Name: a stably established two-point injection of lysophosphatidylcholine-induced focal demyelination model in mice
Uploaded: 2022-05-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı tarafından desteklenmiştir (Hibeler: 82071380, 81873743).

Tüm hayvan prosedürleri, Çin'deki Huazhong Bilim ve Teknoloji Üniversitesi, Tongji Tıp Koleji Hayvan Bakım Komitesi Enstitüsü tarafından onaylandı. Bu çalışmada yetişkin C57BL/6 erkek ve dişi fareler (vahşi tip, WT; 20-25 g; 8-10 haftalık) kullanılmıştır. Fareler ticari kaynaklardan elde edilmiştir (bakınız Malzeme Tablosu). Fareler, su ve gıda ile sağlanan ad libitum ile spesifik bir patojen içermeyen (SPF) hayvan tesisinde barındırıldı. 22 °C sıcaklık ve %55-%...

<ol>
	<li>Gaire, B. P., Choi, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+roles+of+lysophospholipid+receptors+in+activation+of+neuroglia+and+their+neuroinflammatory+responses.">Critical roles of lysophospholipid receptors in activation of neuroglia and their neuroinflammatory responses.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (15), 7864 (2021).</li><li>Compston, A., Coles, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis.">Multiple sclerosis.</a> Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).</li><li>Dobson, R., Giovannoni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis+-+a+review.">Multiple sclerosis - a review.</a> European Journal of Neurology. 26 (1), 27-40 (2019).</li><li>Mahad, D. H., Trapp, B. D., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+mechanisms+in+progressive+multiple+sclerosis.">Pathological mechanisms in progressive multiple sclerosis.</a> The Lancet Neurology. 14 (2), 183-193 (2015).</li><li>Filippi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis.">Multiple sclerosis.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4 (1), 43 (2018).</li><li>Villoslada, P., Steinman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+targets+and+therapeutics+for+neuroprotection,+remyelination+and+repair+in+multiple+sclerosis.">New targets and therapeutics for neuroprotection, remyelination and repair in multiple sclerosis.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 29 (5), 443-459 (2020).</li><li>Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis+pathology.">Multiple sclerosis pathology.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 8 (3), 028936 (2018).</li><li>Franklin, R. J., Ffrench-Constant, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remyelination+in+the+CNS:+From+biology+to+therapy.">Remyelination in the CNS: From biology to therapy.</a> Nature Reviews Neuroscience. 9 (11), 839-855 (2008).</li><li>Gentile, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+effects+of+exercise+in+experimental+multiple+sclerosis.">Immunomodulatory effects of exercise in experimental multiple sclerosis.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2197 (2019).</li><li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+microglial+Hv1+channel+is+associated+with+activation+of+autophagic+pathway+and+ROS+production+in+LPC-induced+demyelination+mouse+model.">Deficiency of microglial Hv1 channel is associated with activation of autophagic pathway and ROS production in LPC-induced demyelination mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 17 (1), 333 (2020).</li><li>Luo, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stable+and+easily+reproducible+model+of+focal+white+matter+demyelination.">A stable and easily reproducible model of focal white matter demyelination.</a> Journal of Neuroscience Methods. 307, 230-239 (2018).</li><li>Blakemore, W. F., Franklin, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remyelination+in+experimental+models+of+toxin-induced+demyelination.">Remyelination in experimental models of toxin-induced demyelination.</a> Current Topics in Microbiology and Immunology. 318, 193-212 (2008).</li><li>Degaonkar, M. N., Raghunathan, P., Jayasundar, R., Jagannathan, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+relaxation+characteristics+during+preacute+stage+of+lysophosphatidyl+choline-induced+demyelinating+lesion+in+rat+brain:+An+animal+model+of+multiple+sclerosis.">Determination of relaxation characteristics during preacute stage of lysophosphatidyl choline-induced demyelinating lesion in rat brain: An animal model of multiple sclerosis.</a> Magnetic Resonance Imaging. 23 (1), 69-73 (2005).</li><li>Baydyuk, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+evolution+of+CNS+remyelinating+lesion+in+mice+with+neutral+red+dye.">Tracking the evolution of CNS remyelinating lesion in mice with neutral red dye.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (28), 14290-14299 (2019).</li><li>Plemel, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+lysophosphatidylcholine-induced+demyelination:+A+primary+lipid+disrupting+myelinopathy.">Mechanisms of lysophosphatidylcholine-induced demyelination: A primary lipid disrupting myelinopathy.</a> Glia. 66 (2), 327-347 (2018).</li><li>Nave, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+support+of+axonal+integrity+by+glia.">Myelination and support of axonal integrity by glia.</a> Nature. 468 (7321), 244-252 (2010).</li><li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+oligodendrocyte+differentiation+by+Olig2+and+Sox10:+evidence+for+reciprocal+interactions+and+dosage-dependent+mechanisms.">Induction of oligodendrocyte differentiation by Olig2 and Sox10: evidence for reciprocal interactions and dosage-dependent mechanisms.</a> Developmental Biology. 302 (2), 683-693 (2007).</li><li>Kassis, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+deacetylase+expression+in+white+matter+oligodendrocytes+after+stroke.">Histone deacetylase expression in white matter oligodendrocytes after stroke.</a> Neurochemistry International. 77, 17-23 (2014).</li><li>Vorhees, C. V., Williams, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morris+water+maze:+Procedures+for+assessing+spatial+and+related+forms+of+learning+and+memory.">Morris water maze: Procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory.</a> Nature Protocols. 1 (2), 848-858 (2006).</li><li>Merkler, D., Ernsting, T., Kerschensteiner, M., Bruck, W., Stadelmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+focal+EAE+model+of+cortical+demyelination:+multiple+sclerosis-like+lesions+with+rapid+resolution+of+inflammation+and+extensive+remyelination.">A new focal EAE model of cortical demyelination: multiple sclerosis-like lesions with rapid resolution of inflammation and extensive remyelination.</a> Brain. 129, 1972-1983 (2006).</li><li>Karussis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+of+multiple+sclerosis+and+the+various+related+demyelinating+syndromes:+A+critical+review.">The diagnosis of multiple sclerosis and the various related demyelinating syndromes: A critical review.</a> Journal of Autoimmunity. 48-49, 134-142 (2014).</li><li>Kamma, E., Lasisi, W., Libner, C., Ng, H. S., Plemel, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+macrophages+in+progressive+multiple+sclerosis:+Relationship+to+neurodegeneration+and+therapeutics.">Central nervous system macrophages in progressive multiple sclerosis: Relationship to neurodegeneration and therapeutics.</a> Journal of Neuroinflammation. 19 (1), 45 (2022).</li><li>Kutzelnigg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+demyelination+and+diffuse+white+matter+injury+in+multiple+sclerosis.">Cortical demyelination and diffuse white matter injury in multiple sclerosis.</a> Brain. 128, 2705-2712 (2005).</li><li>Lassmann, H., Bradl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+Experimental+models+and+reality).">Multiple sclerosis: Experimental models and reality).</a> Acta Neuropathologica. 133 (2), 223-244 (2017).</li><li>Lamport, A. C., Chedrawe, M., Nichols, M., Robertson, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+encephalomyelitis+accelerates+remyelination+after+lysophosphatidylcholine-induced+demyelination+in+the+corpus+callosum.">Experimental autoimmune encephalomyelitis accelerates remyelination after lysophosphatidylcholine-induced demyelination in the corpus callosum.</a> Journal of Neuroimmunology. 334, 576995 (2019).</li><li>Torkildsen, O., Brunborg, L. A., Myhr, K. M., Bo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuprizone+model+for+demyelination.">The cuprizone model for demyelination.</a> Acta Neurologica Scandinavica. Supplementum. 188, 72-76 (2008).</li><li>Zhan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cuprizone+model:+Dos+and+do+nots.">The cuprizone model: Dos and do nots.</a> Cells. 9 (4), 843 (2020).</li><li>Torre-Fuentes, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+demyelination+and+remyelination.">Experimental models of demyelination and remyelination.</a> Neurologia (Barcelona, Spain). 35 (1), 32-39 (2020).</li><li>Merkler, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+oligodendrocyte+glycoprotein-induced+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+common+marmoset+reflects+the+immunopathology+of+pattern+II+multiple+sclerosis+lesions.">Myelin oligodendrocyte glycoprotein-induced experimental autoimmune encephalomyelitis in the common marmoset reflects the immunopathology of pattern II multiple sclerosis lesions.</a> Multiple Sclerosis Journal. 12 (4), 369-374 (2006).</li><li>Ucal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Widespread+cortical+demyelination+of+both+hemispheres+can+be+induced+by+injection+of+pro-inflammatory+cytokines+via+an+implanted+catheter+in+the+cortex+of+MOG-immunized+rats.">Widespread cortical demyelination of both hemispheres can be induced by injection of pro-inflammatory cytokines via an implanted catheter in the cortex of MOG-immunized rats.</a> Experimental Neurology. 294, 32-44 (2017).</li></ol>

MSS'nin kronik demiyelinizan bir hastalığı olan MS, genç erişkinlerde nörolojik disfonksiyonun en yaygın nedenlerinden biridir20. Klinik olarak, MS hastalarının yaklaşık% 60-80'i, sekonder-ilerleyici bir MS 21,22 gelişmeden önce nüks ve remisyon döngüsünü yaşar ve sonunda kümülatif hareket bozukluklarına ve zamanla bilişsel eksikliklere yol açar23. Şu anda, tek bir deneysel model, hastalığ...

Reseptör aracılı lizofosfolipid sinyalizasyonu, hemen hemen tüm organ sistemlerinin çeşitli fizyolojik süreçlerini içerir1. Merkezi sinir sisteminde (MSS), bu sinyal multipl skleroz (MS) gibi otoimmün nörolojik hastalıkların patojenitelerinde kritik bir rol oynar. Multipl skleroz, patolojik demiyelinasyon ve inflamatuar yanıt ile karakterize, nörolojik disfonksiyon ve kognitif bozukluğa neden olan kronik immün aracılı bir hastalıktır 2,3. Erken hastalık sırasında sürekli nüks ve remitting sonrasında, çoğu hasta sonunda beyinde geri dönüşü olmayan hasara ve sonuçta sakatlığa neden olabilecek ikincil-ilerleyici aşamaya ilerler4. İkincil-ilerleyici seyrin patolojik özelliğinin, enflamatuar lezyonların neden olduğu demiyelinizan plaklar olduğuna inanılmaktadır5. MS için mevcut tedaviler nüks riskini önemli ölçüde azaltabilir. Bununla birlikte, ilerleyici MS6'nın neden olduğu uzun süreli demiyelinizan hasar için hala etkili bir tedavi yoktur. Bu nedenle, beyaz cevher dejenerasyonuna odaklanan preklinik terapötikleri incelemek için istikrarlı bir şekilde kurulmuş ve kolayca çoğaltılabilir bir model gereklidir.
Demiyelinasyon ve remiyelinasyon, multipl skleroz gelişiminde iki önemli patolojik süreçtir. Demiyelinasyon, proinflamatuar fenotipler7 ile mikroglia tarafından indüklenen aksonların etrafındaki miyelin kılıfının kaybıdır ve sinir uyarılarının yavaş iletilmesine yol açarak nöron kaybına ve nörolojik bozukluklara neden olur. Remiyelinasyon, oligodendrositlerin aracılık ettiği, bozuklukların nörodejenerasyona ve bilişsel bozulmaya yol açabileceği endojen bir onarım yanıtıdır8. Enflamatuar yanıt, hem miyelin hasarının derecesini hem de onarımını etkileyen tüm süreç için çok önemlidir.
Bu nedenle, MS'in karmaşıklığı nedeniyle, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), toksik-demiyelinizan modeller, cuprizon (CPZ) ve lizofosfatidilkolin (LPC)9 dahil olmak üzere in vivo demiyelinizan lezyonları taklit etmek için çeşitli hayvan modelleri oluşturulmuştur. . LPC, inflamasyonla ilişkili endojen bir lizofosfolipiddir ve miyelin lipitlerine toksisite ile hızlı hasara neden olabilir ve fokal demiyelinizasyona yol açabilir. Önceki raporlara ve araştırmalara dayanarak10,11, bazı modifikasyonlarla birlikte iki noktalı enjeksiyonun ayrıntılı bir protokolü sağlanmıştır. Genel olarak, klasik tek noktalı LPC enjeksiyon modeli sadece enjeksiyon bölgesinde lokal demiyelinasyon üretir ve sıklıkla spontan remiyelinasyon12,13 eşlik eder. Bununla birlikte, iki noktalı enjeksiyon LPC modeli, LPC'nin fare korpus kallozumunda doğrudan demiyelinasyonu indükleyebileceğini ve az miktarda miyelin rejenerasyonu ile daha dayanıklı demiyelinizasyona neden olabileceğini gösterebilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >L-&#945;-Lysophosphatidylcholine from egg yolk</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >L4129-25MG</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >32 gauge Needle</td>
			<td >HAMILTON</td>
			<td >7762-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10 &#956;l syringe</td>
			<td >HAMILTON</td>
			<td >80014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >high speed skull drill</td>
			<td >strong,korea</td>
			<td >strong204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >drill</td>
			<td >Hager &#38; Meisinger, Germany&#160;</td>
			<td >REF 500 104 001 001 005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Matrx Animal Aneathesia Ventilator</td>
			<td >MIDMARK</td>
			<td >VMR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Portable Stereotaxic Instrument for Mouse</td>
			<td >Reward</td>
			<td >68507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micro syringe</td>
			<td >Reward</td>
			<td >KDS LEGATO 130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane&#160;</td>
			<td >VETEASY</td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paraformaldehyde</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Phosphate buffer</td>
			<td >BOSTER</td>
			<td >PYG0021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LuxoL fast bLue</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1030-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Suture</td>
			<td >FUSUNPHARMA</td>
			<td >20152021225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brain mold</td>
			<td >Reward</td>
			<td >68707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Electron microscope fixative</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1102-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Neutral red (C.I. 50040), for microscopy Certistain</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >1.01376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-Myelin Basic Protein Antibody&#160;</td>
			<td >Millipore</td>
			<td >#AB5864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-GST-P pAb</td>
			<td >MBL</td>
			<td >#311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ki-67 Monoclonal Antibody (SolA15)</td>
			<td >Thermo Fisher&#160;Scientific</td>
			<td >14-5698-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Beta Actin Monoclonal Antibody</td>
			<td >Proteintech</td>
			<td >66009-1-Ig&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Myelin Basic Protein Polyclonal Antibody</td>
			<td >Proteintech</td>
			<td >10458-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >OLIG2 Polyclonal Antibody</td>
			<td >Proteintech</td>
			<td >13999-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 488&#160;AffiniPure&#160;Donkey anti-Rabbit&#160;IgG (H+L)</td>
			<td >YEASEN</td>
			<td >34206ES60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L)&#160;</td>
			<td >YEASEN</td>
			<td >34412ES60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 594&#160;AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)&#160;</td>
			<td >YEASEN</td>
			<td >34212ES60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td >abclonal</td>
			<td >AS014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L)&#160;</td>
			<td >abclonal</td>
			<td >AS003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Adult C57BL/6 male and female mice</td>
			<td >Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd</td>
			<td ></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a stably established two-point injection of lysophosphatidylcholine-induced focal demyelination model in mice

Reseptör aracılı lizofosfolipid sinyalizasyonu, başta multipl skleroz (MS) olmak üzere çeşitli nörolojik hastalıkların patofizyolojisine katkıda bulunur. Lizofosfatidilkolin (LPC), inflamasyonla ilişkili endojen bir lizofosfolipiddir ve miyelin lipitlerine toksisite ile hızlı hasara neden olarak fokal demiyelinizasyona yol açabilir. Burada, stereotaktik iki noktalı LPC enjeksiyonu için doğrudan ciddi demiyelinasyona neden olabilecek ve deneysel demiyelinasyon hasarını cerrahi prosedürle farelerde hızlı ve istikrarlı bir şekilde çoğaltabilecek ayrıntılı bir protokol sunulmaktadır. Bu nedenle, bu model demiyelinasyon hastalıkları, özellikle MS ile oldukça ilgilidir ve klinik olarak ilgili araştırmaların ilerlemesine katkıda bulunabilir. Ayrıca, LPC enjekte edilen farelerin korpus kallozumunda demiyelinizasyonun zaman seyrini göstermek için immünofloresan ve Luxol hızlı mavi boyama yöntemleri kullanılmıştır. Ek olarak, modelleme sonrası farelerin bilişsel işlevlerini değerlendirmek için davranışsal yöntem kullanılmıştır. Genel olarak, stereotaksik bir çerçeve yoluyla lizofosfatidilkolinin iki noktalı enjeksiyonu, daha fazla çalışma için farelerde bir demiyelinasyon modeli oluşturmak için kararlı ve tekrarlanabilir bir yöntemdir.

LPC'nin iki noktalı enjeksiyonu daha dayanıklı bir demiyelinizasyon ile sonuçlandı LPC esas olarak miyelin toksisitesi ve akson bütünlüğünün bölünmesi ile hızlı hasara yol açar15. Enjeksiyon günü 0. gün olarak kabul edildi. Fareler 10-28 günlük bir süre boyunca tutuldu (10 dpi ve 28 dpi). Luxol hızlı mavi (LFB) boyama10, bu zaman noktalarında farelerde demiyelinizasyon alanını değerlendirmek için kullanıldı. İki noktalı e...

Watch this Scientific Journal Video about A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice at JoVE.com

A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice

Mevcut protokol, farelerde stabil ve tekrarlanabilir bir demiyelinasyon modeli oluşturmak için stereotaksik bir çerçeve yoluyla iki noktalı bir lizofosfatidilkolin enjeksiyonunu tanımlamaktadır.

Farelerde Lizofosfatidilkolin Kaynaklı Fokal Demiyelinasyon Modelinin Stably Olarak Kurulmuş İki Noktalı Enjeksiyonu

Receptor-mediated lysophospholipid signaling contributes to the pathophysiology of diverse neurological diseases, especially multiple sclerosis (MS). ...

Modelimiz demiyelinizasyon hastalıkları, özellikle multipl skleroz ile oldukça ilgilidir. Ve klinik olarak ilgili araştırmaların ilerlemesine katkıda bulunabilir. Cerrahi prosedürle farelerde hızlı ve istikrarlı bir şekilde doğrudan ciddi demiyelinizasyona neden olabilecek ayrıntılı bir protokoldür.Bu tekniği ilk kez denerken, sabırlı olun ve koordinatların doğru olduğundan emin olun. 32 gauge'lik bir iğneyi 5 mikrolitrelik bir şırıngaya bağlayarak başlayın. Enjeksiyonun hazırlanması için 5 mikrolitre LPC çözeltisi çekin.Daha sonra, solunum pürüzsüzken ayak parmağı sıkışma refleksinin eksikliği ile farenin anestezi derinliğini onaylayın. Fareyi stereotaksik çerçeveye sırt tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve kafayı bir burun konisi ve diş kelepçesi ile sabitleyin. Fareyi iki taraflı kulak çubuklarıyla stereotaksik aparata sabitleyin.Kulak çubuklarının düz olduğundan ve başın yatay ve sabit olduğundan emin olun. İyodofor ile silerek baş derisini dezenfekte edin. Ardından, kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisinin orta çizgisi boyunca yaklaşık 1,5 santimetreye kadar küçük bir kesi kesmek için neşter kullanın.Bregma, lambda ve posterior fontanelle açığa çıkana kadar% 1 hidrojen peroksit içine batırılmış bir pamuklu çubukla beceriyi silin. Şırıngayı stereotaksik aparata yerleştirin. Hayvanın başının yatay olarak konumlandırıldığından emin olun ve korpus kallozumu bulun.Enjeksiyon bölgesi belirlendikten sonra, koordinatları kaydedin ve kafatası üzerinde bir işaretleyici ile bir işaret yapın. İşaretli bölgeyi bir kafatası matkabı ile nazikçe delin. Herhangi bir kanamayı önlemeye özen gösterin.İğneyi yavaşça verilen koordinatlara hareket ettirin. Korpus kallozum demiyelinizasyonunu indüklemek için, her enjeksiyon bölgesine dakikada 0.4 mikrolitre hızında 2 mikrolitre LPC çözeltisi enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, iğneyi her bölgede 10 dakika daha tutun.Son olarak, cildi 4-0 dikişle dikin ve hayvanın 10 dakika içinde uyanmasını bekleyin. Temsili görüntü, Luxol hızlı mavi boyama yoluyla beyaz madde lejyonlarının tespitini göstermektedir. Sonuçlardan, korpus kallozumun stabil demiyelinizasyonu enjeksiyondan 10 ve 28 gün sonra görülebilir.Demiyelinasyon alanının farklı zaman noktalarında nicelleştirilmesi burada gösterilmiştir. İmmünofloresan boyama yoluyla bozulmuş miyelin bazik proteini, LPC enjekte edilen grupta, enjeksiyondan 10 gün sonra kayda değer bir dMBP artışı gözlenmiştir, bu da korpus kallozumda miyelin kaybını temsil eder. Miyelin bazik proteininin veya MBP'nin batı leke analizi, LPC enjeksiyonundan sonra önemli miktarda MBP kaybı gösterdi.Beta-aktin, temel ifadeyi ölçmek için yükleme kontrolü olarak kullanıldı. Elektron mikroskobu görüntüleri, sahte grup ve LPC enjekte edilen grubun korpus kallozumundaki miyelinli ultrayapıyı doğrulamaktadır. GST-pi, oligodendrosit öncü hücresinin veya OPC, farklılaşma olgunlaşmasının belirtecidir.10 günlük LPC enjeksiyonundan sonra, GST-pi sahte gruba kıyasla azaldı. Aynı zamanda, oligodendrositlerin proliferasyon kabiliyeti, oligodendrositlerin çoğalma oranı ve toplam oligodendrosit soy hücreleri ile yansıtılabilir. Daha yüksek oran, enjeksiyondan 10 gün sonra oligodendrositlerin daha fazla çoğalmasını temsil eder.Temsili görüntüler, farelerin yüzme yolunu her grupta, platformun varlığında ve platformu kaldırdıktan sonra göstermektedir. Sonuçlar, iki noktalı LPC enjeksiyon modelinde demiyelinli farelerin uzamsal hafızasının önemli ölçüde bozulduğunu göstermektedir. Bu prosedürü denerken, enjeksiyon hızının doğru olduğundan emin olun ve iğneyi her bölgede 10 dakika daha tutun.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Nörobilim

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Farelerde Spontan İntraserebral Kanama Model Otolog Kan Enjeksiyon

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Inhibitory Synapse Formation in a Co-culture Model Incorporating GABAergic Medium Spiny Neurons and HEK293 Cells Stably Expressing GABAA Receptors

Inhibitory Synapse Formation in a Co-culture Model Incorporating GABAergic Medium Spiny Neurons and HEK293 Cells Stably Expressing GABAA Receptors

Co-kültür Model Birleşmeyle GABA&#39;erjik Orta Spiny Nöronlar ve HEK293 Hücreler inhibitör Synapse Oluşumu istikrarlı bir şekilde GABA ifade<sub&gt; A</sub&gt; Reseptörler

Inhibitory neurons act in the central nervous system to regulate the dynamics and spatio-temporal co-ordination of neuronal networks. GABA ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

Lisolesitin Odak Enjeksiyon Deneysel Demyelizasyon ve Kemirgen Omurilik remiyelinizasyon

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

Kısmi optik sinir transeksiyon Sıçanlarda: ikincil dejenerasyonu retina Ganglion hücrelerinin değerlendirmek için yeni bir operatif yaklaşım ile kurulan bir Model

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

Pro-enflamatuar Sitokinlerin İntraserebral Enjeksiyonu ile İndüklenen Yaygın Serebral Kortikal Demiyelinasyonun Sıçan Modeli

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Direct Intrathecal Injection of Recombinant Adeno-associated Viruses in Adult Mice

Rekombinant Adeno ilişkili virüs yetişkin farelerde doğrudan intratekal enjeksiyon

Intrathecal (IT) injection of adeno-associated virus (AAV) has drawn considerable interest in CNS gene therapy by virtue of its safety, noninvasiveness, ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subaraknoid Kanama Modeli olarak Cisterna Magna içine Kan Çift Doğrudan Enjeksiyon

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

EcoHIV Beyin Enfeksiyonunun Bir Sıçan Modeli

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...