Name: lipid supplementation for longevity and gene transcriptional analysis in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-12-09T13:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Bakım desteği için P. Svay'a teşekkür ederiz. Bu çalışma NIH hibeleri R01AG045183 (MCW), R01AT009050 (MCW), R01AG062257 (MCW), DP1DK113644 (MCW), March of Dimes Foundation (MCW), Welch Foundation (MCW), HHMI araştırmacısı (M.C.W.) ve NIH T32 ES027801 doktora öncesi öğrenci arkadaşı (M.S.) tarafından desteklenmiştir. Bazı suşlar, NIH Araştırma Altyapı Programları Ofisi (P40 OD010440) tarafından finanse edilen CGC tarafından sağlanmıştır.

Şekil 1 , farklı deneysel ortamlar kullanılarak lipit beslemenin bir şemasını göstermektedir.
1. Lipid şartlandırılmış bakterilerin hazırlanması
<ol><li>Bakteriyel seyreltme diyet kısıtlaması (BDR) baz çözeltisini, 999mLdeiyonize suda 5.85 g NaCl, 1.0 g K 2 HPO4 ve 6.0 g KH2PO4 (bkz. 0,5 M KOH ile pH'ı 6,0'a ayarlayın ve ardından 0,22 μm'lik bir filtreden süzün...

<ol>
	<li>Fahy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+of+the+LIPID+MAPS+comprehensive+classification+system+for+lipids+1.">Update of the LIPID MAPS comprehensive classification system for lipids 1.</a> Journal of Lipid Research. 50, 9-14 (2009).</li><li>Liebisch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+LIPID+MAPS+classification,+nomenclature,+and+shorthand+notation+for+MS-derived+lipid+structures.">Update on LIPID MAPS classification, nomenclature, and shorthand notation for MS-derived lipid structures.</a> Journal of Lipid Research. 61 (12), 1539-1555 (2020).</li><li>Mutlu, A. S., Duffy, J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+and+lipid+signals+in+aging+and+longevity.">Lipid metabolism and lipid signals in aging and longevity.</a> Developmental Cell. 56 (10), 1394-1407 (2021).</li><li>Kimura, T., Jennings, W., Epand, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+specific+lipid+species+in+the+cell+and+their+molecular+mechanism.">Roles of specific lipid species in the cell and their molecular mechanism.</a> Progress in Lipid Research. 62, 75-92 (2016).</li><li>Duffy, J., Mutlu, A. S., Wang, M. C., Olsen, A., Gill, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+Metabolism,+Lipid+Signalling+and+Longevity.">Lipid Metabolism, Lipid Signalling and Longevity.</a> Ageing: Lessons from C. elegans. Healthy Ageing and Longevity. , 307-329 (2017).</li><li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+chain+poly-unsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans.">Long chain poly-unsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> Journal of Cell Science. 116 (24), 4965-4975 (2003).</li><li>Folick, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+signaling+molecules+regulate+longevity+in+Caenorhabditis+elegans.">Lysosomal signaling molecules regulate longevity in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 347 (6217), 83-86 (2015).</li><li>Ramachandran, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosomal+signaling+promotes+longevity+by+adjusting+mitochondrial+activity.">Lysosomal signaling promotes longevity by adjusting mitochondrial activity.</a> Developmental Cell. 48 (5), 685-696 (2019).</li><li>Byrne, E. F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+of+Smoothened+regulation+by+its+extracellular+domains.">Structural basis of Smoothened regulation by its extracellular domains.</a> Nature. 535 (7613), 517-522 (2016).</li><li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+window+into+biology:+a+primer+on+Caenorhabditis+elegans.">Transparent window into biology: a primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li><li>Nigon, V. M., F&#233;lix, M. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+research+on+C.+elegans+and+other+free-living+nematodes+as+model+organisms.">History of research on C. elegans and other free-living nematodes as model organisms.</a> WormBook. , 1-84 (2017).</li><li>Kutscher, L. M., Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+reverse+mutagenesis+in+C.+elegans.">Forward and reverse mutagenesis in C. elegans.</a> WormBook. , 1-26 (2014).</li><li>Brooks, K. K., Liang, B., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+bacterial+diet+on+fat+storage+in+C.+elegans.">The influence of bacterial diet on fat storage in C. elegans.</a> PloS ONE. 4 (10), 7545 (2009).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans.">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176 (2), 865-875 (2007).</li><li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans.">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PloS Genetics. 2 (7), 108 (2006).</li><li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiencies+in+C20+poly-unsaturated+fatty+acids+cause+behavioral+and+developmental+defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+mutants.">Deficiencies in C20 poly-unsaturated fatty acids cause behavioral and developmental defects in Caenorhabditis elegans fat-3 mutants.</a> Genetics. 163 (2), 581-589 (2003).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+poly-unsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans.">Genetic dissection of poly-unsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (9), 5854-5859 (2002).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoyl-CoA-specific+&#916;9+fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans.">Palmitoyl-CoA-specific &#916;9 fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 272 (1), 263-269 (2000).</li><li>Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+synthesis+and+adiposity+regulation+in+Caenorhabditis+elegans.">Fat synthesis and adiposity regulation in Caenorhabditis elegans.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 20 (2), 58-65 (2009).</li><li>Peyou-Ndi, M. M., Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+an+animal+&#916;12+fatty+acid+desaturase+gene+by+heterologous+expression+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Identification and characterization of an animal &#916;12 fatty acid desaturase gene by heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 376 (2), 399-408 (2000).</li><li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+animal+&#969;-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis.">Identification of an animal &#969;-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (4), 1142-1147 (1997).</li><li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+&#916;5-fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans.">Isolation and characterization of a &#916;5-fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 362 (1), 175-182 (1999).</li><li>Deline, M. L., Vrablik, T. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+supplementation+of+polyunsaturated+fatty+acids+in+Caenorhabditis+elegans.">Dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50879 (2013).</li><li>Estes, R. E., Lin, B., Khera, A., Davis, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+influence+on+neurodegenerative+disease+progression:+is+the+vehicle+as+important+as+the+cargo.">Lipid metabolism influence on neurodegenerative disease progression: is the vehicle as important as the cargo.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 788695 (2021).</li><li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+lipids+and+cell+signaling.">Membrane lipids and cell signaling.</a> Current Opinion in Lipidology. 28 (5), 408-413 (2017).</li><li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mono-unsaturated+fatty+acids+link+H3K4me3+modifiers+to+C.+elegans+lifespan.">Mono-unsaturated fatty acids link H3K4me3 modifiers to C. elegans lifespan.</a> Nature. 544 (7649), 185-190 (2017).</li><li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#969;-6+Poly-unsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy.">&#969;-6 Poly-unsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes &amp; Development. 27 (4), 429-440 (2013).</li><li>Steinbaugh, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-mediated+regulation+of+SKN-1/Nrf+in+response+to+germ+cell+absence.">Lipid-mediated regulation of SKN-1/Nrf in response to germ cell absence.</a> eLife. 4, 07836 (2015).</li><li>Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SKN-1/Nrf,+stress+responses,+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans.">SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans.</a> Free Radical Biology and Medicine. 88, 290-301 (2015).</li><li>Ezzili, C., Otrubova, K., Boger, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+amide+signaling+molecules.">Fatty acid amide signaling molecules.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 20 (20), 5959-5968 (2010).</li><li>Qi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+&#969;-3+fatty+acid+&#945;-linolenic+acid+extends+Caenorhabditis+elegans+lifespan+via+NHR-49/PPAR&#945;+and+oxidation+to+oxylipins.">The &#969;-3 fatty acid &#945;-linolenic acid extends Caenorhabditis elegans lifespan via NHR-49/PPAR&#945; and oxidation to oxylipins.</a> Aging Cell. 16 (5), 1125-1135 (2017).</li><li>Shemesh, N., Meshnik, L., Shpigel, N., Ben-Zvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary-induced+signals+that+activate+the+gonadal+longevity+pathway+during+development+regulate+a+proteostasis+switch+in+Caenorhabditis+elegans+adulthood.">Dietary-induced signals that activate the gonadal longevity pathway during development regulate a proteostasis switch in Caenorhabditis elegans adulthood.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 254 (2017).</li><li>Savini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysosome+lipid+signalling+from+the+periphery+to+neurons+regulates+longevity.">Lysosome lipid signalling from the periphery to neurons regulates longevity.</a> Nature Cell Biology. 24 (6), 906-916 (2022).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , (2006).</li><li>Wang, M. C., O'Rourke, E. J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+metabolism+links+germline+stem+cells+and+longevity+in+C.+elegans.">Fat metabolism links germline stem cells and longevity in C. elegans.</a> Science. 322 (5903), 957-960 (2008).</li><li>Jacob, T. C., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EGL-21+carboxypeptidase+E+facilitates+acetylcholine+release+at+Caenorhabditis+elegans+neuromuscular+junctions.">The EGL-21 carboxypeptidase E facilitates acetylcholine release at Caenorhabditis elegans neuromuscular junctions.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (6), 2122-2130 (2003).</li><li>Kass, J., Jacob, T. C., Kim, P., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EGL-3+proprotein+convertase+regulates+mechanosensory+responses+of+Caenorhabditis+elegans.">The EGL-3 proprotein convertase regulates mechanosensory responses of Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (23), 9265-9272 (2001).</li><li>Bael, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+evidence+for+neuropeptide-amidating+enzymes+in+Caenorhabditis+elegans.">Mass spectrometric evidence for neuropeptide-amidating enzymes in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (16), 6052-6063 (2018).</li><li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li></ol>

Lipid takviyesi, bazı lipit türlerinin sağlıklı yaşlanma üzerindeki doğrudan etkisini aydınlatmak için yaşlanma araştırmalarında kullanılmıştır 6,7,23,26,27,31. Bununla birlikte, lipit takviyesi prosedürü zor olabilir ve deneyler arasındaki herhangi bir tutarsızlık tekrarlanamayan sonuçlara neden olabi...

Lipit Lipitler, organik çözücülerde çözünen, ancak suda çözünmeyen küçük hidrofobik veya amfipatik moleküllerdir 1,2. Farklı lipit molekülleri, zincirlerinde bulunan karbonların sayısına, konumlarına, çift bağların sayısına ve gliserol veya fosfatlar dahil olmak üzere bağlı yapılara bağlı olarak birbirlerinden ayrılırlar. Lipitler, membran çift katmanlarını oluşturmak, enerji depolaması sağlamak ve sinyal molekülleri olarak hareket etmek de dahil olmak üzere organizma fonksiyonlarını düzenlemek için farklı hücreler içinde ve arasında çok önemli roller oynar 3,4.
İlk olarak, lipitler, iç bölmeleri hücre dışı ortamdan ayıran plazma zarı ve hücre içi hücre altı membranlar dahil olmak üzere biyolojik membranların yapısal bileşenleridir. İkincisi, lipitler omurgalı ve omurgasız hayvanlarda enerji depolamanın ana şeklidir. Triasilgliseroller de dahil olmak üzere nötr lipitler, yağ dokusu da dahil olmak üzere çeşitli dokularda uzun süre depolanır. Nematodda Caenorhabditis elegans, bağırsak başlıca metabolik yağ depolama organıdır; işlevi sadece besinlerin sindirimi ve emiliminde değil, aynı zamanda memeli hepatositlerinin aktivitesine benzeyen detoksifikasyon sürecinde de rol oynar. Diğer yağ depolama dokuları, lipitlerin oosit gelişimi için gerekli olduğu germline ve cilt benzeri epidermal hücrelerden oluşan hipodermisi içerir 3,5. Üçüncüsü, son yıllarda, lipitlerin, G proteinine bağlı ve nükleer reseptörler de dahil olmak üzere çeşitli reseptörlere doğrudan etki ederek veya dolaylı olarak membran akışkanlık modülasyonu veya çeviri sonrası modifikasyonlar yoluyla hücre içi ve hücre dışı sinyalleşmede rol oynayan güçlü sinyal molekülleri olduğunu ileri sürmüştür 6,7,8,9 . Daha ileri çalışmalar, uzun ömürlülüğü ve sağlık süresini teşvik etmede lipid sinyallemesinin altında yatan moleküler mekanizmaları aydınlatmaya devam edecektir.
Model organizmalar, insanlarda çalışılamayacak kadar karmaşık olan belirli biyolojik soruları ele almak için önemlidir. Örneğin, yuvarlak kurt C. elegans, insan beslenmesi ve hastalığı ile ilgili biyolojik süreçleri incelemek için genetik analiz yapmak için mükemmel bir modeldir10. İnsan fizyolojisi, karmaşık dokular, davranış kalıpları ve bol miktarda genetik manipülasyon araçları ile ilgili yüksek oranda korunmuş moleküler yollar, C. elegans'ı dikkate değer bir model organizma11 yapar. Örneğin, C. elegans, fenotipe özgü genleri tanımlamak için genetik ekranların iletilmesinde ve RNA girişimi12 yoluyla genom çapında ters genetik ekranlarda mükemmeldir.
Laboratuvarlarda, nematodlar, Escherichia coli bakterilerinin bir çimi ile tohumlanmış agar Petri plakaları üzerinde yetiştirilir, proteinler, karbonhidratlar ve enerji ve yapı taşları olarak doymuş ve doymamış yağ asitleri gibi makro besinler ve ko-faktörler ve vitaminler gibi mikro besinler sağlar13. Memelilere benzer şekilde, nematodlar yağ asidi moleküllerini hem palmitik asitten hem de stearik asitten (sırasıyla doymuş 16-karbon ve 18-karbon molekülleri) sentezler, bunlar sırayla doymamış ve çeşitli tekli doymamış yağ asitleri (MUFA'lar) ve çoklu doymamış yağ asitleri (PUFA'lar) 14,15,16,17,18'e uzatılır. İlginçtir ki, C. elegans, yağ asidi biyosentezi, doygunluğun giderilmesi ve uzamasında rol oynayan gerekli tüm yağ asitlerinin ve çekirdek enzimlerin de novo sentezini yapabilir ve uzun zincirli PUFA'ların sentezini kolaylaştırır19. Diğer hayvan türlerinden farklı olarak, C. elegans 18-karbon ve 20-karbon ω-6 yağ asitlerini kendi ω-3 desaturaz enzimleri ile ω-3 yağ asitlerine dönüştürebilir. Ek olarak, solucanlar oleik asitten linoleik asit (LA) oluşumunu katalize eden bir Δ12 desaturaza sahiptir (OA, 18: 1) 20,21. Çoğu hayvan veya bitki hem Δ12 hem de ω-3 desaturazlardan yoksundur ve bu nedenle PUFA'larını elde etmek için ω-6 ve ω-3'ün diyet alımına güvenirken, C. elegans diyet yağ asitleri gerektirmez22. Fonksiyonel desaturaz enzimlerinden yoksun izole mutantlar, spesifik yağ asitlerinin üreme, büyüme, uzun ömürlülük ve nörotransmisyon dahil olmak üzere farklı biyolojik süreçlerdeki işlevlerini incelemek için kullanılmıştır. Bireysel yağ asitlerinin spesifik biyolojik yollar üzerindeki etkisi, hem genetik bir yaklaşım hem de diyet takviyesi kullanılarak ele alınabilir16,17,23. Bugüne kadar, lipit araştırmaları, nörolojik ve gelişimsel koşullarda lipit sentezi, bozulması, depolanması ve parçalanmasında rol oynayan genleri karakterize etmeye odaklanmıştır24. Bununla birlikte, lipitlerin uzun ömürlülük regülasyonundaki rolleri yeni ortaya çıkmaya başlamıştır.
Uzun ömürlülük regülasyonunda lipit sinyalizasyonu Lipitler, farklı dokularda ve hücre tiplerinde hücresel sinyal kaskadlarını aktive ederek uzun ömürlülük regülasyonunda önemli roller oynamaktadır. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, lipid bağlayıcı proteinler yoluyla transkripsiyon ve hücre-hücre iletişiminin modüle edilmesinde veya membran reseptörlerinin tanınmasında lipitlerin aktif rollerini vurgulamıştır25. Ek olarak, diyet lipit takviyesi, lipit metabolizmasının C. elegans'ta yaşam süresini nasıl etkilediğini incelemek için mükemmel bir araç sunar. Farklı MUFA'ların ve PUFA'ların, transkripsiyon faktörleri 26,27'yi aktive ederek uzun ömürlülüğü arttırdığı gösterilmiştir.
İnsülin / IGF-1 sinyallemesi ve germline öncü hücrelerinin ablasyonu da dahil olmak üzere uzun ömürlü modeller, MUFA biyosentez yolu ile ilişkilidir ve oleik asit, palmitoleik asit ve cis-vaccenic dahil olmak üzere MUFA takviyesi, C. elegans ömrünü uzatmak için yeterlidir26. MUFA uygulaması tarafından verilen uzun ömürlülük etkisi daha fazla araştırma gerektirse de, altta yatan mekanizmanın, oksidatif stres yanıtının ve uzun ömür düzenlemesinin kilit bir aktivatörü olan SKN-1 / Nrf2 transkripsiyon faktörü tarafından aracılık edilmesi muhtemeldir28,29. MUFA'lar arasında, N-asiletanolaminler (NAE'ler) adı verilen belirli bir yağlı açil etanolamidler sınıfı, iltihaplanma, alerjiler, öğrenme, hafıza ve enerji metabolizması gibi farklı mekanizmalarda çok önemli roller oynar30. Özellikle, oleoylethanolamid (OEA) olarak bilinen lipit molekülü, nükleer hormon reseptörleri NHR-49 ve NHR-807'yi aktive etmek için lipit bağlayıcı protein 8'in (LBP-8) çekirdeğe translokasyonunu teşvik ederek uzun ömürlülüğün pozitif bir düzenleyicisi olarak tanımlanmıştır. OEA analog KDS-5104'ün takviyesi ömrünü uzatmak için yeterlidir ve oksidatif stres yanıtları ve mitokondriyal β-oksidasyonda rol oynayan genlerin ekspresyonunu indükler 7,8.
Aynı zamanda, PUFA'ların rolü de uzun ömürlülük düzenlemesiyle ilişkilendirilmiştir. PUFA ω-3 yağ asidi α-linolenik asit (ALA) uygulaması, NHR-49 / PPARa, SKN-1 / NRF transkripsiyon faktörlerini aktive ederek ve mitokondriyal β-oksidasyonu indükleyerek uzun ömürlülüğü arttırır31. İlginç bir şekilde, oksilipinler olarak adlandırılan ALA'nın perokside ürünleri, SKN-1 / NRF'yi aktive eder, bu da hem PUFA'ların hem de oksidatif türevlerinin uzun ömürlülük yararları sağlayabileceğini düşündürmektedir23. ω-6 yağ asidi arakidonik asit (AA) ve dihomo-γ-linolenik asit (DGLA) takviyesi, otofaji aktivasyonu yoluyla ömrünü uzatır, protein kalite kontrolünü teşvik eder ve atık ve toksik protein agregalarının bozulmasına neden olur27,32. Daha yakın zamanlarda, lipid bağlayıcı protein 3 (LBP-3) ve DGLA'nın aracılık ettiği bir hücre-otonom olmayan sinyal düzenlemesinin, nöronlara periferik sinyaller göndererek uzun ömürlülüğü teşvik etmek için çok önemli olduğu gösterilmiştir, bu da lipid moleküllerinin sistemik seviyelerde dokular arası iletişimde uzun vadeli bir rol oynadığını düşündürmektedir33. Bu çalışma, plakalara ekilen bakterilerle lipit takviyesi veya sıvı kültürde bakteriyel süspansiyon ile lipit takviyesi yapmak için her adımı bildirmektedir. Bu metodolojiler, tüm vücut içeriğini veya birkaç solucandan türetilen disseke dokuları kullanarak yaşam süresini ve transkripsiyonel analizi değerlendirmek için kullanılır. Aşağıdaki teknikler çeşitli beslenme çalışmalarına uyarlanabilir ve lipit metabolizmasının uzun ömürlülüğü ve sağlıklı yaşlanmayı nasıl etkilediğini incelemek için geçerli bir araç sunar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Pestle</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>93-165P15</td>
			<td>For worm grinding with Trizol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9639-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AmfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix</td>
			<td>GenDEPOT</td>
			<td>R5600</td>
			<td>For reverse transcription from bulk worm samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applied Biosystems QuanStudio 3 Real-Time PCR</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A28567</td>
			<td>For qRT-PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchmark Scientific StripSpin 12 Microcentrifuge</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>C1248</td>
			<td>For spin down PCR tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Branson 450 Digital Sonifier, w/ 1/8&#34; tip</td>
			<td>Branson Ultrasonic Corporation</td>
			<td>100-132-888R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8503-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8418-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5424 R centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22620444R</td>
			<td>For RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf vapo protect mastercycler pro</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>950030010</td>
			<td>For reverse transcription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, Absolute (200 Proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One CELLSTAR, 12 W Plate</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>665180</td>
			<td>12-well plates for licuid feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 100 x 20 mm</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>664161</td>
			<td>For bacterial LB plates and worm 10-cm NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Bio-One Petri Dish, Ps, 60 x 15 mm</td>
			<td>Neta Scientific</td>
			<td>628161</td>
			<td>For worm6-cm NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen nuclease-free water</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoproanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PX1835-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisole hydrochloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>SPCML1054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipl-4Tg</td>
			<td>MCW Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Transgenic C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lipl-4Tg;fat-3(wa22)</td>
			<td>MCW Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Transgenic C. elegans</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria Broth Base</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12795-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast Clear Reaction Plate with Barcode</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4483354</td>
			<td>96-well qPCR plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td>
			<td>Applied BioSystem</td>
			<td>4311971</td>
			<td>For sealing the 96-well qPCR plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Advantage A10 Water Purification System</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z00Q0V0WW</td>
			<td>Deionized water used to make all reagents, including buffer and cultural media, unless specified as nuclease-free water in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>C. elegans wild isolate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop ND-1000 Spectrophotometer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For measuring RNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP50</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Bacteria used as C. elegans food</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium phosphate dibasic trihydrate (K2HPO4&#183;3H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5504-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0662-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green cells-to-Ct kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4402953</td>
			<td>For reverse transcription and qPCR from a few worms or worm tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4367659</td>
			<td>For qPCR from bulk worm samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pure Bright germicidal ultra bleach&#160;</td>
			<td>KIK International LLC.</td>
			<td>59647210143</td>
			<td>6% house bleach For worm egg preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex spot plate with nine depressions</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS722085-18EA</td>
			<td>Watch glass for dissecting the worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium cloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7653-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SX0590-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic heptahydrate (Na2HPO4&#183;7H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9390-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Sorvall Legend Mach 1.6R Centrifuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>7500-4337</td>
			<td>For bacteria collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Sorvall ST 8 centrifuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>7500-7200</td>
			<td>For worm egg preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol Reagent</td>
			<td>TheroFisher</td>
			<td>15596018</td>
			<td>RNA extraction reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turbo DNA-free kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM1907</td>
			<td>For removing DNA contamination in RNA extractions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer 59</td>
			<td>Denville Scientific INV</td>
			<td>S7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Disposable Pellet Mixers and Cordless Motor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>47747-370</td>
			<td>For worm grinding with Trizol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Kinetic Energy 26 Joules Mini Centrifuge C1413 V-115</td>
			<td>VWR</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For worm collection. Discontinued model, a similar one available at VWR with Cat# 76269-064</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm picker</td>
			<td>WormStuff</td>
			<td>59-AWP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lipid supplementation for longevity and gene transcriptional analysis in caenorhabditis elegans

Yaşlanma, hem çevresel hem de genetik katkılardan kaynaklanan ilerleyici fizyolojik değişikliklerle karakterize karmaşık bir süreçtir. Lipitler, hücre zarlarının yapısal bileşenlerini oluşturmada, enerji depolamada ve sinyal molekülleri olarak çok önemlidir. Lipid metabolizmasının ve sinyalizasyonun düzenlenmesi, farklı uzun ömürlü yolları aktive etmek için esastır. Yuvarlak kurt Caenorhabditis elegans , lipid metabolizmasının ve sinyalizasyonun uzun ömür regülasyonuna katkısını incelemek için mükemmel ve güçlü bir organizmadır. Çok sayıda araştırma çalışması, spesifik lipit moleküllerinin diyet takviyesinin C. elegans ömrünü nasıl uzatabileceğini açıklamıştır; Bununla birlikte, takviye koşullarındaki küçük farklılıklar, farklı laboratuvarlardaki bilim adamları arasında tekrarlanabilirlik sorunlarına neden olabilir. Burada, C. elegans için iki ayrıntılı takviye yönteminin, plakalara tohumlanmış bakterilerle veya sıvı kültürde bakteriyel süspansiyonla lipit takviyesi kullanıldığı bildirilmiştir. Burada ayrıca, ömür boyu lipit takviyesi ve bütün bir solucan lizatı veya birkaç solucandan türetilen disseke dokular kullanılarak qRT-PCR analizi ile ömür boyu tahliller yapmak için detaylar verilmiştir. Uzunlamasına çalışmaların ve lipit takviyesi üzerine transkripsiyonel araştırmaların bir kombinasyonunu kullanarak, beslenme analizleri, lipitlerin uzun ömürlülüğü ve sağlıklı yaşlanmayı nasıl etkilediğini incelemek için güvenilir yaklaşımlar sağlar. Bu metodoloji ayrıca, az sayıda disseke doku veya birkaç hayvan kullanarak transkriptlerin bir alt kümesindeki değişiklikleri değerlendirmek için çeşitli beslenme tarama yaklaşımları için uyarlanabilir.

Lipid takviyesi üzerine birkaç bütün solucan kullanılarak transkripsiyonel değişikliklerin doğrulanması RNA'yı birkaç bütün solucandan cDNA'ya çıkarma ve retrotranskripsiyon protokolünün çoğaltılabilir olup olmadığını ve toplu solucanlardan elde edilen verilerle karşılaştırılabilir olup olmadığını araştırmak için, bağırsakta lizozomal asit lipaz lipl-4'ü aşırı eksprese eden uzun ömürlü bir solucan suşu 7,8,33,35<...

Watch this Scientific Journal Video about Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

Mevcut protokol, Caenorhabditis elegans için sıvı ve plaka üstü kültürlerde lipit takviyesi yöntemlerini, uzunlamasına çalışmalar ve toplu veya birkaç solucan ve solucan dokusundan gen transkripsiyonel analizi ile birlikte tanımlamaktadır.

Caenorhabditis elegans'ta Uzun Ömürlülük ve Gen Transkripsiyonel Analizi için Lipid Takviyesi

Aging is a complex process characterized by progressive physiological changes resulting from both environmental and genetic contributions. Lipids are ...

Bu protokol, model organizma C.elegans'ta uzunlamasına ve transkripsiyonel analizin bir kombinasyonu ile iki lipit takviyesi stratejisini açıklamaktadır. Teknik, birkaç solucan veya disseke edilmiş solucan dokusu kullanarak transkripsiyonel değişikliklerin nasıl inceleneceğini ve bir böcek popülasyonu için sıvı beslemenin hidro tekniklerle nasıl birleştirilebileceğini açıklar. Bu tekniği uygulayan bireyler, yeterli transkripsiyonel analiz elde etmek için deneyi gerçekleştirmek için kısa zaman penceresi nedeniyle doku diseksiyonu uygulamalıdır.Başlamak için, gece boyunca yetiştirilen kültürü oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 4.000 G'de santrifüj ederek OP50 bakterilerini toplayın. Süper natantı atın. Bakteriyel peleti vorteks yoluyla 20 mililitre bakteriyel seyreltme, diyet kısıtlaması veya BDR baz içinde askıya alın ve tekrar santrifüjlemeyi 10 dakika tekrarlayın.Süper natantı attıktan sonra, 20 X BDR bakteri stoğu hazırlamak için bakteriyel peleti BDR ortamında tekrar askıya alın. Kullanmadan önce bir BDR ortamı kullanarak bakteri stoğunu 5X'e kadar seyreltin. Çözücü olarak etanol veya dimetil sülfoksit kullanarak, yeni bir otoklavlanmış cam şişede bir lipit stok çözeltisi hazırlayın ve oksidasyonu önlemek için cam şişeyi argon veya azotla doldurun.Besleme koşullarında istenen nihai konsantrasyonu elde etmek için lipit stok çözeltisini BDR bakteri çözeltisine aktarın. 20 saniye boyunca vorteks yaparak iyice karıştırın. Aynı hacimlerde filtrelenmiş etanol veya dimetil sülfoksitin BDR bakterileriyle karıştırılmasıyla kontrol edilen aracı hazırlayın.İstenilen miktarda lipit veya araç kontrolünü, her besleme koşulu için üç ila dört kopya içeren 12 kuyucuklu bir plakanın her bir kuyucuğuna aktararak lipit takviyesi ve sıvı kültürü gerçekleştirin. Senkronize Caenorrhabditis elegans solucan süspansiyonunu 5X BDR bakterileriyle bire bir oranında karıştırarak mililitre başına 1.500 solucan ve bakteriler için 2.5X nihai konsantrasyon elde edin. Daha sonra solucan bakteri karışımının iki mililitresini 12 kuyucuk plakasının her bir kuyucuğuna aktarın.Tamamlandığında, 12 kuyucuklu plakayı folyo ile sarın ve plakayı istenen inkübasyon uzunluğu için 100 RPMM'de 20 santigrat derecelik bir inkübatörde çalkalayın. Plakalarda lipit takviyesi için, lipit şartlandırılmış bakterilerin bir mililitresini 10 santimetrelik bir nematod büyüme ortamının veya NGM agar plakasının merkezine tohumlayın. Çok sayıda plaka ile çalışırken nihai çalışma çözeltisinin iki plakanın tohumlanması arasında birkaç kez girdap halinde yapıldığından emin olun.Plakayı karanlıkta bir biyogüvenlik başlığının içinde kurulayın. Senkronize solucan kültüründen 3000 solucanı 10 santimetrelik plakaya aktarın. Lipit takviyeli plakalar üzerinde yüzen solucanlar emeklemeye başlayana kadar plakayı bir biyogüvenlik başlığında kurutun.Kurutulduktan sonra, lipit şartlandırılmış plakayı istenen süre boyunca 20 santigrat derecelik bir inkübatörde inkübe edin ve çoklu doymamış lipitler kullanılıyorsa plakayı ışıktan koruyun. Bir PCR tüpünde 0,2 mikrolitre DNaz I ile 19,8 mikrolitre lizis çözeltisi karıştırarak her numune için 20 mikrolitre nihai lizis çözeltisi hazırlayın ve beş kez yukarı ve aşağı pipetleyerek iyice karıştırın. RNA'yı az sayıda bütün solucandan çıkarmak için, bakteri çimlerinden 15 ila 20 solucanı taze tohumlanmamış bir NGM plakasına aktararak bakterileri çıkarın.Tohumlanmamış NGM plakasından 15 ila 20 solucanı, minimum bakteri sayısı ile taze hazırlanmış son lizis çözeltisinin 20 mikrolitresini içeren PCR tüpüne aktarın ve lizis reaksiyonunu oda sıcaklığında beş dakika boyunca inkübe edin. Kuluçka bittikten sonra, numuneyi güzel bir soğuk su banyosunda tutun ve sonda, solucanları dört kez, her seferinde beş saniye% 30 genlik ve her sonikasyon zamanı arasında 15 saniye boyunca nabız ile sonikleştirin. Lizis reaksiyonuna iki mikrolitre durdurma çözeltisi eklemeden önce tüpü oda sıcaklığında beş dakika boyunca inkübe edin ve hafifçe dokunarak karıştırın.Reaksiyonu oda sıcaklığında iki dakika boyunca inkübe edin ve ardından tüpü buz üzerine ayarlayın. RNA'yı solucan dokusundan çıkarmak için, bakteri çimlerinden yaklaşık 20 solucan toplayın ve bakterileri solucanlardan çıkarmak için taze bir tohumlanmamış NGM plakasına yerleştirin. Mümkün olduğunca az bakteri içeren 20 solucanı, dört mikromolar levamisol içeren 500 mikrolitre M9 çözeltisi içeren bir saat camına aktarın.Solucanlar hareketsiz hale getirildiğinde, bir mililitrelik şırıngaya tutturulabilen 25 gauge iğne kullanarak germline veya bağırsağı diseke edin. Otoklavlanmış bir cam pipet kullanarak, disseke edilmiş dokuları PCR tüpüne aktarın ve tüpü iki dakika boyunca buz üzerine yerleştirin ve malzemenin altta birikmesine izin verin. 20 mikrolitre nihai lizis çözeltisi eklemeden önce süpernatantı PCR tüpünden çıkarın ve dokunarak iyice karıştırın.Lizis reaksiyonunu beş dakika inkübe ettikten sonra, iki mikrolitre durdurma çözeltisi ekleyin ve tüpe birkaç kez dokunun. Ters transkripsiyona geçmeden önce tüpü iki dakika boyunca inkübe edin. Doğrulama çalışmasında, büyük bir popülasyondan ekstrakte edilen RNA ve birkaç solucan, nöropeptit işleme genlerinin, egl-3 ve egl-21'in benzer indüksiyonunu gösterdi.Birkaç solucandan RNA ekstraksiyonunun, büyük popülasyonlardan standart CDNA sentez tekniklerine geçerli bir alternatif olabileceğini düşündürmektedir. Lipl-4 transgen solucanlarının disseke edilmiş bağırsağında, dihomo-gama-linolenik asit veya DGLA ile desteklenmiş, nöronal nöropeptit işleme genleri indüklenmemiştir. Farklı konsantrasyonlarda DGLA takviyesi, yağ-3 nakavtı üzerine solucanlarda yaşam süresinin uzamasını kurtardı.Lipid takviyeli solucanlar, bu spesifik koşullar altında ek fenotipleri tanımlamak için RNA dizilimi, proteomik, metabolomik ve davranışsal çalışmalar için de işlenebilir. Bu metodoloji, yaşlanma araştırmalarına, lipit biyolojisine ve belirli bir fenotip ile beslenme faktörü veya metabolit arasında bir ilişki kurmayı amaçlayan diğer araştırma alanlarına uygulanabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

İzolasyon ve In vitro Etkinleştirme Caenorhabditis elegans Sperm

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Erken Embriyo Oluşumu Zaman atlamalı Mikroskopi Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Temel<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Yöntem: Senkronizasyon ve Gözlem

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Ekstraksiyon ve Analiz<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Çoklu doymamış yağ asitlerinin Diyet takviyesi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Fatty acids are essential for numerous cellular functions. They serve as efficient energy storage molecules, make up the hydrophobic core of membranes, ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Yöntemleri ile Caenorhabditis elegans çağda doğal Protein toplama çalışma değişikliklere

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Lipid bolluk ve değerlendirme Lipid dağılımı Nil kırmızı ve O kırmızı petrol boyama tarafından Caenorhabditis elegans miktar

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Kombine nükleotit ve Caenorhabditis elegans Protein çekimi

A single biological sample holds a plethora of information, and it is now common practice to simultaneously investigate several macromolecules to capture ...

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

Purification and Analysis of Caenorhabditis elegans Extracellular Vesicles

Arınma ve Caenorhabditis elegans Ekstrasellüler Veziküllerin Analizi

The secretion of small membrane-bound vesicles into the external environment is a fundamental physiological process of all cells. These extracellular ...

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans Yaş İlişkili Nörodejeneratif Hastalıkların Modellendirilmesi

Battling human neurodegenerative pathologies and managing their pervasive socioeconomic impact is becoming a global priority. Notwithstanding their ...