelt brønn på en 96 godt klar bunnplate. Gjenta for de resterende 600 mikroliterne og lag fire tekniske repliker per brønn.Ved hjelp av en plateleser som er i stand til luminescens, registrer verdier ved integrasjon på 0,25 millisekunder og sammenlign de relative verdiene mellom behandlinger. Den representative immunfluorescensfargingen av kontroll bekreftet apikal ut lokalisering av kjerner mot lumen og påvisning av skurk i ytterkanten av epitelet. Sammenlignet med kontrollen induserte ikke eksponering for lipopolysakkarid, tumornekrose alfa eller hypoksi alene åpenbare endringer i bruttocellemorfologi E-cadherin eller skurklokalisering eller fluorescerende intensitet.Behandling med lipopolysakkarid eller tumornekrose alfa i kombinasjon med hypoksi forstyrret epitelarkitektur og viste et signifikant tap av adherenskryss og børstegrenseproteinuttrykk avslørt av tap av ECA-hørsel og skurkfarging. Den apikale ut cellens levedyktighet ble bestemt under normoksiske eller hypoksiske forhold. Under normoksiske forhold sammenlignet med kontroll lipo polysakkarid eller tumornekrose alfa påvirket ikke signifikant cellens levedyktighet av enteroider.Det ble imidlertid observert signifikant reduksjon i levedyktighet i lipopolysakkarid eller tumornekrose alfa i kombinasjon med hypoksi sammenlignet med hypoksi alene. Mens du etablerer apikal ut in-a-dish-modell. Husk å holde EDTA i cellesuspensjonen iskald.Dette vil forbedre polaritetsreversering og sikre at all ECM er riktig flytende og fjernet. Andre nedstrøms applikasjoner som QPCR, RNA-seq, western blotting eller funksjonelle evalueringer av barrierepermeabilitet kan utføres videre for å karakterisere responsen på inflammatorisk signalering i hypoksi.

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stamcelletransplantasjon i en In vitro Simulert ischemia / reperfusjon Model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Vurdere Teratogene Endringer i en sebrafisk Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells (cEND) as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells cEND as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Strekk i Brain mikrovaskulær endotelceller (cend) som en<em&gt; In Vitro</em&gt; Traumatic Brain Injury Modell av blod-hjerne barrieren

Due to the high mortality incident brought about by traumatic brain injury (TBI), methods that would enable one to better understand the underlying ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Eksitotoksiske Stimulering av Hjerne Microslices som en<em&gt; In vitro</em&gt; Modell av Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk Contractility måling av musen hvem arterien bruker Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

In Vitro Modell av Koronar Angiogenese

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

An In Vitro Hemodynamic Loop Model to Investigate the Hemocytocompatibility and Host Cell Activation of Vascular Medical Devices

En In Vitro Hemodynamic Loop Modell for å undersøke hemocytokompatibilitet og vertscelleaktivering av vaskulære medisinske enheter

In this study, the hemocompatibility of tubes with an inner diameter of 5 mm made of polyvinyl chloride (PVC) and coated with different bioactive ...

In vitro Assessment of Myocardial Protection following Hypothermia-Preconditioning in a Human Cardiac Myocytes Model

In vitro vurdering av myokardbeskyttelse etter hypotermi-prekondisjonering i en human hjerte-myocytter modell

Ischemia/reperfusion-derived myocardial dysfunction is a common clinical scenario in patients after cardiac surgery. In particular, the sensitivity of ...

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

En modell av eksperimentell steatose in vitro: Hepatocyte cellekultur i Lipid overbelastningskondisjonerte medium

Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MAFLD), previously known as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), is the most prevalent liver ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

En neonatal BALB/c musemodell av nekrotiserende enterokolitt

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...