Name: combining 3d magnetic force actuator and multi-functional fluorescence imaging to study nucleus mechanobiology
Uploaded: 2022-07-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology at JoVE.com

Detta projekt finansieras av UF Gatorade Award Start-up Package (X. T.), UFHCC Pilot Award (X. T. och Dr. Dietmar Siemann), UF Opportunity Seed Fund (X. T.) och UFHCC University Scholars Program (H. Y. Wang). Vi uppskattar uppriktigt de intellektuella diskussionerna med och den tekniska supporten från Dr. Jonathan Licht (UFHCC), Dr. Rolf Renne (UFHCC), Dr. Christopher Vulpe (UFHCC), Dr. Blanka Sharma (BME), Dr. Mark Sheplak (MAE & ECE), Dr. Daniel Ferris (BME), Dr. Malisa Sarntinoranont (MAE), Dr. Ashok Kumar (MAE), Dr. Benjamin Keselowsky (BME), Dr. Brent Gila (RSC), Dr. Philip Feng (ECE), Dr. Gregory A. Hudalla (BME), Dr. Steven Ghivizzani (OSSM), Dr. Yenisel Cruz-Almeida (CDBS), Dr. Roger Fillingim (CD-BS), Dr. Robert Caudle (OMS), Dr. John Neubert (DN-OR), Dr. Justin Hiliard (Neurokirurgi), Dr. Tian He (Harvard University), Dr. Youhua Tan (Hong Kong Polytechnic University), Dr. Jessie L-S Au (Institute of Quantitative Systems Pharmacology), Dr. David Hahn (University of Arizona), och supportteam av Nikon (Drs. Jose Serrano-Velez, Larry Kodon och Jon Ekman). Vi är djupt tacksamma för det effektiva stödet från alla medlemmar i Tangs, Yamaguchis, Sharmas, Au: s, Siemanns och Guans forskningslaboratorier och alla anställda på UF MAE-avdelningen.

1. Underhåll av CRISPR/Cas9-konstruerade B2B-celler
<ol><li>Odla B2B-celler i en T25-kolv med RPMI-1640 kompletterat med 10% fetalt bovint serum och 1% penicillin-streptomycin.</li>
	<li>Håll B2B-cellerna i en fuktad inkubator vid 37 °C med 5%CO2.</li>
	<li>Subkultur B2B-cellerna när sammanflödet når 70% till 80%.</li>
	<li>Förvara B2B-cellinjen i RPMI-1640 odlingsmedium med 10% (v / v) DMSO i en -80 ° C frys.</li>
	<li>Använd B2B-cellerna med ett passagenummer mindre än 10 i exper...

Internalisering av magnetiska mikrober (avsnitt 2.2) är avgörande eftersom extracellulära mikrober inte kan applicera kraft direkt på kärnan. Krafttillämpning och avbildning (avsnitt 5.3) är kritiska steg i detta experiment, och den kraft som behövs för att deformera kärnan och inducera meningsfulla biologiska konsekvenser kan vara provberoende. Kraftstorleken i detta experiment (0,8 nN och 1,4 nN) kan ökas ytterligare för att utlösa kärnmekanoavkänning i mindre känsliga celler.
<p class="jove_content...

Denna studie syftar till att utveckla och tillämpa en ny teknik för att belysa kärnmekanobiologi genom att kombinera de magnetiska ställdonen som applicerar mekanisk kraft direkt på cellkärnan och den konfokala fluorescensmikroskopin som samtidigt avbildar de strukturella och funktionella subcellulära förändringarna. Celler känner av extracellulära biofysiska signaler inklusive vävnadsstyvhet 1,2,3,4, interstitiellt vätsketryck och skjuvspänning 5,6,7, yttopologi/geometri 8,9,10,11,12 och spännings-/kompressionsspänning13,14, 15,16. Biofysiska signaler omvandlas till biokemiska signaler och utlöser potentiella nedströmsförändringar av genuttryck och cellbeteenden - en process som kallas mekanotransduktion 17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27 . För att studera mekanotransduktionsprocesser har en myriad av tekniker utvecklats för att tillämpa mekanisk kraft på cellerna, såsom atomkraftmikroskopi28, cellsträckningsanordning29, bio-MEMS (mikroelektromekaniska system) kraftsensor 15,30,31, skjuvreologi 32 och Stereo Vision System 33 . En ny granskning sammanfattar metoderna för att tillämpa extracellulära mekaniska ledtrådar och störa mekanosensering34. Hittills tillämpar de flesta av dessa metoder kraft på cellplasmamembranet, och celler tar direkt emot dessa extracellulära biofysiska signaler via membranreceptorer såsom integrin, kadherin, jonkanaler och G-proteinkopplade receptorer. Därefter sänder de signalen till den intracellulära cytoskeletten och kärnan. Till exempel, med hjälp av ja-associerad protein (YAP) translokation som en indikator på mekano-avkänning, visas celler att känna av de mekaniska signalerna om substratstyvhet och extracellulär spänning från cellmembranet och överföra dem genom cytoskeletten till kärnan för att inducera YAP-cytoplasma-till-kärntranslokation28,35.
Nya bevis tyder på att själva cellkärnan är en oberoende mekanosensor 8,36,37. Detta bevisas av experiment som utförs på den isolerade kärnan som skördats från celler, där det avslöjades att kärnor adaptivt ändrar sin styvhet som svar på den mekaniska kraften som direkt appliceras på dem36. Under många fysiologiska förhållanden känner kärnor i både tumör- och friska celler av extracellulära biofysiska signaler och ändrar deras mekaniska egenskaper och sammansättningar38,39,40. Till exempel, vid extravasation, minskar tumörcellernas kärnstyvhet och upprätthåller mjukhet i över 24 timmar38. Under migration genom begränsat interstitiellt utrymme förlorar kärnorna i tumörceller ofta och återställer sin strukturella integritet39. Hur kärnan känner av den biofysiska signalen är dock okänt, även om flera kärnhöljeproteiner och familjer av proteiner har visat sig vara inblandade, såsom Lamin A / C och linker av nukleoskelett och cytoskelett (LINC) komplex38,41. Därför kommer nya icke-invasiva metoder som direkt kan applicera kraft på kärnan att frikoppla effekten av kraftöverföring från cellplasmamembranet och cytoskelettet och kommer att hjälpa till att belysa de tidigare otillgängliga molekylära mekanismerna för kärnmekanoavkänning.
Forskning som använde optisk pincett för att manipulera organeller42 och mikrober injicerade i celler43 visade den tekniska förmågan att direkt applicera kraft på kärnan. Den optiska pincetttekniken har emellertid flera begränsningar: (1) optisk pincett med låg genomströmning manipulerar ofta bara en cell eller mikrob åt gången; och (2) potentiell fotoskada och temperatur artefakt-deformation av kärnkraft kräver tiotals pN36, och motsvarande nödvändiga lasereffekt är cirka 10 mW per pN44,45. Sådan laserintensitet är tillräcklig för att utlösa fotoskador i cellerna och störa cellfunktionerna under experimentet46.
Magnetisk kraft applicerad genom mikrober i levande celler visar potentialen att direkt applicera kraft på kärnan och övervinner begränsningarna hos optisk pincett. När mikrober levereras in i cytoplasman kan ett magnetfält utöva en magnetisk kraft på flera mikrober samtidigt på ett sätt med hög genomströmning. Magnetfältet påverkar inte cellfunktioner47, men genererar kraft från pN till nN, vilket är tillräckligt för att inducera kärndeformation 36,48,49. Hittills har manipulation av magnetiska mikrober applicerats på cellplasmamembran48, inuti cytoplasman50, på F-aktin51, inuti kärnan47 och på den isolerade kärnan36. Magnetisk manipulation av mikrober har emellertid aldrig använts för att applicera direkt mekanisk kraft på kärnhöljet för att studera mekanotransduktion i kärnan.
I detta dokument utvecklas en enkel teknik för att icke-invasivt leverera magnetiska mikrober till cytoplasman och använda dessa mikrober för att applicera mekanisk kraft på kärnan (figur 1). Här används CRISPR / Cas9-konstruerade mänskliga normala B2B-cellinjer som endogent uttrycker mNeonGreen21-10/11-taggad YAP för att validera metoden. YAP är ett mekanokänsligt protein, och translokationen av YAP regleras av kärnmekanoavkännande 14,28. Den CRISPR/Cas9-reglerade knock-in-metoden valdes för att märka endogen YAP med ett fluorescerande protein (FP) mNeonGreen21-10/11. Även om CRISPR-redigering är känd för att ha ofullständig effektivitet och off-target-effekt, integrerade protokollen i tidigare publikationer fluorescenssortering för att välja för korrekt öppen läsraminsättning52,53,54. Med detta ytterligare urvalslager observerades ingen taggningshändelse utanför målet i 20+ cellinjer som tidigare genererat52,53,54,55. Detta är en delad fluorescerande proteinkonstruktion, men i princip kan vilken uttryckbar fluorescerande tagg som helst vara användbar. Denna märkningsmetod är överlägsen transgen- eller antikroppsmetoder. För det första, till skillnad från transgenuttrycket, upprätthåller det taggade proteinet enkopiegendosering och uttrycker sig i det fysiologiska sammanhanget för det inhemska genreglerande nätverket, vilket begränsar avvikelser i proteinkoncentration, lokalisering och interaktion. Taggningsmetoden som används i denna studie uppnår över en storleksordning högre genomströmning och effektivitet än full FP-taggning. Det undviker också utmaningar i samband med immunofluorescens på grund av fixeringsartefakter och den begränsade tillgången på högkvalitativa antikroppar med hög specificitet. För det andra gör tillvägagångssättet som används i detta dokument minimal störning av cellfysiologin och möjliggör realtidsuppenbarelse av alla endogena YAP: er autentiskt. Däremot leder andra vanliga transgenmetoder ofta till överuttryck av YAP. Den resulterande artificiella fördelningen kan potentiellt orsaka cytotoxicitet och påverka mekanoavkänning av celler56,57,58.
Denna studie presenterar ett protokoll för att direkt applicera kraft på kärnan genom magnetiska mikrober som levereras in i cytoplasman och för att genomföra samtidig fluorescerande avbildning av levande celler. Sammanfattningsvis visar protokollen som presenteras här hur man (1) levererar magnetiska mikrober in i cellen utanför kärnan, (2) manipulerar mikroberna för att applicera magnetisk kraft på kärnan, (3) utför konfokal fluorescerande avbildning av cellerna under manipulation och (4) kvantitativt analyserar YAP-kärn- / cytoplasmaförhållandet (N / C) under hela kraftapplikationsprocessen. Resultaten tyder på att (1) genom endocytos kan magnetiska mikrober icke-invasivt levereras till cytoplasman hos B2B-celler inom 7 timmar (figur 2 och figur 3); och (2) kvantifierad magnetisk kraft som appliceras direkt på kärnan (figur 4, figur 5 och figur 6) ensam kan utlösa olika förändringar av YAP N / C-förhållandet i CRISPR / Cas9-konstruerade B2B-celler (figur 7 och figur 8).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05 % Trypsin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-051-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>156340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-&#181;m mean diameter carbonyl iron microbeads</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A1R confocal system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl Iron Powder CM</td>
			<td>BASF</td>
			<td>30042253</td>
			<td>Magnetic microbead</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture medium (RPMI-1640)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desktop Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td></td>
			<td>with Windows 10 operating system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmental chamber TIZB</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>TIZB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health and the Laboratory for Optical and Computational Instrumentation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-bottom petri dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnet</td>
			<td>K&#38;J Magnetics, Inc.</td>
			<td>D99-N52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monochrome&#160;Camera</td>
			<td>FLIR</td>
			<td>BFS-U3-70S7M-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements software platform</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>software platform</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleus mask ImageJ macro</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://github.com/KOLIUG/Nuclear mask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucSpot Live 650</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>#40082</td>
			<td>Nuclear stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti2-E inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XYZ mover (CAD files)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://github.com/KOLIUG/XYZ-mover</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

combining 3d magnetic force actuator and multi-functional fluorescence imaging to study nucleus mechanobiology

En grundläggande fråga inom mekanobiologin är hur levande celler känner av extracellulära mekaniska stimuli i samband med cellfysiologi och patologi. Den cellulära mekano-känslan av extracellulära mekaniska stimuli tros vara genom membranreceptorerna, det associerade proteinkomplexet och cytoskeletten. Nya framsteg inom mekanobiologi visar att cellkärnan i cytoplasma själv självständigt kan känna av mekaniska stimuli samtidigt. En mekanistisk förståelse av hur cellkärnan känner av, omvandlar och svarar på mekaniska stimuli saknas dock, främst på grund av de tekniska utmaningarna med att komma åt och kvantifiera kärnmekaniken med konventionella verktyg. Detta dokument beskriver design, tillverkning och implementering av ett nytt magnetiskt kraftställdon som tillämpar exakta och icke-invasiva 3D-mekaniska stimuli för att direkt deformera cellkärnan. Med hjälp av CRISPR/Cas9-konstruerade celler visar denna studie att detta verktyg, i kombination med högupplöst konfokal fluorescerande avbildning, möjliggör avslöjandet av realtidsdynamiken hos ett mekanokänsligt ja-associerat protein (YAP) i enskilda celler som en funktion av kärndeformation. Denna enkla metod har potential att överbrygga det nuvarande teknikgapet i mekanobiologisamhället och ge svar på den kunskapslucka som finns i förhållandet mellan kärnmekanotransduktion och cellfunktion.

Design av en magnetrörlig anordning och applicering av magnetisk kraft För att applicera kraft på kärnan genom de magnetiska mikropärlorna designades och byggdes en magnetrörlig anordning för att styra magnetens rumsliga position. Den magnetförflyttningsanordningen innehåller en central ram, tre vred och skenor för att flytta den bifogade magneten i x-, y- och z-riktningar oberoende av varandra med en rumslig upplösning på 1,59 mm per cykel (figur 1A). När ma...

Watch this Scientific Journal Video about Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology at JoVE.com

Combining 3D Magnetic Force Actuator and Multi-Functional Fluorescence Imaging to Study Nucleus Mechanobiology

Denna studie presenterar ett nytt protokoll för att direkt applicera mekanisk kraft på cellkärnan genom magnetiska mikrober som levereras in i cytoplasman och för att genomföra samtidig fluorescerande avbildning av levande celler.

Kombinera 3D-magnetiskt kraftställdon och multifunktionell fluorescensavbildning för att studera kärnmekanobiologi

A fundamental question in mechanobiology is how living cells sense extracellular mechanical stimuli in the context of cell physiology and pathology. The ...

I denna metod appliceras kraften direkt på kärnan. Detta frikopplar kraftöverföringseffekten från cellplasmamembranet och cytoskeletten, vilket avslöjar de molekylära mekanismerna för kärnmekanosensering. Kraften appliceras i de levande cellerna på ett icke-invasivt sätt.Jämfört med optisk pincett påverkar magnetfältet och magnetkraften inte cellfunktionerna och har högre genomströmning. Börja odla cellerna med magnetiska mikrober genom att väga 0,2 gram karbonyljärnmikrober med sju mikrometer medeldiameter. Suspendera mikroberna i ett milliliter RPMI 1640 odlingsmedium med en pipett.Ta sedan petriskålen med B2B-celler till biosäkerhetsskåpet och tillsätt snabbt 200 mikroliter av mediet som innehåller mikropärlor i petriskålen. Lägg petriskålen i en inkubator tills mikrober internaliseras av cellerna. Öppna det inverterade mikroskopet och använd konfokal fluorescensavbildning, bestäm den optimala tiden för internalisering av cellinjerna var sjätte timme genom att visualisera mikropärlan, kärnkraften och cellgränsen.De internaliserade mikropärlorna kommer att finnas inom cellgränsen. För small force-applikation och live-cell imaging, öppna programvaran Elements. För att definiera konfigurationens magnetiska sökning, klicka på knappen en över två för att ställa in skanningshastigheten till en bildruta per två sekunder.Ställ in pinhålstorleken på 1,2 Airy-enhet. Kontrollera endast FITC-kanalen och ställ in PMT HV som 70, offset som noll, laserintensitet som 10. För att definiera konfigurationens magnetiska YAP-kärna, ställ in skanningshastigheten till en bildruta per fyra sekunder genom att klicka på en över fyra knapp.Klicka sedan på 1.2 Airy-enhetsknappen för att ställa in pinhålstorleken till 1.2 Airy-enheten och kontrollera FITC-kanalen. Ställ in PMT HV som 70, offset som noll, laserintensitet som 10. För avbildning av kärngränsen och kärnfläckintensiteten, kontrollera cyanin 5-kanalen.Klicka inte på 1.2 Airy-enhetsknappen och ställ in PMT HV på 70, förskjuten till noll och laserintensitet till 10. Pinhålsstorleken kommer att optimeras för tredimensionell YES-associerad proteinavbildning. Slå sedan på DIA genom Elements.Öppna spinnvyn, använd ett ljusfält och justera objektets fokus för att få en tydlig bild av celler i fokus. Använd ett 10X-mål för att hitta lämpliga flera enskilda celler under tre förhållanden, till exempel en cell med en enda mikrob inuti, med flera mikrober inuti och utan någon mikrob inuti. Byt sedan till 40X-målet och namnge denna position med lämpligt positionsnummer.Öppna Elements, klicka på magnetisk sökning, ta bort interlock, skanna sedan flikar och välj sedan de övre och nedre knapparna för att justera Z-positionen för fokalplanet för att ställa in den nedre och övre gränsen för Z-stacken för de valda cellerna. Sluta skanna genom att klicka på skanna igen. Växla till magnetisk YAP-kärnkonfiguration och ställ in filnamnet som before_small_force.nd2.Klicka på körknappen med den inspelade Z-stacken. Byt till rätt ljusväg och slå på DIA. Öppna spinnvyn och klicka på inspelningsknappen.Flytta magneten till 46 millimeter över petriskålens botten genom att snurra på vredet på magnetens rörliga enhet. Spara och kontrollera videon för att bekräfta mikrobernas förskjutning inducerad av magnetisk kraft. Upprepa genomsökningsproceduren genom att ställa in filnamnet som after_small_force.nd2.Byt sedan till rätt ljusväg, slå på DIA och öppna snurrvyn innan du klickar på inspelningsknappen. Snurra magnetens rörliga enhetsknapp upp till 120 millimeter över petriskålens botten och spara en ljusfältbildsekvens eller video. Upprepa stegen för skanning genom att ställa in filnamnet på before_large_force.nd2.Mikropärlorna kan inte avge fluorescens under laserexcitation i FITC- eller cyanin 5-kanalen. Således identifierades de internaliserade mikropärlorna av den mörka ihåliga som ligger i den konfokala avbildningen av fluorescens av YES-associerat protein och kärna. Nukleär cirkularitet visade ingen signifikant skillnad mellan kontrollceller och celler med mikrobisk internalisering.Det YES-associerade proteincellkärnan-till-cytoplasmaförhållandet mellan kontrollceller som samodlades med mikrober men utan internalisering och celler med mikrobisk internalisering visade inte heller någon signifikant skillnad. Kärndeformationen och depolymerisationen av aktin orsakades av kompressionskraften som applicerades av mikropärlorna i cytoskelettinnehållande celler. Kalibreringskurvan för kvantitativ bildanalys som tillhandahålls av det kvantitativa AFM-kraftförskjutningsförhållandet.Baserat på detta förhållande uppskattades den pärlor som applicerades kraft. Kärndeformationen och YES-associerad proteintranslokation observerades vid applicering eller frisättning av den magnetiska kraften. Intensitetsförändringarna i YES-associerat protein i den gröna kanalen och ingen förändring i kärnfärgningen i den röda kanalen bekräftade att den magnetiska kraftinducerade kärndeformationen som utlöses av den YES-associerade proteintranslokationen.Kvantifieringen av nettoförändringen av det JA-associerade proteinkärnan-till-cytoplasmaförhållandet inom två grupper bekräftade att den magnetiska kraften som applicerades på mikroberna i cytoplasman inducerade den JA-associerade proteintranslokationen och förändrade det JA-associerade proteinkärnan-till-cytoplasmaförhållandet. Innan du applicerar kraft och avbildning, se till att cellerna har internaliserat de magnetiska mikroberna och pärlorna ligger inom cellgränsen.

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Testa Visual Känsligheten för hastighet och rörelseriktning i Ödlor

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Isolering och rening av Drosophila Kringutrustning Nervceller av magnetiska Bead Sortering

The Drosophila peripheral nervous system (PNS) is a powerful model for investigating the complex processes of neuronal development and dendrite ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Time-lapse avbildning av Mitos Efter siRNA Transfektion

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Identifying Targets of Human microRNAs with the LightSwitch Luciferase Assay System using 3'UTR-reporter Constructs and a microRNA Mimic in Adherent Cells

Identifiera mål om mänskliga mikroRNA med lightswitch luciferas analyssystem med 3&#39;UTR-reporter Konstruerar och ett mikroRNA Mimic i Vidhäftande Cells

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression and play a role in many biological processes.  More than 700 human miRNAs have been ...

Sample Preparation for Single Virion Atomic Force Microscopy and Super-resolution Fluorescence Imaging

Provberedning för single virion atomic force mikroskopi och superupplösning fluorescensavbildning

Immobilization of virions to glass surfaces is a critical step in single virion imaging. Here we present a technique&#160;adopted from single molecule ...

Combining Single-molecule Manipulation and Imaging for the Study of Protein-DNA Interactions

Kombinera enda molekyl manipulation och Imaging för studier av protein-DNA-interaktioner

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

Hög kapacitet bildanalys av tumör spheroids: Ett användarvänligt program för att mäta storleken på sfäroider automatiskt och korrekt

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Combining Magnetic Sorting of Mother Cells and Fluctuation Tests to Analyze Genome Instability During Mitotic Cell Aging in Saccharomyces cerevisiae

Combining Magnetic Sorting of Mother Cells and Fluctuation Tests to Analyze Genome Instability During Mitotic Cell Aging in Saccharomyces cerevisiae

Kombinera Magnetisk Sortering av Mother celler och fluktuationer Tester för att analysera arvsmassan Instabilitet Under Mitotisk Cell Aging in<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Saccharomyces cerevisiae has been an excellent model system for examining mechanisms and consequences of genome instability. Information gained from this ...

A Method for Selecting Structure-switching Aptamers Applied to a Colorimetric Gold Nanoparticle Assay

En metod för att välja Struktur-växling Aptamerer Tillämpat på en kolorimetrisk Gold nanopartiklar analys

Small molecules provide rich targets for biosensing applications due to their physiological implications as biomarkers of various aspects of human health ...