Name: combining 3d magnetic force actuator and multi-functional fluorescence imaging to study nucleus mechanobiology
Uploaded: 2022-07-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology at JoVE.com

Dette projekt er finansieret af UF Gatorade Award Start-up Package (X. T.), UFHCC Pilot Award (X. T. og Dr. Dietmar Siemann), UF Opportunity Seed Fund (X. T.) og UFHCC University Scholars Program (H. Y. Wang). Vi sætter stor pris på de intellektuelle diskussioner med og den tekniske støtte fra Dr. Jonathan Licht (UFHCC), Dr. Rolf Renne (UFHCC), Dr. Christopher Vulpe (UFHCC), Dr. Blanka Sharma (BME), Dr. Mark Sheplak (MAE & ECE), Dr. Daniel Ferris (BME), Dr. Malisa Sarntinoranont (MAE), Dr. Ashok Kumar (MAE), Dr. Benjamin Keselowsky (BME), Dr. Brent Gila (RSC), Dr. Philip Feng (ECE), Dr. Gregory A. Hudalla (BME), Dr. Steven Ghivizzani (OSSM), Dr. Yenisel Cruz-Almeida (CDBS), Dr. Roger Fillingim (CD-BS), Dr. Robert Caudle (OMS), Dr. John Neubert (DN-OR), Dr. Justin Hiliard (Neurokirurgi), Dr. Tian He (Harvard University), Dr. Youhua Tan (Hong Kong Polytechnic University), Dr. Jessie L-S Au (Institut for Kvantitative Systemer Farmakologi), Dr. David Hahn (University of Arizona), og supportteam af Nikon (Dr. Jose Serrano-Velez, Larry Kordon og Jon Ekman). Vi er dybt taknemmelige for den effektive støtte fra alle medlemmer af Tangs, Yamaguchis, Sharmas, Au's, Siemanns og Guans forskningslaboratorier og alle medarbejdere i UF MAE Department.

1. Vedligeholdelse af CRISPR/Cas9-konstruerede B2B-celler
<ol><li>Kultur B2B-celler i en T25-kolbe med RPMI-1640 suppleret med 10% føtalt bovint serum og 1% penicillin-streptomycin.</li>
	<li>B2B-cellerne opbevares i en befugtet inkubator ved 37 °C med 5 % CO2.</li>
	<li>Subkulturer B2B-cellerne, når sammenløbet når 70% til 80%.</li>
	<li>Opbevar B2B-cellelinjen i RPMI-1640 dyrkningsmedium med 10% (v/v) DMSO i en -80 °C fryser.</li>
	<li>Brug B2B-cellerne med et passagenummer mindre en...

Internalisering af magnetiske mikroperler (afsnit 2.2) er kritisk, fordi ekstracellulære mikroperler ikke kan anvende kraft direkte på kernen. Kraftanvendelse og billeddannelse (afsnit 5.3) er kritiske trin i dette eksperiment, og den kraft, der er nødvendig for at deformere kernen og fremkalde meningsfulde biologiske konsekvenser, kan være prøveafhængig. Kraftstørrelsen i dette eksperiment (0,8 nN og 1,4 nN) kan øges yderligere for at udløse nuklear mekano-sensing i mindre følsomme celler.
<p class="jove_c...

Denne undersøgelse sigter mod at udvikle og anvende en ny teknik til at belyse kernemekanobiologi ved at kombinere de magnetiske aktuatorer, der anvender mekanisk kraft direkte på cellekernen og den konfokale fluorescensmikroskopi, der samtidig afbilder de strukturelle og funktionelle subcellulære ændringer. Celler registrerer ekstracellulære biofysiske signaler, herunder vævsstivhed 1,2,3,4, interstitiel væsketryk og forskydningsspænding 5,6,7, overfladetopologi/geometri 8,9,10,11,12 og spændings-/kompressionsspænding13,14, 15,16. Biofysiske signaler omdannes til biokemiske signaler og udløser potentielle nedstrøms ændringer af genekspression og celleadfærd - en proces kendt som mekanotransduktion 17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27 . For at studere mekanotransduktionsprocesser er der udviklet et utal af teknikker til at anvende mekanisk kraft på cellerne, såsom atomkraftmikroskopi28, cellestrækningsenhed29, bio-MEMS (mikroelektromekaniske systemer) kraftsensor 15,30,31, forskydningsreologi 32 og Stereo Vision System 33 . En nylig gennemgang opsummerer tilgangene til at anvende ekstracellulære mekaniske signaler og forstyrre mekanosensing34. Til dato anvender de fleste af disse metoder kraft på celleplasmamembranen, og celler modtager direkte disse ekstracellulære biofysiske signaler via membranreceptorer såsom integrin, cadherin, ionkanaler og G-proteinkoblede receptorer. Derefter sender de signalet til det intracellulære cytoskelet og kernen. For eksempel ved hjælp af ja-associeret protein (YAP) translokation som en indikator for mekano-sensing, viser celler at fornemme de mekaniske signaler af substratstivhed og ekstracellulær spænding fra cellemembranen og transmittere dem gennem cytoskelettet ind i kernen for at inducere YAP-cytoplasma-til-kernetranslokation28,35.
Nylige beviser tyder på, at selve cellekernen er en uafhængig mekano-sensor 8,36,37. Dette er bevist ved eksperimenter udført på den isolerede kerne høstet fra celler, hvor det blev afsløret, at kerner adaptivt ændrer deres stivhed som reaktion på den mekaniske kraft, der påføres demdirekte 36. Under mange fysiologiske tilstande fornemmer kerner i både tumor og sunde celler ekstracellulære biofysiske signaler og ændrer deres mekaniske egenskaber og samlinger38,39,40. For eksempel ved ekstravasation falder tumorcellernes nukleare stivhed og opretholder blødhed i over 24 timer38. Under migration gennem begrænset interstitielt rum mister kernerne i tumorceller ofte og genvinder deres strukturelle integritet39. Den måde, hvorpå kernen registrerer det biofysiske signal, er imidlertid ukendt, selvom flere nukleare kuvertproteiner og familier af proteiner har vist sig at være involveret, såsom Lamin A / C og linker af nukleoskelet og cytoskelet (LINC) kompleks38,41. Derfor vil nye ikke-invasive metoder, der direkte kan anvende kraft på kernen, afkoble effekten af kraftoverførsel fra celle-plasmamembranen og cytoskelettet og vil hjælpe med at belyse de tidligere utilgængelige molekylære mekanismer for nuklear mekano-sensing.
Forskning, der anvendte optisk pincet til at manipulere organeller42 og mikroperler injiceret i celler43, viste den teknologiske evne til direkte at anvende kraft på kernen. Den optiske pincetteknik har imidlertid flere begrænsninger: (1) optiske pincet med lav kapacitet manipulerer ofte kun en celle eller mikrokugle ad gangen; og (2) potentiel fotoskade og temperaturartefaktdeformation af atomkraft kræver snesevis af pN36, og den tilsvarende nødvendige lasereffekt er ca. 10 mW pr. pN44,45. En sådan laserintensitet er tilstrækkelig til at udløse fotoskader i cellerne og forstyrre cellefunktionerne under eksperimentet46.
Magnetisk kraft påført gennem mikroperler i levende celler viser potentialet til direkte at anvende kraft på kernen og overvinde begrænsningerne ved optisk pincet. Når mikroperler er leveret ind i cytoplasmaet, kan et magnetfelt udøve en magnetisk kraft på flere mikroperler samtidigt på en måde med høj kapacitet. Magnetfeltet påvirker ikke cellefunktioner47, men genererer kraft fra pN til nN, hvilket er nok til at inducere nuklear deformation 36,48,49. Hidtil er manipulation af magnetiske mikroperler blevet anvendt på celleplasmamembran48, inde i cytoplasma50, på F-actin51, inde i kernen47 og på den isolerede kerne36. Imidlertid er magnetisk manipulation af mikroperler aldrig blevet brugt til at anvende direkte mekanisk kraft på atomkuverten for at studere mekanotransduktion i kernen.
I dette papir udvikles en simpel teknik til ikke-invasivt at levere magnetiske mikroperler ind i cytoplasmaet og bruge disse mikroperler til at anvende mekanisk kraft på kernen (figur 1). Her bruges CRISPR/Cas9-konstruerede menneskelige normale B2B-cellelinjer, der endogent udtrykker mNeonGreen21-10/11-mærket YAP, til at validere metoden. YAP er et mekanofølsomt protein, og translokationen af YAP reguleres af nuklear mekano-sensing14,28. Den CRISPR/Cas9-regulerede knock-in-tilgang blev valgt til at mærke endogen YAP med et fluorescerende protein (FP) mNeonGreen21-10/11. Selvom CRISPR-redigering er kendt for at have ufuldstændig effektivitet og off-target effekt, integrerede protokollerne i tidligere publikationer fluorescenssortering for at vælge korrekt åben læserammeindsættelse52,53,54. Med dette ekstra selektionslag blev der ikke observeret nogen tagginghændelse uden for målet i 20+ cellelinjer, der tidligere genererede52,53,54,55. Dette er en delt fluorescerende proteinkonstruktion, men i princippet kan ethvert udtryksfuldt fluorescerende mærke være brugbart. Denne mærkningsmetode er bedre end transgene eller antistofmetoder. For det første, i modsætning til transgenekspressionen, opretholder det mærkede protein enkeltkopi-gendosering og udtrykker sig i den fysiologiske sammenhæng med det native genregulerende netværk, hvilket begrænser afvigelser i proteinkoncentration, lokalisering og interaktion. Mærkningsmetoden, der anvendes i denne undersøgelse, opnår over en størrelsesorden højere gennemstrømning og effektivitet end fuld FP-mærkning. Det undgår også udfordringer forbundet med immunfluorescens på grund af fikseringsartefakter og den begrænsede tilgængelighed af antistoffer af høj kvalitet og høj specificitet. For det andet gør den tilgang, der anvendes i dette papir, minimal forstyrrelse af cellefysiologien og muliggør realtidsåbenbaring af alle endogene YAP'er autentisk. I modsætning hertil fører andre almindelige transgene metoder ofte til overekspression af YAP. Den resulterende kunstige fordeling kan potentielt forårsage cytotoksicitet og påvirke mekano-sensing af celler56,57,58.
Denne undersøgelse præsenterer en protokol til direkte at anvende kraft på kernen gennem magnetiske mikroperler leveret ind i cytoplasmaet og til at udføre samtidig levende celle fluorescerende billeddannelse. Sammenfattende viser de protokoller, der præsenteres her, hvordan man (1) leverer magnetiske mikroperler ind i cellen, mens de er uden for kernen, (2) manipulerer mikroperlerne til at anvende magnetisk kraft på kernen, (3) udfører konfokal fluorescerende billeddannelse af cellerne under manipulation og (4) kvantitativt analyserer YAP-nuklear / cytoplasma (N / C) -forholdet gennem kraftpåføringsprocessen. Resultaterne tyder på, at (1) gennem endocytose kan magnetiske mikroperler ikke-invasivt leveres til cytoplasmaet af B2B-celler inden for 7 timer (figur 2 og figur 3); og (2) kvantificeret magnetisk kraft, der påføres direkte på kernen (figur 4, figur 5 og figur 6) alene kan udløse forskellige ændringer i YAP N / C-forhold i CRISPR / Cas9-konstruerede B2B-celler (figur 7 og figur 8).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05 % Trypsin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-051-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>156340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-&#181;m mean diameter carbonyl iron microbeads</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A1R confocal system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl Iron Powder CM</td>
			<td>BASF</td>
			<td>30042253</td>
			<td>Magnetic microbead</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium (RPMI-1640)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desktop Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td></td>
			<td>with Windows 10 operating system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmental chamber TIZB</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>TIZB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health and the Laboratory for Optical and Computational Instrumentation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-bottom petri dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnet</td>
			<td>K&#38;J Magnetics, Inc.</td>
			<td>D99-N52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monochrome&#160;Camera</td>
			<td>FLIR</td>
			<td>BFS-U3-70S7M-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements software platform</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>software platform</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleus mask ImageJ macro</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://github.com/KOLIUG/Nuclear mask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucSpot Live 650</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>#40082</td>
			<td>Nuclear stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti2-E inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XYZ mover (CAD files)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://github.com/KOLIUG/XYZ-mover</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

combining 3d magnetic force actuator and multi-functional fluorescence imaging to study nucleus mechanobiology

Et grundlæggende spørgsmål i mekanobiologi er, hvordan levende celler sanser ekstracellulære mekaniske stimuli i forbindelse med cellefysiologi og patologi. Den cellulære mekano-fornemmelse af ekstracellulære mekaniske stimuli menes at være gennem membranreceptorerne, det tilknyttede proteinkompleks og cytoskelettet. Nylige fremskridt inden for mekanobiologi viser, at cellekernen i cytoplasma selv uafhængigt kan mærke mekaniske stimuli samtidigt. Imidlertid mangler en mekanistisk forståelse af, hvordan cellekernen sanser, transducerer og reagerer på mekaniske stimuli, hovedsageligt på grund af de tekniske udfordringer med at få adgang til og kvantificere kernemekanikken ved hjælp af konventionelle værktøjer. Dette papir beskriver design, fremstilling og implementering af en ny magnetisk kraftaktuator, der anvender præcise og ikke-invasive 3D mekaniske stimuli til direkte deformering af cellekernen. Ved hjælp af CRISPR /Cas9-manipulerede celler viser denne undersøgelse, at dette værktøj kombineret med højopløselig konfokal fluorescerende billeddannelse muliggør afsløring af realtidsdynamikken i et mekano-følsomt ja-associeret protein (YAP) i enkeltceller som en funktion af kernedeformation. Denne enkle metode har potentialet til at bygge bro over det nuværende teknologigab i mekanobiologisamfundet og give svar på den videnskløft, der findes i forholdet mellem kernemekanotransduktion og cellefunktion.

Design af en magnetbevægelsesanordning og anvendelse af magnetisk kraft For at anvende kraft på kernen gennem de magnetiske mikroperler blev en magnetbevægelsesanordning designet og bygget til at styre magnetens rumlige position. Magnetbevægelsesenheden indeholder en central ramme, tre knapper og skinner til at flytte den vedhæftede magnet i x-, y- og z-retninger uafhængigt ved den rumlige opløsning på 1,59 mm pr. cyklus (figur 1A). Når magneten er flyttet tæt p...

Watch this Scientific Journal Video about Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology at JoVE.com

Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology

Denne undersøgelse præsenterer en ny protokol til direkte at anvende mekanisk kraft på cellekernen gennem magnetiske mikroperler leveret ind i cytoplasmaet og til at udføre samtidig levende celle fluorescerende billeddannelse.

Kombination af 3D magnetisk kraftaktuator og multifunktionel fluorescensbilleddannelse for at studere kernemekanobiologi

A fundamental question in mechanobiology is how living cells sense extracellular mechanical stimuli in the context of cell physiology and pathology. The ...

I denne metode påføres kraften direkte på kernen. Dette afkobler kraftoverførselseffekten fra celleplasmamembranen og cytoskelettet, hvilket afslører de molekylære mekanismer for nuklear mekanosensing. Kraften påføres i de levende celler på en ikke-invasiv måde.Sammenlignet med optiske pincetter påvirker magnetfeltet og magnetkraften ikke cellefunktionerne og har højere gennemstrømning. Begynd at dyrke cellerne med magnetiske mikroperler ved at veje 0,2 gram carbonyljernmikroperler med syv mikrometer gennemsnitlig diameter. Suspender mikroperlerne i et milliliter RPMI 1640 kulturmedium ved hjælp af en pipette.Tag derefter petriskålen med B2B-celler til biosikkerhedsskabet og tilsæt hurtigt 200 mikroliter af mediet indeholdende mikroperler i petriskålen. Sæt petriskålen i en inkubator, indtil mikroperler internaliseres af cellerne. Åbn det omvendte mikroskop og brug konfokal fluorescensbilleddannelse, bestem den optimale tid til internalisering af cellelinjerne hver sjette time ved at visualisere mikroperle-, atom- og cellegrænsen.De internaliserede mikroperler vil være til stede inden for cellegrænsen. For applikation med lille kraft og levende cellebilleddannelse skal du åbne softwareapplikationen Elements. For at definere konfigurationen magnetisk find, klik på en over to knappen for at indstille scanningshastigheden til en ramme pr. To sekunder.Indstil pinhole størrelse til 1,2 luftig enhed. Kontroller kun FITC-kanalen, og indstil PMT HV som 70, forskudt som nul, laserintensitet som 10. For at definere konfigurationens magnetiske YAP-kerne skal du indstille scanningshastigheden til en ramme pr. Fire sekunder ved at klikke på knappen en over fire.Klik derefter på knappen 1.2 Airy enhed for at indstille pinhole-størrelsen til 1.2 Airy-enheden og kontrollere FITC-kanalen. Indstil PMT HV som 70, forskudt som nul, laserintensitet som 10. For at afbilde kernegrænsen og nuklear pletintensitet skal du kontrollere cyanin 5-kanalen.Klik ikke på knappen 1.2 Airy enhed, og indstil PMT HV til 70, forskydning til nul og laserintensitet til 10. Pinhole-størrelsen vil blive optimeret til tredimensionel YES-associeret proteinbilleddannelse. Tænd derefter DIA gennem Elements.Åbn spinvisning, brug et lysfelt, og juster objektets fokus for at få et klart billede af celler i fokus. Brug et 10X-mål til at finde passende flere enkeltceller under tre forhold, f.eks. en celle med en enkelt mikroperle indeni, med flere mikroperler indeni og uden mikroperler indeni. Skift derefter til 40X mål, og navngiv denne position med det relevante positionsnummer.Åbn Elements, klik på magnetisk find, fjern interlock, scan derefter faner, og vælg derefter de øverste og nederste knapper for at justere Z-positionen på brændplanet til indstilling af den nedre og øvre grænse for Z-stakken af de valgte celler. Stop scanningen ved at klikke på Scan igen. Skift til magnetisk YAP-kernekonfiguration, og indstil filnavnet som before_small_force.nd2.Klik på knappen Kør med den optagede Z-stak. Skift til den rigtige lyssti, og tænd DIA. Åbn spin-visning, og klik på optageknappen.Flyt magneten til 46 millimeter over petriskålens bund ved at dreje knappen på magnetbevægelsesanordningen. Gem og kontroller videoen for at bekræfte mikroperlernes forskydning induceret af magnetisk kraft. Gentag scanningsproceduren ved at indstille filnavnet som after_small_force.nd2.Skift derefter til den rigtige lyssti, tænd DIA og åbn spinvisning, før du klikker på optageknappen. Drej magnetens bevægelige enhedsknap op til 120 millimeter over petriskålens bund, og gem en brightfield-billedsekvens eller video. Gentag trinnene til scanning ved at indstille filnavnet til before_large_force.nd2.Mikroperlerne kan ikke udsende fluorescens under laser excitation i FITC eller cyanin 5 kanalen. Således blev de internaliserede mikroperler identificeret ved den mørke hule placeret i den konfokale billeddannelse af fluorescens af YES-associeret protein og kerne. Nuklear cirkularitet viste ingen signifikant forskel mellem kontrolceller og celler med mikroperleinternalisering.Det YES-associerede proteincellekerne-til-cytoplasma-forhold mellem kontrolceller samdyrket med mikroperler, men uden internalisering og celler med mikroperleinternalisering viste heller ingen signifikant forskel. Kernedeformationen og depolymerisationen af actin var forårsaget af kompressionskraften påført af mikroperlerne i cytoskeletholdige celler. Den kvantitative billedanalysekalibreringskurve, der leveres af det kvantitative AFM-kraftforskydningsforhold.Baseret på dette forhold blev perlerne anvendt kraft estimeret. Kernedeformationen og YES-associeret proteintranslokation blev observeret ved påføring eller frigivelse af den magnetiske kraft. Intensitetsændringerne i YES-associeret protein i den grønne kanal og ingen ændring i kernefarvningen i den røde kanal bekræftede, at den magnetiske kraftinducerede nukleare deformation udløst af den YES-associerede proteintranslokation.Kvantificeringen af nettoændringen af det YES-associerede proteinkerne-til-cytoplasma-forhold inden for to grupper bekræftede, at den magnetiske kraft, der blev påført mikroperlerne i cytoplasmaet, inducerede den YES-associerede proteintranslokation og ændrede det YES-associerede proteinkerne-til-cytoplasma-forhold. Før du anvender kraft og billeddannelse, skal du sikre dig, at cellerne har internaliseret de magnetiske mikroperler, og perlerne er inden for cellegrænsen.

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

The Drosophila peripheral nervous system (PNS) is a powerful model for investigating the complex processes of neuronal development and dendrite ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Identifying Targets of Human microRNAs with the LightSwitch Luciferase Assay System using 3'UTR-reporter Constructs and a microRNA Mimic in Adherent Cells

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression and play a role in many biological processes.  More than 700 human miRNAs have been ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

Prøve forberedelse til single virion Atomic Force mikroskopi og superopløsning fluorescens Imaging

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Combining Single-molecule Manipulation and Imaging for the Study of Protein-DNA Interactions

Ved at kombinere Single-molekyle manipulation og Imaging for Studiet af protein-DNA interaktioner

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

High-throughput Billede Analyse af Tumor Spheroids: Et brugervenligt program til at måle størrelsen af ​​Spheroids automatisk og præcist

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Combining Magnetic Sorting of Mother Cells and Fluctuation Tests to Analyze Genome Instability During Mitotic Cell Aging in Saccharomyces cerevisiae

Combining Magnetic Sorting of Mother Cells and Fluctuation Tests to Analyze Genome Instability During Mitotic Cell Aging in Saccharomyces cerevisiae

Kombination Magnetic Sortering af Mother Celler og udsving Tests at analysere Genome ustabilitet ved Mitotisk Cell Aging i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Saccharomyces cerevisiae has been an excellent model system for examining mechanisms and consequences of genome instability. Information gained from this ...

A Method for Selecting Structure-switching Aptamers Applied to a Colorimetric Gold Nanoparticle Assay

En metode til at vælge Struktur-skifte Aptamerer Anvendt på en kolorimetrisk Gold Nanopartikel Assay

Small molecules provide rich targets for biosensing applications due to their physiological implications as biomarkers of various aspects of human health ...