该技术使用PET成像来阐明B细胞在中枢神经系统中的体内分布和动力学。我们的方法有利于研究神经系统疾病，其中受影响的脊髓使分析更具挑战性。因此，我们的技术有几个主要优势。
首先，我们创建了一个新工具来跟踪泛B细胞生物标志物，使我们能够捕获一系列B细胞亚群并在体内可视化它们。其次，我们的脊髓分析方法能够对该区域的PET信号进行高度准确和可重复的定量。我们技术的伟大之处在于它与疾病无关。
它可以用于从临床前到临床 PET 成像的任何场景，其中 B 细胞和/或脊髓是感兴趣的。在放射性标记并将抗体注射到小鼠体内后 18 至 24 小时，通过将眼凝胶涂在眼睛上来准备小鼠进行扫描。确保四鼠标扫描床配有加热垫，异氟醚设置为 1.5 至 2% 将鼠标仰卧在扫描床上，轻轻拉动鼠标尾巴以伸直脊柱。
鼠标处于仰卧位后，用柔软的显微镜胶带将其牢固地贴在头部和腹部，以尽量减少呼吸的运动。在实验室笔记本中记录每只鼠标的扫描位置。固定第一组后，关闭床，并通过进行 CT 扫描检查床的位置。
单击 CT 中心视野，床就位后，运行 CT 测试扫描以确保放置正确。重复上述步骤，直到床位令人满意。在扫描仪床上放置一小块白色胶带，以标记研究剩余部分的正确床位置。
打开“运动控制器”菜单，然后单击“PET Center Field of View”，将鼠标移动到 PET 环中。床进入 PET 环后，单击“运行”启动扫描序列，等待扫描仪自动完成 PET 扫描，然后从 PET 环移动到 CT 进行 CT 采集。由于实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE），小鼠由于疾病进展而脊柱明显弯曲，因此在仰卧时扫描它们有助于拉直脊柱。
在动物的背侧做一个切口，去除皮肤和皮毛，露出脊柱。沿着三个横平面穿过颈部、肋骨正下方和骨盆顶部的脊柱，将腰椎与颈椎和胸部区域分开。小心地移除分段的脊柱，得到两块，腰椎和颈胸椎。
然后，从骨盆端仔细修剪脊柱，直到腰椎脊髓可见，从而隔离腰椎。要排出腰椎脊髓，请使用装有PBS的滑尖注射器，并使用拇指和食指在注射器和脊柱之间形成密封。轻轻地将PBS推过注射器，将脊髓排出到吸收垫上，然后从颈侧插入注射器，对颈胸脊髓重复。
将脊髓组织放入伽马计数管中。记录干重，并加入PBS，确保组织在试管底部，以免干燥。将试管放在冰上，直到准备好计数。
要开始分析脊髓中的感兴趣区域，请从导航菜单中打开 3D 感兴趣区域工具。在“感兴趣区域”标题下，使用菜单底部的加号创建六个感兴趣区域：感兴趣腰椎区域、感兴趣颈椎区域、腰椎骨骼、胸骨骼、腰椎脊髓、胸脊髓。为避免 PET 信号的视觉干扰，请单击 F3 关闭 PET。
转到 3D 感兴趣区域工具运算符的顶部，然后单击光标符号右侧的实心点以打开 3D 绘画模式和侵蚀/扩张菜单。选择“球体”，然后将大小更改为 20 像素。同样，将 dilate 设置为加 5。
在继续操作之前，请转到菜单底部，并确保选择了感兴趣的腰椎区域。在 CT 上，找到脊柱的 L6 椎骨。从 L6 上方的一个椎骨开始，在臀部上方的五个椎骨上画一个粗略的腰椎区域。
然后切换到感兴趣的颈椎胸部区域，并将脊柱的其余部分追踪到颅底。绘制广义感兴趣区域后，转到运算符的顶部，然后选择“分割算法”菜单。从下拉菜单中，选择 Otsu 阈值，然后选择感兴趣的腰椎区域作为输入，并确保在菜单底部选择腰椎骨骼。
在图像旁边的下拉菜单中，确保选择了 CT 扫描，此处用数字 0 表示。单击“应用”，然后对感兴趣的颈椎胸部区域和胸骨重复该过程。使用 Otsu 阈值创建感兴趣的骨骼区域后，返回导航菜单，删除感兴趣的区域，或选中感兴趣的粗腰椎和颈胸区域的 H 列以隐藏它们。
选中两个感兴趣骨骼区域的 I 列，以便无法对其进行编辑。最后，返回到 3D 感兴趣区域工具操作员的顶部，然后转到 3D 绘画菜单以绘制感兴趣的脊髓区域。再次选择“球体”工具，并追踪腰椎和胸椎骨骼内的脊髓，确保在菜单底部选择正确的感兴趣区域。
要擦除任何感兴趣的区域，请单击“命令/控制”（Command/Control），然后在要擦除的部分上绘制。从所有三个平面检查感兴趣的脊髓区域，以确保没有感兴趣的区域被绘制到脊柱之外。如果 PET 信号已关闭，请在绘制感兴趣的脊髓区域后按 F3 重新打开 PET，或选择视觉控制器，然后单击 PET 条。
返回导航菜单。单击网格图标以显示表格。将表格复制到电子表格软件中，然后保存文件。
PET成像显示，与幼稚小鼠相比，EAE小鼠的大脑和胸脊髓中的放射性示踪剂结合升高。与幼稚相比，离体伽马计数显示EAE小鼠的腰椎和颈椎椎节段以及大脑的结合增加。离体放射自显影图像显示，与幼稚小鼠相比，EAE小鼠的脑干，小脑和脑室中矢状脑切片中的放射性示踪剂结合增加。
同样，与幼稚脊髓相比，在EAE小鼠的颈椎胸椎和腰椎脊髓节段中观察到放射性示踪剂结合增加。在PET成像和伽马计数之后，我们可以通过分子生物学技术，如流式细胞术和免疫组化来研究PET信号与目标靶标之间的关系。我们的技术为研究人员提出有关B细胞在多种疾病领域（包括中风、多发性硬化症、其他自身免疫性疾病和癌症）的体内作用的问题铺平了道路。
