Name: lipid supplementation for longevity and gene transcriptional analysis in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-12-09T13:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Vi takker P. Svay for vedligeholdelsesstøtte. Dette arbejde blev støttet af NIH-tilskud R01AG045183 (MCW), R01AT009050 (MCW), R01AG062257 (MCW), DP1DK113644 (MCW), March of Dimes Foundation (MCW), Welch Foundation (MCW), HHMI-efterforsker (MCW) og NIH T32 ES027801 prædoktorand (MS). Nogle stammer blev leveret af CGC, som finansieres af NIH Office of Research Infrastructure Programs (P40 OD010440).

Figur 1 viser et skema over lipidfodring ved hjælp af forskellige eksperimentelle indstillinger.
1. Fremstilling af lipidkonditionerede bakterier
<ol><li>Forbered baseopløsningen Bakteriel fortynding kostbegrænsning (BDR) ved at opløse 5,85 g NaCl, 1,0 g K 2 HPO 4og 6,0 g KH2PO4 (se Materialetabel) i 999 ml deioniseret vand. Juster pH til 6,0 med 0,5 M KOH, og filtrer derefter genn...

<ol>
	<li>Fahy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+of+the+LIPID+MAPS+comprehensive+classification+system+for+lipids+1.">Update of the LIPID MAPS comprehensive classification system for lipids 1.</a> Journal of Lipid Research. 50, 9-14 (2009).</li><li>Liebisch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+LIPID+MAPS+classification,+nomenclature,+and+shorthand+notation+for+MS-derived+lipid+structures.">Update on LIPID MAPS classification, nomenclature, and shorthand notation for MS-derived lipid structures.</a> Journal of Lipid Research. 61 (12), 1539-1555 (2020).</li><li>Mutlu, A. S., Duffy, J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+and+lipid+signals+in+aging+and+longevity.">Lipid metabolism and lipid signals in aging and longevity.</a> Developmental Cell. 56 (10), 1394-1407 (2021).</li><li>Kimura, T., Jennings, W., Epand, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+specific+lipid+species+in+the+cell+and+their+molecular+mechanism.">Roles of specific lipid species in the cell and their molecular mechanism.</a> Progress in Lipid Research. 62, 75-92 (2016).</li><li>Duffy, J., Mutlu, A. S., Wang, M. C., Olsen, A., Gill, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+Metabolism,+Lipid+Signalling+and+Longevity.">Lipid Metabolism, Lipid Signalling and Longevity.</a> Ageing: Lessons from C. elegans. Healthy Ageing and Longevity. , 307-329 (2017).</li><li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+chain+poly-unsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans.">Long chain poly-unsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> Journal of Cell Science. 116 (24), 4965-4975 (2003).</li><li>Folick, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+signaling+molecules+regulate+longevity+in+Caenorhabditis+elegans.">Lysosomal signaling molecules regulate longevity in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 347 (6217), 83-86 (2015).</li><li>Ramachandran, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+signaling+promotes+longevity+by+adjusting+mitochondrial+activity.">Lysosomal signaling promotes longevity by adjusting mitochondrial activity.</a> Developmental Cell. 48 (5), 685-696 (2019).</li><li>Byrne, E. F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+of+Smoothened+regulation+by+its+extracellular+domains.">Structural basis of Smoothened regulation by its extracellular domains.</a> Nature. 535 (7613), 517-522 (2016).</li><li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+window+into+biology:+a+primer+on+Caenorhabditis+elegans.">Transparent window into biology: a primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li><li>Nigon, V. M., F&#233;lix, M. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+research+on+C.+elegans+and+other+free-living+nematodes+as+model+organisms.">History of research on C. elegans and other free-living nematodes as model organisms.</a> WormBook. , 1-84 (2017).</li><li>Kutscher, L. M., Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+reverse+mutagenesis+in+C.+elegans.">Forward and reverse mutagenesis in C. elegans.</a> WormBook. , 1-26 (2014).</li><li>Brooks, K. K., Liang, B., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+bacterial+diet+on+fat+storage+in+C.+elegans.">The influence of bacterial diet on fat storage in C. elegans.</a> PloS ONE. 4 (10), 7545 (2009).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans.">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176 (2), 865-875 (2007).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans.">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PloS Genetics. 2 (7), 108 (2006).</li><li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiencies+in+C20+poly-unsaturated+fatty+acids+cause+behavioral+and+developmental+defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+mutants.">Deficiencies in C20 poly-unsaturated fatty acids cause behavioral and developmental defects in Caenorhabditis elegans fat-3 mutants.</a> Genetics. 163 (2), 581-589 (2003).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+poly-unsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans.">Genetic dissection of poly-unsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (9), 5854-5859 (2002).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoyl-CoA-specific+&#916;9+fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans.">Palmitoyl-CoA-specific &#916;9 fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 272 (1), 263-269 (2000).</li><li>Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+synthesis+and+adiposity+regulation+in+Caenorhabditis+elegans.">Fat synthesis and adiposity regulation in Caenorhabditis elegans.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 20 (2), 58-65 (2009).</li><li>Peyou-Ndi, M. M., Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+an+animal+&#916;12+fatty+acid+desaturase+gene+by+heterologous+expression+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Identification and characterization of an animal &#916;12 fatty acid desaturase gene by heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 376 (2), 399-408 (2000).</li><li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+animal+&#969;-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis.">Identification of an animal &#969;-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (4), 1142-1147 (1997).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+&#916;5-fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans.">Isolation and characterization of a &#916;5-fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 362 (1), 175-182 (1999).</li><li>Deline, M. L., Vrablik, T. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+supplementation+of+polyunsaturated+fatty+acids+in+Caenorhabditis+elegans.">Dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50879 (2013).</li><li>Estes, R. E., Lin, B., Khera, A., Davis, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+influence+on+neurodegenerative+disease+progression:+is+the+vehicle+as+important+as+the+cargo.">Lipid metabolism influence on neurodegenerative disease progression: is the vehicle as important as the cargo.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 788695 (2021).</li><li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids+and+cell+signaling.">Membrane lipids and cell signaling.</a> Current Opinion in Lipidology. 28 (5), 408-413 (2017).</li><li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mono-unsaturated+fatty+acids+link+H3K4me3+modifiers+to+C.+elegans+lifespan.">Mono-unsaturated fatty acids link H3K4me3 modifiers to C. elegans lifespan.</a> Nature. 544 (7649), 185-190 (2017).</li><li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#969;-6+Poly-unsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy.">&#969;-6 Poly-unsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes &amp; Development. 27 (4), 429-440 (2013).</li><li>Steinbaugh, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-mediated+regulation+of+SKN-1/Nrf+in+response+to+germ+cell+absence.">Lipid-mediated regulation of SKN-1/Nrf in response to germ cell absence.</a> eLife. 4, 07836 (2015).</li><li>Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SKN-1/Nrf,+stress+responses,+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans.">SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans.</a> Free Radical Biology and Medicine. 88, 290-301 (2015).</li><li>Ezzili, C., Otrubova, K., Boger, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+signaling+molecules.">Fatty acid amide signaling molecules.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 20 (20), 5959-5968 (2010).</li><li>Qi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+&#969;-3+fatty+acid+&#945;-linolenic+acid+extends+Caenorhabditis+elegans+lifespan+via+NHR-49/PPAR&#945;+and+oxidation+to+oxylipins.">The &#969;-3 fatty acid &#945;-linolenic acid extends Caenorhabditis elegans lifespan via NHR-49/PPAR&#945; and oxidation to oxylipins.</a> Aging Cell. 16 (5), 1125-1135 (2017).</li><li>Shemesh, N., Meshnik, L., Shpigel, N., Ben-Zvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary-induced+signals+that+activate+the+gonadal+longevity+pathway+during+development+regulate+a+proteostasis+switch+in+Caenorhabditis+elegans+adulthood.">Dietary-induced signals that activate the gonadal longevity pathway during development regulate a proteostasis switch in Caenorhabditis elegans adulthood.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 254 (2017).</li><li>Savini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosome+lipid+signalling+from+the+periphery+to+neurons+regulates+longevity.">Lysosome lipid signalling from the periphery to neurons regulates longevity.</a> Nature Cell Biology. 24 (6), 906-916 (2022).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , (2006).</li><li>Wang, M. C., O'Rourke, E. J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+metabolism+links+germline+stem+cells+and+longevity+in+C.+elegans.">Fat metabolism links germline stem cells and longevity in C. elegans.</a> Science. 322 (5903), 957-960 (2008).</li><li>Jacob, T. C., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EGL-21+carboxypeptidase+E+facilitates+acetylcholine+release+at+Caenorhabditis+elegans+neuromuscular+junctions.">The EGL-21 carboxypeptidase E facilitates acetylcholine release at Caenorhabditis elegans neuromuscular junctions.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (6), 2122-2130 (2003).</li><li>Kass, J., Jacob, T. C., Kim, P., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EGL-3+proprotein+convertase+regulates+mechanosensory+responses+of+Caenorhabditis+elegans.">The EGL-3 proprotein convertase regulates mechanosensory responses of Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (23), 9265-9272 (2001).</li><li>Bael, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+evidence+for+neuropeptide-amidating+enzymes+in+Caenorhabditis+elegans.">Mass spectrometric evidence for neuropeptide-amidating enzymes in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (16), 6052-6063 (2018).</li><li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li></ol>

Lipidtilskud har været ansat i aldringsforskning for at belyse den direkte virkning af visse lipidarter på sund aldring 6,7,23,26,27,31. Men, lipid tilskud procedure kan være udfordrende, og enhver inkonsekvens mellem eksperimenter kan forårsage ikke-reproducerbare resultater. Her dokumenteres den første detaljerede trin...

Lipider Lipider er små hydrofobe eller amfipatiske molekyler, der er opløselige i organiske opløsningsmidler, men uopløselige i vand 1,2. Forskellige lipidmolekyler adskiller sig fra hinanden baseret på antallet af carbonatomer indeholdt i deres kæder, placering, antal dobbeltbindinger og bundne strukturer, herunder glycerol eller fosfater. Lipider spiller afgørende roller inden for og på tværs af forskellige celler for at regulere organismefunktioner, herunder at udgøre membrandobbeltlag, tilvejebringe energilagring og fungere som signalmolekyler 3,4.
For det første er lipider strukturelle komponenter i biologiske membraner, herunder plasmamembranen og intracellulære subcellulære membraner, der adskiller de indre rum fra det ekstracellulære miljø. For det andet er lipider den vigtigste form for energilagring hos hvirveldyr og hvirvelløse dyr. Neutrale lipider, herunder triacylglyceroler, opbevares i en længere periode i forskellige væv, herunder i fedtvæv. I nematoden Caenorhabditis elegans er tarmen det vigtigste metaboliske fedtlagringsorgan; Dens funktion er ikke kun involveret i fordøjelse og absorption af næringsstoffer, men også i afgiftningsprocessen, der ligner aktiviteten af pattedyrs hepatocytter. Andre fedtopbevaringsvæv omfatter kimlinjen, hvor lipider er afgørende for udvikling af oocytter, og hypodermis, der består af hudlignende epidermale celler 3,5. For det tredje har flere beviser i de senere år antydet, at lipider er kraftige signalmolekyler involveret i intra- og ekstracellulær signalering ved direkte at virke på en række receptorer, herunder G-proteinkoblede og nukleare receptorer, eller indirekte via membranfluiditetsmodulation eller posttranslationelle modifikationer 6,7,8,9 . Yderligere undersøgelser vil fortsætte med at belyse de underliggende molekylære mekanismer for lipidsignalering til fremme af lang levetid og sundhed.
Modelorganismer er vigtige for at løse specifikke biologiske spørgsmål, der er for komplekse til at studere hos mennesker. For eksempel er rundorm C. elegans en fremragende model til gennemførelse af genetisk analyse for at dissekere biologiske processer, der er relevante for menneskelig ernæring og sygdom10. De højt bevarede molekylære veje, der er relevante for menneskelig fysiologi, komplekse væv, adfærdsmønstre og rigelige genetiske manipulationsværktøjer, gør C. elegans til en bemærkelsesværdig modelorganisme11. For eksempel er C. elegans fremragende til at videresende genetiske skærme til at identificere fænotypespecifikke gener såvel som i genom-dækkende omvendte genetiske skærme via RNA-interferens12.
I laboratorier dyrkes nematoderne på agar Petri-plader podet med en græsplæne af Escherichia coli-bakterier, der giver makronæringsstoffer som proteiner, kulhydrater og mættede og umættede fedtsyrer som energikilder og byggesten og mikronæringsstoffer såsom co-faktorer og vitaminer13. I lighed med pattedyr syntetiserer nematoder fedtsyremolekyler fra både palmitinsyre og stearinsyre (henholdsvis mættede 16-carbon- og 18-carbonmolekyler), der sekventielt desatureres og forlænges til en række mono-umættede fedtsyrer (MUFA'er) og flerumættede fedtsyrer (PUFA'er)14,15,16,17,18. Interessant nok er C. elegans i stand til de novo-syntese af alle de krævede fedtsyrer og kerneenzymer involveret i fedtsyrebiosyntese, desaturation og forlængelse, hvilket letter syntesen af langkædede PUFA'er19. Forskellig fra andre dyrearter kan C. elegans omdanne 18-carbon og 20-carbon ω-6 fedtsyrer til ω-3 fedtsyrer med sine egne ω-3 desaturase enzymer. Derudover har orme en Δ12 desaturase, der katalyserer dannelsen af linolsyre (LA) fra oliesyre (OA, 18: 1) 20,21. De fleste dyr eller planter mangler både Δ12 og ω-3 desaturaser og er derfor afhængige af diætindtagelse af ω-6 og ω-3 for at opnå deres PUFA'er, mens C. elegans ikke kræver diætfedtsyrer22. Isolerede mutanter, der mangler funktionelle desaturaseenzymer, er blevet brugt til at studere funktionerne af specifikke fedtsyrer i forskellige biologiske processer, herunder reproduktion, vækst, lang levetid og neurotransmission. Effekten af individuelle fedtsyrer på specifikke biologiske veje kan behandles ved hjælp af både en genetisk tilgang og kosttilskud16,17,23. Hidtil har lipidforskning fokuseret på at karakterisere gener involveret i lipidsyntese, nedbrydning, opbevaring og nedbrydning i neurologiske og udviklingsmæssige tilstande24. Imidlertid er lipidernes roller i levetidsregulering lige begyndt at blive afsløret.
Lipidsignalering i levetidsregulering Lipider spiller afgørende roller i levetidsregulering ved at aktivere cellulære signalkaskader i forskellige væv og celletyper. Nylige undersøgelser har fremhævet lipidernes aktive roller i modulerende transkription og cellecellekommunikation via lipidbindende proteiner eller genkendelse af membranreceptorer25. Derudover tilbyder diætlipidtilskud et glimrende værktøj til at dissekere, hvordan lipidmetabolisme påvirker levetiden i C. elegans. Forskellige MUFA'er og PUFA'er har vist sig at fremme lang levetid ved at aktivere transkriptionsfaktorer26,27.
Levetidsmodeller, herunder insulin / IGF-1-signalering og ablation af kimlinjeprækursorceller, er forbundet med MUFA-biosyntesevejen, og MUFA-tilskud, herunder oliesyre, palmitolsyre og cis-vaccensyre, er tilstrækkelig til at forlænge C. elegans levetid26. Selvom den levetidseffekt, der tildeles af MUFA-administrationen, kræver yderligere undersøgelse, vil den underliggende mekanisme sandsynligvis blive formidlet af SKN-1/Nrf2-transkriptionsfaktoren, som er en nøgleaktivator for oxidativ stressrespons og levetidsregulering28,29. Blandt MUFA'er spiller en bestemt klasse af fede acylethanolamider kaldet N-acylethanolaminer (NAE'er) afgørende roller i forskellige mekanismer, herunder inflammation, allergier, læring, hukommelse og energimetabolisme30. Især lipidmolekylet kendt som oleoylethanolamid (OEA) er blevet identificeret som en positiv regulator af lang levetid ved at fremme translokationen af det lipidbindende protein 8 (LBP-8) i kernen for at aktivere de nukleare hormonreceptorer NHR-49 og NHR-807. Tilskud af OEA-analogen KDS-5104 er tilstrækkelig til at forlænge levetiden og inducerer ekspression af gener involveret i oxidative stressresponser og mitokondrie β-oxidation 7,8.
Samtidig har PUFA'ernes rolle også været knyttet til regulering af levetiden. Administration af PUFA ω-3 fedtsyre α-linolensyre (ALA) fremmer levetiden ved at aktivere NHR-49/PPARα, SKN-1/NRF transkriptionsfaktorer og inducere mitokondrie β-oxidation31. Interessant nok aktiverer peroxiderede produkter af ALA, kaldet oxylipiner, SKN-1 / NRF, hvilket tyder på, at både PUFA'er og deres oxidative derivater kan give levetidsfordele23. Tilskud af ω-6 fedtsyre arachidonsyre (AA) og dihomo-γ-linolensyre (DGLA) forlænger levetiden via autofagiaktivering, hvilket fremmer proteinkvalitetskontrol og resulterer i nedbrydning af spildte og giftige proteinaggregater27,32. For nylig har en celle-ikke-autonom signalregulering medieret af det lipidbindende protein 3 (LBP-3) og DGLA vist sig at være afgørende for at fremme lang levetid ved at sende perifere signaler til neuroner, hvilket tyder på en langtrækkende rolle af lipidmolekyler i intervævskommunikation på systemiske niveauer33. Den nuværende undersøgelse rapporterer hvert trin til at udføre lipidtilskud med bakterier podet på plader eller bakteriel suspension i flydende kultur. Disse metoder bruges til at vurdere levetid og transkriptionel analyse, anvende hele kropsindhold eller dissekeret væv afledt af nogle få orme. Følgende teknikker kan tilpasses en række ernæringsmæssige undersøgelser og tilbyde et gyldigt værktøj til at dissekere, hvordan lipidmetabolisme påvirker lang levetid og sund aldring.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Pestle</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>93-165P15</td>
			<td>For worm grinding with Trizol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9639-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AmfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix</td>
			<td>GenDEPOT</td>
			<td>R5600</td>
			<td>For reverse transcription from bulk worm samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applied Biosystems QuanStudio 3 Real-Time PCR</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A28567</td>
			<td>For qRT-PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchmark Scientific StripSpin 12 Microcentrifuge</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>C1248</td>
			<td>For spin down PCR tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Branson 450 Digital Sonifier, w/ 1/8&#34; tip</td>
			<td>Branson Ultrasonic Corporation</td>
			<td>100-132-888R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8503-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5424 R centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22620444R</td>
			<td>For RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf vapo protect mastercycler pro</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>950030010</td>
			<td>For reverse transcription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, Absolute (200 Proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One CELLSTAR, 12 W Plate</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>665180</td>
			<td>12-well plates for licuid feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 100 x 20 mm</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>664161</td>
			<td>For bacterial LB plates and worm 10-cm NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 60 x 15 mm</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>628161</td>
			<td>For worm6-cm NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen nuclease-free water</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoproanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PX1835-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisole hydrochloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>SPCML1054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipl-4Tg</td>
			<td>MCW Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Transgenic C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipl-4Tg;fat-3(wa22)</td>
			<td>MCW Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Transgenic C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria Broth Base</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12795-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast Clear Reaction Plate with Barcode</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4483354</td>
			<td>96-well qPCR plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td>
			<td>Applied BioSystem</td>
			<td>4311971</td>
			<td>For sealing the 96-well qPCR plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Advantage A10 Water Purification System</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z00Q0V0WW</td>
			<td>Deionized water used to make all reagents, including buffer and cultural media, unless specified as nuclease-free water in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>C. elegans wild isolate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop ND-1000 Spectrophotometer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For measuring RNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP50</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Bacteria used as C. elegans food</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium phosphate dibasic trihydrate (K2HPO4&#183;3H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5504-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0662-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green cells-to-Ct kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4402953</td>
			<td>For reverse transcription and qPCR from a few worms or worm tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4367659</td>
			<td>For qPCR from bulk worm samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pure Bright germicidal ultra bleach&#160;</td>
			<td>KIK International LLC.</td>
			<td>59647210143</td>
			<td>6% house bleach For worm egg preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex spot plate with nine depressions</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS722085-18EA</td>
			<td>Watch glass for dissecting the worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium cloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SX0590-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic heptahydrate (Na2HPO4&#183;7H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9390-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Sorvall Legend Mach 1.6R Centrifuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>7500-4337</td>
			<td>For bacteria collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Sorvall ST 8 centrifuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>7500-7200</td>
			<td>For worm egg preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol Reagent</td>
			<td>TheroFisher</td>
			<td>15596018</td>
			<td>RNA extraction reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turbo DNA-free kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM1907</td>
			<td>For removing DNA contamination in RNA extractions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer 59</td>
			<td>Denville Scientific INV</td>
			<td>S7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Disposable Pellet Mixers and Cordless Motor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>47747-370</td>
			<td>For worm grinding with Trizol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Kinetic Energy 26 Joules Mini Centrifuge C1413 V-115</td>
			<td>VWR</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For worm collection. Discontinued model, a similar one available at VWR with Cat# 76269-064</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm picker</td>
			<td>WormStuff</td>
			<td>59-AWP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lipid supplementation for longevity and gene transcriptional analysis in caenorhabditis elegans

Aldring er en kompleks proces præget af progressive fysiologiske ændringer som følge af både miljømæssige og genetiske bidrag. Lipider er afgørende for at udgøre strukturelle komponenter i cellemembraner, lagre energi og som signalmolekyler. Regulering af lipidmetabolisme og signalering er afgørende for at aktivere forskellige levetidsveje. Rundorm Caenorhabditis elegans er en fremragende og kraftfuld organisme til at dissekere bidraget fra lipidmetabolisme og signalering i levetidsregulering. Flere forskningsundersøgelser har beskrevet, hvordan kosttilskud af specifikke lipidmolekyler kan forlænge C. elegans levetid; Men, mindre forskelle i tilskud betingelser kan forårsage reproducerbarhed spørgsmål blandt forskere i forskellige laboratorier. Her rapporteres to detaljerede tilskudsmetoder til C. elegans ved anvendelse af lipidtilskud enten med bakterier podet på plader eller bakteriel suspension i flydende kultur. Også heri er detaljerne til at udføre levetidsanalyser med livslang lipidtilskud og qRT-PCR-analyse ved hjælp af et helt ormlysatat eller dissekeret væv afledt af nogle få orme. Ved hjælp af en kombination af langsgående undersøgelser og transkriptionelle undersøgelser af lipidtilskud giver fodringsassays pålidelige tilgange til at dissekere, hvordan lipider påvirker levetid og sund aldring. Denne metode kan også tilpasses til forskellige ernæringsmæssige screeningsmetoder til vurdering af ændringer i en delmængde af transkripter ved hjælp af enten et lille antal dissekerede væv eller nogle få dyr.

Validering af transkriptionelle ændringer ved hjælp af et par hele orme ved lipidtilskud For at undersøge, om protokollen til ekstraktion og retrotransskribering af RNA til cDNA fra nogle få hele orme er reproducerbar og sammenlignelig med data fra bulkorme, blev en langlivet ormstamme, der overudtrykte lysosomalsyrelipasen lipl-4 i tarmen, anvendt 7,8,33,35. De...

Watch this Scientific Journal Video about Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

Den nuværende protokol beskriver lipidtilskudsmetoder i flydende og on-plate kulturer for Caenorhabditis elegans, kombineret med langsgående undersøgelser og gentranskriptionel analyse fra bulk eller nogle få orme og ormvæv.

Lipidtilskud til lang levetid og gentranskriptionel analyse i Caenorhabditis elegans

Aging is a complex process characterized by progressive physiological changes resulting from both environmental and genetic contributions. Lipids are ...

Denne protokol beskriver to lipidtilskudsstrategier med en kombination af langsgående og transkriptionel analyse i modelorganismen, C.elegans. Teknikken beskriver, hvordan man undersøger transkriptionelle ændringer ved hjælp af få orme eller dissekeret ormvæv, og hvordan væskefodring til en bugpopulation kan kombineres med hydroteknikker. Personer, der udfører denne teknik, skal øve vævsdissektion på grund af det korte tidsvindue til at udføre eksperimentet for at opnå tilstrækkelig transkriptionel analyse.Til at begynde med skal du indsamle OP50-bakterier ved centrifugering af den natten dyrkede kultur ved 4.000 G i 10 minutter ved stuetemperatur. Kassér supernatanten. Suspender bakteriepelleten i 20 ml bakteriel fortynding, diætbegrænsning eller BDR-base ved hvirveldannelse og gentag centrifugeringen igen i 10 minutter.Efter kassation af supernatanten suspenderes bakteriepelleten i BDR-mediet igen for at forberede en 20 X BDR-bakteriestamme. Fortynd bakteriestammen til 5X ved hjælp af et BDR-medium før brug. Brug ethanol eller dimethylsulfoxid som opløsningsmiddel til at forberede en lipidstamopløsning i et nyt autoklaveret glashætteglas og fyld hætteglasset med argon eller nitrogen for at forhindre oxidation.Overfør lipidstamopløsningen til BDR-bakterieopløsningen for at opnå den ønskede endelige koncentration under fodringsbetingelser. Bland det grundigt ved hvirvlning i 20 sekunder. Køretøjet forberedes ved at blande de samme mængder filtreret ethanol eller dimethylsulfoxid med BDR-bakterier.Udfør lipidtilskud og væskekultur ved at overføre den ønskede mængde lipid eller køretøjskontrol til hver brønd i en 12 brøndplade med tre til fire replikater for hver fodringstilstand. Bland den synkroniserede Caenorrhabditis elegans ormsuspension med 5X BDR-bakterier i et en-til-en-forhold for at opnå en endelig koncentration på 1.500 orme pr. milliliter og 2,5X for bakterier. Overfør derefter to milliliter af ormbakterieblandingen til hver brønd i 12-brøndpladen.Når du er færdig, pakk 12-brøndpladen med folie og ryst pladen i en 20 graders Celsius-inkubator ved 100 RPMM for den ønskede inkubationslængde. Til lipidtilskud på plader, frø en milliliter af lipidkonditionerede bakterier på midten af et 10 centimeter nematodevækstmedium eller NGM agarplade. Sørg for, at den endelige arbejdsløsning er hvirvlet flere gange mellem såning af de to plader, når du arbejder med et stort antal plader.Tør pladen i mørke inde i en biosikkerhedshætte. Overfør 3000 orme fra den synkroniserede ormkultur til 10 centimeter pladen. Tør pladen i en biosikkerhedshætte, indtil orme, der svømmede på lipidsupplerede plader, begynder at kravle.Når den er tørret, inkuberes den lipidkonditionerede plade i en 20 grader Celsius inkubator i den ønskede tid, og hvis du bruger flerumættede lipider, beskytter pladen mod lys. Der fremstilles 20 mikroliter endelig lyseopløsning for hver prøve ved at blande 0,2 mikroliter DNase I med 19,8 mikroliter lysisopløsning i et PCR-rør og bland det godt ved at pipettere op og ned fem gange. For at ekstrahere RNA'et fra det lille antal hele orme skal du fjerne bakterierne ved at overføre 15 til 20 orme fra bakterieplænen til en frisk useedet NGM-plade.Overfør 15 til 20 orme fra den useedede NGM-plade til PCR-røret indeholdende 20 mikroliter af den frisklavede endelige lysisopløsning med det mindste antal bakterier, og inkuber lysisreaktionen i fem minutter ved stuetemperatur. Når inkubationen er overstået, skal du holde prøven i et dejligt koldt vandbad og sonde sonikere ormene fire gange, fem sekunder hver gang med 30% amplitude og puls i 15 sekunder mellem hver sonikeringstid. Inkuber røret ved stuetemperatur i fem minutter, før der tilsættes to mikroliter stopopløsning i lysisreaktionen, og bland det ved blid tapning.Inkuber reaktionen i to minutter ved stuetemperatur og sæt derefter røret på is. For at ekstrahere RNA fra ormevævet skal du plukke omkring 20 orme fra bakterieplænen og placere dem i en frisk useedet NGM-plade for at fjerne bakterierne fra ormene. Overfør 20 orme med så få bakterier som muligt til et urglas indeholdende 500 mikroliter M9-opløsning indeholdende fire mikromolære levamisol.Når ormene er immobiliseret, dissekeres kimlinjen eller tarmen ved hjælp af en 25 gauge nål, der kan fastgøres til en milliliter sprøjte. Ved hjælp af en autoklaveret glaspipette overføres det dissekerede væv til PCR-røret og sætter røret på is i to minutter, hvilket tillader aflejring af materialet i bunden. Fjern supernatanten fra PCR-røret, inden du tilsætter 20 mikroliter endelig lyseopløsning, og bland den godt ved at tappe.Efter inkubation af lysisreaktionen i fem minutter tilsættes to mikroliter stopopløsning og tapper røret flere gange. Inkuber røret i to minutter, før du fortsætter til omvendt transkription. I valideringsundersøgelsen viste RNA ekstraheret fra en stor population og nogle få orme lignende induktion af neuropeptidbehandlingsgenerne, egl-3 og egl-21.Det tyder på, at RNA-ekstraktionen fra nogle få orme kan være et gyldigt alternativ til standard CDNA-synteseteknikker fra store populationer. I den dissekerede tarm af lipl-4 transgene orme, suppleret med dihomo-gamma-linolensyre eller DGLA, blev de neuronale neuropeptidbehandlingsgener ikke induceret. DGLA tilskud i forskellige koncentrationer reddede levetidsforlængelse i ormene ved fedt-3 knockdown.Orme med lipidtilskud kan også behandles til RNA-sekventering, proteomik, metabolomics og adfærdsmæssige undersøgelser for at identificere yderligere fænotyper under disse specifikke forhold. Denne metode kan anvendes til aldringsforskning, lipidbiologi og ethvert andet forskningsområde, der sigter mod at etablere et forhold mellem en bestemt fænotype og en ernæringsmæssig faktor eller metabolit.

Research

JoVE Journal

Biology

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Grundlæggende<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Metoder: Synkronisering og Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Udvinding og Analyse i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Kosttilskud af polyumættede fedtsyrer i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Fatty acids are essential for numerous cellular functions. They serve as efficient energy storage molecules, make up the hydrophobic core of membranes, ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Metoder til undersøgelse ændringer i iboende Protein sammenlægning med alder i Caenorhabditis elegans

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Kvantificering af Lipid overflod og evaluering af Lipid Distribution i Caenorhabditis elegans af Nilen rød og olie røde O farvning

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Kombinerede nukleotid og Protein ekstraktioner i Caenorhabditis elegans

A single biological sample holds a plethora of information, and it is now common practice to simultaneously investigate several macromolecules to capture ...

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

Rensning og analyse af Caenorhabditis elegans Ekstracellulære Vesicles

The secretion of small membrane-bound vesicles into the external environment is a fundamental physiological process of all cells. These extracellular ...

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

Modellering Alders-associerede neurodegenerative sygdomme i Caenorhabditis elegans

Battling human neurodegenerative pathologies and managing their pervasive socioeconomic impact is becoming a global priority. Notwithstanding their ...