Name: lipid supplementation for longevity and gene transcriptional analysis in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-12-09T13:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

हम रखरखाव समर्थन के लिए पी स्वाय को धन्यवाद देते हैं। इस कार्य को एनआईएच अनुदान R01AG045183 (MCW), R01AT009050 (MCW), R01AG062257 (MCW), DP1DK113644 (MCW), मार्च ऑफ डाइम्स फाउंडेशन (MCW), वेल्च फाउंडेशन (MCW), HHMI अन्वेषक (M.C.W.), और NIH T32 ES027801 प्री-डॉक्टरेट छात्र फेलो (M.S.) द्वारा समर्थित किया गया था। कुछ उपभेदों को सीजीसी द्वारा प्रदान किया गया था, जिसे एनआईएच ऑफिस ऑफ रिसर्च इंफ्रास्ट्रक्चर प्रोग्राम्स (पी 40 ओडी010440) द्वारा वित्त पोषित किया गया है।

चित्रा 1 विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग्स का उपयोग करके लिपिड फीडिंग के एक योजनाबद्ध को दर्शाता है।
1. लिपिड-वातानुकूलित बैक्टीरिया की तैयारी
<ol><li>999 एमएल विआयनीकृत पानी में 5.85 ग?...

<ol>
	<li>Fahy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+of+the+LIPID+MAPS+comprehensive+classification+system+for+lipids+1.">Update of the LIPID MAPS comprehensive classification system for lipids 1.</a> Journal of Lipid Research. 50, 9-14 (2009).</li><li>Liebisch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+LIPID+MAPS+classification,+nomenclature,+and+shorthand+notation+for+MS-derived+lipid+structures.">Update on LIPID MAPS classification, nomenclature, and shorthand notation for MS-derived lipid structures.</a> Journal of Lipid Research. 61 (12), 1539-1555 (2020).</li><li>Mutlu, A. S., Duffy, J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+and+lipid+signals+in+aging+and+longevity.">Lipid metabolism and lipid signals in aging and longevity.</a> Developmental Cell. 56 (10), 1394-1407 (2021).</li><li>Kimura, T., Jennings, W., Epand, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+specific+lipid+species+in+the+cell+and+their+molecular+mechanism.">Roles of specific lipid species in the cell and their molecular mechanism.</a> Progress in Lipid Research. 62, 75-92 (2016).</li><li>Duffy, J., Mutlu, A. S., Wang, M. C., Olsen, A., Gill, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+Metabolism,+Lipid+Signalling+and+Longevity.">Lipid Metabolism, Lipid Signalling and Longevity.</a> Ageing: Lessons from C. elegans. Healthy Ageing and Longevity. , 307-329 (2017).</li><li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+chain+poly-unsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans.">Long chain poly-unsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> Journal of Cell Science. 116 (24), 4965-4975 (2003).</li><li>Folick, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+signaling+molecules+regulate+longevity+in+Caenorhabditis+elegans.">Lysosomal signaling molecules regulate longevity in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 347 (6217), 83-86 (2015).</li><li>Ramachandran, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+signaling+promotes+longevity+by+adjusting+mitochondrial+activity.">Lysosomal signaling promotes longevity by adjusting mitochondrial activity.</a> Developmental Cell. 48 (5), 685-696 (2019).</li><li>Byrne, E. F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+of+Smoothened+regulation+by+its+extracellular+domains.">Structural basis of Smoothened regulation by its extracellular domains.</a> Nature. 535 (7613), 517-522 (2016).</li><li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+window+into+biology:+a+primer+on+Caenorhabditis+elegans.">Transparent window into biology: a primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li><li>Nigon, V. M., F&#233;lix, M. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+research+on+C.+elegans+and+other+free-living+nematodes+as+model+organisms.">History of research on C. elegans and other free-living nematodes as model organisms.</a> WormBook. , 1-84 (2017).</li><li>Kutscher, L. M., Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+reverse+mutagenesis+in+C.+elegans.">Forward and reverse mutagenesis in C. elegans.</a> WormBook. , 1-26 (2014).</li><li>Brooks, K. K., Liang, B., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+bacterial+diet+on+fat+storage+in+C.+elegans.">The influence of bacterial diet on fat storage in C. elegans.</a> PloS ONE. 4 (10), 7545 (2009).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans.">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176 (2), 865-875 (2007).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans.">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PloS Genetics. 2 (7), 108 (2006).</li><li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiencies+in+C20+poly-unsaturated+fatty+acids+cause+behavioral+and+developmental+defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+mutants.">Deficiencies in C20 poly-unsaturated fatty acids cause behavioral and developmental defects in Caenorhabditis elegans fat-3 mutants.</a> Genetics. 163 (2), 581-589 (2003).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+poly-unsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans.">Genetic dissection of poly-unsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (9), 5854-5859 (2002).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoyl-CoA-specific+&#916;9+fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans.">Palmitoyl-CoA-specific &#916;9 fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 272 (1), 263-269 (2000).</li><li>Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+synthesis+and+adiposity+regulation+in+Caenorhabditis+elegans.">Fat synthesis and adiposity regulation in Caenorhabditis elegans.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 20 (2), 58-65 (2009).</li><li>Peyou-Ndi, M. M., Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+an+animal+&#916;12+fatty+acid+desaturase+gene+by+heterologous+expression+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Identification and characterization of an animal &#916;12 fatty acid desaturase gene by heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 376 (2), 399-408 (2000).</li><li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+animal+&#969;-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis.">Identification of an animal &#969;-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (4), 1142-1147 (1997).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+&#916;5-fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans.">Isolation and characterization of a &#916;5-fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 362 (1), 175-182 (1999).</li><li>Deline, M. L., Vrablik, T. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+supplementation+of+polyunsaturated+fatty+acids+in+Caenorhabditis+elegans.">Dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50879 (2013).</li><li>Estes, R. E., Lin, B., Khera, A., Davis, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+influence+on+neurodegenerative+disease+progression:+is+the+vehicle+as+important+as+the+cargo.">Lipid metabolism influence on neurodegenerative disease progression: is the vehicle as important as the cargo.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 788695 (2021).</li><li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids+and+cell+signaling.">Membrane lipids and cell signaling.</a> Current Opinion in Lipidology. 28 (5), 408-413 (2017).</li><li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mono-unsaturated+fatty+acids+link+H3K4me3+modifiers+to+C.+elegans+lifespan.">Mono-unsaturated fatty acids link H3K4me3 modifiers to C. elegans lifespan.</a> Nature. 544 (7649), 185-190 (2017).</li><li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#969;-6+Poly-unsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy.">&#969;-6 Poly-unsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes &amp; Development. 27 (4), 429-440 (2013).</li><li>Steinbaugh, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-mediated+regulation+of+SKN-1/Nrf+in+response+to+germ+cell+absence.">Lipid-mediated regulation of SKN-1/Nrf in response to germ cell absence.</a> eLife. 4, 07836 (2015).</li><li>Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SKN-1/Nrf,+stress+responses,+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans.">SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans.</a> Free Radical Biology and Medicine. 88, 290-301 (2015).</li><li>Ezzili, C., Otrubova, K., Boger, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+signaling+molecules.">Fatty acid amide signaling molecules.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 20 (20), 5959-5968 (2010).</li><li>Qi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+&#969;-3+fatty+acid+&#945;-linolenic+acid+extends+Caenorhabditis+elegans+lifespan+via+NHR-49/PPAR&#945;+and+oxidation+to+oxylipins.">The &#969;-3 fatty acid &#945;-linolenic acid extends Caenorhabditis elegans lifespan via NHR-49/PPAR&#945; and oxidation to oxylipins.</a> Aging Cell. 16 (5), 1125-1135 (2017).</li><li>Shemesh, N., Meshnik, L., Shpigel, N., Ben-Zvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary-induced+signals+that+activate+the+gonadal+longevity+pathway+during+development+regulate+a+proteostasis+switch+in+Caenorhabditis+elegans+adulthood.">Dietary-induced signals that activate the gonadal longevity pathway during development regulate a proteostasis switch in Caenorhabditis elegans adulthood.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 254 (2017).</li><li>Savini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosome+lipid+signalling+from+the+periphery+to+neurons+regulates+longevity.">Lysosome lipid signalling from the periphery to neurons regulates longevity.</a> Nature Cell Biology. 24 (6), 906-916 (2022).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , (2006).</li><li>Wang, M. C., O'Rourke, E. J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+metabolism+links+germline+stem+cells+and+longevity+in+C.+elegans.">Fat metabolism links germline stem cells and longevity in C. elegans.</a> Science. 322 (5903), 957-960 (2008).</li><li>Jacob, T. C., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EGL-21+carboxypeptidase+E+facilitates+acetylcholine+release+at+Caenorhabditis+elegans+neuromuscular+junctions.">The EGL-21 carboxypeptidase E facilitates acetylcholine release at Caenorhabditis elegans neuromuscular junctions.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (6), 2122-2130 (2003).</li><li>Kass, J., Jacob, T. C., Kim, P., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EGL-3+proprotein+convertase+regulates+mechanosensory+responses+of+Caenorhabditis+elegans.">The EGL-3 proprotein convertase regulates mechanosensory responses of Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (23), 9265-9272 (2001).</li><li>Bael, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+evidence+for+neuropeptide-amidating+enzymes+in+Caenorhabditis+elegans.">Mass spectrometric evidence for neuropeptide-amidating enzymes in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (16), 6052-6063 (2018).</li><li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li></ol>

स्वस्थ उम्र बढ़ने पर कुछ लिपिड प्रजातियों के प्रत्यक्ष प्रभाव को स्पष्ट करने के लिए उम्र बढ़ने के अनुसंधान में लिपिड पूरकता को नियोजित किया गया है 6,7,23,26,27,31।<sup class="xref...

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Pestle</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>93-165P15</td>
			<td>For worm grinding with Trizol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9639-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AmfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix</td>
			<td>GenDEPOT</td>
			<td>R5600</td>
			<td>For reverse transcription from bulk worm samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applied Biosystems QuanStudio 3 Real-Time PCR</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A28567</td>
			<td>For qRT-PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchmark Scientific StripSpin 12 Microcentrifuge</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>C1248</td>
			<td>For spin down PCR tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Branson 450 Digital Sonifier, w/ 1/8&#34; tip</td>
			<td>Branson Ultrasonic Corporation</td>
			<td>100-132-888R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8503-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5424 R centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22620444R</td>
			<td>For RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf vapo protect mastercycler pro</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>950030010</td>
			<td>For reverse transcription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, Absolute (200 Proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One CELLSTAR, 12 W Plate</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>665180</td>
			<td>12-well plates for licuid feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 100 x 20 mm</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>664161</td>
			<td>For bacterial LB plates and worm 10-cm NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 60 x 15 mm</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>628161</td>
			<td>For worm6-cm NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen nuclease-free water</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoproanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PX1835-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisole hydrochloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>SPCML1054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipl-4Tg</td>
			<td>MCW Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Transgenic C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipl-4Tg;fat-3(wa22)</td>
			<td>MCW Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Transgenic C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria Broth Base</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12795-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast Clear Reaction Plate with Barcode</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4483354</td>
			<td>96-well qPCR plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td>
			<td>Applied BioSystem</td>
			<td>4311971</td>
			<td>For sealing the 96-well qPCR plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Advantage A10 Water Purification System</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z00Q0V0WW</td>
			<td>Deionized water used to make all reagents, including buffer and cultural media, unless specified as nuclease-free water in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>C. elegans wild isolate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop ND-1000 Spectrophotometer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For measuring RNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP50</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Bacteria used as C. elegans food</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium phosphate dibasic trihydrate (K2HPO4&#183;3H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5504-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0662-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green cells-to-Ct kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4402953</td>
			<td>For reverse transcription and qPCR from a few worms or worm tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4367659</td>
			<td>For qPCR from bulk worm samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pure Bright germicidal ultra bleach&#160;</td>
			<td>KIK International LLC.</td>
			<td>59647210143</td>
			<td>6% house bleach For worm egg preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex spot plate with nine depressions</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS722085-18EA</td>
			<td>Watch glass for dissecting the worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium cloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SX0590-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic heptahydrate (Na2HPO4&#183;7H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9390-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Sorvall Legend Mach 1.6R Centrifuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>7500-4337</td>
			<td>For bacteria collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Sorvall ST 8 centrifuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>7500-7200</td>
			<td>For worm egg preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol Reagent</td>
			<td>TheroFisher</td>
			<td>15596018</td>
			<td>RNA extraction reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turbo DNA-free kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM1907</td>
			<td>For removing DNA contamination in RNA extractions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer 59</td>
			<td>Denville Scientific INV</td>
			<td>S7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Disposable Pellet Mixers and Cordless Motor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>47747-370</td>
			<td>For worm grinding with Trizol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Kinetic Energy 26 Joules Mini Centrifuge C1413 V-115</td>
			<td>VWR</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For worm collection. Discontinued model, a similar one available at VWR with Cat# 76269-064</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm picker</td>
			<td>WormStuff</td>
			<td>59-AWP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lipid supplementation for longevity and gene transcriptional analysis in caenorhabditis elegans

उम्र बढ़ने एक जटिल प्रक्रिया है जो पर्यावरण और आनुवंशिक योगदान दोनों के परिणामस्वरूप प्रगतिशील शारीरिक परिवर्तनों की विशेषता है। लिपिड कोशिका झिल्ली के संरचनात्मक घटकों के गठन, ऊर्जा भंडारण और सिग्नलिंग अणुओं के रूप में महत्वपूर्ण हैं। लिपिड चयापचय और सिग्नलिंग का विनियमन अलग-अलग दीर्घायु मार्गों को सक्रिय करने के लिए आवश्यक है। राउंडवर्म केनोरहाब्डिस एलिगेंस एक उत्कृष्ट और शक्तिशाली जीव है जो दीर्घायु विनियमन में लिपिड चयापचय और सिग्नलिंग के योगदान को विच्छेदित करता है। कई शोध अध्ययनों ने वर्णन किया है कि विशिष्ट लिपिड अणुओं के आहार पूरक सी एलिगेंस जीवनकाल का विस्तार कैसे कर सकते हैं; हालांकि, पूरक स्थितियों में मामूली अंतर विभिन्न प्रयोगशालाओं में वैज्ञानिकों के बीच प्रजनन क्षमता के मुद्दों का कारण बन सकता है। एलिगेंस के लिए दो विस्तृत पूरक विधियों को लिपिड पूरकता का उपयोग करने की सूचना दी गई है या तो प्लेटों पर बीजित बैक्टीरिया या तरल संस्कृति में जीवाणु निलंबन के साथ। यहां आजीवन लिपिड पूरकता और क्यूआरटी-पीसीआर विश्लेषण के साथ जीवनकाल परख करने के लिए विवरण भी दिए गए हैं, जो कुछ कीड़े से प्राप्त पूरे कीड़े लाइसेट या विच्छेदित ऊतकों का उपयोग करते हैं। लिपिड पूरकता पर अनुदैर्ध्य अध्ययन और ट्रांसक्रिप्शनल जांच के संयोजन का उपयोग करते हुए, फीडिंग परख यह विच्छेदन करने के लिए भरोसेमंद दृष्टिकोण प्रदान करते हैं कि लिपिड दीर्घायु और स्वस्थ उम्र बढ़ने को कैसे प्रभावित करते हैं। इस पद्धति को विभिन्न पोषण संबंधी स्क्रीनिंग दृष्टिकोणों के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है ताकि या तो विच्छेदित ऊतकों या कुछ जानवरों की एक छोटी संख्या का उपयोग करके प्रतिलिपियों के उप-समूह में परिवर्तन का आकलन किया जा सके।

लिपिड पूरकता पर कुछ पूरे कीड़े का उपयोग करके ट्रांसक्रिप्शनल परिवर्तनों का सत्यापन यह जांचने के लिए कि क्या कुछ पूरे कीड़े से सीडीएनए में आरएनए निकालने और रेट्रोट्रांसक्राइब करने का प्रोटोक?...

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Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

वर्तमान प्रोटोकॉल केनोरहाब्डिस एलिगेंस के लिए तरल और ऑन-प्लेट संस्कृतियों में लिपिड पूरक विधियों का वर्णन करता है, जो थोक या कुछ कीड़े और कृमि ऊतकों से अनुदैर्ध्य अध्ययन और जीन ट्रांसक्रिप्शनल विश्लेषण के साथ युग्मित है।

केनोरहाब्डिस एलिगेंस में दीर्घायु और जीन ट्रांसक्रिप्शनल विश्लेषण के लिए लिपिड पूरकता

Aging is a complex process characterized by progressive physiological changes resulting from both environmental and genetic contributions. Lipids are ...

यह प्रोटोकॉल मॉडल जीव, सी.एलिगेंस में अनुदैर्ध्य और ट्रांसक्रिप्शनल विश्लेषण के संयोजन के साथ दो लिपिड पूरक रणनीतियों का वर्णन करता है। तकनीक बताती है कि कुछ कीड़े या विच्छेदित कृमि ऊतकों का उपयोग करके ट्रांसक्रिप्शनल परिवर्तनों की जांच कैसे करें और बग आबादी के लिए तरल भोजन को हाइड्रो तकनीकों के साथ कैसे जोड़ा जा सकता है। इस तकनीक को करने वाले व्यक्तियों को पर्याप्त ट्रांसक्रिप्शनल विश्लेषण प्राप्त करने के लिए प्रयोग करने के लिए कम समय की खिड़की के कारण ऊतक विच्छेदन का अभ्यास करना चाहिए।शुरू करने के लिए, कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए 4,000 जी पर रात भर विकसित संस्कृति को सेंट्रीफ्यूज करके ओपी 50 बैक्टीरिया एकत्र करें। सतह पर तैरने वाले को त्याग दें। बैक्टीरिया के छर्रों को 20 मिलीलीटर में बैक्टीरिया कमजोर पड़ने, आहार प्रतिबंध या बीडीआर बेस में भंवर द्वारा निलंबित करें और फिर से, सेंट्रीफ्यूजेशन को 10 मिनट के लिए दोहराएं।सुपरनैटेंट को छोड़ने के बाद, 20 एक्स बीडीआर बैक्टीरियल स्टॉक तैयार करने के लिए बीडीआर माध्यम में बैक्टीरियल पेलेट को फिर से निलंबित करें। उपयोग से पहले बीडीआर माध्यम का उपयोग करके बैक्टीरिया स्टॉक को 5 एक्स तक पतला करें। विलायक के रूप में इथेनॉल या डाइमिथाइल सल्फोक्साइड का उपयोग करके, एक नई आटोक्लेव ग्लास शीशी में एक लिपिड स्टॉक समाधान तैयार करें और ऑक्सीकरण को रोकने के लिए ग्लास शीशी को आर्गन या नाइट्रोजन से भरें।फीडिंग स्थितियों में वांछित अंतिम एकाग्रता प्राप्त करने के लिए लिपिड स्टॉक समाधान को बीडीआर बैक्टीरिया समाधान में स्थानांतरित करें। इसे 20 सेकंड के लिए भंवर द्वारा अच्छी तरह से मिलाएं। फ़िल्टर किए गए इथेनॉल या डाइमिथाइल सल्फोक्साइड की समान मात्रा को बीडीआर बैक्टीरिया के साथ मिलाकर नियंत्रित वाहन तैयार करें।प्रत्येक भोजन की स्थिति के लिए तीन से चार प्रतिकृतियों के साथ 12 वेल प्लेट के प्रत्येक कुएं में लिपिड या वाहन नियंत्रण की वांछित मात्रा को स्थानांतरित करके लिपिड पूरकता और तरल संस्कृति का प्रदर्शन करें। बैक्टीरिया के लिए 1,500 कीड़े प्रति मिलीलीटर और 2.5 एक्स की अंतिम एकाग्रता प्राप्त करने के लिए एक-से-एक अनुपात में 5एक्स बीडीआर बैक्टीरिया के साथ सिंक्रनाइज़ किए गए केनोरहाब्डिस एलिगेंस वर्म निलंबन को मिलाएं। फिर 12 वेल प्लेट के प्रत्येक कुएं में दो मिलीलीटर कृमि बैक्टीरिया मिश्रण स्थानांतरित करें।जब यह पूरा हो जाता है तो पन्नी के साथ 12 वेल प्लेट लपेटें और वांछित इनक्यूबेशन लंबाई के लिए 100 आरपीएमएम पर 20 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में प्लेट को हिलाएं। प्लेटों पर लिपिड पूरकता के लिए, 10 सेंटीमीटर नेमाटोड विकास माध्यम या एनजीएम एगर प्लेट के केंद्र पर लिपिड वातानुकूलित बैक्टीरिया का एक मिलीलीटर बीज। सुनिश्चित करें कि प्लेटों की उच्च संख्या के साथ काम करते समय दो प्लेटों को सीड करने के बीच अंतिम कार्यशील समाधान कई बार भंवर होता है।एक जैव सुरक्षा हुड के अंदर अंधेरे में प्लेट को सुखाएं। सिंक्रनाइज़ किए गए कृमि संस्कृति से 10 सेंटीमीटर प्लेट में 3000 कीड़े स्थानांतरित करें। प्लेट को बायोसेफ्टी हुड में सुखाएं जब तक कि लिपिड पूरक प्लेटों पर तैरने वाले कीड़े रेंगना शुरू न कर दें।एक बार सूखने के बाद, लिपिड वातानुकूलित प्लेट को वांछित लंबाई के लिए 20 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में इनक्यूबेट करें और यदि पॉलीअनसेचुरेटेड लिपिड का उपयोग करके प्लेट को प्रकाश से बचाते हैं। पीसीआर ट्यूब में लाइसिस समाधान के 19.8 माइक्रोलीटर के साथ DNase I के 0.2 माइक्रोलीटर मिलाकर प्रत्येक नमूने के लिए अंतिम लाइसिस समाधान के 20 माइक्रोलीटर तैयार करें और इसे पांच बार ऊपर और नीचे करके अच्छी तरह से मिलाएं। पूरे कीड़े की छोटी संख्या से आरएनए निकालने के लिए, बैक्टीरियल लॉन से 15 से 20 कीड़े को ताजा बिना बीज वाली एनजीएम प्लेट में स्थानांतरित करके बैक्टीरिया को हटा दें।15 से 20 कीड़े को गैर-बीजित एनजीएम प्लेट से पीसीआर ट्यूब में स्थानांतरित करें जिसमें बैक्टीरिया की न्यूनतम संख्या के साथ ताजा तैयार अंतिम लाइसिस समाधान के 20 माइक्रोलीटर होते हैं और कमरे के तापमान पर पांच मिनट के लिए लाइसिस प्रतिक्रिया को इनक्यूबेट करते हैं। एक बार इनक्यूबेशन समाप्त हो जाने के बाद, नमूने को एक अच्छे ठंडे पानी के स्नान में रखें और कीड़े को चार बार, हर बार पांच सेकंड 30% आयाम के साथ और पल्स को सोनिकेशन के प्रत्येक समय के बीच 15 सेकंड के लिए जांचें। लाइसिस प्रतिक्रिया में स्टॉप समाधान के दो माइक्रोलीटर जोड़ने से पहले ट्यूब को पांच मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें और इसे सौम्य टैपिंग द्वारा मिलाएं।कमरे के तापमान पर दो मिनट के लिए प्रतिक्रिया को इनक्यूबेट करें और फिर ट्यूब को बर्फ पर सेट करें। कृमि ऊतक से आरएनए निकालने के लिए, बैक्टीरिया लॉन से लगभग 20 कीड़े चुनें और उन्हें कीड़े से बैक्टीरिया को हटाने के लिए एक ताजा गैर-बीज वाले एनजीएम प्लेट में रखें। जितना संभव हो उतने कम बैक्टीरिया वाले 20 कीड़े को एक घड़ी ग्लास में स्थानांतरित करें जिसमें एम 9 समाधान के 500 माइक्रोलीटर होते हैं जिसमें चार माइक्रोमोलर लेवैमिसोल होते हैं।जब कीड़े स्थिर हो जाते हैं, तो 25 गेज सुई का उपयोग करके जर्मलाइन या आंत को विच्छेदित करें जिसे एक मिलीलीटर सिरिंज से जोड़ा जा सकता है। एक आटोक्लेव ग्लास पिपेट का उपयोग करके, विच्छेदित ऊतकों को पीसीआर ट्यूब में स्थानांतरित करें और ट्यूब को बर्फ पर दो मिनट के लिए व्यवस्थित करें जिससे नीचे सामग्री का जमाव हो सके। अंतिम लाइसिस समाधान के 20 माइक्रोलीटर जोड़ने से पहले पीसीआर ट्यूब से सुपरनैटेंट को हटा दें और टैप करके इसे अच्छी तरह से मिलाएं।पांच मिनट के लिए लाइसिस प्रतिक्रिया को इंजेक्ट करने के बाद, स्टॉप समाधान के दो माइक्रोलीटर जोड़ें और ट्यूब को कई बार टैप करें। रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पर आगे बढ़ने से पहले ट्यूब को दो मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। सत्यापन अध्ययन में, एक बड़ी आबादी और कुछ कीड़े से निकाले गए आरएनए ने न्यूरोपैप्टाइड प्रोसेसिंग जीन, ईजीएल -3 और ईजीएल -21 के समान प्रेरण दिखाया।यह बताता है कि कुछ कीड़े से आरएनए निष्कर्षण बड़ी आबादी से मानक सीडीएनए संश्लेषण तकनीकों का एक वैध विकल्प हो सकता है। लिप -4 ट्रांसजीन कीड़े की विच्छेदित आंत में, डिहोमो-गामा-लिनोलेनिक एसिड, या डीजीएलए के साथ पूरक, न्यूरोनल न्यूरोपैप्टाइड प्रसंस्करण जीन प्रेरित नहीं थे। विभिन्न सांद्रता में डीजीएलए पूरकता ने वसा -3 वध पर कीड़े में जीवनकाल विस्तार को बचाया।लिपिड पूरकता वाले कीड़े को इन विशिष्ट स्थितियों के तहत अतिरिक्त फेनोटाइप की पहचान करने के लिए आरएनए अनुक्रमण, प्रोटिओमिक्स, मेटाबोलॉमिक्स और व्यवहार अध्ययन के लिए भी संसाधित किया जा सकता है। इस पद्धति को उम्र बढ़ने के अनुसंधान, लिपिड जीव विज्ञान और किसी अन्य शोध क्षेत्र पर लागू किया जा सकता है जिसका उद्देश्य एक निश्चित फेनोटाइप और पोषण कारक या मेटाबोलाइट के बीच संबंध स्थापित करना है।

Research

JoVE Journal

Biology

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

अलगाव और इन विट्रो में सक्रियकरण Caenorhabditis एलिगेंस शुक्राणु

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

समय चूक प्रारंभिक Embryogenesis में माइक्रोस्कोपी Caenorhabditis एलिगेंस

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

बुनियादी<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em&gt; तरीके तुल्यकालन और निरीक्षण:

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

में प्रोस्टाग्लैंडीन निष्कर्षण और विश्लेषण<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

में पॉलीअनसेचुरेटेड फैटी एसिड की आहार अनुपूरण<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em

Fatty acids are essential for numerous cellular functions. They serve as efficient energy storage molecules, make up the hydrophobic core of membranes, ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis एलिगेंस में आयु के साथ अंतर्निहित प्रोटीन एकत्रीकरण में परिवर्तन का अध्ययन करने के लिए विधियाँ

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

ठहराव लिपिड बहुतायत और लिपिड वितरण के मूल्यांकन में Caenorhabditis एलिगेंस द्वारा नील लाल और तेल लाल ओ धुंधला

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

कैनोहैबडिटिस एलिगेंस में संयुक्त न्यूक्लियोटाइड और प्रोटीन निष्कर्षण

A single biological sample holds a plethora of information, and it is now common practice to simultaneously investigate several macromolecules to capture ...

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

कैनोरहैब्डिटिस एलिगेंस एक्सिटेलर वेसिकल्स का शुद्धिकरण और विश्लेषण

The secretion of small membrane-bound vesicles into the external environment is a fundamental physiological process of all cells. These extracellular ...

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

कैरोहैब्डिटिस एलिगेंस में मॉडलिंग एज-एसोसिएटेड न्यूरोडीजेनेरेटिव डिजीज

Battling human neurodegenerative pathologies and managing their pervasive socioeconomic impact is becoming a global priority. Notwithstanding their ...