Name: a stably established two-point injection of lysophosphatidylcholine-induced focal demyelination model in mice
Uploaded: 2022-05-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice at JoVE.com

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (гранты: 82071380, 81873743).

Все процедуры для животных были одобрены Комитетом института по уходу за животными Медицинского колледжа Тунцзи, Университет науки и технологии Хуачжун, Китай. Для настоящего исследования использовались взрослые самцы и самки мышей C57BL/6 (дикий тип, WT; 20-25 г; 8-10 недель). Мыши были получен?...

<ol>
	<li>Gaire, B. P., Choi, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+roles+of+lysophospholipid+receptors+in+activation+of+neuroglia+and+their+neuroinflammatory+responses.">Critical roles of lysophospholipid receptors in activation of neuroglia and their neuroinflammatory responses.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (15), 7864 (2021).</li><li>Compston, A., Coles, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis.">Multiple sclerosis.</a> Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).</li><li>Dobson, R., Giovannoni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis+-+a+review.">Multiple sclerosis - a review.</a> European Journal of Neurology. 26 (1), 27-40 (2019).</li><li>Mahad, D. H., Trapp, B. D., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+mechanisms+in+progressive+multiple+sclerosis.">Pathological mechanisms in progressive multiple sclerosis.</a> The Lancet Neurology. 14 (2), 183-193 (2015).</li><li>Filippi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis.">Multiple sclerosis.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4 (1), 43 (2018).</li><li>Villoslada, P., Steinman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+targets+and+therapeutics+for+neuroprotection,+remyelination+and+repair+in+multiple+sclerosis.">New targets and therapeutics for neuroprotection, remyelination and repair in multiple sclerosis.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 29 (5), 443-459 (2020).</li><li>Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis+pathology.">Multiple sclerosis pathology.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 8 (3), 028936 (2018).</li><li>Franklin, R. J., Ffrench-Constant, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remyelination+in+the+CNS:+From+biology+to+therapy.">Remyelination in the CNS: From biology to therapy.</a> Nature Reviews Neuroscience. 9 (11), 839-855 (2008).</li><li>Gentile, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+effects+of+exercise+in+experimental+multiple+sclerosis.">Immunomodulatory effects of exercise in experimental multiple sclerosis.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2197 (2019).</li><li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+microglial+Hv1+channel+is+associated+with+activation+of+autophagic+pathway+and+ROS+production+in+LPC-induced+demyelination+mouse+model.">Deficiency of microglial Hv1 channel is associated with activation of autophagic pathway and ROS production in LPC-induced demyelination mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 17 (1), 333 (2020).</li><li>Luo, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stable+and+easily+reproducible+model+of+focal+white+matter+demyelination.">A stable and easily reproducible model of focal white matter demyelination.</a> Journal of Neuroscience Methods. 307, 230-239 (2018).</li><li>Blakemore, W. F., Franklin, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remyelination+in+experimental+models+of+toxin-induced+demyelination.">Remyelination in experimental models of toxin-induced demyelination.</a> Current Topics in Microbiology and Immunology. 318, 193-212 (2008).</li><li>Degaonkar, M. N., Raghunathan, P., Jayasundar, R., Jagannathan, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+relaxation+characteristics+during+preacute+stage+of+lysophosphatidyl+choline-induced+demyelinating+lesion+in+rat+brain:+An+animal+model+of+multiple+sclerosis.">Determination of relaxation characteristics during preacute stage of lysophosphatidyl choline-induced demyelinating lesion in rat brain: An animal model of multiple sclerosis.</a> Magnetic Resonance Imaging. 23 (1), 69-73 (2005).</li><li>Baydyuk, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+evolution+of+CNS+remyelinating+lesion+in+mice+with+neutral+red+dye.">Tracking the evolution of CNS remyelinating lesion in mice with neutral red dye.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (28), 14290-14299 (2019).</li><li>Plemel, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+lysophosphatidylcholine-induced+demyelination:+A+primary+lipid+disrupting+myelinopathy.">Mechanisms of lysophosphatidylcholine-induced demyelination: A primary lipid disrupting myelinopathy.</a> Glia. 66 (2), 327-347 (2018).</li><li>Nave, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+support+of+axonal+integrity+by+glia.">Myelination and support of axonal integrity by glia.</a> Nature. 468 (7321), 244-252 (2010).</li><li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+oligodendrocyte+differentiation+by+Olig2+and+Sox10:+evidence+for+reciprocal+interactions+and+dosage-dependent+mechanisms.">Induction of oligodendrocyte differentiation by Olig2 and Sox10: evidence for reciprocal interactions and dosage-dependent mechanisms.</a> Developmental Biology. 302 (2), 683-693 (2007).</li><li>Kassis, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+deacetylase+expression+in+white+matter+oligodendrocytes+after+stroke.">Histone deacetylase expression in white matter oligodendrocytes after stroke.</a> Neurochemistry International. 77, 17-23 (2014).</li><li>Vorhees, C. V., Williams, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morris+water+maze:+Procedures+for+assessing+spatial+and+related+forms+of+learning+and+memory.">Morris water maze: Procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory.</a> Nature Protocols. 1 (2), 848-858 (2006).</li><li>Merkler, D., Ernsting, T., Kerschensteiner, M., Bruck, W., Stadelmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+focal+EAE+model+of+cortical+demyelination:+multiple+sclerosis-like+lesions+with+rapid+resolution+of+inflammation+and+extensive+remyelination.">A new focal EAE model of cortical demyelination: multiple sclerosis-like lesions with rapid resolution of inflammation and extensive remyelination.</a> Brain. 129, 1972-1983 (2006).</li><li>Karussis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+of+multiple+sclerosis+and+the+various+related+demyelinating+syndromes:+A+critical+review.">The diagnosis of multiple sclerosis and the various related demyelinating syndromes: A critical review.</a> Journal of Autoimmunity. 48-49, 134-142 (2014).</li><li>Kamma, E., Lasisi, W., Libner, C., Ng, H. S., Plemel, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+macrophages+in+progressive+multiple+sclerosis:+Relationship+to+neurodegeneration+and+therapeutics.">Central nervous system macrophages in progressive multiple sclerosis: Relationship to neurodegeneration and therapeutics.</a> Journal of Neuroinflammation. 19 (1), 45 (2022).</li><li>Kutzelnigg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+demyelination+and+diffuse+white+matter+injury+in+multiple+sclerosis.">Cortical demyelination and diffuse white matter injury in multiple sclerosis.</a> Brain. 128, 2705-2712 (2005).</li><li>Lassmann, H., Bradl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+Experimental+models+and+reality).">Multiple sclerosis: Experimental models and reality).</a> Acta Neuropathologica. 133 (2), 223-244 (2017).</li><li>Lamport, A. C., Chedrawe, M., Nichols, M., Robertson, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+encephalomyelitis+accelerates+remyelination+after+lysophosphatidylcholine-induced+demyelination+in+the+corpus+callosum.">Experimental autoimmune encephalomyelitis accelerates remyelination after lysophosphatidylcholine-induced demyelination in the corpus callosum.</a> Journal of Neuroimmunology. 334, 576995 (2019).</li><li>Torkildsen, O., Brunborg, L. A., Myhr, K. M., Bo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuprizone+model+for+demyelination.">The cuprizone model for demyelination.</a> Acta Neurologica Scandinavica. Supplementum. 188, 72-76 (2008).</li><li>Zhan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuprizone+model:+Dos+and+do+nots.">The cuprizone model: Dos and do nots.</a> Cells. 9 (4), 843 (2020).</li><li>Torre-Fuentes, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+demyelination+and+remyelination.">Experimental models of demyelination and remyelination.</a> Neurologia (Barcelona, Spain). 35 (1), 32-39 (2020).</li><li>Merkler, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+oligodendrocyte+glycoprotein-induced+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+common+marmoset+reflects+the+immunopathology+of+pattern+II+multiple+sclerosis+lesions.">Myelin oligodendrocyte glycoprotein-induced experimental autoimmune encephalomyelitis in the common marmoset reflects the immunopathology of pattern II multiple sclerosis lesions.</a> Multiple Sclerosis Journal. 12 (4), 369-374 (2006).</li><li>Ucal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Widespread+cortical+demyelination+of+both+hemispheres+can+be+induced+by+injection+of+pro-inflammatory+cytokines+via+an+implanted+catheter+in+the+cortex+of+MOG-immunized+rats.">Widespread cortical demyelination of both hemispheres can be induced by injection of pro-inflammatory cytokines via an implanted catheter in the cortex of MOG-immunized rats.</a> Experimental Neurology. 294, 32-44 (2017).</li></ol>

РС, хроническое демиелинизирующее заболевание ЦНС, является одной из наиболее распространенных причин неврологической дисфункции у молодых людей20 лет. Клинически примерно 60%-80% пациентов с РС испытывают цикл рецидивов и ремиссий до развития вторично-прогрессирующего РС<s...

Рецептор-опосредованная передача лизофосфолипидов включает в себя разнообразные физиологические процессы практически всех систем органов1. В центральной нервной системе (ЦНС) эта сигнализация играет решающую роль в патогенах аутоиммунных неврологических заболеваний, таких как рассеянный склероз (РС). Рассеянный склероз является хроническим иммуноопосредованным расстройством, характеризующимся патологической демиелинизацией и воспалительной реакцией, вызывающей неврологическую дисфункцию и когнитивные нарушения 2,3. После непрерывного рецидива и ремиттирования во время раннего заболевания большинство пациентов в конечном итоге прогрессируют до вторично-прогрессирующей стадии, что может привести к необратимому повреждению мозга и, как следствие, инвалидности4. Считается, что патологической отличительной чертой вторично-прогрессирующего течения являются демиелинизирующие бляшки, вызванные воспалительными поражениями5. Существующие методы лечения РС могут значительно снизить риск рецидива. Тем не менее, до сих пор нет эффективной терапии для долгосрочного демиелинизирующего повреждения, вызванного прогрессирующимMS 6. Таким образом, стабильно установленная и легко воспроизводимая модель требуется для изучения доклинических терапевтических средств, которые фокусируются на дегенерации белого вещества.
Демиелинизация и ремиелинизация являются двумя основными патологическими процессами при развитии рассеянного склероза. Демиелинизация - это потеря миелиновой оболочки вокруг аксонов, индуцированная микроглией с провоспалительными фенотипами7, и это приводит к медленной проводимости нервных импульсов и приводит к потере нейронов и неврологическим расстройствам. Ремиелинизация представляет собой эндогенную реакцию репарации, опосредованную олигодендроцитами, где расстройства могут привести к нейродегенерации и когнитивным нарушениям8. Воспалительная реакция имеет решающее значение для всего процесса, влияя как на степень повреждения миелина, так и на восстановление.
Таким образом, стабильная животная модель стойкой воспалительной демиелинизации имеет значение для дальнейшего изучения терапевтических стратегий для РС. Из-за сложности РС были установлены различные типы моделей животных для имитации демиелинизирующих поражений in vivo, включая экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (EAE), токсико-демиелинизирующие модели, купризон (CPZ) и лизофосфатидилхолин (LPC)9 . LPC является эндогенным лизофосфолипидом, связанным с воспалением, и он может вызывать быстрое повреждение с токсичностью липидов миелина, что приводит к очаговой демиелинизации. На основе предыдущих отчетов и исследований10,11 приведен подробный протокол двухточечной инъекции с некоторыми модификациями. Как правило, классическая одноточечная модель инъекции LPC производит только местную демиелинизацию в месте инъекции и часто сопровождается спонтанной ремиелинизацией12,13. Тем не менее, двухточечная инъекционная модель LPC может продемонстрировать, что LPC может непосредственно индуцировать демиелинизацию в мозолистом теле мыши и вызывать более длительную демиелинизацию с небольшой регенерацией миелина.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >L-&#945;-Lysophosphatidylcholine from egg yolk</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >L4129-25MG</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >32 gauge Needle</td>
			<td >HAMILTON</td>
			<td >7762-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10 &#956;l syringe</td>
			<td >HAMILTON</td>
			<td >80014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >high speed skull drill</td>
			<td >strong,korea</td>
			<td >strong204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >drill</td>
			<td >Hager &#38; Meisinger, Germany&#160;</td>
			<td >REF 500 104 001 001 005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Matrx Animal Aneathesia Ventilator</td>
			<td >MIDMARK</td>
			<td >VMR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Portable Stereotaxic Instrument for Mouse</td>
			<td >Reward</td>
			<td >68507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micro syringe</td>
			<td >Reward</td>
			<td >KDS LEGATO 130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane&#160;</td>
			<td >VETEASY</td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paraformaldehyde</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Phosphate buffer</td>
			<td >BOSTER</td>
			<td >PYG0021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LuxoL fast bLue</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1030-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Suture</td>
			<td >FUSUNPHARMA</td>
			<td >20152021225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brain mold</td>
			<td >Reward</td>
			<td >68707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Electron microscope fixative</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1102-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Neutral red (C.I. 50040), for microscopy Certistain</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >1.01376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-Myelin Basic Protein Antibody&#160;</td>
			<td >Millipore</td>
			<td >#AB5864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-GST-P pAb</td>
			<td >MBL</td>
			<td >#311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ki-67 Monoclonal Antibody (SolA15)</td>
			<td >Thermo Fisher&#160;Scientific</td>
			<td >14-5698-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Beta Actin Monoclonal Antibody</td>
			<td >Proteintech</td>
			<td >66009-1-Ig&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Myelin Basic Protein Polyclonal Antibody</td>
			<td >Proteintech</td>
			<td >10458-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >OLIG2 Polyclonal Antibody</td>
			<td >Proteintech</td>
			<td >13999-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 488&#160;AffiniPure&#160;Donkey anti-Rabbit&#160;IgG (H+L)</td>
			<td >YEASEN</td>
			<td >34206ES60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L)&#160;</td>
			<td >YEASEN</td>
			<td >34412ES60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 594&#160;AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)&#160;</td>
			<td >YEASEN</td>
			<td >34212ES60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td >abclonal</td>
			<td >AS014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L)&#160;</td>
			<td >abclonal</td>
			<td >AS003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Adult C57BL/6 male and female mice</td>
			<td >Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd</td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a stably established two-point injection of lysophosphatidylcholine-induced focal demyelination model in mice

Рецептор-опосредованная лизофосфолипидная сигнализация способствует патофизиологии различных неврологических заболеваний, особенно рассеянного склероза (РС). Лизофосфатидилхолин (LPC) является эндогенным лизофосфолипидом, связанным с воспалением, и он может вызывать быстрое повреждение с токсичностью липидов миелина, что приводит к очаговому демиелинизации. Здесь представлен подробный протокол стереотаксической двухточечной инъекции LPC, которая может непосредственно вызвать тяжелую демиелинизацию и быстро и стабильно воспроизвести экспериментальную демиелинизацию у мышей с помощью хирургической процедуры. Таким образом, эта модель очень актуальна для демиелинических заболеваний, особенно РС, и она может способствовать соответствующему продвижению клинически значимых исследований. Кроме того, иммунофлуоресценция и методы быстрого синего окрашивания Luxol были использованы для изображения временного хода демиелинизации в мозолистом теле мышей, которым вводили LPC. Кроме того, поведенческий метод использовался для оценки когнитивной функции мышей после моделирования. В целом, двухточечная инъекция лизофосфатидилхолина через стереотаксическую рамку является стабильным и воспроизводимым методом создания модели демиелинизации у мышей для дальнейшего изучения.

Двухточечная инъекция LPC привела к более длительной демиелинизации LPC в основном приводит к быстрому повреждению с токсичностью миелина и расщеплению целостности аксона15. День инъекции считался днем 0. Мышей держали в течение 10-28 дней (10 dpi и 28 dpi). Быстрое синее ок?...

Watch this Scientific Journal Video about A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice at JoVE.com

A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice

Настоящий протокол описывает двухточечную инъекцию лизофосфатидилхолина через стереотаксическую рамку для создания стабильной и воспроизводимой модели демиелинизации у мышей.

Стабильно установленная двухточечная инъекция лизофосфатидилхолин-индуцированной модели фокального демиелинирования у мышей

Receptor-mediated lysophospholipid signaling contributes to the pathophysiology of diverse neurological diseases, especially multiple sclerosis (MS). ...

Наша модель очень актуальна для демиелинических заболеваний, особенно рассеянного склероза. И это может способствовать соответствующему продвижению клинически значимых исследований. Это подробный протокол, который может непосредственно вызвать тяжелую демиелинизацию быстро и стабильно у мышей с помощью хирургической процедуры.Пробуя эту технику в первый раз, будьте терпеливы и убедитесь, что координаты точны. Начните с подключения иглы 32-го калибра к 5-микролитровому шприцу. Выводят 5 микролитров раствора LPC для приготовления инъекции.Далее подтвердите глубину анестезии мыши отсутствием рефлекса защемления пальцев ног при гладком дыхании. Поместите мышь в стереотаксическую рамку спинной стороной вверх и закрепите голову носовым конусом и зубным зажимом. Прикрепите мышь к стереотаксическому аппарату с помощью двусторонних ушных вкладышей.Убедитесь, что ушные вкладыши ровные, а голова горизонтальная и устойчивая. Дезинфицируйте кожу головы, протирая йодофором. Затем используйте скальпель, чтобы разрезать небольшой разрез примерно до 1,5 сантиметров вдоль средней линии кожи головы, чтобы обнажить череп.Протрите навык ватным тампоном, смоченным в 1% перекиси водорода, пока не обнажаются брегма, лямбда и задний родничок. Поместите шприц на стереотаксический аппарат. Обеспечьте горизонтальное расположение головы животного и найдите мозолистое тело.Как только место инъекции определено, запишите координаты и сделайте отметку маркером на черепе. Аккуратно просверлите отмеченный участок с помощью сверла черепа. Позаботьтесь о том, чтобы избежать кровотечения.Медленно перемещайте иглу к заданным координатам. Чтобы индуцировать демиелинизацию мозолистого тела, вводят 2 микролитра раствора LPC в каждое место инъекции со скоростью 0,4 микролитра в минуту. После инъекции держите иглу в каждом месте в течение дополнительных 10 минут.Наконец, зашить кожу швом 4-0 и подождать, пока животное проснется в течение 10 минут. Репрезентативное изображение показывает обнаружение легионов белого вещества с помощью быстрого синего окрашивания Luxol. Из результатов стабильная демиелинизация мозолистого тела может наблюдаться через 10 и 28 дней после инъекции.Здесь показана количественная оценка области демиелинизации в разные моменты времени. Благодаря иммунофлуоресцентному окрашиванию деградировавшего основного белка миелина наблюдалось заметное увеличение dMBP в группе, вводимой LPC через 10 дней после инъекции, что представляет собой потерю миелина в мозолистом теле. Вестерн-блоттинговый анализ экспрессии основного белка миелина, или MBP, показал значительную потерю MBP после инъекции LPC.Бета-актин использовался в качестве регулятора нагрузки для измерения базового выражения. Изображения электронной микроскопии подтверждают миелинизированную ультраструктуру в мозолистом теле фиктивной группы и LPC-инъекционной группе. GST-pi является маркером созревания клетки-предшественника олигодендроцитов, или OPC, дифференцировки.После 10 дней инъекции LPC GST-pi снизился по сравнению с фиктивной группой. В то же время пролиферационная способность олигодендроцитов может отражаться соотношением пролиферированных олигодендроцитов и общего количества клеток линии олигодендроцитов. Более высокое соотношение представляет собой большую пролиферацию олигодендроцитов через 10 дней после инъекции.Репрезентативные изображения показывают плавательную дорожку мышей в каждой группе, в присутствии платформы и после снятия платформы. Результаты показывают, что пространственная память демиелинизированных мышей значительно нарушена в двухточечной модели инъекции LPC. При попытке этой процедуры убедитесь, что скорость инъекции точна, и держите иглу в каждом месте в течение дополнительных 10 минут.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Фокусное церебральный Модель ишемии по эндоваскулярной окклюзии шов средней мозговой артерии в Крыса

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Инъекции аутологичной крови в модели спонтанного внутримозгового кровоизлияния у мышей

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Inhibitory Synapse Formation in a Co-culture Model Incorporating GABAergic Medium Spiny Neurons and HEK293 Cells Stably Expressing GABAA Receptors

Inhibitory Synapse Formation in a Co-culture Model Incorporating GABAergic Medium Spiny Neurons and HEK293 Cells Stably Expressing GABAA Receptors

Inhibitory Synapse Формирование в совместной культуре модель, включающая ГАМКергические средний Колючие нейронов и клеток НЕК293, стабильно экспрессирующих GABA<sub&gt;</sub&gt; Рецепторы

Inhibitory neurons act in the central nervous system to regulate the dynamics and spatio-temporal co-ordination of neuronal networks. GABA ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

Экспериментальная Демиелинизация и ремиелинизацию мышиной спинного мозга Focal инъекций лизолецитина

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Визуальный вызванных потенциалов Запись в крысиной модели экспериментальной зрительного нерва демиелинизация

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

Перерезка частичное зрительного нерва у крыс: модель с новой постановляющей части подход к оценке вторичной дегенерации сетчатки ганглия клеток

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

Крысиная модель широко распространенной церебральной кортикальной демиелинизации, индуцированной внутримозговой инъекцией провоспалительных цитокинов

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Direct Intrathecal Injection of Recombinant Adeno-associated Viruses in Adult Mice

Непосредственный впрыск Интратекальное рекомбинантного адено связанные вирусов у взрослых мышей

Intrathecal (IT) injection of adeno-associated virus (AAV) has drawn considerable interest in CNS gene therapy by virtue of its safety, noninvasiveness, ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Двойная прямая инъекция крови в Цистерна Магна как модель субарахноидового кровоизлияния

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

Крысиная модель инфекции мозга EcoHIV

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...