Name: a stably established two-point injection of lysophosphatidylcholine-induced focal demyelination model in mice
Uploaded: 2022-05-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation of China (Grants: 82071380, 81873743).

Alle dyreprosedyrer ble godkjent av Institute of Animal Care Committee of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Kina. Voksne C57BL/6 hann- og hunnmus (villtype, WT; 20-25 g; 8-10 uker gamle) ble brukt i denne studien. Musene ble hentet fra kommersielle kilder (se Materialtabell). Mus ble plassert i et spesifikt patogenfritt (SPF) dyreanlegg med vann og mat levert ad libitum. De ble holdt i en vekslende 12 timers periode med lys og mørke syklus under standardforh...

<ol>
	<li>Gaire, B. P., Choi, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+roles+of+lysophospholipid+receptors+in+activation+of+neuroglia+and+their+neuroinflammatory+responses.">Critical roles of lysophospholipid receptors in activation of neuroglia and their neuroinflammatory responses.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (15), 7864 (2021).</li><li>Compston, A., Coles, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis.">Multiple sclerosis.</a> Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).</li><li>Dobson, R., Giovannoni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis+-+a+review.">Multiple sclerosis - a review.</a> European Journal of Neurology. 26 (1), 27-40 (2019).</li><li>Mahad, D. H., Trapp, B. D., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+mechanisms+in+progressive+multiple+sclerosis.">Pathological mechanisms in progressive multiple sclerosis.</a> The Lancet Neurology. 14 (2), 183-193 (2015).</li><li>Filippi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis.">Multiple sclerosis.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4 (1), 43 (2018).</li><li>Villoslada, P., Steinman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+targets+and+therapeutics+for+neuroprotection,+remyelination+and+repair+in+multiple+sclerosis.">New targets and therapeutics for neuroprotection, remyelination and repair in multiple sclerosis.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 29 (5), 443-459 (2020).</li><li>Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis+pathology.">Multiple sclerosis pathology.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 8 (3), 028936 (2018).</li><li>Franklin, R. J., Ffrench-Constant, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remyelination+in+the+CNS:+From+biology+to+therapy.">Remyelination in the CNS: From biology to therapy.</a> Nature Reviews Neuroscience. 9 (11), 839-855 (2008).</li><li>Gentile, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+effects+of+exercise+in+experimental+multiple+sclerosis.">Immunomodulatory effects of exercise in experimental multiple sclerosis.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2197 (2019).</li><li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+microglial+Hv1+channel+is+associated+with+activation+of+autophagic+pathway+and+ROS+production+in+LPC-induced+demyelination+mouse+model.">Deficiency of microglial Hv1 channel is associated with activation of autophagic pathway and ROS production in LPC-induced demyelination mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 17 (1), 333 (2020).</li><li>Luo, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stable+and+easily+reproducible+model+of+focal+white+matter+demyelination.">A stable and easily reproducible model of focal white matter demyelination.</a> Journal of Neuroscience Methods. 307, 230-239 (2018).</li><li>Blakemore, W. F., Franklin, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remyelination+in+experimental+models+of+toxin-induced+demyelination.">Remyelination in experimental models of toxin-induced demyelination.</a> Current Topics in Microbiology and Immunology. 318, 193-212 (2008).</li><li>Degaonkar, M. N., Raghunathan, P., Jayasundar, R., Jagannathan, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+relaxation+characteristics+during+preacute+stage+of+lysophosphatidyl+choline-induced+demyelinating+lesion+in+rat+brain:+An+animal+model+of+multiple+sclerosis.">Determination of relaxation characteristics during preacute stage of lysophosphatidyl choline-induced demyelinating lesion in rat brain: An animal model of multiple sclerosis.</a> Magnetic Resonance Imaging. 23 (1), 69-73 (2005).</li><li>Baydyuk, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+evolution+of+CNS+remyelinating+lesion+in+mice+with+neutral+red+dye.">Tracking the evolution of CNS remyelinating lesion in mice with neutral red dye.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (28), 14290-14299 (2019).</li><li>Plemel, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+lysophosphatidylcholine-induced+demyelination:+A+primary+lipid+disrupting+myelinopathy.">Mechanisms of lysophosphatidylcholine-induced demyelination: A primary lipid disrupting myelinopathy.</a> Glia. 66 (2), 327-347 (2018).</li><li>Nave, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+support+of+axonal+integrity+by+glia.">Myelination and support of axonal integrity by glia.</a> Nature. 468 (7321), 244-252 (2010).</li><li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+oligodendrocyte+differentiation+by+Olig2+and+Sox10:+evidence+for+reciprocal+interactions+and+dosage-dependent+mechanisms.">Induction of oligodendrocyte differentiation by Olig2 and Sox10: evidence for reciprocal interactions and dosage-dependent mechanisms.</a> Developmental Biology. 302 (2), 683-693 (2007).</li><li>Kassis, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+deacetylase+expression+in+white+matter+oligodendrocytes+after+stroke.">Histone deacetylase expression in white matter oligodendrocytes after stroke.</a> Neurochemistry International. 77, 17-23 (2014).</li><li>Vorhees, C. V., Williams, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morris+water+maze:+Procedures+for+assessing+spatial+and+related+forms+of+learning+and+memory.">Morris water maze: Procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory.</a> Nature Protocols. 1 (2), 848-858 (2006).</li><li>Merkler, D., Ernsting, T., Kerschensteiner, M., Bruck, W., Stadelmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+focal+EAE+model+of+cortical+demyelination:+multiple+sclerosis-like+lesions+with+rapid+resolution+of+inflammation+and+extensive+remyelination.">A new focal EAE model of cortical demyelination: multiple sclerosis-like lesions with rapid resolution of inflammation and extensive remyelination.</a> Brain. 129, 1972-1983 (2006).</li><li>Karussis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+of+multiple+sclerosis+and+the+various+related+demyelinating+syndromes:+A+critical+review.">The diagnosis of multiple sclerosis and the various related demyelinating syndromes: A critical review.</a> Journal of Autoimmunity. 48-49, 134-142 (2014).</li><li>Kamma, E., Lasisi, W., Libner, C., Ng, H. S., Plemel, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+macrophages+in+progressive+multiple+sclerosis:+Relationship+to+neurodegeneration+and+therapeutics.">Central nervous system macrophages in progressive multiple sclerosis: Relationship to neurodegeneration and therapeutics.</a> Journal of Neuroinflammation. 19 (1), 45 (2022).</li><li>Kutzelnigg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+demyelination+and+diffuse+white+matter+injury+in+multiple+sclerosis.">Cortical demyelination and diffuse white matter injury in multiple sclerosis.</a> Brain. 128, 2705-2712 (2005).</li><li>Lassmann, H., Bradl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+Experimental+models+and+reality).">Multiple sclerosis: Experimental models and reality).</a> Acta Neuropathologica. 133 (2), 223-244 (2017).</li><li>Lamport, A. C., Chedrawe, M., Nichols, M., Robertson, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+encephalomyelitis+accelerates+remyelination+after+lysophosphatidylcholine-induced+demyelination+in+the+corpus+callosum.">Experimental autoimmune encephalomyelitis accelerates remyelination after lysophosphatidylcholine-induced demyelination in the corpus callosum.</a> Journal of Neuroimmunology. 334, 576995 (2019).</li><li>Torkildsen, O., Brunborg, L. A., Myhr, K. M., Bo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuprizone+model+for+demyelination.">The cuprizone model for demyelination.</a> Acta Neurologica Scandinavica. Supplementum. 188, 72-76 (2008).</li><li>Zhan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuprizone+model:+Dos+and+do+nots.">The cuprizone model: Dos and do nots.</a> Cells. 9 (4), 843 (2020).</li><li>Torre-Fuentes, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+demyelination+and+remyelination.">Experimental models of demyelination and remyelination.</a> Neurologia (Barcelona, Spain). 35 (1), 32-39 (2020).</li><li>Merkler, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+oligodendrocyte+glycoprotein-induced+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+common+marmoset+reflects+the+immunopathology+of+pattern+II+multiple+sclerosis+lesions.">Myelin oligodendrocyte glycoprotein-induced experimental autoimmune encephalomyelitis in the common marmoset reflects the immunopathology of pattern II multiple sclerosis lesions.</a> Multiple Sclerosis Journal. 12 (4), 369-374 (2006).</li><li>Ucal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Widespread+cortical+demyelination+of+both+hemispheres+can+be+induced+by+injection+of+pro-inflammatory+cytokines+via+an+implanted+catheter+in+the+cortex+of+MOG-immunized+rats.">Widespread cortical demyelination of both hemispheres can be induced by injection of pro-inflammatory cytokines via an implanted catheter in the cortex of MOG-immunized rats.</a> Experimental Neurology. 294, 32-44 (2017).</li></ol>

MS, en kronisk demyeliniserende sykdom i CNS, er en av de vanligste årsakene til nevrologisk dysfunksjon hos unge voksne20. Klinisk opplever omtrent 60% -80% av MS-pasientene syklusen av tilbakefall og remisjoner før de utvikler en sekundær progressiv MS21,22, og det fører til slutt til kumulative bevegelseshemminger og kognitive underskudd over tid23. For tiden dekker ingen enkelt eksperimentell modell hele spe...

Reseptormediert lysofosfolipidsignalering involverer ulike fysiologiske prosesser i nesten alle organsystemer1. I sentralnervesystemet (CNS) spiller denne signaliseringen en kritisk rolle i patogenene til autoimmune nevrologiske sykdommer som multippel sklerose (MS). Multippel sklerose er en kronisk immunmediert lidelse preget av patologisk demyelinisering og inflammatorisk respons, som forårsaker nevrologisk dysfunksjon og kognitiv svekkelse 2,3. Etter kontinuerlig relapsing og remitting under den tidlige sykdommen, utvikler de fleste pasienter til slutt til det sekundære progressive stadiet, noe som kan forårsake irreversibel skade på hjernen og resulterende funksjonshemming. Det antas at det patologiske kjennetegnet for det sekundære progressive kurset er demyeliniserende plakk forårsaket av inflammatoriske lesjoner5. Eksisterende behandlinger for MS kan redusere risikoen for tilbakefall betydelig. Imidlertid er det fortsatt ingen effektiv behandling for langvarig demyeliniserende skade forårsaket av progressiv MS6. Dermed er det nødvendig med en stabilt etablert og lett reproduserbar modell for å studere prekliniske terapier som fokuserer på degenerasjon av hvit substans.
Demyelinisering og remyelinisering er to store patologiske prosesser for å utvikle multippel sklerose. Demyelinisering er tap av myelinskjede rundt aksoner indusert av mikroglia med proinflammatoriske fenotyper7, og det fører til langsom ledning av nerveimpulser og resulterer i tap av nevroner og nevrologiske lidelser. Remyelinisering er en endogen reparasjonsrespons mediert av oligodendrocytter, hvor lidelser kan føre til nevrodegenerasjon og kognitiv svekkelse8. Den inflammatoriske responsen er avgjørende for hele prosessen, og påvirker både graden av myelinskader og reparasjon.
Derfor er en stabil dyremodell med vedvarende inflammatorisk demyelinisering meningsfull for videre utforskning av terapeutiske strategier for MS. På grunn av kompleksiteten til MS er det etablert ulike typer dyremodeller for å etterligne demyeliniserende lesjoner in vivo, inkludert eksperimentell autoimmun encefalomyelitt (EAE), toksiske demyeliniserende modeller, cuprizon (CPZ) og lysofosphatidylcholine (LPC)9 . LPC er et endogent lysofosfolipid assosiert med betennelse, og det kan indusere rask skade med toksisitet mot myelinlipider, noe som fører til fokal demyelinisering. Basert på tidligere rapporter og forskning 10,11, er en detaljert protokoll for topunktsinjeksjon med noen modifikasjoner gitt. Vanligvis gir den klassiske ettpunkts LPC-injeksjonsmodellen bare lokal demyelinisering på injeksjonsstedet og ledsages ofte av spontan remyelinisering12,13. Imidlertid kan topunktsinjeksjons-LPC-modellen demonstrere at LPC direkte kan indusere demyelinisering i musekorpuskallosum og forårsake mer holdbar demyelinisering med lite myelinregenerering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >L-&#945;-Lysophosphatidylcholine from egg yolk</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >L4129-25MG</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >32 gauge Needle</td>
			<td >HAMILTON</td>
			<td >7762-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10 &#956;l syringe</td>
			<td >HAMILTON</td>
			<td >80014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >high speed skull drill</td>
			<td >strong,korea</td>
			<td >strong204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >drill</td>
			<td >Hager &#38; Meisinger, Germany&#160;</td>
			<td >REF 500 104 001 001 005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Matrx Animal Aneathesia Ventilator</td>
			<td >MIDMARK</td>
			<td >VMR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Portable Stereotaxic Instrument for Mouse</td>
			<td >Reward</td>
			<td >68507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micro syringe</td>
			<td >Reward</td>
			<td >KDS LEGATO 130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane&#160;</td>
			<td >VETEASY</td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paraformaldehyde</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Phosphate buffer</td>
			<td >BOSTER</td>
			<td >PYG0021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LuxoL fast bLue</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1030-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Suture</td>
			<td >FUSUNPHARMA</td>
			<td >20152021225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brain mold</td>
			<td >Reward</td>
			<td >68707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Electron microscope fixative</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1102-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Neutral red (C.I. 50040), for microscopy Certistain</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >1.01376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-Myelin Basic Protein Antibody&#160;</td>
			<td >Millipore</td>
			<td >#AB5864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-GST-P pAb</td>
			<td >MBL</td>
			<td >#311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ki-67 Monoclonal Antibody (SolA15)</td>
			<td >Thermo Fisher&#160;Scientific</td>
			<td >14-5698-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Beta Actin Monoclonal Antibody</td>
			<td >Proteintech</td>
			<td >66009-1-Ig&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Myelin Basic Protein Polyclonal Antibody</td>
			<td >Proteintech</td>
			<td >10458-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >OLIG2 Polyclonal Antibody</td>
			<td >Proteintech</td>
			<td >13999-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 488&#160;AffiniPure&#160;Donkey anti-Rabbit&#160;IgG (H+L)</td>
			<td >YEASEN</td>
			<td >34206ES60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L)&#160;</td>
			<td >YEASEN</td>
			<td >34412ES60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 594&#160;AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)&#160;</td>
			<td >YEASEN</td>
			<td >34212ES60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td >abclonal</td>
			<td >AS014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L)&#160;</td>
			<td >abclonal</td>
			<td >AS003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Adult C57BL/6 male and female mice</td>
			<td >Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd</td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a stably established two-point injection of lysophosphatidylcholine-induced focal demyelination model in mice

Reseptormediert lysofosfolipidsignalering bidrar til patofysiologien ved ulike nevrologiske sykdommer, spesielt multippel sklerose (MS). Lysofosfatidylkolin (LPC) er et endogent lysofosfolipid assosiert med betennelse, og det kan indusere rask skade med toksisitet for myelinlipider, noe som fører til fokal demyelinisering. Her presenteres en detaljert protokoll for stereotaktisk topunkts LPC-injeksjon som direkte kan forårsake alvorlig demyelinisering og replikere den eksperimentelle demyeliniseringsskaden raskt og stabilt hos mus ved kirurgisk prosedyre. Dermed er denne modellen svært relevant for demyeliniseringssykdommer, spesielt MS, og den kan bidra til den relaterte fremme klinisk relevante forskningen. Også immunfluorescens og Luxol raske blåfargingsmetoder ble brukt til å skildre tidsforløpet for demyelinisering i corpus callosum av mus injisert med LPC. I tillegg ble atferdsmetoden brukt til å evaluere musens kognitive funksjon etter modellering. Samlet sett er topunktsinjeksjonen av lysofosfatidylkolin via en stereotaksisk ramme en stabil og reproduserbar metode for å generere en demyeliniseringsmodell hos mus for videre studier.

Topunktsinjeksjon av LPC resulterte i en mer holdbar demyelinisering LPC fører hovedsakelig til rask skade med toksisitet for myelin og spaltning av aksonintegriteten15. Injeksjonsdagen ble regnet som dag 0. Mus ble holdt i en periode på 10-28 dager (10 dpi og 28 dpi). Luxol rask blå (LFB) farging10 ble brukt til å evaluere området for demyelinisering hos mus på disse tidspunktene. I topunktsinjeksjonsmodellen var det signifikant demyelinisering p?...

Watch this Scientific Journal Video about A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice at JoVE.com

A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice

Den nåværende protokollen beskriver en topunktsinjeksjon av lysofosfatidylkolin via en stereotaksisk ramme for å generere en stabil og reproduserbar demyeliniseringsmodell hos mus.

En stabilt etablert topunktsinjeksjon av lysofosfatidylkolinindusert fokal demyeliniseringsmodell hos mus

Receptor-mediated lysophospholipid signaling contributes to the pathophysiology of diverse neurological diseases, especially multiple sclerosis (MS). ...

Vår modell er svært relevant for demyeliniseringssykdommer, spesielt multippel sklerose. Og det kan bidra til den relaterte fremme klinisk relevant forskning. Det er en detaljert protokoll som direkte kan forårsake alvorlig demyelinisering raskt og stabilt hos mus ved kirurgisk prosedyre.Mens du prøver denne teknikken for første gang, vær tålmodig og sørg for at koordinatene er nøyaktige. Begynn med å koble en 32 gauge nål til en 5 mikroliter sprøyte. Trekk opp 5 mikroliter LPC-oppløsning til fremstilling av injeksjonen.Deretter bekrefter du dybden av anestesi av musen ved mangel på tåklemmerefleks mens pusten er glatt. Plasser musen i den stereotaksiske rammen med dorsalsiden opp, og fest hodet med en nesekjegle og tannklemme. Fest musen til det stereotaksiske apparatet med bilaterale ørestenger.Sørg for at ørestengene er jevne og hodet er horisontalt og stabilt. Desinfiser hodehuden ved å tørke med iodophor. Bruk deretter skalpell til å kutte et lite snitt til ca. 1,5 centimeter langs midtlinjen i hodebunnen for å eksponere skallen.Tørk av ferdigheten med en bomullspinne dyppet i 1% hydrogenperoksid til bregma, lambda og bakre fontanelle er utsatt. Plasser sprøyten på det stereotaksiske apparatet. Sørg for horisontal posisjonering av dyrets hode, og finn corpus callosum.Når injeksjonsstedet er bestemt, registrer koordinatene og lag et merke med en markør på skallen. Bor forsiktig det merkede stedet med en skallebor. Pass på å unngå blødning.Beveg nålen sakte til de angitte koordinatene. For å indusere corpus callosum demyelinisering, injiser 2 mikroliter LPC-oppløsning på hvert injeksjonssted med en hastighet på 0,4 mikroliter per minutt. Etter injeksjon skal kanylen oppbevares på hvert sted i ytterligere 10 minutter.Til slutt, sutur huden med en 4-0 sutur, og vent til dyret våkner innen 10 minutter. Det representative bildet viser deteksjonen av legionene av hvit substans via Luxol rask blå farging. Ut fra resultatene kan man se stabil demyelinisering av corpus callosum 10 og 28 dager etter injeksjon.Kvantifiseringen av demyeliniseringsområdet på forskjellige tidspunkter er vist her. Gjennom immunfluorescensfarging nedbrutt myelin basisk protein, ble det observert en bemerkelsesverdig økning av dMBP i LPC-injisert gruppen 10 dager etter injeksjon, noe som representerer myelintap i corpus callosum. Western blot-analyse av myelin basisk protein, eller MBP, uttrykk viste et signifikant tap av MBP etter injeksjon av LPC.Betaaktin ble brukt som belastningskontroll for å måle baselineuttrykket. Elektronmikroskopibilder bekrefter den myeliniserte ultrastrukturen i corpus callosum av humbuggruppen og LPC-injisert gruppe. GST-pi er markøren for oligodendrocytt forløpercelle, eller OPC, differensieringsmodning.Etter 10 dager med LPC-injeksjon ble GST-pi redusert sammenlignet med humbuggruppen. Samtidig kan proliferasjonsevnen til oligodendrocytter reflekteres av forholdet mellom oligodendrocytter prolifererer og de totale oligodendrocytter-avstamningscellene. Det høyere forholdet representerer mer spredning av oligodendrocytter etter 10 dager etter injeksjon.De representative bildene viser musenes svømmebane i hver gruppe, i plattformens nærvær og etter at plattformen er fjernet. Resultatene tyder på at det romlige minnet til demyeliniserte mus er betydelig svekket i topunkts LPC-injeksjonsmodellen. Mens du prøver denne prosedyren, må du kontrollere at injeksjonshastigheten er nøyaktig, og holde nålen på hvert sted i ytterligere 10 minutter.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Inhibitory Synapse Formation in a Co-culture Model Incorporating GABAergic Medium Spiny Neurons and HEK293 Cells Stably Expressing GABAA Receptors

Inhibitory Synapse Formation in a Co-culture Model Incorporating GABAergic Medium Spiny Neurons and HEK293 Cells Stably Expressing GABAA Receptors

Hemmende Synapse Dannelse i en Co-kultur Modell innlemme gabaergic Medium Tifotkreps nevroner og HEK293 Cells stabilt uttrykker GABA<sub&gt; A</sub&gt; Reseptorer

Inhibitory neurons act in the central nervous system to regulate the dynamics and spatio-temporal co-ordination of neuronal networks. GABA ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

Eksperimentell Demyelinisering og Remyelinering av Murine Spinal Cord av Focal Injeksjon av Lysolecithin

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Visuell fremkalt potensial Opptak i en rottemodell of Experimental Optic Nerve Demyelinisering

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

Delvis synsnerven Transection i rotter: modell etablert med en ny Operative tilnærming til vurdere sekundære degenerasjon av netthinnen ganglieceller

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

Rottemodell av utbredt cerebral kortikale demyelinering indusert av en intracerebral injeksjon av proinflammatoriske cytokiner

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Direct Intrathecal Injection of Recombinant Adeno-associated Viruses in Adult Mice

Direkte intratekal injeksjon av rekombinant Adeno-assosiert virus i voksen mus

Intrathecal (IT) injection of adeno-associated virus (AAV) has drawn considerable interest in CNS gene therapy by virtue of its safety, noninvasiveness, ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Dobbel direkte injeksjon av blod inn i Cisterna Magna som modell av Subaraknoid blødning

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

En rottemodell av EcoHIV hjerneinfeksjon

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...