Name: lipid supplementation for longevity and gene transcriptional analysis in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-12-09T13:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

نشكر P. Svay على دعم الصيانة. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة المنح R01AG045183 (MCW) ، R01AT009050 (MCW) ، R01AG062257 (MCW) ، DP1DK113644 (MCW) ، مارس من مؤسسة الدايمز (MCW) ، مؤسسة ويلش (MCW) ، محقق HHMI (MCW) ، والمعاهد الوطنية للصحة T32 ES027801 زميل طالب ما قبل الدكتوراه (MS). تم توفير بعض السلالات من قبل CGC ، والتي يمولها مكتب المعاهد الوطنية للصحة لبرامج البنية التحتية البحثية (P40 OD010440).

يوضح الشكل 1 مخططا لتغذية الدهون باستخدام إعدادات تجريبية مختلفة.
1. إعداد البكتيريا المكيفة الدهون
<ol><li>قم بإعداد محلول قاعدة التقييد الغذائي للتخفيف البكتيري (BDR) عن طريق إذابة 5.85 جم من كلوريد الصوديوم و 1.0 جم من K 2 HPO 4 و 6.0 جم من KH2PO4 (انظر...

<ol>
	<li>Fahy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+of+the+LIPID+MAPS+comprehensive+classification+system+for+lipids+1.">Update of the LIPID MAPS comprehensive classification system for lipids 1.</a> Journal of Lipid Research. 50, 9-14 (2009).</li><li>Liebisch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+LIPID+MAPS+classification,+nomenclature,+and+shorthand+notation+for+MS-derived+lipid+structures.">Update on LIPID MAPS classification, nomenclature, and shorthand notation for MS-derived lipid structures.</a> Journal of Lipid Research. 61 (12), 1539-1555 (2020).</li><li>Mutlu, A. S., Duffy, J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+and+lipid+signals+in+aging+and+longevity.">Lipid metabolism and lipid signals in aging and longevity.</a> Developmental Cell. 56 (10), 1394-1407 (2021).</li><li>Kimura, T., Jennings, W., Epand, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+specific+lipid+species+in+the+cell+and+their+molecular+mechanism.">Roles of specific lipid species in the cell and their molecular mechanism.</a> Progress in Lipid Research. 62, 75-92 (2016).</li><li>Duffy, J., Mutlu, A. S., Wang, M. C., Olsen, A., Gill, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+Metabolism,+Lipid+Signalling+and+Longevity.">Lipid Metabolism, Lipid Signalling and Longevity.</a> Ageing: Lessons from C. elegans. Healthy Ageing and Longevity. , 307-329 (2017).</li><li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+chain+poly-unsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans.">Long chain poly-unsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> Journal of Cell Science. 116 (24), 4965-4975 (2003).</li><li>Folick, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+signaling+molecules+regulate+longevity+in+Caenorhabditis+elegans.">Lysosomal signaling molecules regulate longevity in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 347 (6217), 83-86 (2015).</li><li>Ramachandran, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+signaling+promotes+longevity+by+adjusting+mitochondrial+activity.">Lysosomal signaling promotes longevity by adjusting mitochondrial activity.</a> Developmental Cell. 48 (5), 685-696 (2019).</li><li>Byrne, E. F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+of+Smoothened+regulation+by+its+extracellular+domains.">Structural basis of Smoothened regulation by its extracellular domains.</a> Nature. 535 (7613), 517-522 (2016).</li><li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+window+into+biology:+a+primer+on+Caenorhabditis+elegans.">Transparent window into biology: a primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li><li>Nigon, V. M., F&#233;lix, M. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+research+on+C.+elegans+and+other+free-living+nematodes+as+model+organisms.">History of research on C. elegans and other free-living nematodes as model organisms.</a> WormBook. , 1-84 (2017).</li><li>Kutscher, L. M., Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+reverse+mutagenesis+in+C.+elegans.">Forward and reverse mutagenesis in C. elegans.</a> WormBook. , 1-26 (2014).</li><li>Brooks, K. K., Liang, B., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+bacterial+diet+on+fat+storage+in+C.+elegans.">The influence of bacterial diet on fat storage in C. elegans.</a> PloS ONE. 4 (10), 7545 (2009).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans.">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176 (2), 865-875 (2007).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans.">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PloS Genetics. 2 (7), 108 (2006).</li><li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiencies+in+C20+poly-unsaturated+fatty+acids+cause+behavioral+and+developmental+defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+mutants.">Deficiencies in C20 poly-unsaturated fatty acids cause behavioral and developmental defects in Caenorhabditis elegans fat-3 mutants.</a> Genetics. 163 (2), 581-589 (2003).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+poly-unsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans.">Genetic dissection of poly-unsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (9), 5854-5859 (2002).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoyl-CoA-specific+&#916;9+fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans.">Palmitoyl-CoA-specific &#916;9 fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 272 (1), 263-269 (2000).</li><li>Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+synthesis+and+adiposity+regulation+in+Caenorhabditis+elegans.">Fat synthesis and adiposity regulation in Caenorhabditis elegans.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 20 (2), 58-65 (2009).</li><li>Peyou-Ndi, M. M., Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+an+animal+&#916;12+fatty+acid+desaturase+gene+by+heterologous+expression+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Identification and characterization of an animal &#916;12 fatty acid desaturase gene by heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 376 (2), 399-408 (2000).</li><li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+animal+&#969;-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis.">Identification of an animal &#969;-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (4), 1142-1147 (1997).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+&#916;5-fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans.">Isolation and characterization of a &#916;5-fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 362 (1), 175-182 (1999).</li><li>Deline, M. L., Vrablik, T. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+supplementation+of+polyunsaturated+fatty+acids+in+Caenorhabditis+elegans.">Dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50879 (2013).</li><li>Estes, R. E., Lin, B., Khera, A., Davis, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+influence+on+neurodegenerative+disease+progression:+is+the+vehicle+as+important+as+the+cargo.">Lipid metabolism influence on neurodegenerative disease progression: is the vehicle as important as the cargo.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 788695 (2021).</li><li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids+and+cell+signaling.">Membrane lipids and cell signaling.</a> Current Opinion in Lipidology. 28 (5), 408-413 (2017).</li><li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mono-unsaturated+fatty+acids+link+H3K4me3+modifiers+to+C.+elegans+lifespan.">Mono-unsaturated fatty acids link H3K4me3 modifiers to C. elegans lifespan.</a> Nature. 544 (7649), 185-190 (2017).</li><li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#969;-6+Poly-unsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy.">&#969;-6 Poly-unsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes &amp; Development. 27 (4), 429-440 (2013).</li><li>Steinbaugh, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-mediated+regulation+of+SKN-1/Nrf+in+response+to+germ+cell+absence.">Lipid-mediated regulation of SKN-1/Nrf in response to germ cell absence.</a> eLife. 4, 07836 (2015).</li><li>Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SKN-1/Nrf,+stress+responses,+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans.">SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans.</a> Free Radical Biology and Medicine. 88, 290-301 (2015).</li><li>Ezzili, C., Otrubova, K., Boger, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+signaling+molecules.">Fatty acid amide signaling molecules.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 20 (20), 5959-5968 (2010).</li><li>Qi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+&#969;-3+fatty+acid+&#945;-linolenic+acid+extends+Caenorhabditis+elegans+lifespan+via+NHR-49/PPAR&#945;+and+oxidation+to+oxylipins.">The &#969;-3 fatty acid &#945;-linolenic acid extends Caenorhabditis elegans lifespan via NHR-49/PPAR&#945; and oxidation to oxylipins.</a> Aging Cell. 16 (5), 1125-1135 (2017).</li><li>Shemesh, N., Meshnik, L., Shpigel, N., Ben-Zvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary-induced+signals+that+activate+the+gonadal+longevity+pathway+during+development+regulate+a+proteostasis+switch+in+Caenorhabditis+elegans+adulthood.">Dietary-induced signals that activate the gonadal longevity pathway during development regulate a proteostasis switch in Caenorhabditis elegans adulthood.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 254 (2017).</li><li>Savini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosome+lipid+signalling+from+the+periphery+to+neurons+regulates+longevity.">Lysosome lipid signalling from the periphery to neurons regulates longevity.</a> Nature Cell Biology. 24 (6), 906-916 (2022).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , (2006).</li><li>Wang, M. C., O'Rourke, E. J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+metabolism+links+germline+stem+cells+and+longevity+in+C.+elegans.">Fat metabolism links germline stem cells and longevity in C. elegans.</a> Science. 322 (5903), 957-960 (2008).</li><li>Jacob, T. C., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EGL-21+carboxypeptidase+E+facilitates+acetylcholine+release+at+Caenorhabditis+elegans+neuromuscular+junctions.">The EGL-21 carboxypeptidase E facilitates acetylcholine release at Caenorhabditis elegans neuromuscular junctions.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (6), 2122-2130 (2003).</li><li>Kass, J., Jacob, T. C., Kim, P., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EGL-3+proprotein+convertase+regulates+mechanosensory+responses+of+Caenorhabditis+elegans.">The EGL-3 proprotein convertase regulates mechanosensory responses of Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (23), 9265-9272 (2001).</li><li>Bael, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+evidence+for+neuropeptide-amidating+enzymes+in+Caenorhabditis+elegans.">Mass spectrometric evidence for neuropeptide-amidating enzymes in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (16), 6052-6063 (2018).</li><li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li></ol>

تم استخدام مكملات الدهون في أبحاث الشيخوخة لتوضيح التأثير المباشر لبعض أنواع الدهون على الشيخوخة الصحية6،7،23،26،27،31. ومع ذلك ، يمكن أن يكون إجراء مكملات الدهون صعبا ، وأي عدم اتساق ...

الدهون الليبيدات هي جزيئات صغيرة كارهة للماء أو برمائية قابلة للذوبان في المذيبات العضوية ولكنها غير قابلة للذوبان في الماء 1,2. تتمايز جزيئات الليبيدات المتميزة بعضها عن بعض بناء على عدد ذرات الكربون الموجودة في سلاسلها، وموقعها، وعدد الروابط المزدوجة، والتراكيب المرتبطة، بما في ذلك الجليسرول أو الفوسفات. تلعب الليبيدات أدوارا حاسمة داخل الخلايا المتميزة وعبرها لتنظيم وظائف الكائنات الحية ، بما في ذلك تكوين طبقات ثنائية الغشاء ، وتوفير تخزين الطاقة ، والعمل كجزيئات إشارة 3,4.
أولا، الليبيدات هي مكونات تركيبية للأغشية البيولوجية، بما في ذلك غشاء البلازما والأغشية تحت الخلوية داخل الخلايا التي تفصل الأجزاء الداخلية عن البيئة خارج الخلية. ثانيا، الليبيدات هي الشكل الرئيسي لتخزين الطاقة في الحيوانات الفقارية واللافقارية. يتم تخزين الدهون المحايدة ، بما في ذلك ثلاثي الجلسرين ، لفترة طويلة في الأنسجة المختلفة ، بما في ذلك الأنسجة الدهنية. في الديدان الخيطية Caenorhabditis elegans ، الأمعاء هي الجهاز الرئيسي لتخزين الدهون الأيضية. لا تشارك وظيفتها فقط في هضم وامتصاص العناصر الغذائية ، ولكن أيضا في عملية إزالة السموم ، والتي تشبه نشاط خلايا الكبد في الثدييات. تشمل أنسجة تخزين الدهون الأخرى الخط الجرثومي ، حيث تكون الدهون ضرورية لتطوير البويضات ، وتحت الجلد ، والتي تتكون من خلايا البشرةالشبيهة بالجلد 3,5. ثالثا ، في السنوات الأخيرة ، أشارت المزيد من الأدلة إلى أن الدهون هي جزيئات إشارات قوية تشارك في الإشارات داخل وخارج الخلية من خلال العمل مباشرة على مجموعة متنوعة من المستقبلات ، بما في ذلك مستقبلات G المقترنة بالبروتين والنووية ، أو بشكل غير مباشر عن طريق تعديل سيولة الغشاء أو تعديلات ما بعد الترجمة6،7،8،9 . ستستمر الدراسات الإضافية في توضيح الآليات الجزيئية الأساسية لإشارات الدهون في تعزيز طول العمر والصحة.
الكائنات النموذجية مهمة لمعالجة أسئلة بيولوجية محددة معقدة للغاية بحيث لا يمكن دراستها على البشر. على سبيل المثال ، تعد الدودة المستديرة C. elegans نموذجا ممتازا لإجراء التحليل الجيني لتشريح العمليات البيولوجية ذات الصلة بالتغذية البشرية والمرض10. إن المسارات الجزيئية المحفوظة للغاية ذات الصلة بعلم وظائف الأعضاء البشرية والأنسجة المعقدة والأنماط السلوكية وأدوات التلاعب الجيني الوفيرة تجعل C. elegans كائنا نموذجيا رائعا11. على سبيل المثال ، C. elegans ممتاز في إعادة توجيه الشاشات الجينية لتحديد الجينات الخاصة بالنمط الظاهري ، وكذلك في الشاشات الجينية العكسية على مستوى الجينوم عبر تداخل الحمض النووي الريبي12.
في المختبرات ، تزرع الديدان الخيطية على ألواح بتري أجار المزروعة بعشب من بكتيريا الإشريكية القولونية ، مما يوفر المغذيات الكبيرة مثل البروتينات والكربوهيدرات والأحماض الدهنية المشبعة وغير المشبعة كمصادر للطاقة ولبنات البناء ، والمغذيات الدقيقة مثل العوامل المساعدة والفيتامينات13. على غرار الثدييات ، تقوم الديدان الخيطية بتوليف جزيئات الأحماض الدهنية من كل من حمض النخيل وحامض دهني (جزيئات الكربون 16 و 18 الكربون المشبعة ، على التوالي) التي يتم إلغاء تشبعها بالتتابع وممدودة إلى مجموعة متنوعة من الأحماض الدهنية الأحادية غير المشبعة (MUFAs) والأحماض الدهنية المتعددة غير المشبعة (PUFAs)14،15،16،17،18. ومن المثير للاهتمام ، أن C. elegans قادر على تخليق جميع الأحماض الدهنية المطلوبة والإنزيمات الأساسية المشاركة في التخليق الحيوي للأحماض الدهنية ، وإزالة التشبع ، والاستطالة ، مما يسهل تخليق PUFAsطويلة السلسلة 19. تختلف عن الأنواع الحيوانية الأخرى ، يمكن ل C. elegans تحويل الأحماض الدهنية 18-كربون و 20-كربون ω-6 إلى أحماض دهنية ω-3 مع إنزيمات desaturase ω-3 الخاصة بها. بالإضافة إلى ذلك ، تمتلك الديدان Δ12 desaturase الذي يحفز تكوين حمض اللينوليك (LA) من حمض الأوليك (OA ، 18: 1) 20،21. تفتقر معظم الحيوانات أو النباتات إلى كل من Δ12 و ω-3 desaturases وبالتالي تعتمد على المدخول الغذائي من ω-6 و ω-3 للحصول على PUFAs ، في حين أن C. elegans لا تتطلب الأحماض الدهنية الغذائية22. تم استخدام الطفرات المعزولة التي تفتقر إلى إنزيمات ديساتوراز الوظيفية لدراسة وظائف الأحماض الدهنية المحددة في العمليات البيولوجية المتميزة ، بما في ذلك التكاثر والنمو وطول العمر والنقل العصبي. يمكن معالجة تأثير الأحماض الدهنية الفردية على مسارات بيولوجية محددة باستخدام كل من النهج الجيني ومكملات النظام الغذائي16،17،23. حتى الآن ، ركزت أبحاث الدهون على توصيف الجينات المشاركة في تخليق الدهون ، وتدهورها ، وتخزينها ، وتكسيرها في الحالات العصبية والتنموية24. ومع ذلك ، فإن أدوار الدهون في تنظيم طول العمر بدأت للتو في الكشف.
إشارات الدهون في تنظيم طول العمر تلعب الدهون أدوارا حاسمة في تنظيم طول العمر عن طريق تنشيط شلالات الإشارات الخلوية في الأنسجة وأنواع الخلايا المتميزة. أبرزت الدراسات الحديثة الأدوار النشطة للدهون في تعديل النسخ والتواصل بين الخلايا الخلوية عبر البروتينات المرتبطة بالدهون أو التعرف على مستقبلات الغشاء25. بالإضافة إلى ذلك ، توفر مكملات الدهون الغذائية أداة ممتازة لتشريح كيفية تأثير استقلاب الدهون على العمر الافتراضي في C. elegans. لقد ثبت أن MUFAs و PUFAs المتميزة تعزز طول العمر من خلال تنشيط عوامل النسخ26,27.
ترتبط نماذج طول العمر ، بما في ذلك إشارات الأنسولين / IGF-1 واستئصال خلايا سلائف الخط الجرثومي ، بمسار التخليق الحيوي MUFA ، ومكملات MUFA ، بما في ذلك حمض الأوليك وحمض البالميتوليك و cis-vaccenic ، كافية لإطالة عمر C. elegans 26. على الرغم من أن تأثير طول العمر الذي تمنحه إدارة MUFA يتطلب مزيدا من التحقيق ، فمن المرجح أن يتم التوسط في الآلية الأساسية بواسطة عامل النسخ SKN-1 / Nrf2 ، وهو المنشط الرئيسي لاستجابة الإجهاد التأكسدي وتنظيم طول العمر28,29. من بين MUFAs ، تلعب فئة معينة من الأسيل إيثانولاميدات الدهنية تسمى N-acylethanolamines (NAEs) أدوارا حاسمة في آليات متميزة بما في ذلك الالتهاب والحساسية والتعلم والذاكرة واستقلاب الطاقة30. على وجه الخصوص ، تم تحديد جزيء الدهون المعروف باسم oleoylethanolamide (OEA) كمنظم إيجابي لطول العمر من خلال تعزيز نقل البروتين المرتبط بالدهون 8 (LBP-8) إلى النواة لتنشيط مستقبلات الهرمونات النووية NHR-49 و NHR-807. مكملات OEA التناظرية KDS-5104 كافية لإطالة العمر ، وتحفز التعبير عن الجينات المشاركة في استجابات الإجهاد التأكسدي وأكسدة β الميتوكوندريا 7,8.
في الوقت نفسه ، تم ربط دور PUFAs أيضا بتنظيم طول العمر. إدارة حمض PUFA ω-3 الدهني حمض α لينولينيك (ALA) يعزز طول العمر عن طريق تنشيط عوامل النسخ NHR-49 / PPARα و SKN-1 / NRF وتحفيز أكسدة β الميتوكوندريا31. ومن المثير للاهتمام ، أن المنتجات البيروكسيد من ALA ، المشار إليها باسم oxylipins ، تنشط SKN-1 / NRF ، مما يشير إلى أن كلا من PUFAs ومشتقاتها المؤكسدة يمكن أن تمنح فوائد طول العمر23. مكملات الأحماض الدهنية ω-6 حمض الأراكيدونيك (AA) وحمض ثنائي هومو-γ-لينولينيك (DGLA) يطيل العمر عن طريق تنشيط الالتهام الذاتي ، مما يعزز مراقبة جودة البروتين ويؤدي إلى تدهور مجاميع البروتين المهدرة والسامة27,32. في الآونة الأخيرة ، ثبت أن تنظيم الإشارات الخلوية غير المستقلة بوساطة البروتين المرتبط بالدهون 3 (LBP-3) و DGLA أمر حاسم لتعزيز طول العمر عن طريق إرسال إشارات محيطية إلى الخلايا العصبية ، مما يشير إلى دور طويل المدى لجزيئات الدهون في التواصل بين الأنسجة عند المستويات الجهازية33. تشير الدراسة الحالية إلى كل خطوة لأداء مكملات الدهون مع البكتيريا المصنفة على الألواح أو التعليق البكتيري في الثقافة السائلة. تستخدم هذه المنهجيات لتقييم العمر الافتراضي وتحليل النسخ ، باستخدام محتوى الجسم بالكامل أو الأنسجة المشرحة المشتقة من عدد قليل من الديدان. يمكن تكييف التقنيات التالية مع مجموعة متنوعة من الدراسات الغذائية وتقديم أداة صالحة لتشريح كيفية تأثير استقلاب الدهون على طول العمر والشيخوخة الصحية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Pestle</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>93-165P15</td>
			<td>For worm grinding with Trizol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9639-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AmfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix</td>
			<td>GenDEPOT</td>
			<td>R5600</td>
			<td>For reverse transcription from bulk worm samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applied Biosystems QuanStudio 3 Real-Time PCR</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A28567</td>
			<td>For qRT-PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchmark Scientific StripSpin 12 Microcentrifuge</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>C1248</td>
			<td>For spin down PCR tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Branson 450 Digital Sonifier, w/ 1/8&#34; tip</td>
			<td>Branson Ultrasonic Corporation</td>
			<td>100-132-888R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8503-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5424 R centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22620444R</td>
			<td>For RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf vapo protect mastercycler pro</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>950030010</td>
			<td>For reverse transcription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, Absolute (200 Proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One CELLSTAR, 12 W Plate</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>665180</td>
			<td>12-well plates for licuid feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 100 x 20 mm</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>664161</td>
			<td>For bacterial LB plates and worm 10-cm NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 60 x 15 mm</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>628161</td>
			<td>For worm6-cm NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen nuclease-free water</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoproanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PX1835-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisole hydrochloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>SPCML1054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipl-4Tg</td>
			<td>MCW Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Transgenic C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipl-4Tg;fat-3(wa22)</td>
			<td>MCW Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Transgenic C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria Broth Base</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12795-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast Clear Reaction Plate with Barcode</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4483354</td>
			<td>96-well qPCR plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td>
			<td>Applied BioSystem</td>
			<td>4311971</td>
			<td>For sealing the 96-well qPCR plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Advantage A10 Water Purification System</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z00Q0V0WW</td>
			<td>Deionized water used to make all reagents, including buffer and cultural media, unless specified as nuclease-free water in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>C. elegans wild isolate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop ND-1000 Spectrophotometer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For measuring RNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP50</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Bacteria used as C. elegans food</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium phosphate dibasic trihydrate (K2HPO4&#183;3H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5504-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0662-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green cells-to-Ct kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4402953</td>
			<td>For reverse transcription and qPCR from a few worms or worm tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4367659</td>
			<td>For qPCR from bulk worm samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pure Bright germicidal ultra bleach&#160;</td>
			<td>KIK International LLC.</td>
			<td>59647210143</td>
			<td>6% house bleach For worm egg preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex spot plate with nine depressions</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS722085-18EA</td>
			<td>Watch glass for dissecting the worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium cloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SX0590-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic heptahydrate (Na2HPO4&#183;7H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9390-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Sorvall Legend Mach 1.6R Centrifuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>7500-4337</td>
			<td>For bacteria collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Sorvall ST 8 centrifuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>7500-7200</td>
			<td>For worm egg preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol Reagent</td>
			<td>TheroFisher</td>
			<td>15596018</td>
			<td>RNA extraction reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turbo DNA-free kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM1907</td>
			<td>For removing DNA contamination in RNA extractions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer 59</td>
			<td>Denville Scientific INV</td>
			<td>S7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Disposable Pellet Mixers and Cordless Motor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>47747-370</td>
			<td>For worm grinding with Trizol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Kinetic Energy 26 Joules Mini Centrifuge C1413 V-115</td>
			<td>VWR</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For worm collection. Discontinued model, a similar one available at VWR with Cat# 76269-064</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm picker</td>
			<td>WormStuff</td>
			<td>59-AWP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lipid supplementation for longevity and gene transcriptional analysis in caenorhabditis elegans

الشيخوخة هي عملية معقدة تتميز بالتغيرات الفسيولوجية التدريجية الناتجة عن المساهمات البيئية والجينية. الليبيدات ضرورية في تكوين المكونات التركيبية لأغشية الخلايا، وتخزين الطاقة، وكجزيئات إشارة. يعد تنظيم استقلاب الدهون والإشارات أمرا ضروريا لتنشيط مسارات طول العمر المتميزة. الدودة المستديرة Caenorhabditis elegans هي كائن حي ممتاز وقوي لتشريح مساهمة التمثيل الغذائي للدهون والإشارة في تنظيم طول العمر. وصفت دراسات بحثية متعددة كيف يمكن لمكملات النظام الغذائي لجزيئات دهنية معينة أن تطيل عمر C. elegans. ومع ذلك ، يمكن أن تسبب الاختلافات الطفيفة في ظروف المكملات مشكلات في التكاثر بين العلماء في المختبرات المختلفة. هنا ، تم الإبلاغ عن طريقتين مفصلتين لمكملات C. elegans باستخدام مكملات الدهون إما مع البكتيريا المصنفة على الألواح أو التعليق البكتيري في الثقافة السائلة. كما ترد هنا تفاصيل لإجراء فحوصات العمر مع مكملات الدهون مدى الحياة وتحليل qRT-PCR باستخدام محللة دودة كاملة أو أنسجة تشريح مشتقة من عدد قليل من الديدان. باستخدام مزيج من الدراسات الطولية والتحقيقات النسخية على مكملات الدهون ، توفر فحوصات التغذية طرقا يمكن الاعتماد عليها لتشريح كيفية تأثير الدهون على طول العمر والشيخوخة الصحية. يمكن أيضا تكييف هذه المنهجية مع مناهج الفحص الغذائي المختلفة لتقييم التغييرات في مجموعة فرعية من النصوص باستخدام إما عدد صغير من الأنسجة المشرحة أو عدد قليل من الحيوانات.

التحقق من صحة التغييرات النسخية باستخدام عدد قليل من الديدان الكاملة عند تناول مكملات الدهون للتحقق مما إذا كان بروتوكول استخراج الحمض النووي الريبي ونسخه إلى cDNA من عدد قليل من الديدان الكاملة قابلا للتكرار وقابلا للمقارنة مع البيانات من الديدان السائبة ، تم استخدام سلالة دود...

Watch this Scientific Journal Video about Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

يصف البروتوكول الحالي طرق مكملات الدهون في المزارع السائلة وعلى الصفائح ل Caenorhabditis elegans ، إلى جانب الدراسات الطولية وتحليل النسخ الجيني من السائبة أو عدد قليل من الديدان وأنسجة الديدان.

مكملات الدهون لطول العمر وتحليل النسخ الجيني في Caenorhabditis elegans

Aging is a complex process characterized by progressive physiological changes resulting from both environmental and genetic contributions. Lipids are ...

يصف هذا البروتوكول استراتيجيتين لمكملات الدهون مع مزيج من التحليل الطولي والنسخ في الكائن الحي النموذجي ، C.elegans. تصف هذه التقنية كيفية فحص التغيرات النسخية باستخدام عدد قليل من الديدان أو أنسجة الديدان المشرحة وكيف يمكن أن تقترن التغذية السائلة لمجموعة الحشرات بالتقنيات المائية. يجب على الأفراد الذين يقومون بهذه التقنية ممارسة تشريح الأنسجة بسبب النافذة الزمنية القصيرة لإجراء التجربة لتحقيق تحليل النسخ المناسب.للبدء ، اجمع بكتيريا OP50 عن طريق الطرد المركزي للثقافة المزروعة طوال الليل عند 4،000 G لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تخلص من المادة الطافية. تعليق الحبيبات البكتيرية في 20 ملليلتر من التخفيف البكتيري أو التقييد الغذائي أو قاعدة BDR عن طريق الدوامة ومرة أخرى ، كرر الطرد المركزي لمدة 10 دقائق.بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات البكتيرية في وسط BDR لتحضير مخزون بكتيري 20 X BDR. قم بتخفيف المخزون البكتيري إلى 5X باستخدام وسيط BDR قبل الاستخدام. باستخدام الإيثانول أو ثنائي ميثيل سلفوكسيد كمذيب ، قم بإعداد محلول مخزون الدهون في قارورة زجاجية معقمة جديدة واملأ القارورة الزجاجية بالأرجون أو النيتروجين لمنع الأكسدة.انقل محلول مخزون الدهون إلى محلول بكتيريا BDR لتحقيق التركيز النهائي المطلوب في ظروف التغذية. امزجه جيدا عن طريق الدوامة لمدة 20 ثانية. قم بإعداد السيارة التي يتم التحكم فيها عن طريق خلط نفس الأحجام من الإيثانول المصفى أو ثنائي ميثيل سلفوكسيد مع بكتيريا BDR.قم بإجراء مكملات الدهون وزراعة السوائل عن طريق نقل الكمية المطلوبة من الدهون أو التحكم في السيارة إلى كل بئر من لوحة 12 بئر مع ثلاثة إلى أربعة مكررات لكل حالة تغذية. امزج معلق دودة Caenorrhabditis elegans المتزامن مع بكتيريا BDR 5X بنسبة واحد إلى واحد لتحقيق تركيز نهائي قدره 1،500 دودة لكل ملليلتر و 2.5X للبكتيريا. ثم انقل مليلتر من خليط بكتيريا الدودة إلى كل بئر من صفيحة البئر 12.عند الانتهاء ، لف لوحة البئر 12 بورق القصدير وهز اللوحة في حاضنة 20 درجة مئوية عند 100 دورة في الدقيقة لطول الحضانة المطلوب. لمكملات الدهون على الأطباق ، قم بزرع ملليلتر واحد من البكتيريا المكيفة الدهنية في مركز وسط نمو الديدان الخيطية 10 سم أو صفيحة أجار NGM. تأكد من أن حل العمل النهائي يتم دوامة عدة مرات بين بذر الصفيحتين عند العمل مع عدد كبير من الألواح.جفف الطبق في الظلام داخل غطاء السلامة البيولوجية. نقل 3000 دودة من ثقافة الدودة المتزامنة إلى لوحة 10 سم. جفف الصفيحة في غطاء السلامة البيولوجية حتى تبدأ الديدان التي كانت تسبح على الألواح المكملة للدهون في الزحف.بمجرد التجفيف ، قم باحتضان الصفيحة المكيفة بالدهون في حاضنة 20 درجة مئوية للمدة الزمنية المطلوبة ، وفي حالة استخدام الدهون المتعددة غير المشبعة ، قم بحماية اللوحة من الضوء. تحضير 20 ميكرولترا من محلول التحلل النهائي لكل عينة عن طريق خلط 0.2 ميكرولتر من DNase I مع 19.8 ميكرولتر من محلول التحلل في أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل وخلطه جيدا عن طريق السحب لأعلى ولأسفل خمس مرات. لاستخراج الحمض النووي الريبي من العدد الصغير من الديدان الكاملة ، قم بإزالة البكتيريا عن طريق نقل 15 إلى 20 دودة من العشب البكتيري إلى صفيحة NGM غير المصنفة حديثا.انقل 15 إلى 20 دودة من صفيحة NGM غير المصنفة إلى أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل الذي يحتوي على 20 ميكرولتر من محلول التحلل النهائي الطازج مع الحد الأدنى لعدد البكتيريا واحتضان تفاعل التحلل لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بمجرد انتهاء الحضانة ، احتفظ بالعينة في حمام ماء بارد لطيف ودقق في الديدان أربع مرات ، خمس ثوان في كل مرة بسعة 30٪ ونبض لمدة 15 ثانية بين كل مرة من الصوتنة. احتضن الأنبوب في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق قبل إضافة ميكرولتر من محلول التوقف في تفاعل التحلل واخلطه عن طريق النقر اللطيف.احتضان التفاعل لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة ثم اضبط الأنبوب على الجليد. لاستخراج الحمض النووي الريبي من أنسجة الدودة ، اختر حوالي 20 دودة من العشب البكتيري وضعها في صفيحة NGM جديدة غير مصنفة لإزالة البكتيريا من الديدان. انقل 20 دودة بأقل عدد ممكن من البكتيريا إلى زجاج ساعة يحتوي على 500 ميكرولتر من محلول M9 يحتوي على أربعة ليفاميزول ميكرومولاري.عندما يتم تجميد الديدان ، قم بتشريح الخط الجرثومي أو الأمعاء باستخدام إبرة قياس 25 يمكن توصيلها بحقنة ملليلتر واحد. باستخدام ماصة زجاجية معقمة ، انقل الأنسجة المشرحة إلى أنبوب PCR وقم بتثبيت الأنبوب على الجليد لمدة دقيقتين مما يسمح بترسب المادة في الأسفل. قم بإزالة المادة الطافية من أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل قبل إضافة 20 ميكرولتر من محلول التحلل النهائي واخلطها جيدا عن طريق النقر.بعد احتضان تفاعل التحلل لمدة خمس دقائق ، أضف ميكرولتر من محلول التوقف واضغط على الأنبوب عدة مرات. احتضان الأنبوب لمدة دقيقتين قبل المتابعة إلى النسخ العكسي. في دراسة التحقق من الصحة ، أظهر الحمض النووي الريبي المستخرج من عدد كبير من السكان وعدد قليل من الديدان تحريضا مشابها لجينات معالجة الببتيد العصبي ، egl-3 و egl-21.ويشير إلى أن استخراج الحمض النووي الريبي من عدد قليل من الديدان يمكن أن يكون بديلا صالحا لتقنيات تخليق CDNA القياسية من مجموعات سكانية كبيرة. في الأمعاء المشرحة لديدان التحوير lipl-4 ، المكملة بحمض ثنائي هومو جاما لينولينيك ، أو DGLA ، لم يتم تحفيز جينات معالجة الببتيد العصبي العصبي. مكملات DGLA بتركيزات مختلفة أنقذت تمديد العمر في الديدان عند ضربة قاضية fat-3.يمكن أيضا معالجة الديدان مع مكملات الدهون لتسلسل الحمض النووي الريبي والبروتينات والأيض والدراسات السلوكية لتحديد الأنماط الظاهرية الإضافية في ظل هذه الظروف المحددة. يمكن تطبيق هذه المنهجية على أبحاث الشيخوخة وبيولوجيا الدهون وأي مجال بحثي آخر يهدف إلى إقامة علاقة بين نمط ظاهري معين وعامل غذائي أو مستقلب.

Research

JoVE Journal

Biology

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

والعزلة في المختبر تفعيل انواع معينة ايليجانس الحيوانات المنوية

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

الوقت الفاصل بين مرحلة التطور الجنيني المبكر من الميكروسكوب في انواع معينة ايليجانس

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

الأساسية<em&gt; Caenorhabditis ايليجانس</em&gt; طرق: التزامن والمراقبة

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

استخراج البروستاجلاندين والتحليل في<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

مكملات غذائية من الأحماض الدهنية غير المشبعة في<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Fatty acids are essential for numerous cellular functions. They serve as efficient energy storage molecules, make up the hydrophobic core of membranes, ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

أساليب "دراسة التغيرات" في "تجميع البروتين الأصيل" مع التقدم في السن في ايليجانس كاينورهابديتيس

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

التحديد الكمي لوفرة الدهن وتقييم توزيع الدهن في ايليجانس كاينورهابديتيس "الأحمر النيل" و "النفط تلطيخ س الأحمر"

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

الجمع بين النوكليوتيدات والاستخراج البروتين في ايليجانس كاينورهابديتيس

A single biological sample holds a plethora of information, and it is now common practice to simultaneously investigate several macromolecules to capture ...

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

تنقية وتحليل Caenorhabditis elegans خارج الخلية الحويصلات

The secretion of small membrane-bound vesicles into the external environment is a fundamental physiological process of all cells. These extracellular ...

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

النمذجة العمر المرتبطة الأمراض العصبية في Caenorhabditis elegans

Battling human neurodegenerative pathologies and managing their pervasive socioeconomic impact is becoming a global priority. Notwithstanding their ...