Name: combining 3d magnetic force actuator and multi-functional fluorescence imaging to study nucleus mechanobiology
Uploaded: 2022-07-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology at JoVE.com

Dit project wordt gefinancierd door UF Gatorade Award Start-up Package (X. T.), de UFHCC Pilot Award (X. T. en Dr. Dietmar Siemann), UF Opportunity Seed Fund (X. T.) en UFHCC University Scholars Program (H. Y. Wang). We waarderen oprecht de intellectuele discussies met en de technische ondersteuning van Dr. Jonathan Licht (UFHCC), Dr. Rolf Renne (UFHCC), Dr. Christopher Vulpe (UFHCC), Dr. Blanka Sharma (BME), Dr. Mark Sheplak (MAE &ECE), Dr. Daniel Ferris (BME), Dr. Malisa Sarntinoranont (MAE), Dr. Ashok Kumar (MAE), Dr. Benjamin Keselowsky (BME), Dr. Brent Gila (RSC), Dr. Philip Feng (ECE), Dr. Gregory A. Hudalla (BME), Dr. Steven Ghivizzani (OSSM), Dr. Yenisel Cruz-Almeida (CDBS), Dr. Roger Fillingim (CD-BS), Dr. Robert Caudle (OMS), Dr. John Neubert (DN-OR), Dr. Justin Hiliard (Neurochirurgie), Dr. Tian He (Harvard University), Dr. Youhua Tan (Hong Kong Polytechnic University), Dr. Jessie L-S Au (Institute of Quantitative Systems Pharmacology), Dr. David Hahn (Universiteit van Arizona), en ondersteuningsteam van Nikon (Drs. Jose Serrano-Velez, Larry Kordon en Jon Ekman). We zijn zeer dankbaar voor de effectieve steun van alle leden van Tang's, Yamaguchi's, Sharma's, Au's, Siemann's en Guan's onderzoekslaboratoria en alle medewerkers van de UF MAE-afdeling.

1. Onderhoud van CRISPR/Cas9-engineered B2B cellen
<ol><li>Kweek B2B-cellen in een T25-kolf met RPMI-1640 aangevuld met 10% foetaal runderserum en 1% penicilline-streptomycine.</li>
	<li>Bewaar de B2B-cellen in een bevochtigde incubator op 37 °C met 5% CO2.</li>
	<li>Subcultuur de B2B-cellen wanneer de samenvloeiing 70% tot 80% bereikt.</li>
	<li>Bewaar de B2B cellijn in RPMI-1640 kweekmedium met 10% (v/v) DMSO in een -80 °C vriezer.</li>
	<li>Gebruik de B2B-cellen met een passagegetal van...

Internalisatie van magnetische microbeads (sectie 2.2) is van cruciaal belang omdat extracellulaire microbeads niet rechtstreeks kracht kunnen uitoefenen op de kern. Krachttoepassing en beeldvorming (paragraaf 5.3) zijn kritieke stappen in dit experiment en de kracht die nodig is om de kern te vervormen en zinvolle biologische gevolgen te veroorzaken, kan steekproefafhankelijk zijn. De krachtmagnitude in dit experiment (0,8 nN en 1,4 nN) kan verder worden verhoogd om nucleaire mechano-detectie in minder gevoelige cellen ...

Deze studie heeft tot doel een nieuwe techniek te ontwikkelen en toe te passen om kernmechanobiologie op te helderen door de magnetische actuatoren die mechanische kracht rechtstreeks op de celkern uitoefenen te combineren met de confocale fluorescentiemicroscopie die tegelijkertijd de structurele en functionele subcellulaire veranderingen in beeld brengt. Cellen detecteren extracellulaire biofysische signalen, waaronder weefselstijfheid 1,2,3,4, interstitiële vloeistofdruk en schuifspanning 5,6,7, oppervlaktetopologie/geometrie 8,9,10,11,12 en spanning/compressiespanning 13,14, 15,16. Biofysische signalen worden omgezet in biochemische signalen en veroorzaken potentiële stroomafwaartse veranderingen van genexpressie en celgedrag - een proces dat bekend staat als mechanotransductie 17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27 . Om mechanotransductieprocessen te bestuderen, zijn talloze technieken ontwikkeld om mechanische kracht op de cellen uit te oefenen, zoals atoomkrachtmicroscopie28, celrekapparaat29, bio-MEMS (micro-elektromechanische systemen) krachtsensor 15,30,31, afschuifreologie 32 en Stereo Vision System33 . Een recente review vat de benaderingen samen om extracellulaire mechanische signalen toe te passen en te interfereren met mechanosensing34. Tot op heden oefenen de meeste van deze methoden kracht uit op het celplasmamembraan en cellen ontvangen deze extracellulaire biofysische signalen rechtstreeks via membraanreceptoren zoals integrine, cadherine, ionkanalen en G-eiwit-gekoppelde receptoren. Vervolgens geven ze het signaal door aan het intracellulaire cytoskelet en de kern. Bijvoorbeeld, met behulp van yes-associated protein (YAP) translocatie als een indicator van mechano-sensing, wordt aangetoond dat cellen de mechanische signalen van substraatstijfheid en extracellulaire spanning van het celmembraan detecteren en deze via het cytoskelet naar de kern overbrengen om YAP-cytoplasma-naar-kerntranslocatie te induceren28,35.
Recent bewijs suggereert dat de celkern zelf een onafhankelijke mechano-sensoris 8,36,37. Dit wordt bewezen door experimenten uitgevoerd op de geïsoleerde kern geoogst uit cellen, waar werd onthuld dat kernen adaptief hun stijfheid veranderen als reactie op de mechanische kracht die direct op hen wordt uitgeoefend36. Tijdens veel fysiologische omstandigheden voelen kernen in zowel tumor- als gezonde cellen extracellulaire biofysische signalen en veranderen hun mechanische eigenschappen en assemblages 38,39,40. Bijvoorbeeld, bij extravasatie neemt de nucleaire stijfheid van tumorcellen af en handhaaft de zachtheid gedurende meer dan 24 h38. Tijdens de migratie door de besloten interstitiële ruimte verliezen en herstellen de kernen van tumorcellen vaak hun structurele integriteit39. De manier waarop de kern het biofysische signaal waarneemt, is echter onbekend, hoewel verschillende nucleaire enveloppe-eiwitten en families van eiwitten betrokken zijn gebleken, zoals Lamin A / C en linker van nucleoskelet en cytoskelet (LINC) complex38,41. Vandaar dat nieuwe niet-invasieve methoden die direct kracht kunnen uitoefenen op de kern het effect van krachtoverdracht van het cel-plasmamembraan en cytoskelet zullen loskoppelen en zullen helpen de voorheen ontoegankelijke moleculaire mechanismen van nucleaire mechano-detectie op te helderen.
Onderzoek waarbij optische pincetten werden gebruikt om organellen42 te manipuleren en microbeads geïnjecteerd in cellen43 toonde het technologische vermogen aan om direct kracht uit te oefenen op de kern. De optische pincettechniek heeft echter verschillende beperkingen: (1) optische pincetten met lage doorvoer manipuleren vaak maar één cel of microbead tegelijk; en (2) potentiële fotoschade en temperatuurartefact-vervorming van kernenergie vereist tientallen pN36, en het overeenkomstige benodigde laservermogen is ongeveer 10 mW per pN 44,45. Een dergelijke laserintensiteit is voldoende om fotoschade in de cellen te veroorzaken en de functies van de perturbcel tijdens het experimentte verstoren 46.
Magnetische kracht toegepast door microbeads in levende cellen toont het potentieel om direct kracht uit te oefenen op de kern en overwint de beperkingen van optische pincetten. Zodra microbeads in het cytoplasma worden afgeleverd, kan een magnetisch veld een magnetische kracht uitoefenen op meerdere microbeads tegelijkertijd op een manier met hoge doorvoer. Het magnetisch veld beïnvloedt de celfuncties niet47, maar genereert kracht van pN naar nN, wat voldoende is om nucleaire vervorming te induceren 36,48,49. Tot op heden is manipulatie van magnetische microbeads toegepast op celplasmamembraan48, in het cytoplasma50, op F-actine51, in de kern47 en op de geïsoleerde kern36. Magnetische manipulatie van microbeads is echter nooit gebruikt om directe mechanische kracht op de nucleaire envelop toe te passen om mechanotransductie in de kern te bestuderen.
In dit artikel wordt een eenvoudige techniek ontwikkeld om niet-invasief magnetische microbeads in het cytoplasma af te leveren en deze microbeads te gebruiken om mechanische kracht op de kern uit te oefenen (figuur 1). Hier worden CRISPR / Cas9-engineered menselijke normale B2B-cellijnen gebruikt die endogeen mNeonGreen21-10 / 11-gelabelde YAP uitdrukken om de methode te valideren. YAP is een mechano-gevoelig eiwit en de translocatie van YAP wordt gereguleerd door nucleaire mechano-sensing14,28. De CRISPR/Cas9-gereguleerde knock-in benadering werd gekozen om endogene YAP te taggen met een fluorescerend eiwit (FP) mNeonGreen21-10/11. Hoewel bekend is dat CRISPR-bewerking onvolledige efficiëntie en off-target effect heeft, integreerden de protocollen in eerdere publicaties fluorescentiesortering om te selecteren op correcte open leesframe-invoeging 52,53,54. Met deze extra selectielaag werd geen off-target tagginggebeurtenis waargenomen in meer dan 20 cellijnen die eerder52,53,54,55 genereerden. Dit is een gesplitst fluorescerend eiwitconstruct, maar in principe zou elke expresseerbare fluorescerende tag bruikbaar kunnen zijn. Deze etiketteringsbenadering is superieur aan transgene- of antilichaammethoden. Ten eerste, in tegenstelling tot de transgene expressie, handhaaft het getagde eiwit single-copy gendosering en expressie in de fysiologische context van het inheemse gen regulerende netwerk, waardoor afwijkingen in eiwitconcentratie, lokalisatie en interactie worden beperkt. De taggingmethode die in deze studie wordt gebruikt, bereikt een orde van grootte hogere doorvoer en efficiëntie dan volledige FP-tagging. Het vermijdt ook uitdagingen in verband met immunofluorescentie als gevolg van fixatieartefacten en de beperkte beschikbaarheid van hoogwaardige antilichamen met hoge specificiteit. Ten tweede zorgt de benadering die in dit artikel wordt gebruikt voor minimale verstoring van de celfysiologie en maakt de real-time openbaring van alle endogene YAP's op authentieke wijze mogelijk. Andere gangbare transgene methoden leiden daarentegen vaak tot overexpressie van YAP. De resulterende kunstmatige distributie kan mogelijk cytotoxiciteit veroorzaken en de mechano-detectie van cellen beïnvloeden 56,57,58.
Deze studie presenteert een protocol om direct kracht uit te oefenen op de kern door middel van magnetische microbeads die in het cytoplasma worden afgeleverd en om gelijktijdige live-cell fluorescerende beeldvorming uit te voeren. Samenvattend laten de hier gepresenteerde protocollen zien hoe (1) magnetische microbeads in de cel kunnen worden afgeleverd terwijl ze zich buiten de kern bevinden, (2) de microbeads manipuleren om magnetische kracht op de kern uit te oefenen, (3) confocale fluorescerende beeldvorming van de cellen uitvoeren tijdens manipulatie, en (4) kwantitatief de YAP-verhouding tussen nucleair en cytoplasma (N / C) analyseren tijdens het krachttoepassingsproces. De resultaten suggereren dat (1) door endocytose magnetische microbeads niet-invasief kunnen worden afgeleverd in het cytoplasma van B2B-cellen binnen 7 uur (figuur 2 en figuur 3); en (2) gekwantificeerde magnetische kracht die rechtstreeks op de kern wordt uitgeoefend (figuur 4, figuur 5 en figuur 6) alleen kan leiden tot diverse veranderingen in de YAP N/C-verhouding in CRISPR/Cas9-gemanipuleerde B2B-cellen (figuur 7 en figuur 8).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05 % Trypsin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-051-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>156340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-&#181;m mean diameter carbonyl iron microbeads</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A1R confocal system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl Iron Powder CM</td>
			<td>BASF</td>
			<td>30042253</td>
			<td>Magnetic microbead</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium (RPMI-1640)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desktop Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td></td>
			<td>with Windows 10 operating system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmental chamber TIZB</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>TIZB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health and the Laboratory for Optical and Computational Instrumentation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-bottom petri dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnet</td>
			<td>K&#38;J Magnetics, Inc.</td>
			<td>D99-N52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monochrome&#160;Camera</td>
			<td>FLIR</td>
			<td>BFS-U3-70S7M-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements software platform</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>software platform</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleus mask ImageJ macro</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://github.com/KOLIUG/Nuclear mask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucSpot Live 650</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>#40082</td>
			<td>Nuclear stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti2-E inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XYZ mover (CAD files)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://github.com/KOLIUG/XYZ-mover</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

combining 3d magnetic force actuator and multi-functional fluorescence imaging to study nucleus mechanobiology

Een fundamentele vraag in de mechanobiologie is hoe levende cellen extracellulaire mechanische stimuli waarnemen in de context van celfysiologie en pathologie. De cellulaire mechano-sensatie van extracellulaire mechanische stimuli wordt verondersteld zich te bevinden via de membraanreceptoren, het bijbehorende eiwitcomplex en het cytoskelet. Recente ontwikkelingen in de mechanobiologie tonen aan dat de celkern in het cytoplasma zelf onafhankelijk mechanische stimuli tegelijkertijd kan waarnemen. Een mechanistisch begrip van hoe de celkern mechanische stimuli detecteert, transduceert en erop reageert, ontbreekt echter, voornamelijk vanwege de technische uitdagingen bij het openen en kwantificeren van de kernmechanica met conventionele hulpmiddelen. Dit artikel beschrijft het ontwerp, de fabricage en de implementatie van een nieuwe magnetische krachtactuator die nauwkeurige en niet-invasieve 3D-mechanische stimuli toepast om de celkern direct te vervormen. Met behulp van CRISPR/Cas9-engineered cellen toont deze studie aan dat deze tool, in combinatie met hoge resolutie confocale fluorescerende beeldvorming, de onthulling mogelijk maakt van de real-time dynamiek van een mechano-gevoelig yes-associated protein (YAP) in enkele cellen als functie van kernvervorming. Deze eenvoudige methode heeft het potentieel om de huidige technologische kloof in de mechanobiologiegemeenschap te overbruggen en antwoorden te bieden op de kenniskloof die bestaat in de relatie tussen nucleusmechanotransductie en celfunctie.

Ontwerp van een magneetbewegend apparaat en toepassing van magnetische kracht Om kracht uit te oefenen op de kern door de magnetische microbeads, werd een magneetbewegend apparaat ontworpen en gebouwd om de ruimtelijke positie van de magneet te regelen. Het magneetbewegende apparaat bevat een centraal frame, drie knoppen en rails om de aangesloten magneet onafhankelijk van elkaar in x-, y- en z-richting te bewegen met een ruimtelijke resolutie van 1,59 mm per cyclus (figuur 1A</st...

Watch this Scientific Journal Video about Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology at JoVE.com

Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology

Deze studie presenteert een nieuw protocol om direct mechanische kracht uit te oefenen op de celkern door middel van magnetische microbeads die in het cytoplasma worden afgeleverd en om gelijktijdige live-cell fluorescerende beeldvorming uit te voeren.

Combinatie van 3D Magnetic Force Actuator en multifunctionele fluorescentie beeldvorming om Nucleus Mechanobiology te bestuderen

A fundamental question in mechanobiology is how living cells sense extracellular mechanical stimuli in the context of cell physiology and pathology. The ...

Bij deze methode wordt de kracht direct op de kern uitgeoefend. Dit ontkoppelt het krachtoverdrachtseffect van het celplasmamembraan en cytoskelet en onthult de moleculaire mechanismen van nucleaire mechanosensing. De kracht wordt op een niet-invasieve manier uitgeoefend in de levende cellen.In vergelijking met optische pincetten hebben het magnetisch veld en de magnetische kracht geen invloed op de celfuncties en hebben ze een hogere doorvoer. Begin met het kweken van de cellen met magnetische microbeads door 0,2 gram carbonylijzermicroeads met een gemiddelde diameter van zeven micrometer te wegen. Hang de microbeads in één milliliter RPMI 1640 kweekmedium met behulp van een pipet.Neem vervolgens de petrischaal met B2B-cellen mee naar de bioveiligheidskast en voeg snel 200 microliter van het medium met microbeads toe aan de petrischaal. Plaats de petrischaal in een incubator totdat microbeads door de cellen zijn geïnternaliseerd. Open de omgekeerde microscoop en bepaal met behulp van confocale fluorescentiebeeldvorming elke zes uur de optimale tijd voor de internalisatie van de cellijnen door de microbead-, nucleaire en celgrens te visualiseren.De geïnternaliseerde microbeads zullen aanwezig zijn binnen de celgrens. Voor toepassing met een kleine kracht en live-cell imaging opent u de softwaretoepassing Elements. Als u de magnetische configuratiezoeker wilt definiëren, klikt u op de knop één over twee om de scansnelheid in te stellen op één frame per twee seconden.Stel de grootte van het gaatje in op 1,2 Luchtige eenheid. Controleer alleen het FITC-kanaal en stel PMT HV in op 70, offset als nul, laserintensiteit op 10. Als u de magnetische YAP-kern van de configuratie wilt definiëren, stelt u de scansnelheid in op één frame per vier seconden door op de knop één over vier te klikken.Klik vervolgens op de knop 1.2 Airy unit om de grootte van het gaatje in te stellen op 1.2 Airy unit en controleer het FITC-kanaal. Stel PMT HV in op 70, offset als nul, laserintensiteit op 10. Voor het in beeld brengen van de kerngrens en de intensiteit van de kernvlek, controleert u het cyanine 5-kanaal.Klik niet op de knop 1.2 Airy unit en stel PMT HV in op 70, offset op nul en laserintensiteit op 10. De pinhole-grootte zal worden geoptimaliseerd voor driedimensionale YES-geassocieerde eiwitbeeldvorming. Schakel vervolgens de DIA in via Elements.Open de spinweergave, gebruik een brightfield en pas de focus van het object aan om een duidelijk scherp beeld van cellen te krijgen. Gebruik een 10X-objectief om geschikte meerdere afzonderlijke cellen te vinden in drie omstandigheden, zoals een cel met een enkele microbead erin, met meerdere microbeads erin en zonder microbead erin. Schakel vervolgens over naar 40X-objectief en geef deze positie een naam met het juiste positienummer.Open Elements, klik op magnetisch zoeken, verwijder interlock, scantabs en selecteer vervolgens de bovenste en onderste knoppen om de Z-positie van het brandpuntsvlak aan te passen voor het instellen van de onder- en bovengrens voor de Z-stapel van de geselecteerde cellen. Stop het scannen door nogmaals op scannen te klikken. Schakel over naar magnetische YAP-kernconfiguratie en stel de bestandsnaam in als before_small_force.nd2.Klik op de knop Uitvoeren met de opgenomen Z-stack. Schakel over naar het juiste lichtpad en schakel DIA in. Open de draaiweergave en klik op de opnameknop.Verplaats de magneet tot 46 millimeter boven de bodem van de petrischaal door aan de knop van het magneetbewegende apparaat te draaien. Sla de video op en controleer deze om de verplaatsing van microbeads veroorzaakt door magnetische kracht te bevestigen. Herhaal de scanprocedure door de bestandsnaam in te stellen op after_small_force.nd2.Schakel vervolgens over naar het juiste lichtpad, schakel DIA in en open de spinweergave voordat u op de opnameknop klikt. Draai de magneetbewegingsknop tot 120 millimeter boven de bodem van de petrischaal en sla een brightfield-beeldreeks of video op. Herhaal de stappen voor het scannen door de bestandsnaam in te stellen op before_large_force.nd2.De microbeads kunnen geen fluorescentie uitzenden onder laserexcitatie in het FITC- of cyanine 5-kanaal. De geïnternaliseerde microbeads werden dus geïdentificeerd door de donkere holte in de confocale beeldvorming van fluorescentie van YES-geassocieerd eiwit en kern. Nucleaire circulariteit toonde geen significant verschil tussen controlecellen en cellen met microbead-internalisatie.De YES-geassocieerde eiwitcelkern-cytoplasmaverhouding van controlecellen die samen met microbead maar zonder internalisatie werden gekweekt en cellen met microbead-internalisatie vertoonden ook geen significant verschil. De kernvervorming en depolymerisatie van actine werden veroorzaakt door de compressiekracht die door de microbeads in cytoskeletbevattende cellen werd uitgeoefend. De kalibratiecurve van de kwantitatieve beeldvormingsanalyse die wordt geleverd door de kwantitatieve AFM-krachtverplaatsingsrelatie.Op basis van deze relatie werd de toegepaste kracht van de kralen geschat. De kernvervorming en YES-geassocieerde eiwittranslocatie werden waargenomen bij toepassing of het vrijkomen van de magnetische kracht. De intensiteitsveranderingen in YES-geassocieerd eiwit in het groene kanaal en geen verandering in de kernkleuring in het rode kanaal bevestigden dat de magnetische kracht-geïnduceerde nucleaire vervorming veroorzaakt door de YES-geassocieerde eiwittranslocatie.De kwantificering van de nettoverandering van de YES-geassocieerde eiwitkern-cytoplasmaverhouding binnen twee groepen bevestigde dat de magnetische kracht toegepast op de microbeads in het cytoplasma de YES-geassocieerde eiwittranslocatie veroorzaakte en de YES-geassocieerde eiwitkern-tot-cytoplasmaverhouding veranderde. Voordat u kracht en beeldvorming toepast, moet u ervoor zorgen dat de cellen de magnetische microbeads hebben geïnternaliseerd en dat de kralen zich binnen de celgrens bevinden.

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Het testen van visuele gevoeligheid voor de snelheid en richting van de beweging in Lizards

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Isolatie en zuivering van Drosophila Perifere neuronen door Magnetic Bead sorteren

The Drosophila peripheral nervous system (PNS) is a powerful model for investigating the complex processes of neuronal development and dendrite ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Time-lapse Imaging van mitose Na siRNA transfectie

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Identifying Targets of Human microRNAs with the LightSwitch Luciferase Assay System using 3'UTR-reporter Constructs and a microRNA Mimic in Adherent Cells

Het identificeren van doelen van Human microRNA&#39;s met de LightSwitch Luciferase Assay System met behulp van 3&#39;UTR-reporter constructen en een microRNA Mimic in hechtende cellen

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression and play a role in many biological processes.  More than 700 human miRNAs have been ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

Monstervoorbereiding voor single virion atomic force microscopie en superresolutie fluorescentie beeldvorming

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Combining Single-molecule Manipulation and Imaging for the Study of Protein-DNA Interactions

De combinatie van Single-molecule Manipulatie en Imaging voor de Studie van eiwit-DNA interacties

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

High-throughput beeldanalyse van bolvormige tumoren: Een gebruiksvriendelijke software Toepassing op de Grootte van Sferoïden Meet automatisch en nauwkeurig

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Combining Magnetic Sorting of Mother Cells and Fluctuation Tests to Analyze Genome Instability During Mitotic Cell Aging in Saccharomyces cerevisiae

Combining Magnetic Sorting of Mother Cells and Fluctuation Tests to Analyze Genome Instability During Mitotic Cell Aging in Saccharomyces cerevisiae

De combinatie van magnetische sorteren van Moeder Cellen en Schommelingen Tests om Genome Instabiliteit Tijdens mitose Aging in Analyze<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Saccharomyces cerevisiae has been an excellent model system for examining mechanisms and consequences of genome instability. Information gained from this ...

A Method for Selecting Structure-switching Aptamers Applied to a Colorimetric Gold Nanoparticle Assay

Een methode voor het selecteren-Structure schakelen Aptameren Toegepast op een Colorimetric gouden nanodeeltjes Assay

Small molecules provide rich targets for biosensing applications due to their physiological implications as biomarkers of various aspects of human health ...