Name: a novel high-throughput ex vivo ovine skin wound model for testing emerging antibiotics
Uploaded: 2022-09-16T13:20:00
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Gli autori desiderano ringraziare EPSRC (EP/R513313/1) per il finanziamento. Gli autori desiderano anche ringraziare R.B Elliot e Son Abattoir a Calow, Chesterfield, per aver fornito teste di agnelli e per essere stati così accomodanti nelle prime fasi del progetto, Kasia Emery per il suo supporto durante lo sviluppo di questo protocollo e Fiona Wright del Dipartimento di infezione, immunità e malattie cardiovascolari dell'Università di Sheffield per l'elaborazione dei campioni istologici e per essere stata così incredibilmente utile durante questo progetto.

Le teste di agnello del macello R.B Elliott and Son sono state utilizzate come fonte di campioni di pelle in questo progetto. Tutti gli agnelli venivano macellati per il consumo come cibo. Invece di scartare le teste, queste sono state riproposte per la ricerca. L'approvazione etica non era richiesta in quanto il tessuto proveniva da rifiuti scartati dai macelli.
1. Sterilizzazione
<ol><li>Disinfettare le pinze prima della raccolta delle teste prendendo una pinza pulita ed e...

<ol>
	<li>Claeys, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+application+of+published+risk+factors+for+methicillin-resistant+S.+aureus+in+acute+bacterial+skin+and+skin+structure+infections.">Novel application of published risk factors for methicillin-resistant S. aureus in acute bacterial skin and skin structure infections.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 51 (1), 43-46 (2018).</li><li>Rahim, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contribution+in+chronicity+of+wounds.">Bacterial contribution in chronicity of wounds.</a> Microbial Ecology. 73 (3), 710-721 (2017).</li><li>Guest, J. F., Fuller, G. 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P., Carty, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Models+of+Biofilm+Infection.">In Vivo Models of Biofilm Infection.</a> Biofilm Infections. , 267-290 (2011).</li><li>Boase, S., Valentine, R., Singhal, D., Tan, L. W., Wormald, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sheep+model+to+investigate+the+role+of+fungal+biofilms+in+sinusitis:+Fungal+and+bacterial+synergy.">A sheep model to investigate the role of fungal biofilms in sinusitis: Fungal and bacterial synergy.</a> International Forum of Allergy &amp; Rhinology. 1 (5), 340-347 (2011).</li><li>Williams, D. 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Lo sviluppo di antimicrobici è un'impresa importante ma costosa che si stima costi circa 1 miliardo di dollari e richieda circa 15 anni per essere completata. Oltre il 90% della scoperta di farmaci antimicrobici e degli studi preclinici sull'efficacia dei farmaci antimicrobici sono condotti da ricercatori accademici e piccole e medie imprese con in genere meno di 50 dipendenti22. Questi team sono molto vincolati finanziariamente, il che rende disastroso il fallimento delle molecole guida nelle fa...

Le infezioni della pelle sono un importante problema globale, con grandi costi economici per gli operatori sanitari di tutto il mondo. Lo sviluppo della resistenza multifarmaco e la formazione di biofilm da parte di agenti patogeni gioca un ruolo chiave nella prevalenza di ferite non cicatrizzanti 1,2,3,4. Di conseguenza, le infezioni della pelle e dei tessuti molli sono uno dei motivi più comuni per il ricovero prolungato e la successiva riammissione5. I ritardi nella guarigione delle ferite sono costosi sia per il paziente che per gli operatori sanitari, con alcune stime che suggeriscono che circa 6,5 milioni di pazienti sono colpiti ogni anno negli Stati Uniti. Nel Regno Unito, le infezioni della pelle e le complicanze associate provocano circa 75.000 decessi all'anno 2,4,6.
Lo Staphylococcus aureus (S. aureus) è un formidabile patogeno della ferita spesso isolato dalle ferite del paziente 2,7. Il tasso di comparsa della resistenza multifarmaco è aumentato drasticamente negli anni 2000. Durante questo periodo, circa il 60% delle infezioni batteriche acute della pelle e della struttura della pelle erano positive alla coltura per S. aureus 1 resistente alla meticillina. Il crescente numero di ceppi multiresistenti tra gli stafilococchi e altri agenti patogeni negli ultimi 2 decenni indica un urgente bisogno di un rapido sviluppo di antibiotici con nuove modalità di azione in grado di superare la resistenza.
Tuttavia, dai primi anni 2000, i programmi di scoperta degli antibiotici sono stati dominati da tempi di sviluppo più lunghi e bassi tassi di successo, con solo il 17% dei nuovi antibiotici che entrano negli studi clinici negli Stati Uniti ottenendo l'approvazione del mercato8. Ciò suggerisce una disparità tra i risultati dei test in vitro sugli antibiotici emergenti e i loro risultati clinici. Si può sostenere che questa disparità è in gran parte dovuta alle differenze nella fisiologia batterica durante le infezioni in vivo e durante i metodi microbiologici convenzionali quando si verifica l'efficacia degli antibiotici nelle fasi precliniche in vitro . Pertanto, sono necessari nuovi metodi di laboratorio che siano più rappresentativi della fisiologia batterica durante l'infezione per migliorare le percentuali di successo nei programmi di scoperta di antibiotici.
I metodi attuali per studiare le infezioni cutanee includono studi su animali vivi (ad esempio, topi), modelli cutanei ex vivo (ad esempio, suini) e modelli cutanei 3D di ingegneria tissutale (ad esempio, umano)9,10,11,12. Gli studi su animali vivi sono strettamente regolamentati e hanno una produttività relativamente bassa. Nei modelli animali, ferite e infezioni causano disagio significativo agli animali e sollevano preoccupazioni etiche. I modelli di pelle umana, ex vivo o di ingegneria tissutale, richiedono l'approvazione etica, la conformità alla legislazione locale e globale (la legge sui tessuti umani, la dichiarazione di Helsinki) e vi è difficoltà nell'acquisizione di tessuti, con alcune richieste che richiedono anni per soddisfare13,14. Entrambi i tipi di modello sono ad alta intensità di manodopera e richiedono competenze significative per garantire il successo sperimentale. Alcuni attuali modelli di infezione cutanea ex vivo richiedono dischi pre-inoculati e additivi per il letto della ferita per consentire l'infezione; Sebbene questi modelli siano incredibilmente utili, ci sono limitazioni nel processo di infezione in quanto gli additivi limitano l'utilizzo del letto della ferita come fonte di nutrienti10,15,16,17. Il modello descritto in questo studio non utilizza additivi per il letto della ferita, il che garantisce che la patologia dell'infezione e la conta delle cellule vitali siano il risultato dell'utilizzo diretto del letto della ferita come unica fonte di nutrienti.
Data la necessità di nuovi metodi di laboratorio, è stato sviluppato un nuovo modello ex vivo di infezioni cutanee ovine, ad alto rendimento, da utilizzare nella valutazione dell'efficacia degli antibiotici emergenti. Gli studi sulle infezioni della pelle affrontano molte sfide: costi elevati, preoccupazioni etiche e modelli che non mostrano un quadro completo20,21. I modelli ex vivo e i modelli di espianto 3D consentono una migliore visualizzazione del processo patologico e dell'impatto che i trattamenti possono avere da un modello clinicamente più rilevante. Qui viene descritta la configurazione di un nuovo modello di pelle ovina, che è semplice, riproducibile e clinicamente rilevante e ha un alto rendimento. La pelle ovina è stata scelta poiché le pecore sono uno dei grandi mammiferi comunemente usati per modellare le risposte alle infezioni in vivo. Inoltre, sono facilmente reperibili dai macelli, garantendo una fornitura costante di pelle per la ricerca, e le loro carcasse non sono scottate, garantendo una buona qualità dei tessuti. Questo studio ha utilizzato S. aureus come patogeno esemplare; Tuttavia, il modello funziona bene con altri microrganismi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 Well Companion Plate</td>
			<td>SLS&#160;</td>
			<td>353504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm Biopsy Punch</td>
			<td>Williams Medical</td>
			<td>D7484</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>10788561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8 mm Biopsy Punch</td>
			<td>Williams Medical</td>
			<td>D7488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B solution, sterile</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>A2942</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colour Pro Style Cordless Hair Clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9639-2117X</td>
			<td>Hair Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Oven Incubator</td>
			<td>SLS</td>
			<td>OVe1020</td>
			<td>Sterilising oven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal growth factor&#160;</td>
			<td>SLS</td>
			<td>E5036-200UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>458600-2.5L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F12 HAM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N4888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal bovine serum&#160;</td>
			<td>Labtech International</td>
			<td>CA-115/500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15307805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Removal Cream</td>
			<td>Veet</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heracell VIOS 160i</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>15373212&#160;</td>
			<td>Tissue culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraeus Megafuge 16R</td>
			<td>VWR</td>
			<td>521-2242</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer 220, Handheld</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15575809</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer 220, plastic blending cones</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>15585819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insert Individual 24 well 0.4um membrane</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>353095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin, recombinant Human</td>
			<td>SLS</td>
			<td>91077C-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199 (MK media)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M0393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate, cell culture Costar 96 well</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10687551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multitron</td>
			<td>Infors</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>Bacterial incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>P4417-100TAB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>SLS&#160;</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate seals</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>ESI-B-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe 2020</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1284804</td>
			<td>Class II microbiology safety cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade number 15</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>O305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Swann Morton</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11849002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed Allis Tissue Forceps</td>
			<td>Rocialle</td>
			<td>RSPU500-322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Agar</td>
			<td>Merck Life Science UK Limited</td>
			<td>14432-500G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Broth</td>
			<td>Merck Life Science UK Limited</td>
			<td>41298-500G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimoba Tablets</td>
			<td>Quip Labs</td>
			<td>VMTAB75BX</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel high-throughput ex vivo ovine skin wound model for testing emerging antibiotics

Lo sviluppo di antimicrobici è un processo costoso con tassi di successo sempre più bassi, il che rende meno attraenti ulteriori investimenti nella ricerca sulla scoperta di antimicrobici. La scoperta di farmaci antimicrobici e la successiva commercializzazione possono essere rese più redditizie se un approccio fail-fast-and-fail-cheap può essere implementato all'interno delle fasi di ottimizzazione del piombo in cui i ricercatori hanno un maggiore controllo sulla progettazione e la formulazione dei farmaci. In questo articolo, viene descritta la configurazione di un modello di pelle ferita ovina ex vivo infettata da Staphylococcus aureus, che è semplice, economica, ad alta produttività e riproducibile. La fisiologia batterica nel modello imita che durante l'infezione come proliferazione batterica dipende dalla capacità del patogeno di danneggiare il tessuto. L'instaurazione dell'infezione della ferita è verificata da un aumento della conta batterica vitale rispetto all'inoculo. Questo modello può essere utilizzato come piattaforma per testare l'efficacia degli antimicrobici emergenti nella fase di ottimizzazione del piombo. Si può sostenere che la disponibilità di questo modello fornirà ai ricercatori che sviluppano antimicrobici un modello fail-fast-and-fail-cheap, che contribuirà ad aumentare i tassi di successo nelle successive sperimentazioni sugli animali. Il modello faciliterà inoltre la riduzione e il perfezionamento dell'uso animale per la ricerca e, in ultima analisi, consentirà una traduzione più rapida ed economica di nuovi antimicrobici per le infezioni della pelle e dei tessuti molli in clinica.

L'identificazione di un percorso per sterilizzare la pelle prima di impostare il modello di infezione della ferita è stata impegnativa. La sfida consisteva nel sterilizzare la pelle senza danneggiare i diversi strati cutanei, che possono quindi avere conseguenze indesiderate nell'esito dell'infezione. Per identificare un regime di sterilizzazione appropriato, sono stati provati diversi trattamenti per periodi di tempo variabili, come indicato nella Tabella 1. La contaminazione è stata registrata come l...

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A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics

Il protocollo descrive un metodo passo-passo per impostare un modello di pelle ferita ovina ex vivo infettata da Staphylococcus aureus. Questo modello ad alto rendimento simula meglio le infezioni in vivo rispetto alle tecniche di microbiologia convenzionali e presenta ai ricercatori una piattaforma fisiologicamente rilevante per testare l'efficacia degli antimicrobici emergenti.

Un nuovo modello di ferita della pelle ovina ex vivo ad alta produttività per testare antibiotici emergenti

The development of antimicrobials is an expensive process with increasingly low success rates, which makes further investment in antimicrobial discovery ...

Questo modello consentirà ai ricercatori nelle fasi precliniche critiche di determinare con maggiore precisione l'efficacia antimicrobica delle nuove formulazioni e offre ai ricercatori un maggiore controllo sulla progettazione e la formulazione dei farmaci. Questo modello consente risultati rapidamente riproducibili in un ambiente di ferita rappresentativo. Riduce la necessità di animali allevati appositamente e facilita la traduzione più rapida degli antimicrobici topici per le infezioni delle ferite in clinica.Le sfide principali sono la contaminazione e la destrezza. Una rigorosa tecnica asettica e pazienza con la lavorazione dei tessuti sono essenziali; per il successo di questo metodo è necessaria una rimozione precisa e mirata del lembo. Inizia con la disinfezione delle pinze esponendoli alla sterilizzazione a calore secco a 200 gradi Celsius per un'ora.Autoclavare tutti i bicchieri a 121 gradi Celsius per 15 minuti prima dell'uso. Disinfettare la sezione frontale della lampada versando circa 100 millilitri di soluzione di biossido di cloro da 200 PPM sull'area del campione. Rasare la sezione della fronte con tagliatrici elettriche, seguita da un lavaggio con 200 millilitri di soluzione di biossido di cloro da 200 PPM.Pulire l'area con etanolo e un rotolo blu e coprire l'area del campione con una crema depilatoria. Dopo 35 minuti, raschiare delicatamente la crema depilatoria utilizzando uno strumento raschiante e valutare l'area del campione. Ripetere il processo di depilazione se rimane una quantità significativa di peli.Risciacquare l'area del campione pulita con 200 millilitri di soluzione di biossido di cloro seguita da etanolo e un rotolo blu. Utilizzare un pugno sterile da otto millimetri per biopsia per ritagliare un campione di pelle di otto millimetri dall'area preparata. Quindi rimuovere il campione utilizzando una pinza sterile e un bisturi a lama numero 15, assicurandosi che tutto il grasso cutaneo venga rimosso.Mettere i campioni in un barattolo sterile da 0,5 litri riempito con PBS sterile. Quindi trasferirli in tubi sterili da 50 millilitri riempiti con 50 millilitri di soluzione di biossido di cloro da 200 PPM. Capovolgere il tubo due volte e lasciarlo sterilizzare per 30 minuti.Trasferire i campioni in una provetta da 50 millilitri riempita con 40 millilitri di PBS sterile. Dopo il lavaggio PBS, posizionare ciascun campione di pelle in un pozzetto separato di una piastra a 24 pozzetti. Aggiungere 350 microlitri del mezzo preriscaldato in un pozzetto, mantenendo il campione all'interfaccia aria-liquido.Sigillare le piastre a 24 pozzetti con una guarnizione a piastra permeabile al gas prima di posizionare la piastra per l'incubazione in un incubatore di tessuto umidificato al 5% di anidride carbonica e 37 gradi Celsius per 24 ore. Dopo l'incubazione, rimuovere il terreno di coltura e sciacquare i campioni in 500 microlitri di PBS sterile. Rimuovere gli antibiotici residui dal campione trattandoli con terreni privi di antibiotici al 5% di anidride carbonica e 37 gradi Celsius per 24 ore.Se la torbidità o l'infezione fungina si sviluppa nei mezzi privi di antibiotici, scartare il campione. Quindi, preparare un tubo da 50 millilitri con 10 millilitri di brodo di soia tripttico sterile. Quindi trasferire diverse colonie di Staphylococcus aureus da una piastra di agar fresco di S.aureus al brodo e incubare il tubo a 37 gradi Celsius e 150 RPM per 18 ore.Dopo aver centrifugato i tubi a 4.000 G per tre minuti, rimuovere il surnatante e risospendere il pellet cellulare in 10 millilitri di PBS sterile. Ripetere il lavaggio PBS due volte prima di regolare l'inoculo a 0,6 densità ottica a lunghezze d'onda di 600 nanometri utilizzando PBS sterile. Confermare il carico dell'inoculo mediante un conteggio manuale delle piastre.Per infettare il campione di pelle, preparare una piastra fresca a 24 pozzetti con 400 microlitri di mezzi privi di antibiotici preriscaldati e aggiungere i 24 inserti del pozzetto usando una pinza sterile. Rimuovere il supporto dai campioni di pelle. Lavarli con 500 microlitri di PBS sterile e rimuovere il lavaggio.Utilizzare una pinza sterile per tenere delicatamente il campione sul fondo del pozzetto. Utilizzare una biopsia di perforazione di quattro millimetri per perforare il campione di pelle a una profondità approssimativa di uno o due millimetri e creare un lembo centrale della ferita. Quindi utilizzare un bisturi a lama numero 15 e una pinza di tessuto Allis dai denti sterili per rimuovere lo strato superiore del lembo della ferita.Una volta che tutti i campioni sono stati feriti, trasferirli nei 24 inserti del pozzetto usando una pinza sterile. Pipettare 15 microlitri di inoculo batterico nel letto della ferita prima di incubare per 24 ore a 37 gradi Celsius in un incubatore di tessuto umidificato. Per periodi di incubazione più lunghi, rimuovere il supporto, sostituirlo con terreni freschi ogni 24 ore e incubare le piastre nelle stesse condizioni.Per determinare la carica batterica, rimuovere il mezzo dal fondo dei pozzetti. E usando una pinza sterile, trasferire ogni campione in un tubo separato da 50 millilitri riempito con un millilitro di PBS sterile. Quindi staccare i batteri dalla superficie del letto della ferita omogeneizzando la superficie del campione con un omogeneizzatore a punta fine.Assicurarsi che il letto della ferita sia a diretto contatto con la punta dell'omogeneizzatore. Una volta elaborati tutti i campioni, vortice ogni campione prima di trasferire 20 microlitri di omogenato nel pozzetto corrispondente di una piastra a 96 pozzetti contenente 180 microlitri di PBS sterile. Diluire in serie ogni omogenato di campione a 1 volte 10 fino al negativo 7 e pipettare 10 microlitri di omogenato diluito su una piastra di Agar di soia triplice in triplice copia.Incubare la piastra di Agar di soia triptica a 37 gradi Celsius e, dopo 18 ore, contare il numero di colonie per determinare le unità formanti colonie o CFU per ciascun campione. È stato identificato un adeguato regime di sterilizzazione della pelle utilizzando diversi trattamenti per periodi di tempo variabili. L'integrità dei tessuti è stata monitorata mediante istologia, seguita da colorazione con ematossilina ed eosina immediatamente dopo il trattamento.Un trattamento di 30 minuti con biossido di cloro è stato il trattamento più efficace, con sterilizzazione riproducibile del tessuto cutaneo preservando l'integrità del tessuto. Una pellicola bianca nel letto della ferita era evidente sul tessuto 48 ore dopo l'infezione. Sebbene il modello scratch ospitasse un numero medio più elevato di CFU dopo 24 ore, la tecnica di rimozione del lembo ha prodotto risultati più coerenti.Dopo 48 ore, circa 100 volte più CFU batteriche sono state recuperate dal tessuto ferito rispetto all'inoculo, indicando un'infezione riuscita. Le sezioni istologiche colorate di Gram del tessuto infetto indicavano la presenza di cellule S.aureus nel letto della ferita, che era assente nelle sezioni di tessuto non infetto. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire l'immunoistochimica per studiare la risposta tissutale, la colorazione di gram modificata per visualizzare la localizzazione batterica e la conta delle piastre vitali dopo l'esposizione antimicrobica per testare l'efficacia antimicrobica.Per i ricercatori che sviluppano nuovi antimicrobici, questo modello fornirà un maggiore controllo dell'ottimizzazione del piombo, ridurrà la dipendenza da sperimentazioni costose e strettamente regolamentate sugli animali e consentirà la rapida traduzione degli antimicrobici nella clinica.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Beh microtest piastra a base di Metodo per la Formazione di monitoraggio e test di suscettibilità antifungini Candida albicans Biofilm

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

High-throughput Metodo di rilevazione per il virus dell&#39;influenza

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Linfociti Isolamento da Pelle umana per l&#39;analisi fenotipica e<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cell Culture

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

High Throughput, Real-time, Dual-readout Testing of Intracellular Antimicrobial Activity and Eukaryotic Cell Cytotoxicity

High Throughput, in tempo reale, Dual-lettura Prove di intracellulare antimicrobica attività e eucariotica citotossicità cellulare

Traditional measures of intracellular antimicrobial activity and eukaryotic cell cytotoxicity rely on endpoint assays. Such endpoint assays require ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

Un romanzo In Vitro ferita guarigione test per valutare la migrazione cellulare

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Una piattaforma di High-throughput per lo Screening della Salmonella spp /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In Vivo Formazione immagine di specie reattive dell'ossigeno in un murino ferita modello

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Un High-throughput Shigella-specifica analisi battericida

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing ...

Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models.

Valutazione della guarigione acuta delle ferite utilizzando l'impianto di spugna alcolica sottocutaneo dorsale e modelli di ferite cutanee della coda excisionali.

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine ...

Establishing a Porcine Ex Vivo Cornea Model for Studying Drug Treatments against Bacterial Keratitis

Stabilire un modello di Cornea ex vivo suina per lo studio dei trattamenti farmacologici contro la cheratite batterica

When developing novel antimicrobials, the success of animal trials is dependent on accurate extrapolation of antimicrobial efficacy from in vitro tests to ...