Name: embryo rescue protocol for interspecific hybridization in squash
Uploaded: 2022-09-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Embryo Rescue Protocol for Interspecific Hybridization in Squash at JoVE.com

이 작업은 USDA 국립 식량 농업 연구소, NRS 프로젝트 번호의 지원을 받았습니다. FLA-TRC-006176 및 플로리다 대학교 식품 및 농업 과학 연구소.

1. 심기 및 수분
참고: 교잡이 과일 세트와 생존 가능한 배아의 생산을 초래할 수 있는 호환 가능한 유전자형을 식별하는 것이 중요합니다.
<ol><li>심기 조건 및 유지 관리<ol><li>교잡화를 위해 호박 유전자형(품종/가입)의 종자를 얻습니다(표 1).</li>
		<li>50 셀 시작 플랫 (25cm 너비 x 50cm 길이)을 1.38g / kg N, 1.38g / kg P 및 1.38g / kg K를 포함하는 완전한 NPK 비?...

<ol>
	<li>Paris, H. S., Grumet, R., Katzir, N., Garcia-Mas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Resources+of+Pumpkins+and+Squash,+Cucurbita+spp.">Genetic Resources of Pumpkins and Squash, Cucurbita spp.</a> Genetics and Genomics of Cucurbitaceae. Plant Genetics and Genomics: Crops and Models. 20, (2016).</li><li>Gong, L., Stift, G., Kofler, R., Pachner, M., Lelley, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microsatellites+for+the+genus+Cucurbita+and+an+SSR-based+genetic+linkage+map+of+Cucurbita+pepo+L.">Microsatellites for the genus Cucurbita and an SSR-based genetic linkage map of Cucurbita pepo L.</a> Theoretical and Applied Genetics. 117 (1), 37-48 (2008).</li><li>Paris, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+genetic+relationships+in+Cucurbita+pepo+(Cucurbitaceae)+using+DNA+markers.">Assessment of genetic relationships in Cucurbita pepo (Cucurbitaceae) using DNA markers.</a> Theoretical and Applied Genetics. 106 (6), 971-978 (2003).</li><li>Robinson, R. W., Decker-Walters, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cucurbits. , (1997).</li><li>Teppner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cucurbita+pepo+(Cucurbitaceae)-history,+seed+coat+types,+thin+coated+seeds+and+their+genetics.">Cucurbita pepo (Cucurbitaceae)-history, seed coat types, thin coated seeds and their genetics.</a> Phyton (Horn). 40 (1), 1-42 (2000).</li><li>Hazra, P., Mandal, A. K., Dutta, A. K., Ram, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+pumpkin+(Cucurbita+moschata+Duch.+Ex+Poir.)+for+fruit+yield+and+other+characters.">Breeding pumpkin (Cucurbita moschata Duch. Ex Poir.) for fruit yield and other characters.</a> International Journal of Plant Breeding. 1 (1), 51-64 (2007).</li><li>Paris, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+the+cultivar-groups+of+Cucurbita+pepo.">History of the cultivar-groups of Cucurbita pepo.</a> Horticultural Reviews-Westport Then New York. 25, 71 (2001).</li><li>Baggett, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attempts+to+cross+Cucurbita+moschata+(Duch.)+Poir.+'Butternut+and+C.+pepo+L.+'Delicata'.">Attempts to cross Cucurbita moschata (Duch.) Poir. 'Butternut and C. pepo L. 'Delicata'.</a> The Cucurbit Genetics Cooperative. 2, 32-34 (1979).</li><li>Erwin, A. T., Haber, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Species+and+Varietal+Crosses+in+Cucurbits.">Species and Varietal Crosses in Cucurbits.</a> Agricultural Experiment Station, Iowa State College of Agriculture and Mechanical Arts. , (1929).</li><li>Whitaker, T. W., Bohn, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+taxonomy,+genetics,+production+and+uses+of+the+cultivated+species+of+Cucurbita.">The taxonomy, genetics, production and uses of the cultivated species of Cucurbita.</a> Economic Botany. 4 (1), 52-81 (1950).</li><li>Bemis, W. P., Nelson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interspecific+hybridization+within+the+genus+Cucurbita+I,+fruit+set,+seed+and+embryo+development.">Interspecific hybridization within the genus Cucurbita I, fruit set, seed and embryo development.</a> Journal of the Arizona Academy of Science. 2 (3), 104-107 (1963).</li><li>Washek, R. L., Munger, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybridization+of+Cucurbita+pepo+with+disease+resistant+Cucurbita+species.">Hybridization of Cucurbita pepo with disease resistant Cucurbita species.</a> The Cucurbit Genetics Cooperative. 6, 92 (1983).</li><li>Davoodi, S., Olfati, J. A., Hamidoghli, Y., Sabouri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+heterosis+in+Cucurbita+moschata+and+Cucurbita+pepo+interspecific+hybrids.">Standard heterosis in Cucurbita moschata and Cucurbita pepo interspecific hybrids.</a> International Journal of Vegetable Science. 22 (4), 383-388 (2016).</li><li>De Oliveira, A. C. B., Maluf, W. R., Pinto, J. E. B., Azevedo, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+to+papaya+ringspot+virus+in+summer+squash+Cucurbita+pepo+L.+introgressed+from+an+interspecific+C.+pepo&#215;+C.+moschata+cross.">Resistance to papaya ringspot virus in summer squash Cucurbita pepo L. introgressed from an interspecific C. pepo&#215; C. moschata cross.</a> Euphytica. 132 (2), 211-215 (2003).</li><li>Rakha, M. T., Metwally, E. I., Moustafa, S. A., Etman, A. A., Dewir, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+Cucurbita+interspecific+hybrids+through+cross+pollination+and+embryo+rescue+technique.">Production of Cucurbita interspecific hybrids through cross pollination and embryo rescue technique.</a> World Applied Sciences Journal. 20 (10), 1366-1370 (2012).</li><li>Zhang, Q. I., Yu, E., Medina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+advanced+interspecific-bridge+lines+among+Cucurbita+pepo,+C.+maxima,+and+C.+moschata.">Development of advanced interspecific-bridge lines among Cucurbita pepo, C. maxima, and C. moschata.</a> HortScience. 47 (4), 452-458 (2012).</li><li>Brown, R. N., Bolanos-Herrera, A., Myers, J. R., Miller Jahn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inheritance+of+resistance+to+four+cucurbit+viruses+in+Cucurbita+moschata.">Inheritance of resistance to four cucurbit viruses in Cucurbita moschata.</a> Euphytica. 129 (3), 253-258 (2003).</li><li>Pachner, M., Paris, H. S., Winkler, J., Lelley, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+marker-assisted+pyramiding+of+genes+for+resistance+to+zucchini+yellow+mosaic+virus+in+oilseed+pumpkin+(Cucurbita+pepo).">Phenotypic and marker-assisted pyramiding of genes for resistance to zucchini yellow mosaic virus in oilseed pumpkin (Cucurbita pepo).</a> Plant Breeding. 134 (1), 121-128 (2015).</li><li>Hayase, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cucurbita-crosses.+XV.+Flower+pollination+at+4+am+in+the+production+of+C.+pepo+x+C.+moschata+F1+hybrids.">Cucurbita-crosses. XV. Flower pollination at 4 am in the production of C. pepo x C. moschata F1 hybrids.</a> Japanese Journal of Breeding. 13 (2), 76-82 (1963).</li><li>Reed, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryo+rescue.">Embryo rescue.</a> Plant development and biotechnology. , 235-239 (2004).</li><li>Sharma, D. R., Kaur, R., Kumar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryo+rescue+in+plants-a+review.">Embryo rescue in plants-a review.</a> Euphytica. 89 (3), 325-337 (1996).</li><li>Wall, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interspecific+hybrids+of+Cucurbita+obtained+by+embryo+culture.">Interspecific hybrids of Cucurbita obtained by embryo culture.</a> Proceedings of the American Society of Horticultural Science. 63, 427-430 (1954).</li><li>Metwally, E. I., Haroun, S. A., El-Fadly, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interspecific+cross+between+Cucurbita+pepo+L.+and+Cucurbita+martinezii+through+in+vitro+embryo+culture.">Interspecific cross between Cucurbita pepo L. and Cucurbita martinezii through in vitro embryo culture.</a> Euphytica. 90 (1), 1-7 (1996).</li><li>Sisko, M., Ivancic, A., Bohanec, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+size+analysis+in+the+genus+Cucurbita+and+its+use+for+determination+of+interspecific+hybrids+obtained+using+the+embryo-rescue+technique.">Genome size analysis in the genus Cucurbita and its use for determination of interspecific hybrids obtained using the embryo-rescue technique.</a> Plant Science. 165 (3), 663-669 (2003).</li><li>Giancaspro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+an+in+vitro+embryo+rescue+protocol+for+breeding+seedless+table+grapes+(Vitis+vinifera+L.)+in+Italy.">Optimization of an in vitro embryo rescue protocol for breeding seedless table grapes (Vitis vinifera L.) in Italy.</a> Horticulturae. 8 (2), 121 (2022).</li><li>Warchol, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+genotype,+media+composition,+pH+and+sugar+concentrations+on+oat+(Avena+sativa+L.)+doubled+haploid+production+through+oat+x+maize+crosses.">The effect of genotype, media composition, pH and sugar concentrations on oat (Avena sativa L.) doubled haploid production through oat x maize crosses.</a> Acta Physiologiae Plantarum. 40 (5), 1-10 (2018).</li><li>Nepi, M., Pacini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pollination,+pollen+viability+and+pistil+receptivity+in+Cucurbita+pepo.">Pollination, pollen viability and pistil receptivity in Cucurbita pepo.</a> Annals of Botany. 72 (6), 527-536 (1993).</li><li>Harvey, W. J., Grant, D. G., Lammerink, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+and+sensory+changes+during+development+and+storage+of+buttercup+squash.">Physical and sensory changes during development and storage of buttercup squash.</a> New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science. 25 (4), 341-351 (1997).</li><li>Moon, P., Meru, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryo+rescue+of+aged+Cucurbita+pepo+seeds+using+squash+rescue+medium.">Embryo rescue of aged Cucurbita pepo seeds using squash rescue medium.</a> Journal of Horticultural Science and Research. 2 (1), 62-69 (2018).</li><li>Nu&#241;ez-Palenius, H. G., Ram&#237;rez-Malag&#243;n, R., Ochoa-Alejo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muskmelon+embryo+rescue+techniques+using+in+vitro+embryo+culture.">Muskmelon embryo rescue techniques using in vitro embryo culture.</a> Plant Embryo Culture. , 107-115 (2011).</li><li>Vining, K. J., Loy, J. B., McCreight, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seed+development+and+seed+fill+in+hull-less+seeded+cultigens+of+pumpkin+(Cucurbita+pepo+L).">Seed development and seed fill in hull-less seeded cultigens of pumpkin (Cucurbita pepo L).</a> Cucurbitaceae 98: Evaluation and Enhancement of Cucurbit Germplasm. , 64-69 (1998).</li><li>Vining, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Seed development in hull-less-seeded pumpkin (Cucurbita pepo L.). , (1999).</li></ol>

C. moschata와 C. pepo 사이의 성공적인 종간 교잡을위한 두 가지 주요 병목 현상이 있습니다 : 하이브리드 배아를 생산하기위한 유전자형 반응성에 의해 결정되는 교차 호환성 장벽과 정상 종자에 대한 하이브리드 배아의 발달을 방해하는 수정 후 장벽. 스쿼시에 대해 이전에보고 된 바와 같이, 현재 연구의 교차 호환성 테스트는 대부분의 과일이 parthenocarpically 발달했으며 대부분의 씨앗...

Cucurbita (2n = 40)는 27 종의 다른 종을 포함하는 Cucurbitaceae 계통의 매우 다양한 속이며 그 중 5 종은 길 들여집니다1. 이 중 Cucurbita moschata, C. pepo 및 C. maxima는 전 세계적으로 경제적으로 가장 중요합니다. 미국에서 C. moschata와 C. pepo는 농업 생산에서 가장 중요한 두 종입니다. C. pepo는 여름과 겨울 호박 품종 그룹을 모두 포함하는 4 개의 아종 (ovifera, pepo, fraternal 및 gumala)으로 구성됩니다. C. moschata는 주로 버터넛, 디킨슨, 치즈 그룹1을 포함한 겨울 스쿼시 시장 유형으로 구성됩니다. 두 종은 형태 학적으로나 표현형적으로 다양하며 C. pepo는 수확량, 얼얼함, 덤불 성장 습관 및 과일 모양, 과일 크기, 과육 색상 및 껍질 패턴을 포함한 다양한 과일 특성으로 간주됩니다. 반면에 C. moschata는 열과 습도, 질병 및 해충 저항성 6,7에 대한 적응으로 높이 평가됩니다. C. moschata와 C. pepo 사이의 종간 교잡은 두 종 사이의 바람직한 특성을 침해하는 중요한 전략 일뿐만 아니라 육종 프로그램 7,8에서 유전 적 기반을 넓힐 수 있습니다.
C. moschata와 C. pepo 사이의 초기 교배는 호환성 및 / 또는 분류 학적 장벽 9,10,11을 결정하기 위해 이루어졌지만 후기 연구는 주로 바람직한 특성12,13,14를 전달하는 데 중점을 두었습니다. 두 종 간의 종간 교잡은 질병 저항성, 비 생물 적 스트레스에 대한 적응성 및 C. moschata14,15,16의 활력 증가와 함께 부시 또는 반 부시 성장 습관 및 C. pepo의 수확량 향상과 같은 새로운 특성의 전달을 목표로했습니다. 예를 들어, C. pepo (P5)와 C. moschata (MO3) 사이의 특정 교배는 더 높은 과일 수확량 13을 초래 한 반면, C. moschata 가입 (나이지리아 지역 및 메니나)은 재배 된 C. pepo 품종17,18에서 포티 바이러스에 대한 내성의 주요 원천으로 널리 사용되었습니다. 
이전 연구에 따르면 C. moschata와 C. pepo 사이의 교잡은 가능하지만 어렵습니다 8,15. 종간 교배는 과일 세트 없음 (낙태), 생존 가능한 씨앗이없는 단과피 과일 (빈 씨앗), 미성숙 배아가 발달하지 않는 씨없는 과일 (stenospermocarpy) 또는 배아 구조를 통해 성숙한 식물로 구출 될 수있는 미성숙 배아가 거의없는 과일15,16. 예를 들어, C. pepo (테이블 퀸, 모계)와 C. moschata (큰 치즈, 부계)를 교배하여 생존 가능한 종자를 얻지 못했지만, 상호 교배는 134 개의 수분에서 57 개의 생존 가능한 종자를 산출했습니다9. 하야세는 10°C에서 밤새 보관된 꽃가루를 사용하여 오전 04:00에 교배를 한 경우에만 C. moschata 및 C. pepo 교배종으로부터 생존 가능한 종자를 얻었다19. Baggett는 8 개의 다른 C. moschata 품종을 C. pepo (delicata)와 교배했으며 총 103 개의 수분 중 83 개의 과일이 정상으로 보였지만 그 중 어느 것도 생존 가능한 종자를 포함하지 않았다고보고했습니다8. C. pepo (S179)와 C. moschata (NK)의 교배에서 Zhang 등은 2,994 개의 종자로 15 개의 과일을 얻었지만 그 중 12 개만 생존 할 수 있었고 나머지는 초보적인 발달 만 보였습니다. 이 연구는 C. moschata와 C. pepo 사이의 종간 교배가 매우 유익하지만 십자가에서 생존 가능한 씨앗으로 과일을 얻는 것은16을 요구한다는 것을 시사합니다.
배아 구조는 조기 낙태 또는 잘 발달되지 않은 배아에서 발생하는 문제를 극복하기 위한 적절한 방법으로 제안되었으며 미성숙 배아의 재생을 위한 가장 초기의 가장 성공적인 시험관 배양 기술 중 하나입니다16,20. 배아 구조는 저개발 / 미성숙 배아의 시험관 내 배양에 이어 묘목 및 궁극적으로 성숙한 식물21의 회복을 촉진하기 위해 멸균 영양 배지로 옮기는 것을 포함합니다. 배아 구조는 일반적으로 스쿼시 육종에 사용되지만 일상적인 적용을 허용하는 적절한 방법론에 대한 자세한 설명이 부족합니다. Cucurbita 종에서 종간 교잡 장벽을 극복하기 위해 배아 구조 기술을 사용하는 것은 이미 195422 년에보고되었습니다. 그러나 초기 연구에서 배아 구조의 성공은보고되지 않았거나 매우 낮았다. Metwally et al. C. pepo와 C. martinezii23 사이의 교배에서 구출 된 100 개의 종간 잡종 배아 중 10 %의 성공률 (성숙한 식물로의 재생)을보고했습니다. Sisko et al. 서로 다른 교차 조합으로부터 얻은 배아 중 배아 재생의 다양한 성공률을보고했다 : C. maxima (Bos. Max)와 C. pepo (Gold Rush)를 교배하여 얻은 잡종의 재생률은 15.5 % 였고, C. pepo (Zucchini)와 C. moschata (Hokaido)는 20 % 였고, C. pepo (Gold Rush)와 C. moschata (Dolga)는 37.5 % 24였다. 유전자형 이외에, 배지 및 시험관 내 배양 조건은 기술25,26의 성공을위한 중요한 요소입니다. 현재 연구에서는 C. moschata와 C. pepo 사이의 다양한 교차 조합을 테스트하고 스쿼시에서 배아 구조 기술을 활용하기위한 간단한 방법론을 개발했습니다. 간단하고 쉽게 재현 가능한 배아 구조 기술의 개발은 스쿼시 육종 프로그램에서 종간 교잡 및 생식질 향상을 촉진할 것입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ampicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1760-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autoclave</td>
			<td>Steris</td>
			<td>AMSCO LAB 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>balance</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cefotaxime</td>
			<td>Sigma Alfrich</td>
			<td>C 7039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge tubes (1.5 ml)</td>
			<td>Sigma Alfrich</td>
			<td>T9661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>detergent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol, 95%</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2805HC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gellan gum</td>
			<td>Caisson Laboratories</td>
			<td>G024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>growth chamber or illuminated shelf</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>laminar hood / biosafety cabinet</td>
			<td>The Baker Company, Inc</td>
			<td>Edgegard</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>masking tape</td>
			<td>Uline</td>
			<td>S-11735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>media bottle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige &#38; Skoog Medium</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>M10200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NPK fertilizer (20-20-20)</td>
			<td>BWI Companies, Inc</td>
			<td>&#160;PR200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmocote Plus fertilizer</td>
			<td>BWI Companie,s Inc</td>
			<td>OS90590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Sigma Alfrich</td>
			<td>P7793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>USA Scientific, Inc</td>
			<td>8609-0160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plant pots</td>
			<td>BWI Companies, Inc</td>
			<td>NP4000BXL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic food containers, reused</td>
			<td>Oscar Mayer</td>
			<td>4470003330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic hang tags</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07QTZRY6T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potting mix</td>
			<td>Jolly Gardener</td>
			<td>Pro-Line C/B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>seedling starter trays</td>
			<td>BWI Companies Inc</td>
			<td>GPPF128S4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>syringe filter (0.22 um )</td>
			<td>ExtraGene</td>
			<td>B25CA022-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trellis support</td>
			<td>The Home Depot</td>
			<td>&#160;2A060006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

embryo rescue protocol for interspecific hybridization in squash

Cucurbita 작물 (스쿼시)에서의 종간 교잡은 유전 적 변이를 확대하고 유용한 대립 유전자의 침입에 바람직합니다. 이러한 넓은 십자가에서 생성 된 미성숙 배아는 적절한 배아 구조 기술을 사용하여 재생되어야합니다. 이 기술은 많은 작물에 대해 잘 확립되어 있지만 일상적인 적용을 허용하는 스쿼시에 대한 적절한 방법론에 대한 자세한 설명이 부족합니다. 여기에서는 C. pepo와 C. moschata의 종간 교잡에 유용한 배아 구조 프로토콜을 설명합니다. 배아 구조를위한 실행 가능한 조합을 확인하기 위해, 24 개의 종간 교차가 수행되었다. 과일 세트는 22 개의 십자가에서 얻어졌으며 92 %의 성공률을 나타냅니다. 그러나 얻은 과일의 대부분은 배아가없는 씨앗 (빈 씨앗)이있는 단과피였습니다. 단 하나의 교차 조합만이 기초 식물 성장 배지를 사용하여 재생될 수 있는 미성숙 배아를 포함했습니다. 종간F1 열매에서 총 10 개의 배아가 구출되었으며, 배아 구조 성공률은 80 %였다. 여기에서 개발 된 배아 구조 프로토콜은 스쿼시 육종 프로그램에서 종간 교잡에 유용 할 것입니다.

과일 세트 및 종자 생존력 다양한 교차 조합에서 과일 세트와 종자 생존력을 결정하기 위해 초기 테스트가 수행되었습니다. 총 15 개의 스쿼시 유전자형, 4 개의 C. pepo 및 11 개의 C. moschata가 선택되었습니다 (표 1). 시도된 24개의 종간 교차 조합 중 22개에 대해 과일 세트가 얻어졌으며(표 2), 과일 세트에서 전체 >92%의 성공을 나타냅니다. O와 M, E?...

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Embryo Rescue Protocol for Interspecific Hybridization in Squash

이 기사는 Cucurbita pepo와 Cucurbita moschata의 종간 교잡에서 파생 된 미성숙 배아의 재생을위한 배아 구조 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 쉽게 복제 할 수 있으며 스쿼시 육종 프로그램에 중요한 자원이 될 것입니다.

스쿼시에서 종간 교잡화를 위한 배아 구조 프로토콜

Interspecific hybridization in Cucurbita crops (squash) is desirable for widening genetic variation and for the introgression of useful alleles. Immature ...

배아 구조 프로토콜은 서로 다른 Cucurbita 종 간의 종간 교배에서 파생 된 미성숙 배아의 재생에 필수적입니다. 그것은 Cucurbita moschata와 Cucurbita pepo 사이의 십자가에 가장 일반적으로 사용됩니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 단순성입니다.이 프로토콜은 항생제가 포함 된 MS 배지 만 사용합니다. 따라서 모든 실험실에서 쉽게 복제할 수 있습니다. 이 기술을 수정하여 종간 또는 제네릭 간 혼성화에 대한 다양한 장벽을 조사하는 것이 가능합니다.모든 단계에서 세부 사항에주의를 기울이면 성공적인 결과에 도움이됩니다. 질소, 인 및 칼륨의 킬로그램 당 1.38g을 포함하는 완전한 질소, 인 및 칼륨 비료가 보충 된 화분 배지를 사용하여 25 x 50cm의 50 셀 시작 플랫을 채워 Cucurbita 식물을 심는 것으로 시작하십시오. 다음으로 씨앗을 길이와 같은 깊이로 뿌리고 화분 매체로 덮으십시오.고인 물을 만들지 않고 평지에 물을 주고 하루에 한 번 물을 주어 매체를 촉촉하게 유지하십시오. 두 번째 진정한 잎 단계가 끝나면 묘목을 직경 30cm의 화분에 이식하고 화분 당 완전한 비료 3 큰술을 보충합니다. 7 일마다 1 그램의 물에 20, 20, 20 질소, 인 및 칼륨을 함유 한 액체 비료 500 밀리리터로 각 냄비를 비옥하게합니다.자연 채광 체제 하에서 섭씨 22도에서 28도 사이의 온도에서 온실의 식물을 유지하십시오. 유전자형을 구부리려면 온실에서지지 격자를 제공하십시오. 식물이 파종 후 6-8 주에 개화를 시작하자마자 제어 된 교잡 또는 수분을 수행하십시오.꽃잎에 노란색 색조가있는 개봉하지 않은 꽃을 확인하고 Cucurbita pepo 및 Cucurbita moschata 품종의 수꽃과 암꽃을 식별하십시오. 우발적 인 곤충 수분을 방지하려면 마스킹 테이프를 사용하여 상단의 닫힌 꽃을 부드럽게 테이프로 붙입니다. 다음날 아침, 오전 10:00 이전에 암꽃의 테이프 상단 부분을 부드럽게 제거하여 수분을 수행하십시오.수꽃에서 꽃잎을 분리하고 암꽃 오명에 꽃밥을 부드럽게 문질러 꽃가루를 옮깁니다. 수분 후 즉시 마스킹 테이프로 수분 된 암화를 닫고 태그를 사용하여 수분 날짜를 기록하고 십자가에 사용 된 부계 및 외부모를 나타냅니다. 확장 된 난소로 표시된 성공적인 십자가는 일주일 이내에 작은 열매를 형성합니다.수분 45-55 일 후에 과일을 수확하십시오. 세포탁심 주식을 준비하십시오. 멸균 된 0.22 미크론 주사기 필터를 통해 여과하십시오.그리고 섭씨 영하 20도에서 보관하기 전에 밀리리터 당 250 밀리그램의 0.5 밀리리터 분취량을 만드십시오. 마찬가지로 암피실린 스톡을 준비하십시오. 멸균 된 0.22 미크론 주사기 필터를 통해 여과하고 밀리리터 암피실린 당 100 밀리그램의 1 밀리리터 분취량을 준비한 후 섭씨 영하 20도에서 보관합니다.Murashige 및 Skoog 또는 MS 배지를 1 리터 병에 500ml의 증류수에 2.45g의 배지를 용해시켜 준비합니다. MS 배지에 1.5g의 젤란 검을 넣고 섭씨 121도에서 20분 동안 오토클레이브합니다. 병을 섭씨 50 도의 수조에 넣어 매체를 식히십시오.층류 캐비닛 내부의 항생제 재고를 해동하십시오. 배지 병을 층류 후드로 옮기고 적절한 혼합으로 0.6 밀리리터의 세포탁심 스톡과 0.25 밀리리터의 암피실린 스톡을 배지에 추가합니다. 약 7 밀리리터의 배지를 60 x 15 밀리미터의 멸균 페트리 접시에 붓습니다.배지가 페트리 접시에서 약 15-20분 동안 굳도록 합니다. 밀봉 랩으로 페트리 접시를 닫고 나중에 사용할 때까지 실온의 보관 상자에 넣으십시오. 호박 열매는 주 포도 나무를 잘라 수확하고 0.3 % 클로록시 레놀과 같은 액체 세제를 사용하여 실험실 싱크대에서 표면을 씻어 과일을 소독합니다.과일을 라미네이트 기류 캐비닛으로 옮기기 전에 충분한 수돗물로 과일을 헹구고 깨끗한 종이 타월로 말리십시오. 70 % 에탄올을 분사하여 캐비닛 내부의 과일 표면을 소독하십시오. 멸균 칼로 과일을 이등분하고 씨앗을 추출하십시오.멸균 집게 또는 멸균 장갑이 달린 손을 사용하여 종자 코트를 무균 적으로 열고 미성숙 배아를 노출시킨 후 항생제가 보충 된 MS 배지가 들어있는 페트리 접시에 넣습니다. 포장 필름을 사용하여 페트리 플레이트를 밀봉하고 섭씨 25도, 16시간 광기 및 70% 상대 습도의 성장 챔버에 넣습니다. 오염의 경우, 오염되지 않은 배아를 즉시 동일한 배지를 갖는 새로운 판으로 계대 배양하십시오.10-14 일 후에 뿌리가 발달하고 15-21 일 후에 자엽이 발달하면 페트리 접시에서 묘목을 꺼내고 수돗물을 사용하여 뿌리 주변에 존재하는 배지를 부드럽게 씻어냅니다. 청소 한 묘목을 14 x 9 x 4 센티미터의 플라스틱 용기에 넣고 젖은 종이 타월로 뿌리를 덮으십시오. 용기를 덮고 필요한 경우 종이 타월을 다시 적 십니다.플라스틱 용기를 섭씨 25도에서 28도까지 유지하고 종이 타월의 촉촉한 상태를 유지하면서 묘목에 적응할 수 있도록 16 시간의 사진 기간을 유지하십시오. 7-10 일 동안 순응 한 후 3-4 센티미터 길이의 묘목을 비료로 수정 된 상업용 화분 믹스가 들어있는 50 개의 셀 플랫으로 옮기고 온실로 옮깁니다. 썩는 것을 방지하기 위해 과수를 피하고 필요에 따라 세포 당 약 10-20 밀리리터의 물을 추가하십시오.두 번째에서 세 번째 진정한 잎 단계에서 묘목을 비료로 수정 된 화분 배지로 채워진 직경 25cm 화분에 이식하고 식물이 개화하기 시작하면 제어 된 교잡을 수행합니다. 자연 채광 체제 하에서 섭씨 22도에서 28도까지 온실의 식물을 유지하십시오. 그리고 과일과 종자 특성에 대해 식물을 평가하십시오.4 개의 쿠 쿠르 비타 페포와 11 개의 쿠 쿠르 비타 모샤타가 종간 교잡화를 위해 선택되었습니다. 시도된 24개의 종간 교차 조합 중 과일 세트에서 92% 이상의 성공을 나타내는 22개의 교차에 대해 과일 세트를 얻었습니다. 유전자형 O와 M, 유전자형 E와 J를 포함하는 Cucurbita moschata와 Cucurbita pepo 사이의 교배는 성숙한 열매를 맺지 못했습니다.반면 쿠쿠르비타 모샤타와 쿠쿠르비타 페포 사이의 교배는 유전자형 F와 J를 포함하며 6개의 과일을 생산했습니다. 다른 교차 조합에 대해 수분 된 꽃의 수는 1에서 11까지 다양했습니다. 그리고 수분 성공률은 0%에서 100% 사이였습니다. 모든 교차 조합에서 생산된 44개의 과일 중 쿠쿠르비타 모샤타와 쿠쿠르비타 페포 사이의 교배에서 단 하나의 과일만 유전자형 C와 J가 구조될 수 있는 미성숙 배아를 생성했습니다.이러한 잘 발달되지 않은 배아의 발달을 위해 배아 구조 배지를 사용하여 배양하여 배아 구조 성공률이 80%였습니다. 가장 중요한 두 가지 절차는 Cucurbita moschata와 Cucurbita pepo라는 두 종 사이의 호환 가능한 교배와 성공적인 배아 재생을 식별하는 것입니다. 배아 구조 기술은 간단하고 쉽게 복제 할 수 있기 때문에 전 세계의 스쿼시 육종가는이 기술을 사용하여 서로 다른 Cucurbita 종 간의 종간 교배에서 파생 된 미성숙 배아를 구출 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

조기 칙 태아의 현장 하이브리드화에서 더블 전체 산

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

연구

생물학

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

칙의 배아에서 신경 유도에 대한 분석

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

비 - 방사성 현장에서 하이브 리다이 제이션 노르웨이 스프루스에 대한 해당 프로토콜과 식물 종의 범위

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

에 Electrophysiological 녹음 Drosophila 엠브료

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

형광 현장에서</em인간의 정자에서> 하이브리드화 (물고기) 프로토콜

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

초기 여자는 배아에서 Morphogenetic 조직 Deformations 추적

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants

In Situ Hybridization for the Precise Localization of Transcripts in Plants

식물의 성적 증명서의 정확한 현지화에 대한 원위치 하이브리드화에서

With the advances in genomics research of the past decade, plant biology has seen numerous studies presenting large-scale quantitative analyses of gene ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

형광에 의한 바이러스성 RNA의 탐지<em&gt; 현장에서</em&gt; 하이브리드화 (물고기)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

형광을 사용하여 mRNA의 분자의 시각화 및 분석<em&gt; 제자리에서</em에서&gt; 하이브리드<em&gt; 사카 cerevisiae의</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

MicroRNA In situ Hybridization for Formalin Fixed Kidney Tissues

마이크로 RNA<em&gt; 현장에서</em&gt; 포르말린 고정 신장 조직에 대한 하이브리드

In this article we describe a method for colorimetric detection of miRNA in the kidney through in situ hybridization with digoxigenin tagged microRNA ...